Name: 低密度初代海馬ニューロンの文化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 17 min 46 s
Description: 学ぶ低密度初代海馬ニューロンの培養法。神経膠細胞層上にニューロンを浮遊させて高純度培養を実現し、高解像度イメージングと機能アッセイに最適な方法を解説します。

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<ol><li>Banker, G. A., Cowan, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+hippocampal+neurons+in+dispersed+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Rat hippocampal neurons in dispersed cell culture.</a> Brain Res. 126, 397-425 (1977).</li>
<li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat Protoc. 1, 2406-2415 (2006).</li>
<li>Adamantidis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optogenetics%3A+10+years+after+ChR2+in+neurons--views+from+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Optogenetics: 10 years after ChR2 in neurons--views from the community.</a> Nat Neurosci. 18, 1202-1212 (2015).</li>
<li>Ho, V. M., Lee, J. A., Martin, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+biology+of+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The cell biology of synaptic plasticity.</a> Science. 334, 623-628 (2011).</li>
<li>Huganir, R. L., Nicoll, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMPARs+and+synaptic+plasticity%3A+the+last+25+years%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">AMPARs and synaptic plasticity: the last 25 years.</a> Neuron. 80, 704-717 (2013).</li>
<li>Luscher, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+AMPA+receptor+cycling+in+synaptic+transmission+and+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Role of AMPA receptor cycling in synaptic transmission and plasticity.</a> Neuron. 24, 649-658 (1999).</li>
<li>Varoqueaux, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroligins+determine+synapse+maturation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Neuroligins determine synapse maturation and function.</a> Neuron. 51, 741-754 (2006).</li>
<li>Huettner, J. E., Baughman, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+culture+of+identified+neurons+from+the+visual+cortex+of+postnatal+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Primary culture of identified neurons from the visual cortex of postnatal rats.</a> J Neurosci. 6, 3044-3060 (1986).</li>
<li>Lester, R. A., Quarum, M. L., Parker, J. D., Weber, E., Jahr, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+6-cyano-7-nitroquinoxaline-2%2C3-dione+with+the+N-methyl-D-aspartate+receptor-associated+glycine+binding+site%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Interaction of 6-cyano-7-nitroquinoxaline-2,3-dione with the N-methyl-D-aspartate receptor-associated glycine binding site.</a> Mol Pharmacol. 35, 565-570 (1989).</li>
<li>Brewer, G. J., Torricelli, J. R., Evege, E. K., Price, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+survival+of+hippocampal+neurons+in+B27-supplemented+Neurobasal%2C+a+new+serum-free+medium+combination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Optimized survival of hippocampal neurons in B27-supplemented Neurobasal, a new serum-free medium combination.</a> J Neurosci Res. 35, 567-576 (1993).</li>
<li>Banker, G., Goslin, K. Rat hippocampal neurons in low-density culture. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGoslin%2C+K+%22Culturing+nerve+cells%22">Culturing nerve cells</a>. 2, 339-370 (1998).</li>
<li>Hanisch, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+as+a+source+and+target+of+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Microglia as a source and target of cytokines.</a> Glia. 40, 140-155 (2002).</li>
</ol>

著者は、開示することは何もありません。

神経細胞を培養する「サンドイッチ」法は他の場所2、11、よく説明してきたが、それを採用したい研究者のための欲求不満につながることができ、テキストだけで説明するのは非常に困難なプロトコルを通して、いくつかのステップがあります。 グリア培養、カバースリップ調製ニューロン培養および維持：この方法は、3つの広いワークフローに分割することができます。 3つの製剤のそれぞれは、高品質のニューロン培養物のために重要であり、いくつかの重要な考慮事項は念頭に置いておく必要があります。ニューロンをメッキする前に、グリアフィーダー層は、理想的にはアストロサイトの均一な集団であるべきで、50から70パーセントの合流点の間にあります。これは、グリアフィーダー層から十分な栄養支持を確実にするでしょう。アストログリア文化はATTAC緩くしている他の細胞型、特にミクログリア、最小限の汚染を持っていることを確認することが重要ですHEDと丸みを帯びた細胞。ニューロンの健康と生存<sup class="...

