Name: 検出するための実験プロトコールシアノバクテリア抗体マイクロアレイチップと液体と固体試料中の (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 57 s
Description: 学ぶシアノバクテリアの蛍光マイクロアレイ免疫測定法による液体・固体試料中の複数菌株検出法。環境モニタリングと水質管理において、毒素産生細菌の早期発見と生物多様性評価に有用です。

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私たちは、シアノバクテリア菌株を提供するために大学自治・デ・マドリードから博士アントニオ・ケサダに感謝します。この作品は、スペイン語MINISTERIOデエコノミアのy Competitividad（MINECO）のSubdirección一般デProyectosデInvestigaciónによって資金を供給された、無許可します。 AYA2011-24803とESP2014-58494-R。

<ol><li>Simis, S. G. H., Peters, S. W. M., Gons, H. J. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.4319/lo.2005.50.1.0237/abstract">Remote sensing of the cyanobacterial pigment phycocianin in turbid inland water.</a> Limnol. Oceanogr. 50 (1), 237-245 (2005).</li>
<li>Zamyadi, A., McQuaid, N., Prevost, M., Dorner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+potentially+toxic+cyanobacteria+using+an+online+multi-probe+in+drinking+water+sources%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Environ.+Monit%22%5BJournal%5D)">Monitoring of potentially toxic cyanobacteria using an online multi-probe in drinking water sources.</a> J. Environ. Monit. 14, 579-588 (2012).</li>
<li>Msagati, T. A. M., Siame, B. A., Shushu, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+methods+for+the+isolation%2C+detection+and+quantification+of+cyanobacterial+hepatotoxins%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of methods for the isolation, detection and quantification of cyanobacterial hepatotoxins.</a> Aquat. Toxicol. 78 (4), 382-397 (2006).</li>
<li>Weller, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoassays+and+biosensors+for+the+detection+of+cyanobacterial+toxins+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors%22%5BJournal%5D)">Immunoassays and biosensors for the detection of cyanobacterial toxins in water.</a> Sensors. 13 (11), 15085-15112 (2013).</li>
<li>Baker, J. A., Neilan, B. A., Entsch, B., McKay, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+cyanobacteria+and+their+toxigenicity+in+environmental+samples+by+rapid+molecular+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Identification of cyanobacteria and their toxigenicity in environmental samples by rapid molecular analysis.</a> Environ. Toxicol. 16 (6), 472-482 (2001).</li>
<li>Li, H., Singh, A. K., McIntyre, L. M., Sherman, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+gene+expression+in+response+to+hydrogen+peroxide+and+the+putative+PerR+regulon+of+Synechocystis+sp.+Strain+PCC+6803%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Differential gene expression in response to hydrogen peroxide and the putative PerR regulon of Synechocystis sp. Strain PCC 6803.</a> J. Bacteriol. 186 (11), 3331-3345 (2004).</li>
<li>Anderson, D. M., Cembella, A. D., Hallegraeff, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+understanding+harmful+algal+blooms%3A+paradigm+shifts+and+new+technologies+for+research%2C+monitoring%2C+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Rev.+Mar.+Sci%22%5BJournal%5D)">Progress in understanding harmful algal blooms: paradigm shifts and new technologies for research, monitoring, and management.</a> Ann. Rev. Mar. Sci. 4, 143-176 (2012).</li>
<li>Dittami, S. M., Pazos, Y., Laspra, M., Medlin, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+testing+for+the+presence+of+toxic+algae+monitoring+programme+in+Galicia+%28NW+Spain%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Pollut.+Res.+Int%22%5BJournal%5D)">Microarray testing for the presence of toxic algae monitoring programme in Galicia (NW Spain).</a> Environ. Sci. Pollut. Res. Int. 20, 6778-6793 (2013).</li>
<li>Kegel, J. U., Del Amo,, Medlin, Y., K, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+to+Project+MIDTAL%3A+its+methods+and+samples+from+Arcachon+Bay%2C+France%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Pollut.+Res.+Int%22%5BJournal%5D)">Introduction to Project MIDTAL: its methods and samples from Arcachon Bay, France.</a> Environ. Sci. Pollut. Res. Int. 20 (10), 6690-6704 (2013).</li>
