Name: 心機能の研究のための解剖と観察ハニービー背側の船 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 52 s
Description: 学ぶミツバチ心機能の解剖観察法。背側血管への薬剤適用で心拍変化を可視化し、昆虫生理と花粉媒介者の健康研究に貢献する簡便で再現性の高い手法です。

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著者は、技術的なコメントと提案をしてくれたジェフリー・ブルームクイスト博士とダニエル・スウェール博士に感謝します。 このプロジェクトは、バージニア工科大学の昆虫学部と農学生命科学部から部分的に資金提供を受けました。

被験者の1収集と準備<ol><li>コロニーから蜂の適切な数を収集します。 注：必要な数は、規模や範囲の実験だけでなく、研究者のスキルだけでなく、依存します。 2つの治療グループでは、グループごとに10蜂の所望のサンプルサイズである場合たとえば、合理的に熟練した研究者は失敗した解剖を考慮して、少なくとも30蜂を集めるかもしれないし、スコアに20便利な動画で終わります。 </li><li>コレクションと解剖の間を通過する時間を最小にしてください。 注：ミツバチが解剖の前日間実験室に収容することができるが、解剖の成功率（ すなわち 、解剖背容器安定心拍数を維持する可能性）は、その時間の量に対して減少することが観察されていますミツバチコロニーから離れて収容されています。 <ol><li>研究室に収容されながら、水や食料の供給源とミツバチを提供します。エクサのためmple、少なくとも、（これ未満6時間の持続時間のために十分である）を水中でスクロースの50％（w / v）の溶液へのアクセスを提供します。より長い期間のために、ミツバチが蜜へのアクセスを提供します。 </li><li>ストレスを軽減し、脱水症状を避けるために、約32°C 60〜80％の相対湿度の温度で一晩ラボでハウス蜂。 </li></ol></li><li>解剖の前に、取り扱いを支援するために簡単にハチを麻酔。 注：これは、解剖の成功率を減少させ、スループットを減少させることができます。 <ol><li>ちょうど十分な長さの取り扱いを助けるために運動を減らすために、氷上や冷蔵庫にそれらを配置することにより、いずれかのミツバチを冷やします。 </li><li>また、簡単に取り扱いを助けるためにCO 2にミツバチを公開します。 注：寒さに拡張暴露は、解剖の成功率を減らすことができます。拡張またはCO 2への暴露を繰り返しても、解剖の成功率を減少させることができます。 </li></ol></li></ol> 2.解剖背側腹壁の注：蜂は解剖の時に生きている必要があります。 <ol><li>鉗子および/または顕微解剖ハサミを使用して、腹部の切開を容易にするための脚と翼を削除します。解剖の間に器具を洗浄する目的で、近くに蒸留水で満たされた小さなビーカーまたは類似の容器を保管してください。 </li><li>鉗子で蜂を抑制しつつ、第一および第二のtergites（ 図1参照）との間に背側腹壁に沿って横方向にカットする顕微解剖ハサミを使用しています。 </li></ol><img alt="図1" src="/files/ftp_upload/55029/55029fig1.jpg" /> 図1：ミツバチの腹部の背面図。赤線で示すように最初の切開は、第一および第二のtergitesとの間でなされるべきです。スケールバー= 1ミリメートル。 <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55029/55029fig1large.jpg" target="_blank">彼女をクリックしてください</a>eは、この図の拡大版を表示します。 <ol start="3"><li>軽くピンセットで第二背板の後縁を把持しながら、スティンガーに最初の切開から蜂の各辺に沿って縦方向に切断（ 図2を参照）。消化管を穿刺避けるために切断する際には注意してください。 </li></ol><img alt="図2" src="/files/ftp_upload/55029/55029fig2.jpg" /> 図2：ミツバチの腹部の側面図。赤線で示すように第二と第三の切開は、腹部の両側に沿ってなされるべきです。スケールバー= 1ミリメートル。 <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55029/55029fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <ol start="4"><li>細かい鉗子の第二のセットのためのはさみを交換し、慎重に残りoから背側腹壁を分離するためにそれらを利用します腹部F。ゆっくりスティンガーと背側腹壁に付着したまま消化管の任意の部分を削除します。内容は背血管の可視化を妨げるコート腹壁をすることができているように、腸を破裂避けてください。 </li></ol><img alt="図3" src="/files/ftp_upload/55029/55029fig3.jpg" /> 図3：背容器の眺め。腸とスティンガーが削除されたら、背血管を切開背側腹壁の正中線に沿って表示されます。スケールバー= 1ミリメートル。 <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55029/55029fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <ol start="5"><li>背容器が表示されるようにカメラの下に所望の向きで背側腹壁を配置します （ 図3を参照）。余分なABを離れてトリミングする顕微解剖はさみを利用背血管の可視化を妨げるdominal壁。背側腹壁の形状が適切に位置し、浅いカップまたはボウルのようになります。 <ol><li>背容器は蜂の最後尾腹部のセグメントに延びていないので、背の血管の可視化を向上させるために、最終的な背板を取り外します。 </li></ol></li><li>調整可能なボリュームのマイクロピペットを利用して、生理的条件を維持し、安定したハートビートを容易にするために、等張溶液10μlと背容器をカバーしています。 注：推奨されるソリューションは四半期強度リンゲル液（0.120グラム/ Lの塩化カルシウム、0.105グラム/ Lの塩化カリウム0.050グラム/ L重炭酸ナトリウム、および2.250グラム/ Lの塩化ナトリウム）安定を促進することが見出されています、連続ハートビート。 </li></ol> 3.観測と心拍数の調節<ol><li>安定した、連続的なハートビートが達成されるまで背容器を静置することを許可します（通常300秒以内）。 注：ハートビートは背容器のリズミカルな収縮として可視化されます。最初に、蜂が麻酔された場合は特に、ハートビートがないように見えるかもしれないが、心臓は通常、数分間等張液で休ん後に打撃を再開しますし、時間の暴行続けることができる、それが溶液に浸したまま提供。 </li><li>分あたりの拍数（BPM）の観点で心拍数を測定します。 <ol><li> 60秒の期間中に観察された収縮の回数を記録します。このプロセスを容易にするために、手の数取器とタイマーを使用してください。 </li></ol></li><li> cardiomodulatory化合物で処理する前と後に観察BPMを記録することによって、心拍数の変化を測定します。 注：心拍数への影響を観察するために必要な時間は、試験される化合物に依存して変化し得るが、心拍数の変化は、典型的には数分以内に観察することができます。 <ol><li>直前のベースライン心拍数を決定しますいずれの試験化合物を添加。 注：治療後の心拍数は、通常90〜120秒後に決定することができます。 </li><li>背の容器を浸して使用したのと同じ等張液中の化合物を溶解することによって潜在的なcardiomodulators（ 例えば、オクトパミン）を準備します。 </li><li>マイクロピペッターを利用して背容器を周囲の溶液に試験化合物を追加します。 </li></ol></li><li>より高い精度とより高いスループットのために、各被験者のビデオ録画を行い、その後、後で心拍数を獲得するためにビデオを使用しています。 注：これはビデオのほぼ連続生産を容易にするために解剖をずらすために、単一の調査員を可能にします。動画を記録する場合、最小推奨長さは、任意の試験化合物を60秒マークで追加されると、約240秒です。これは、研究者は、治療後の心拍数120秒をスコアのベースライン心拍数とし、別の60秒のウィンドウを採点するための60秒のウィンドウを持っていることを保証します治療後。 </li></ol>