脳は、神経細胞の複雑なネットワークに編成されます。ネットワークアクティビティと脳機能への個々のニューロンの寄与は、それらの分子組成およびそれらの生理学的特性の摂動を選択的に変更することによって研究することができます。個々の神経細胞の遺伝的および化学的操作は、後者の細胞の不均一性と複雑さによって邪魔されない、完全な脳組織よりも培養ニューロンで間違いなく簡単です。培養中のニューロンは、明確に定義された軸索及び樹状アーバを開発し、互いに広範囲シナプス結合を形成します。 成体動物から、または神経系の他の領域からニューロン培養は可能であるが、胚海馬培養物は、しばしば、それらの定義された錐体細胞集団と比較的低いグリア密度1,2に好ましいです。培養物中の低密度で成長させた海馬神経細胞は、特にAMEあります細胞内局在、タンパク質輸送、神経細胞の極性とシナプスの開発の研究にNABLE。培養中のニューロンはまた、広範囲シナプス可塑3、4、5、6分子プロセスを研究に使用されてきました。出生後生存しないグローバルな遺伝的欠失を有するマウスからの神経細胞培養物は、特定の遺伝子7の細胞とシナプスの役割を研究する際に特に有用でした。 脳のように、培養海馬神経細胞はグリア細胞からの栄養支持に依存しています。これは、彼らの文化を複雑にし、このサポートが供給されることにより、いくつかの異なる方法の開発につながっています。 1つの一般的に使用される方法は、グリア細胞8の単層上に直接ニューロンをメッキ、又は取得したヒップから汚染グリア細胞を許すことを含みますocampal組織が増殖し、ニューロン9の下の単層を形成します。この方法はある程度の成功を発見したが、得られた神経細胞培養物の不純物は、画像化実験のために不利です。ニューロン培養物の別の一般的に使用される方法は、完全グリアフィーダー層を、除外し、代わりに定義された成長媒体10の形態の栄養サポートを提供することです。 ここでは、「サンドイッチ」またはニューロン文化2、11の「バンカー」の方法について説明します。この方法は、次いで、パラフィンワックスビーズにより分離グリア細胞の単層上に懸架されたガラスカバースリップ上の海馬ニューロンをめっきすることを含みます。これは、基礎となるグリア単層からの栄養支持を可能にしながらグリアを汚染することなく、ニューロンの均一な集団の長期培養を容易にします。ニューロンは十分な年齢や成熟度レベルである場合には、ニューロンカバースリップは、グリア皿のアウト反転及びイメージング又は機能的アッセイに使用することができます。