<li>Marcheggiani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+emerging+and+re-emerging+pathogens+in+surface+waters+close+to+an+urban+area%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Environ.+Res.+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Detection of emerging and re-emerging pathogens in surface waters close to an urban area.</a> Int. J. Environ. Res. Public Health. 12 (5), 5505-5527 (2015).</li>
<li>Fernández-Calvo, P., Näke, C., Rivas, L. A., García-Villadangos, M., Gómez-Elvira, J., Parro, V. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0032063306002017">A multi-array competitive immunoassay for the detection of broad-range molecular size organic compounds relevant for astrobiology.</a> Planet. Space Sci. 54 (815), 1612-1621 (2006).</li>
<li>Parro, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aParro%2C+V+%22Antibody+microarrays+for+environmental+monitoring.+Handbook+of+Hydrocarbon+and+Lipid+Microbiology%22">Antibody microarrays for environmental monitoring. Handbook of Hydrocarbon and Lipid Microbiology</a>. , Springer-Verlag. Berlin Heidelberg, Germany. 2699-2710 (2010).</li>
<li>Fan, Z., Keum, Y. S., Li, Q. X., Shelver, W. L., Guo, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+immunoassay+detection+of+multiple+environmental+chemicals+on+protein+microarrays+using+DNA%2Fdye+conjugate+as+a+fluorescent+label%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Environ.+Monit%22%5BJournal%5D)">Sensitive immunoassay detection of multiple environmental chemicals on protein microarrays using DNA/dye conjugate as a fluorescent label.</a> J. Environ. Monit. 14 (5), 1345-1352 (2012).</li>
<li>Rivas, L. A., García-Villadangos, M., Moreno-Paz, M., Patricia Cruz-Gil, P., Gómez-Elvira, J., Parro, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+200-Antibody+microarray+biochip+for+environmental+monitoring%3A+Searching+for+universal+microbial+biomarkers+through+immunoprofiling%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">A 200-Antibody microarray biochip for environmental monitoring: Searching for universal microbial biomarkers through immunoprofiling.</a> Anal. Chem. 80 (21), 7970-7979 (2008).</li>
<li>Delehanty, J. B., Ligler, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microarray+immunoassay+for+simultaneous+detection+of+proteins+and+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">A microarray immunoassay for simultaneous detection of proteins and bacteria.</a> Anal. Chem. 74 (21), 5681-5687 (2002).</li>
<li>Ligler, F. S., Taitt, C. R., Shriver-Lake, L. C., Sapsford, K. E., Shubin, Y., Golden, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Array+biosensor+for+detection+of+toxins%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Array biosensor for detection of toxins.</a> Anal. Bioanal. Chem. 377 (3), 469-477 (2003).</li>
<li>Rucker, V. C., Havenstrite, K. L., Herr, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+microarrays+for+native+toxin+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Antibody microarrays for native toxin detection.</a> Anal. Biochem. 339 (2), 262-270 (2005).</li>
<li>Kang, J., Kim, S., Kwon, Y. <a target="_blank" href="http://link.springer.com/article/10.1007/BF03216477">Antibody-based biosensors for environmental monitoring.</a> Toxicol. Environ. Health. Sci. 1 (3), 145-150 (2009).</li>
<li>Herranz, S., Marazuela, M. D., Moreno-Bondi, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+portable+array+biosensor+for+multisample+microcystin+analysis+in+freshwater+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens.+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Automated portable array biosensor for multisample microcystin analysis in freshwater samples.</a> Biosens. Bioelectron. 33 (1), 50-55 (2012).</li>
