変更されたカフを用いた膵臓移植マウス モデル

私の名前はベンノ・カルディーニで、インスブルック医科大学内臓・移植・胸部外科のダニエル・スワロフスキー研究所に所属しています。今日は、修正カフ技術を使用した膵臓移植用のマウスモデルを紹介します。ドナー動物にケタミンとキシラジンの腹腔内注射で麻酔をかけ、腹部を剃ります。

次に、レシピエントを仰臥位の手術野に置き、クロルヘキシジンで手術部位を3回こすります。.次に、恥骨領域から剣状突起まで正中線開腹術を行い、切開部を両側に肋骨下方向に拡大して、術野をよりよく見渡します。次に、内臓を左側に外部化し、ヘパリンを腎下大静脈に注入します。

次のステップでは、左腎静脈の交差部に近接する腹部大動脈を特定し、大動脈を弱体化させ、その時点で結束します。次に、肝臓の門に移動し、肝臓に近い総胆管を特定して解剖し、膵臓の近くで結紮します。最後に、結紮糸の上の総胆管を横断します。

次に、肝臓の近くで門脈を解剖して、静脈吻合に十分な長さを達成します。ヒントとして、肝臓の小片を門脈に残して、後で簡単に識別できるようにします。次に、大動脈周囲組織の左腎静脈を弱体化させ、結紮します。

次に、腎静脈と大動脈周囲組織を横断し、結紮糸の右側に留まります。次に、腹腔体幹から横隔膜まで腹部大動脈をぶっきらぼうに解剖し、横隔膜に近い大動脈を弱体化させ、その時点で横断します。次に、すべての腰椎枝を特定して凝固させ、それらを横断します。

次に、前に設定した結紮糸の下で大動脈を横断します。次に、門脈から廃液が出てくるのが見えるまで、氷冷灌流溶液で大動脈パッチを介して膵臓を灌流します。上部には灌流された門脈が見え、下には灌流された大動脈が見えます。

次に、内臓を腹腔に交換し、8-0を使用して膵臓を腸から段階的に分離しますシルクの合字。幽門後領域から始めて、十二指腸を2回弱体化させ、8-0を引きますそれを通して絹の結紮糸。次に、それを結紮し、膵臓を十二指腸から鋭く分離します。

このアプローチは、トレイツの靭帯に到達するまで繰り返し行われます。十二指腸は、汚染の可能性があるため、移植片を実験から除外するため、損傷を与えないことが不可欠です。膵臓が十二指腸から完全に分離した後、腸間膜に移動し、それを弱体化させて結紮し、次にそれを切除します。

前のステップと同様に、膵臓を横行結腸から分離し、それを弱体化させ、結紮し、最後に横行します。次に、同じアプローチを使用して、結紮後に膵臓を胆道領域から鋭く解剖することにより、胆道領域から膵臓を分離します。その後、胃から膵臓を鈍く解剖します。

左胃動脈を特定し、結紮して横断します。最後に、付着した脾臓で膵臓を切除し、さらに着床するまで氷冷再灌流溶液に入れます。脾臓をハンドルとして使用します。

ドナーと同様に、ケタミンとキシラジンの腹腔内注射でレシピエント動物に麻酔をかけ、子宮頸部を剃ります。その後、ドナー動物を仰臥位で手術野に置き、クロルヘキシジンで子宮頸部を3回こすります。次に、頸静脈切開から右下顎角までの皮膚切開を行います。

次に、右外頸静脈のすべての側枝を特定し、それらを動員し、それらを弱体化させ、バイポーラ凝固後にそれらを分割します。その後、右顎下腺の下極をつかみ、頭蓋骨から持ち上げ、栄養血管の双極凝固後に解剖します。次に、バイポーラ凝固後の右外頸静脈のすべての内側枝を横断します。

外頸静脈をできるだけ頭蓋骨に2倍結紮し、結紮糸間で分割します。外頸静脈の近位端をポリエチレンカフに通します。ここでは、カフのハンドルが手術医に面していることが重要です。

次のステップとして、外側から来る微小血管静脈クランプを配置します。次に、静脈をヘパリンで湿らせ、結紮糸を取り除き、ポリエチレンカフの上に静脈をそっと引っ張ります。最後に、円形の8-0でカフの上に静脈を固定します背中に1つ、前に3つの結び目があるシルクの結紮糸。

右総頸動脈にアクセスするには、近位および遠位凝固後に右胸鎖乳突筋を動員して横断します。その後、迷走神経などの隣接する構造を傷つけないように注意しながら、総頸動脈を穏やかに動員します。静脈に類推して、総頸動脈をできるだけ頭蓋状に2回結紮し、結紮糸間で分割します。

次に、血管を動脈カフに通します。最後に、内側から来る微小血管クランプで動脈カフを固定します。次に、結紮糸を取り外し、血管拡張器を使用して動脈の内腔を広げます。

内腔を十分に広げた後、動脈を動脈カフの上に引っ張ります。最後に、静脈に例えて、8-0で動脈を固定しますシルクリガチャー。ここでは、動脈静脈吻合のために修復された静脈と動脈を見ることができます。

移植のためには、移植片を頸部の湿らせたエースに置きます。次に、ポータル静脈を8-0で引き抜きますシルクリガチャーループ、張力のない吻合のために静脈を短くし、次に門脈を静脈カフの上に引っ張ります。最後に、円で静脈を固定します 8-0シルクリガチャー。

静脈と同様に、大動脈の切り株を結紮ループに通し、大動脈を短くします。次に、大動脈を動脈カフの上に引っ張り、最後に円形の8-0で固定しますシルクリガチャー。再灌流の前に、脾臓血管を特定して結紮し、最後にそれらを鋭く解剖して脾臓を取り除きます。

再灌流の場合は、最初に静脈クランプを取り外し、次に動脈クランプを取り外します。移植片の適切な再灌流は、動脈の目に見える脈動と移植片全体のピンクがかった色を示しています。移植片を常温生理食塩水で湿らせます。

創傷を閉じる前に、血管のねじれを避けるために静脈カフのハンドルを取り外してください。最後に、6-0ランニング縫合糸で創傷を閉じ、0.5ミリリットルの常温生理食塩水を皮下に注入します。モデルを検証するために、移植した膵臓の内分泌機能を試験しました。

マウスは、手術の4日前にストレプトゾトシンによる前処理によって低血糖症になり、血糖値が300ミリグラムパーセントを超える場合、低血糖と見なされました。.このラインショットは、移植されていない生きた対照マウスの血糖値を赤で示し、長期の寒冷虚血時間にさらされていない移植片のレシピエントの血糖値を青で示しています。さらに、16時間の寒冷虚血時間に曝露された膵臓移植片のレシピエントの血糖値は緑色で示されています。

生きたマウスは、観察期間全体にわたって低血糖のままでした。対照的に、長期の低温虚血時間にさらされなかった膵臓移植片の移植は、24時間以内に正常な血糖をもたらし、移植片の内分泌機能を確認しました。16時間の低温虚血時間に曝露された移植片の移植は、レシピエントの正常な血糖を回復しませんでした。

さらに、このグループでは、初期の移植片損傷に関連する虚血再灌流障害のために、すべてのマウスを48時間以内に犠牲にしなければなりませんでした。このビデオでは、非縫合カフ技術を使用したマウスの膵臓移植の方法を紹介しました。これは、技術的にも顕微鏡的にも実現可能であり、優れた成功率を誇ります。

しかし、管閉塞による膵臓の進行性線維症を考えると、このモデルは、移植片の損傷に関連する以前の虚血再灌流障害に焦点を当てた研究領域に最も適