<table><tbody><tr><td>解剖器具</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>マイクロ解剖はさみ</td><td>Roboz</td><td>RS-5910</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ解剖スプリングハサミ</td><td>Roboz</td><td>RS-5650</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ解剖スプリングハサミ</td><td>Roboz</td><td>RS-5605</td><td></td></tr><tr><td>デュモン鉗子</td><td>Roboz</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>デュモン鉗子 (#PP)</td><td>Roboz</td><td>RS-4950</td><td></td></tr><tr><td>名前</td><td>会社</td><td>カタログ番号</td><td>コメント</td></tr><tr><td>Tissue Preparation</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin (2.5%)</td><td>Gibco</td><td>15-090-046</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td><td>Gibco</td><td>25-200-072</td><td></td></tr><tr><td>Swinnex フィルターホルダー、25&nbsp;mm</td><td>EMD Millipore</td><td>SX0002500</td><td>セルストレーナーとして使用されます。フィルターとオートクレーブで最初に組み立て</td></tr>る <tr><td>Isoflorane</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada Inc.</td><td></td><td></td>CP0406V2</tr><tr><td>血球計算盤</td><td>ハウサー科学</td><td>1492</td><td></td></tr><tr><td>グレード 105 レンズ クリーニング ティッシュ</td><td>GE ヘルスケア</td><td>2105-841</td><td>セルストレーナーとして使用されます。フィルターホルダーとオートクレーブで最初に組み立て</td></tr>ます <tr><td>コットンフィルター付きガラスパスツールピペット</td><td>VWR</td><td>14672-412</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Gibco</td><td>15-630-080</td><td></td></tr><tr><td>カルシウム、マグネシウム、フェノールレッドを含まないハンクスのバランス塩溶液 (HBSS、10x)</td><td>Gibco</td><td>14-185-052</td><td></td></tr><tr><td>ガラスパスツールピペット</td><td>VWR</td><td>14672-380</td><td></td></tr><tr><td>ウシ膵臓由来デオキシリボヌクレアーゼI(Dnase)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25-100mg</td><td></td></tr><tr><td>Butane Bunsen burner</td><td>Wall-Lenk Mfg. Co.</td><td>モデル 65</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>エッペンドルフ</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>名前</td><td>会社名</td><td>カタログ番号</td><td>コメント</td></tr><tr><td>Tissue Culture</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン (10,000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>15-140-122</td><td></td></tr><tr><td>ペトリ皿 (100 mm)</td><td>フィッシャー</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>ペトリ皿 (60 mm)</td><td>フィッシャー</td><td>FB0875713A</td><td></td></tr><tr><td>ホース セラム</td><td>Gibco</td><td>16050-122</td><td>BGS の代わりに使用できますが、ロット間のばらつきがあるため、各ロットをテストする必要があります。血清の熱不活化をお勧めします。.</td></tr><tr><td>水酸化ナトリウム</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>S318-1</td><td></td></tr><tr><td>ピルビン酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>Minimum Essential Medium (MEM)</td><td>Gibco</td><td>11-095-080</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal Medium</td><td>Gibco</td><td>21-103-049</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamine (200 mM)</td><td>Gibco</td><td>25-030-081</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td>NBG培地</td></tr><tr><td>培養皿(60 mm)</td>でL-グルタミンの代わりに使用できますコー<td>ニング社</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>培養フラスコ(75 cm ^ 2)</td><td>グライナーバイオワン</td><td>658170</td><td></td></tr>シ<tr><td>タラビン(Ara-C)</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>C3350000</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-グルコース</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>ウシ成長血清(BGS)</td><td>ハイクローン</td><td>SH3054103</td><td>使用前に熱不活性化をお勧めします。</td></tr><tr><td>B27サプリメント(50x)</td><td>Gibco</td><td>17-504-044</td><td></td></tr>ジ<tr><td>メチルスルホキシド(DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418-100ml</td><td></td></tr><tr><td>極低温バイアルVWR</td><td></td><td>89094-806</td><td></td></tr><tr><td>DL-2-アミノ-5-ホスフォノペンタノ酸(APV)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5282</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>カタログ番号</td><td>コメント</td></tr><tr><td>Coverslip Preparation</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>四ホウ酸ナトリウム十水和物(ホウ砂)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B9876-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine Hydrobromide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2636</td><td></td></tr><tr><td>Histoplast Paraffin Wax</td><td>Fisher</td><td>22-900-700</td><td></td></tr><tr><td>プロトコルで議論された代替カバースリップ洗浄方法に使用される</td><td>重力対流式</td><td>オーブンVWR</td><td>89511-404</td></tr><tr><td>超音波浴(ソニケーター)</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック<td>15337400</td><td></td></tr><tr><td>硝酸</td><td>Anachemia</td><td>62786-460</td><td></td></tr><tr><td>セラミック染色ラックトーマス</td><td>サイエンティフィック8542E40</td><td></td><td>プロトコルで議論された代替カバースリップ洗浄方法に使用されます</td></tr><tr><td>カバースリップ</td><td>Glaswarenfabrik Karl Hecht&nbsp;GmbH</td><td>1001/18</td><td>ニューロンは低品質のガラスにうまく接着しないため、メーカーは非常に重要です&nbsp;</td></tr><tr><td>ホウ酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B0252</td><td></td></tr><tr><td>名前</td><td>会社</td><td>カタログ番号</td><td>コメント</td></tr><tr><td>Miscellaneous</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>滅菌シリンジ</td><td>フィルターVWR</td><td>28145-477</td><td>BDシリンジと使用フィルター滅菌</td></tr><tr><td>シリンジ&nbsp;</td><td>BD</td><td>302832</td><td>VWR滅菌シリンジフィルターと併用</td></tr><tr><td>ウォーターバス</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>15-460-16Q</td><td></td></tr><tr><td>倒立顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>CKX41</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 円錐形滅菌遠心分離チューブ</td><td>ThermoScientific</td><td>339650</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 円錐形滅菌遠心分離チューブ</td><td>ThermoScientific</td><td>339652</td><td></td></tr></tbody></table>