<li>Shlyapnikov, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+simultaneous+ultrasensitive+immunodetection+of+five+bacterial+toxins%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Rapid simultaneous ultrasensitive immunodetection of five bacterial toxins.</a> Anal. Chem. 84 (13), 5596-5603 (2012).</li>
<li>Szkola, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+simultaneous+detection+of+ricin%2C+staphylococcal+enterotoxin+B+and+saxitoxin+by+chemiluminescence-based+microarray+immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">Rapid and simultaneous detection of ricin, staphylococcal enterotoxin B and saxitoxin by chemiluminescence-based microarray immunoassay.</a> Analyst. 139, 5885-5892 (2014).</li>
<li>Blanco, Y., Quesada, A., Gallardo-Carreño, I., Jacobo Aguirre,, Parro, J., V, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CYANOCHIP%3A+An+antibody+microarray+for+high-taxonomical-resolution+cyanobacterial+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">CYANOCHIP: An antibody microarray for high-taxonomical-resolution cyanobacterial monitoring.</a> Environ. Sci. Technol. 49 (3), 1611-1620 (2015).</li>
<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Rapid+and+Sensitive+Method+for+the+Quantitation+of+Microgram+Quantities+of+Protein+Utilizing+the+Principle+of+Protein-Dye+Binding%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding.</a> Anal. Chem. 72, 248-254 (1976).</li>
<li>Lowry, O. H., Rosebrough, N. J., Farr, A. L., Randall, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+measurement+with+the+Folin+phenol+reagent%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Protein measurement with the Folin phenol reagent.</a> J. Biol. Chem. 193 (1), 265-275 (1951).</li>
<li>Smith, P. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+protein+using+Bicinchoninic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Measurement of protein using Bicinchoninic acid.</a> Anal. Biochem. 150 (1), 76-85 (1985).</li>
<li>Rivas, L. A., Aguirre, J., Blanco, Y., González-Toril, E., Parro, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graph-based+deconvolution+analysis+of+multiplex+sandwich+microarray+immunoassays%3A+applications+for+environmental+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Graph-based deconvolution analysis of multiplex sandwich microarray immunoassays: applications for environmental monitoring.</a> Environ. Microbiol. 13 (6), 1421-1432 (2011).</li>
<li>Blanco, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deciphering+the+prokaryotic+community+and+metabolisms+in+south+african+deep-mine+biofilms+through+antibody+microarrays+and+graph+theory%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Deciphering the prokaryotic community and metabolisms in south african deep-mine biofilms through antibody microarrays and graph theory.</a> PloS One. 9 (2), e114180(2014).</li>
<li>Gas, F., Baus, B., Queré, J., Chapelle, A., Dreanno, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+detection+and+quantification+of+the+marine+toxic+algae%2C+Alexandrium+minutum%2C+using+a+super-paramagnetic+immunochromatographic+strip+test%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Rapid detection and quantification of the marine toxic algae, Alexandrium minutum, using a super-paramagnetic immunochromatographic strip test.</a> Talanta. 147, 581-589 (2016).</li>
<li>Parro, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SOLID3%3A+a+multiplex+antibody+microarray-based+optical+sensor+instrument+for+in+situ+life+detection+in+planetary+exploration%5BTitle%5D)+AND+%22Astrobiology%22%5BJournal%5D)">SOLID3: a multiplex antibody microarray-based optical sensor instrument for in situ life detection in planetary exploration.</a> Astrobiology. 11, 15-28 (2011).</li>
<li>McKay, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Icebreaker+Life+Mission+to+Mars%3A+a+search+for+biomolecular+evidence+for+life%5BTitle%5D)+AND+%22Astrobiology%22%5BJournal%5D)">The Icebreaker Life Mission to Mars: a search for biomolecular evidence for life.</a> Astrobiology. 13, 334-353 (2013).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