<ol><li>Klowden, M. J. Circulatory Systems. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKlowden%2C+MJ+%22Physiological+Systems+in+Insects%2C+3rd+Edition%22">Physiological Systems in Insects, 3rd Edition</a>. , 3rd, 365-413 (2013).</li>
<li>League, G. P., Onuh, O. C., Hillyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+structural+and+functional+analysis+of+the+larval+and+adult+dorsal+vessel+and+its+role+in+hemolymph+circulation+in+the+mosquito+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparative structural and functional analysis of the larval and adult dorsal vessel and its role in hemolymph circulation in the mosquito Anopheles gambiae.</a> J Exp Biol. 218 (Pt 3), 370-380 (2015).</li>
<li>Wasserthal, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+Hemolymph+Circulation+in+the+Butterfly+Papilio-Machaon+L+Revealed+by+Contact+Thermography+and+Photocell+Measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Oscillating Hemolymph Circulation in the Butterfly Papilio-Machaon L Revealed by Contact Thermography and Photocell Measurements.</a> J Comp Physiol. 139 (2), 145-163 (1980).</li>
<li>Wasserthal, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+circulation+and+tracheal+ventilation+in+holometabolous+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Interaction of circulation and tracheal ventilation in holometabolous insects.</a> Adv Insect Physiol. 26, 297-351 (1996).</li>
<li>Schwab, E. R., Chilson, R. A., Eddleman, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heartbeat+Rate+Modulation+Mediated+by+the+Ventral+Nerve+Cord+in+the+Honey-Bee%2C+Apis-Mellifera%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+B-Biochem+Syst+Environ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heartbeat Rate Modulation Mediated by the Ventral Nerve Cord in the Honey-Bee, Apis-Mellifera.</a> J Comp Physiol B-Biochem Syst Environ Physiol. 161 (6), 602-610 (1991).</li>
<li>Kaiser, W., Weber, T., Otto, D., Miroschnikow, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+supply+of+the+heart+and+electrocardiogram+potentials+with+reversed+polarity+in+sleeping+and+resting+honey+bees%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Oxygen supply of the heart and electrocardiogram potentials with reversed polarity in sleeping and resting honey bees.</a> Apidologie. 45 (1), 73-87 (2014).</li>
<li>Papaefthimiou, C., Theophilidis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Octopamine--a+single+modulator+with+double+action+on+the+heart+of+two+insect+species+%28Apis+mellifera+macedonica+and+Bactrocera+oleae%29%3A+Acceleration+vs.+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Octopamine--a single modulator with double action on the heart of two insect species (Apis mellifera macedonica and Bactrocera oleae): Acceleration vs. inhibition.</a> J Insect Physiol. 57 (2), 316-325 (2011).</li>
<li>Castro, C. A., Hogan, J. B., Benson, K. A., Shehata, C. W., Landauer, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral-Effects+of+Vehicles+-+Dmso%2C+Ethanol%2C+Tween-20%2C+Tween-80%2C+and+Emulphor-620%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Behavioral-Effects of Vehicles - Dmso, Ethanol, Tween-20, Tween-80, and Emulphor-620.</a> Pharmacol Biochem Behav. 50 (4), 521-526 (1995).</li>
<li>Papaefthimiou, C., Papachristoforou, A., Theophilidis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biphasic+responses+of+the+honeybee+heart+to+nanomolar+concentrations+of+amitraz%5BTitle%5D)+AND+%22Pestic+Biochem+Phys%22%5BJournal%5D)">Biphasic responses of the honeybee heart to nanomolar concentrations of amitraz.</a> Pestic Biochem Phys. 107 (1), 132-137 (2013).</li>
<li>Roeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Octopamine+in+invertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Octopamine in invertebrates.</a> Prog Neurobiol. 59 (5), 533-561 (1999).</li>
<li>Johnson, E., Ringo, J., Dowse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+Drosophila+heartbeat+by+neurotransmitters%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+B%22%5BJournal%5D)">Modulation of Drosophila heartbeat by neurotransmitters.</a> J Comp Physiol B. 167 (2), 89-97 (1997).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