低密度初代海馬ニューロンの文化

Low-Density Primary Hippocampal Neuron Culture

文化の中で、個々の神経細胞の構造と生理をプローブする能力は、神経生物学の研究に不可欠である、そして個々のセルまたは定義されたネットワークの遺伝的および化学的操作の柔軟性が可能になります。無傷の脳組織と比較した場合、操作のような容易さは減少培養系で簡単です。これらの一次ニューロンの単離および増殖のための多くの方法が存在するが、それぞれが独自の制限を有します。このプロトコルは、次に、グリア細胞の単層上に懸架されたガラスカバースリップ上に低密度および高純度齧歯類胚の海馬ニューロンを培養するための方法を記載しています。根底にあるグリア単層からの栄養支持を可能にしながらこの「サンドイッチ文化は」ニューロンの人口の排他的な長期的成長が可能になります。ニューロンは十分な年齢や成熟度レベルである場合、ニューロンカバースリップは、グリア皿のアウト反転及びイメージング又は機能的アッセイに使用することができます。ニューロングラムこの方法によるrownは、典型的には、数週間のために生き残るためには、大規模なアーバー、シナプス結合、およびネットワークプロパティを開発しています。

初代神経細胞培養物のこの「サンドイッチ」法では、海馬ニューロン（ 図3）は、パラフィンビーズ（ 図2）により分離グリア細胞（ 図1）のベッドの上で成長します。これは、ニューロンが選択的に最小限のグリア細胞の汚染をカバーガラス上で増殖するが、組織培養皿上で成長しているグリア細胞から十分な栄養サポートを受けることを保証します。典型的には、ニューロンは&gt; 3週間の培養で維持し、それぞれ、それらの典型的なデホスホ-tauおよびMAP2免疫染色によって同定よく発達軸索および樹状突起との広範なarborisation、（ 図4）を開発することができます。成熟した神経細胞は、これらの区画に後シナプスマーカーDrebrin1の選択的局在化によって識別されるシナプス棘を開発します。これらのシナプス棘は密接にシナプス小胞マーカーシナプシン免疫染色により識別されシナプス前の専門分野に並置されています。ザ・シナプス前および後のサイトの近接はよく発達し、正し...

この記事では、グリア単層の上に反転したカバーガラス上で成長する低密度初代海馬神経細胞を培養するためのプロトコルを記述しています。ニューロンとグリアの層は、パラフィンワックスビーズで分離されています。この方法によって成長させた神経細胞は、高分解能光学イメージングおよび機能アッセイに適しています。

The ability to probe the structure and physiology of individual nerve cells in culture is crucial to the study of neurobiology, and allows for flexibility ...