ここでは、CYANOCHIP、シアノバクテリア属の広い範囲の検出および同定のための17-抗体マイクロアレイを用いて、多重蛍光サンドイッチ免疫測定法は、22に記載されています。これらのシアノバクテリアは、そのうちのいくつかは毒素生産され、淡水生息地の中で最も頻繁に底生やプランクトンの属を表します。最近、蛍光サンドイッチイムノアッセイ形式が、環境のアプリケーション26、27、28中の微生物および/またはbioanalytesを識別するために使用されています。 （I）固定化または捕捉抗体を特異的に試験試料から分析物を結合することと、（ii）蛍光標識された抗体（トレーサーまたは検出抗体）を用いて分析物 - 抗体ペアを検出：プロトコルは、主に次の2つのステップに基づいています。サンドイッチアッセイは、のために、検体中に少なくとも2個のアクセス抗体の結...

複雑な自然の微生物群集中の微生物の検出と監視は生物医学、環境、エコロジー、そして宇宙生物学などの多くの分野で重要です。淡水中の細胞の花（過剰増殖）を形成する能力についてよく知られている原核微生物はシアノバクテリアです。彼らは遍在している、と多くの種は、ヒトの健康に対する潜在的なリスクに、だけでなく、生態系への影響のみならず大手、毒素を産生することができます。この点では、 シアノバクテリアおよび/または土壌及び水中のそれらの毒素の早期検出のための迅速かつ高感度な方法を開発することが不可欠です。水管理者が適切な水管理プログラムを実施する際に、結果的に、決定にそれらを助けるために、この目的のために、多重蛍光サンドイッチマイクロアレイイムノアッセイ（FSMI）のツールとして開発されました。 方法の多様な範囲は、シアンを検出および同定するために開発されています光学顕微鏡、分子生物学、および免疫学的技術を含む土壌や水にobacterial細胞およびシアノトキシン、。これらの方法は、それらが提供する情報に大きく異なります。顕微鏡技術は、細胞の形態や、フィコシアニンやクロロフィル1とシアノバクテリア顔料、からの生体内蛍光の検出に基づいています。彼らは、試料中に存在するシアノバクテリアの種類と数をお知らせリアルタイムおよび頻繁なモニタリングのための迅速かつ安価な方法であるが、それらは潜在的な毒性に関する情報を与えることはありません。さらに、彼らは、しばしば密接に関連した種2を区別することは非常に困難であることを考慮して、専門知識の特定のレベルを必要とします。これらの制限を克服するために、光学顕微鏡は、生物学的および生化学的スクリーニングアッセイおよびシアノトキシンの同定および定量のための物理化学的方法の両方を添付しなければなりません。 <pクラス= &quot;jove_content&quot;&gt;酵素結合免疫吸着検定法（ELISA）、タンパク質リン阻害アッセイ（PPIA）、およびマウスにおける神経化学的試験は、シアノトキシンを検出するための生化学的スクリーニングアッセイの例です。最初の二つは、迅速かつ高感度な方法論であるが、使用してELISAおよびPPIAテストは毒素の3種類に制限されている場合、偽陽性が記載されています。マウスバイオアッセイは、低感度および精度の質的な技術であり、特別なライセンスやトレーニングが必要です。また、試料中に存在する毒素の種類についての情報を与えません。シアノトキシン例えば、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）などの他の分析方法によって同定及び定量することができる、液体クロマトグラフィー - 質量分析（LC-MS）、ガスクロマトグラフィー（GC）、ガスクロマトグラフィー - 質量分析（GC-MS）またはマトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間（MALDI-TOF）。参照標準、必要とされる場合は、これが唯一の可能性であります複雑なサンプル中の個々の毒素濃度を決定するためのedは、3、4ご利用いただけます。また、これらの方法は時間がかかります。高価な機器、消耗品、およびサンプル調製を必要とします。そして、経験豊富な専門スタッフによって行われなければなりません。 分子ベースの方法は、ゲノムデータベースに公開された配列情報のおかげで、検出、同定、およびシアノバクテリアとそれらに対応するシアノトキシンを定量化するために数十年にわたって適用されている（ 例えば、バイオテクノロジー情報、NCBIのための国立センター）。これらの方法の中でDNAの増幅のためのプライマーセットの設計を必要とし、別のシアノバクテリア種のDNA配列の予備知識に依存してポリメラーゼ連鎖反応（PCR）に基づくものです。遺伝子の検出は、フィコシアニンオペロンのように、属レベルでの正確な同定をもたらす一方で、一部の種や菌株がで検出されませんこの方法。しかしながら、このようなミクロオペロンに属するものとして毒素をコードする遺伝子は、プロデューサ5不足しているサンプル中の毒素の同定を容易にします。それにもかかわらず、PCRによる毒素マーカーの検出は、必ずしも環境に毒性を示すものではありません。また、 シアノバクテリアの種と試料中に存在する毒素生産の全範囲を分析するために開発されたプライマーのセットは、まだ不完全であり、更なる研究は、未知の種を同定するために行われなければなりません。他の分子技術は、 蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）およびDNAマイクロアレイなどの非PCRベースです。 過去20年間では、マイクロアレイ技術は、特に環境モニタリングでは、アプリケーションの多くの分野で重要性を増しています。 DNAマイクロアレイは、種との検体4の間の識別、6、7を可能に</SUP&gt;、8、9、10、それらは非常に面倒で時間がかかる複数のステップ（ 例えば、マイクロアレイの性能、DNA抽出、PCR増幅、およびハイブリダイゼーション）を伴う作業を考えています。そのため、例えば、サンドイッチおよび競合免疫学的マイクロアレイのような抗体に基づいてより少ない時間のかかるアッセイは、多数の環境の分析物11、12、13の検出のために不可欠で信頼性の高いハイスループット法となっています。抗体の能力は、特に、それらの標的化合物を認識し、ほとんどすべての物質に対する抗体を産生する可能性とともに、検体およびタンパク質の少量を検出するために、抗体マイクロアレイを環境目的のための強力な技術を作ります。また、複数を達成する能力は、として分析しますイングルアッセイは、ppmのppbの範囲の検出限界で、この方法14の主な利点の1つです。 抗体ベースのバイオセンサーは、環境モニタリング15、16、17、18、19、20、21中の病原体および毒素の広い範囲を検出するための高感度かつ迅速なツールであることが判明しています。 DNA法は、いくつかのステップを含むが、抗体ベースのマイクロアレイは、主に適切なソリューションバッファ内の短い溶解段階に基づいて、小さなサンプル調製を必要とします。 DelehantyとLigler 15 4 PPBのANのタンパク質濃度を検出することができる抗体サンドイッチ免疫測定法に基づいて、複雑な混合物中のタンパク質および細菌分析物の同時検出を報告しD 10細胞の4 CFU / mLです。 Szkola ら。 21は生物兵器に使用されるかもしれないproteotoxinsと小さな毒素、化合物の同時検出のための安価で信頼性の高いマルチプレックスマイクロアレイを開発しました。彼らは20分未満で、3 ppbでの検出限界で、リシン毒素の濃度を検出しました。最近、CYANOCHIP、毒性および非毒性のシアノバクテリアのin situ検出のための抗体マイクロアレイベースのバイオセンサーは、22に記載されています。このマイクロアレイは、主に顕微鏡的に識別することが困難である水生環境で、潜在的なシアノバクテリアブルームの同定を可能にします。でも、種レベルで、多重検出およびシアノバクテリアの同定のための費用対効果の高いツールにこのバイオセンサーを回すほとんどの種のために10 3細胞、 -マイクロアレイの検出限界は10 2です。これらのプロパティはすべてantiboを作りますDYマイクロアレイ技術、およびこの仕事で提示特に方法、前述の技術に比べて迅速かつ簡単な方法。 この作品は、土壌と水のサンプル中のシアノバクテリアの存在を検出するために抗体マイクロアレイベースのバイオセンサーを使用した実験の2つの例を示します。これは、非常に少量の試料と非常に基本的なサンプル調製を必要とするサンドイッチイムノアッセイフォーマットに基づいて簡単かつ信頼できる方法です。この方法は、短い時間を必要とし、容易フィールドで行うことができます。