本プロトコルは、もともとDr. Gary Bunkerらによって発表されたものであり、神経細胞をグリア細胞のフィルター層の上に懸垂させることで、胚性海馬ニューロンの高密度かつ高純度な培養を可能にするものです。この手法は、汚染となるグリア細胞を極めて少なく抑えた状態でニューロンを低密度に成長させることができるため、当社の他の海馬培養の結果においても非常に有用です。したがって、本手法は培養中の成熟ニューロンの高解像度イメージングや機能解析に最適です。本プロトコルの熟練度の向上は、手順の中で記述することが困難な重要な局面がいくつか存在するため、それに沿って進めることで、新規の導入を迅速化させます。本プロトコルは、高品質な初代ニューロンを培養するために必要な3つの独立した工程で構成されています。これらの工程には、グリア細胞の培養、カバーガラスの作成およびコーティング、そして海馬神経細胞の調製が含まれます。まず、記述プロトコルに従って、出生直後のラット皮質組織を入手します。ここでは直接的に示しませんが、本プロトコルの後半に登場する解剖手順は、皮質の解剖に使用するものとほぼ同一であることに留意してください。そのため、この後のビデオで示す海馬の解剖手順の中で、関連するステップを強調して説明します。記載されたプロトコルのステップ6に従い、回収した皮質組織からHBSSを除去し、その後、ハサミを用いて組織を可能な限り細かく刻みます。刻んだ組織を50 milliliterのコニカルチューブに移送するのに十分な量のHBSSを加え、さらにHBSSを加えて全量を12 millilitersにします。2.5%trypsinと10 milligram per milliliter DNA溶液をそれぞれ1.5 milliliters加え、転倒混和した後、得られた混合物を37 degree Celsiusのウォーターバスで12分間インキュベートします。ガラス製パステールピペットを用いて組織を10〜15回トリチュレーションし、その後、ウォーターバスでさらに3分間インキュベートします。組織片がチューブの底に沈殿していることを確認し、上清を5 mLのBGSを含む50 mLコニカルチューブにろ過します。未消化の組織片が残っているチューブに、13.5 mLのHBSSおよび1.5 mLの2.5% trypsinを加え、転倒混和した後、ウォーターバスでさらに10分間インキュベートします。インキュベーション後、残った組織を10〜15回トリチュレーションし、最初のろ液が入ったチューブにろ過します。次に、さらに3 millilitersのBGSを通過させてフィルターを洗浄します。この時点で、ろ液を複数のチューブに分けることで、ペレット化した細胞のバランス調整と再懸濁の両方を簡便に行うことができます。懸濁液を130

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Research

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Neuroscience

神経科学

解剖や個々の脳領域からの細胞の増殖は、細胞と生理的パラメータの調査を容易にします。我々は、無血清環境でのニューロンに富んだ文化を生産する主要な細胞培養のための方法を説明します。...

P0新生児ラットからの海馬ニューロンの初代培養

このプロトコルは、エレクトロポレーションと文化のマウス海馬および皮質のニューロンを経由してトランスフェクション、解剖するために必要な手順を説明します。長期培養がシナプスと樹状突起棘の解析の研究に使用することができますが、短期的な文化は、軸索伸長やガイダンスの研究に使用されることがあります。...

Nucleofectionとマウス胎児海馬および皮質ニューロンの初代培養

私達は非常にフィーダーグリア細胞層を使用せずに出生マウスの脳から海馬神経細胞の精製培養のためのプロトコルを提供しています。...

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マウス海馬ニューロンの培養技術

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凍結胚性ニューロンからの低密度初代ニューロン培養物の生成

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高密度ニューロンフィーダー層を用いた超低密度ニューロン培養物の作製

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私たちは、新生児マウスの標識とジェノタイピング、およびそれらから一次ニューロン培養を生成する手順について説明します。ジェノタイピングは迅速、効率的、信頼性が高く、自動核酸抽出が可能です。これは、ジェノタイピングを事前に完了する必要がある新生児致死マウスとその培養物に特に有用です。...

脳神経細胞の初代培養の確立が続く動物の急速なジェノタイピング

初代海馬ニューロンの低密度培養では、通常、神経栄養因子を供給し、寿命を維持するためにグリアフィーダー層が必要です。ここでは、高密度ニューロンフィーダー層の存在下でガラスカバースリップ上で超低密度ニューロンを培養する簡略化された方法について説明し、これにより特定のニューロン自律メカニズムの調査が容易になります。...

超低密度のために簡略化された方法、長期初代海馬ニューロンの文化

このプロトコルは、一次神経細胞培養におけるタンパク質の共局在化を研究するために超解像顕微鏡を採用する方法を示す。...

一次ニューロンにおけるタンパク質とシナプスマーカーの共局在化を研究する超分解能イメージング

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低密度初代海馬ニューロンの文化

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