<table><tbody><tr><td>0.22 mmの細孔径フィルター</td><td>ミリポア</td><td>GSWP04700</td><td>免疫原の調製用</td></tr><tr><td>Eppendorf&nbsp; 5424R 微量遠心分離機</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td></td><td>免疫原の調製用</td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) pH 7.4 (10x)</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>70011036</td><td>50 mM リン酸カリウム、150 mM NaCl、pH 7.4</td></tr><tr><td>超音波プロセッサ UP50H</td><td>ヒールシャー</td><td></td>免疫<td>原の調製のために完全な</td></tr><tr><td>フロイントのアジュバント&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F5881</td><td>免疫増強剤</td></tr><tr><td>不完全 フロイトのアジュバント</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>F5506</td><td>ブースト注射用</td></tr><tr><td>プロテインA抗体精製キット&nbsp;&nbsp;</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>PURE1A&nbsp;</td><td>IgGの単離</td></tr><tr><td>遠心フィルター装置 MWCO<100 kDa</td><td>Millipore</td><td>UFC510096-96K</td><td>IgG</td></tr><tr><td>透析チューブの単離、ベンゾイル化</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D7884-10FT</td> IgG <td></td></tr><tr><td>Illustra Microspin G-50 カラム</td>の単離用&nbsp;<td>GE-HealthCare</td><td>GE27-5330-02</td><td>IgG</td></tr><tr><td>Bradford試薬</td>の単離<td>用 Sigma-Aldrich</td><td>B6916-500 mL</td><td>抗体濃度を定量するには</td></tr><tr><td>MicroBCAタンパク質アッセイキット&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>23235</td><td>抗体濃度を定量化するには</td></tr><tr><td>Protein arraying buffer 2x</td><td>Whatman (Sigma Aldrich)&nbsp;</td><td>S00537</td><td>印刷バッファー; 30 - 40% グリセロール 1x PBS と 0.01% Tween</td></tr><tr><td>20 Tween 20&nbsp;</td><td>シグマ・アルドリッチ&nbsp;</td><td>P9416</td><td>非イオン性界面活性剤</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>A9418</td><td>Control&nbsp; 印刷用; ブロッキング試薬</td></tr><tr><td>384ウェル マイクロプレート</td><td>Genetix</td><td>X6004</td><td>抗体印刷</td></tr><tr><td>用 ロボットアレイ Digilab</td><td></td><td>社製 MicroGrid II TASアレイ</td><td>抗体印刷用</td></tr><tr><td>エポキシ基板ガラススライド</td><td>Arrayit corporation</td><td>VEPO25C</td><td>抗体印刷用ソリッドサポート</td></tr><tr><td>Alexa Fluor-647スクシンイミジルエステル&nbsp;</td><td>分子プローブ</td><td>A20006</td><td>蛍光色素</td></tr><tr><td>DMSO&nbsp;</td><td>シグマ・アルドリッチ&nbsp;</td><td>D8418</td><td>蛍光色素溶解</td></tr>剤 <tr><td>ハイドルフ タイトラマックス 振動プラットフォームシェーカー</td><td>フィッシャー・サイエンティフィ</td><td></td>ック <td>抗体標識用&nbsp;</td></tr><tr><td>Illustra Microspin G-50カラム&nbsp;</td><td>ヘルスケア</td><td>27-5330-01</td><td>標識抗体の精製用</td></tr><tr><td>セーフシール ブラウン 0.5 mL チューブ</td><td>Sarstedt</td><td>72,704,001</td><td>標識抗体の保管用&nbsp;</td></tr><tr><td>Nanodrop 1000 分光光度計</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>抗体濃度と標識効率を定量化するには</td></tr><tr><td>3 &micro;m細孔サイズポリカーボネート47mm直径</td>フィルター<td>ミリポア</td><td>TMTP04700</td>細胞<td>を濃縮するために</td></tr><tr><td>1Mトリズマ塩酸塩溶液pH8</td>シ<td>グマアルドリッチ&nbsp;</td><td>T3038</td><td>TBSTRR調製用;スライドをブロックするために塩化</td></tr><tr><td>ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>S7653</td><td>TBSTRR調製用</td></tr><tr><td>20 &micro;mナイロンフィルター&nbsp;</td><td>ミリポア</td><td>NY2004700</td><td>環境抽出物調製用</td></tr><tr><td>10 - 12 mmフィルターホルダー</td><td>ミリポア</td><td>SX0001300</td><td>環境抽出物調製用</td></tr><tr><td>プロテアーゼ阻害剤カクテル</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>P8340</td><td>環境抽出物保存用</td></tr><tr><td>1 M Trizma 塩酸塩溶液 pH 9</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>T2819</td><td>スライドをブロックするには</td></tr><tr><td>ハイドルフ デュオマックス 1030 ロッキングプラットフォーム シェーカー</td><td>VWR</td><td></td><td>スライドをブロックするには、インキュベーションプロセス用&nbsp;</td></tr><tr><td>VWR ギャラクシー ミニアレイ微量遠心分離機</td><td>VWR</td><td>C1403-VWR</td><td>スライドを乾燥させる</td></tr><tr><td>マルチウェルマイクロアレイハイブリダイゼーションカセット</td><td>Arrayit corporation</td><td>AHC1X24</td><td>スライドあたり24アッセイのカセット</td></tr><tr><td>GenePix 4100A マイクロアレイスキャナー&nbsp;</td><td>蛍光用</td><td>分子デバイス</td><td></td>スキャナー</tr><tr><td>GenePix Proソフトウェア</td><td>画像解析・定量用</td><td>分子デバイス</td><td></td>ソフトウェア</tr></tbody></table>

検出するための実験プロトコールシアノバクテリア抗体マイクロアレイチップと液体と固体試料中の

Experimental Protocol for Detecting Cyanobacteria in Liquid and Solid Samples with an Antibody Microarray Chip

地球温暖化や富栄養化は、いくつかの水生生態系が急速かつ大規模なシアノバクテリアの成長をトリガとして、真のバイオリアクターを動作させます。これは、関連する健康と経済的な影響を持っています。多くのシアノバクテリア菌株は毒素生産者である、とだけ少数の細胞は、環境に取り返しのつかない損傷を誘発するために必要です。したがって、水体当局との投与は、それらの予防的もしくは治療的な意思決定をサポートするために信頼できるデータを提供する迅速かつ効率的な早期警報システムを必要とします。この原稿は、分類学上の解像度（CYANOCHIP）で17抗体（ABS）を有する抗体マイクロアレイチップを使用して、毒素産生シアノバクテリア株のインフィールド検出のための実験プロトコルを報告します。ここでは、17シアノバクテリア株の同時モニタリングのための多重蛍光サンドイッチマイクロアレイイムノアッセイ（FSMI）が頻繁に淡水生態系に咲く発見、それらのいくつかの毒素生産者は、記載されています。マルチでのマイクロアレイPLE CYANOCHIPの（24まで）同一の複製を同時にサンプルの同様の数をテストするために、単一の顕微鏡スライド上に印刷しました。液体試料は、1〜3ミクロンのフィルターを通して濾過することにより、抗体との直接的インキュベーション（ABS）または細胞濃度後のいずれかで試験することができます。そのような堆積物とグランド石のような固体サンプルを、最初のインキュベーション緩衝液中のハンドヘルド超音波処理によって均質化し、分散しています。粗物質を除去し、ろ液をABSでインキュベートする - それらは、次いで、（20ミクロン5）濾過します。免疫反応は、17蛍光標識Abの混合物で最終インキュベーションによって明らかにされており、可搬型蛍光検出器によって読み取られます。全体のプロセスは、そのほとんどが、インキュベーションの2 1時間の期間に対応し、約3時間かかります。出力は、明るいスポットは、シアノバクテリアマーカーの陽性検出に対応した画像です。

この作品はCYANOCHIP抗体マイクロアレイを用いて、最も関連性の高い淡水シアノバクテリア種の同時同定（ 表1）のためのマルチプレックスイムノアッセイテストを説明します。マイクロアレイは、顕微鏡スライド上に印刷された3×8マイクロアレイフォーマットすることができます。各マイクロアレイは、陰性対照としてトリプリケートスポットパターンで印刷17抗体のセット、それらの対応する免疫前抗体およびBSAから構成されています。マイクロアレイはまた、簡単にマイクロアレイパターン22（ 図1）をローカライズするために、蛍光標識された免疫前抗体を用いて、蛍光のフレームが含まれます。 マイクロアレイはマドリードの街を供給する淡水ロソヤ貯水池の海岸で採取した水試料のその場での分析のためのフィールドで試験しました。サンプルは、上記のように処理し...

人間が消費する淡水貯留層にシアノバクテリア毒素が存在することは、水管理当局にとって大きな懸念事項です。水質汚染のリスクを評価するために、この記事では、抗体マイクロアレイチップを使用して、液体および固体サンプル中のシアノバクテリア株を野外で検出するためのプロトコルについて説明します。

Global warming and eutrophication make some aquatic ecosystems behave as true bioreactors that trigger rapid and massive cyanobacterial growth; this has ...

この手順の全体的な目標は、蛍光マイクロアレイイムノアッセイを使用して、液体および固体サンプル中の複数のシアノバクテリア株の存在を決定することです。この方法は、ブルームが肉眼で見えるようになる前に、毒素を生成する毒素がプロトキシン産生細菌の存在など、環境、モニタリング、および水管理の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、複数のシアノバクテリア株と複数のサンプルを、in situまたは実験室の両方で3時間から4時間の間に同時に監視できることです。したがって、これらの方法は生物多様性についての洞察を提供することができます。また、農業設備の監視、ひずみ環境での生命検出、惑星探査など、他の分野にも適用できます。一般的に、この方法に不慣れな個人は苦労しません。サンプル処理が簡単で、結果の解釈が容易だからです。テキストプロトコルに従って抗体を作製および精製した後、標識用色素を含む市販のバイアルに100マイクロリットルのDMSOを加え、1ミリグラムのタンパク質を添加します。色素が溶解したら、各抗体調製物の50マイクロリットルに2マイクロリットルの色素を加えて、精製した抗体を標識します。ラベリング反応を、振動プラットフォーム上で連続的に攪拌し、周囲温度で1時間維持します。テキストプロトコルに従って標識抗体を精製した後、分光光度計に小さなアリコートをロードし、280ナノメートルと650ナノメートルでの吸光度を測定します。サプライヤーの推奨事項に従って、ラベリング効率を計算します。CYANOCHIPを作製するには、Tween 20の1容量あたり01%の容量の1Xタンパク質印刷バッファーに1ミリグラムの抗体を混合することにより、精製された各抗体を30マイクロリットル調製します。コントロールとして、次の印刷ソリューションを30マイクロリットル準備します。Tween 20の体積あたり01%の容量を持つ1Xタンパク質印刷バッファー。01%Tween 20および01%Tween 20および01%Tween 20を含む1ミリリットルあたり1ミリグラムのBSAおよび1Xタンパク質印刷バッファー中の1ミリグラム/ミリリットルで精製された免疫前血清。調製した印刷溶液のウェルあたり30マイクロリットルを高品質の384ウェルマイクロプレートに追加します。テキストプロトコルに従って印刷ロボットとスライド基板をセットアップした後、すべての抗体とコントロールをスライド上に約180〜200ミクロンのスポット直径の3重のスポットパターンでスポットします。環境でのサンプリングには、滅菌シリンジを使用して1〜100ミリリットルの液体を採取し、サンプルを3ミクロンの細孔サイズフィルターに通して細胞を濃縮します。必要に応じて、岩石や土壌から固体サンプルを採取し、滅菌チューブに保管します。サ

experimental-protocol-for-detecting-cyanobacteria-liquid-solid

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我々は、その後、表面抗原（DotScan...

抗体マイクロアレイと蛍光多重を用いた大腸癌の細胞表面タンパク質のプロファイリング

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この動画では、抗体マイクロアレイチップを用いて環境試料中のシアノバクテリア株を検出する方法を実演しています。さまざまな細菌を運ぶサンプルは、印刷された抗体と相互作用し、蛍光色素標識抗シアノバクテリア株抗体による免疫染色は、異なるスポットでの蛍光を通じて特定のシアノバクテリア株の存在を明らかにします。...

抗体マイクロアレイチップを用いたシアノバクテリア株検出技術

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大量の農業用水に含まれる食品媒介病原体の統合濃度、濃縮、エンドポイント比色検出を含むプロトコルがここに提示されています。...

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細菌のための2つの成分​​規制システムを遺伝子標的を決定するために、DNA親和性精製チップ（DAP-チップ）方法

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細胞ベースのアッセイによるひと血清抗アクアポリン 4 免疫グロブリン G の検出

エレクトロウェッティングベースのデジタルマイクロ流体は、マイクロリットル体積液滴の見かけの接触角の電圧駆動変化を利用して、その操作を容易にする技術です。これを機能化された磁気ビーズと組み合わせることで、酵素結合免疫測定アッセイ(ELISA)を用いた複数の実験ユニット操作を組み合わせて、サンプル調製と病原体の同定を可能にします。...

酵素結合免疫吸着アッセイ用エレクトロウェッティングベースのデジタルマイクロ流体プラットフォーム

さまざまな細菌性病原体は、正確に検出され、迅速に治療されない場合、気道感染症を引き起こし、深刻な健康問題を引き起こす可能性があります。ループを介した等温増幅...

マイクロ流体チップベースのループ媒介等温増幅による下気道感染症を引き起こす細菌性病原体の迅速な検出

学ぶシアノバクテリアの蛍光マイクロアレイ免疫測定法による液体・固体試料中の複数菌株検出法。環境モニタリングと水質管理において、毒素産生細菌の早期発見と生物多様性評価に有用です。

検出するための実験プロトコールシアノバクテリア抗体マイクロアレイチップと液体と固体試料中の

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