ここで紹介するプロトコルは、ミツバチの心拍数に対する薬理学的化合物の影響をテストするための簡単で効果的なアプローチを提供します。生きた昆虫の腹側神経索を横断する5、 または背側血管7を露出させるときに腹側神経索を解剖する以前の実験で観察されたように、中枢神経系の調節が失われると、安定した低周波の心拍がもたらされます。拍動の頻度が低いため、研究者は繊細な器具や高価な器具に頼ることなく、心拍数を視覚的に評価できます。実証されているように、溶媒DMSOは、低濃度で使用して、背側血管を入浴するために使用される等張溶液を介して送達するための薬理学的薬剤を溶解することができます。さらに、この方法では、ミツバチの心臓促進剤として作用することが以前に示されている無脊椎動物の神経調節剤オクトパミンを使用して、心拍数を加速することができます7。このプロトコルは心拍数の変化を測定するために設計されましたが、収縮パターンの変化など、心拍の他のより定性的な特徴も観察するために使用することが可能です。問題のエンドポイントに関係なく、プロトコルは主に、クリーンで迅速な解剖を実行する研究者の能力に依存し...

この方法論の全体的な目標は、研究者が迅速かつ容易に観察し、薬理学的薬剤は、ミツバチの心拍数に与える影響を定量化できるようにすることです。ミツバチは、他の昆虫のように、血体腔として知られている体腔、全体を通して、血リンパ、血液の昆虫同等のものを広めるオープン循環系を持っています。血リンパの循環が栄養素、免疫因子、老廃物、ならびに神経ホルモンおよび他のシグナル伝達分子1の輸送のために不可欠です。循環は昆虫の背側正中線だけでなく、アクセサリー拍動器官に沿って延びている背の容器、によって促進されます。背容器は腹部と胸部と頭の中で大動脈に心を指定、機能的に異なる2つのセクションに分かれています。胸部や頭部に向かって心臓ポンプ血リンパ中の伝播収縮は、付属拍動器官は、四肢への血リンパの流れを確保しながら。 <pクラス= &quot;jove_content&quot;&gt;昆虫心臓機能、サイズ、生理学、または昆虫のライフステージに応じて、様々な方法を使用して観察することができます。幼虫以下昆虫に心拍数を観察するための一般的な方法は、生体内イメージング2の使用です。それは、腹壁を通して背容器を明確に表示することは困難であるため、この方法は、しかしながら、成人ミツバチにおいてあまり有用です。ミツバチなどの昆虫、様々な心拍数を記録するための確立されたアプローチは、サーミスタは、心臓拍動3,4を検出するために、昆虫の外側に適用される利用接触サーモグラフィの使用です。成体ミツバチにおける心拍数は、電気インピーダンス信号4,5を測定するために電気技術を使用して記録されています。この技法は、心臓への次の動物に電極を挿入し、心拍4を記録するためのインピーダンス変換器の使用を必要とします。同様に、心電図はdetecするために使用されています心臓によって生成され、心臓の活動6の変化を観察するために蜂のビデオ録画と組み合わせた電気信号をtは。これらのアプローチの明確な利点は、心拍数ではなく、対象における生理学的応答の全範囲の可用性を保証するのに役立つ解剖標本、よりも、そのまま、生きている蜂で評価されていることです。これらのアプローチの課題は、被写体、心拍数を変化させるだけでなく、薬理学的薬剤をテストするときに、適切な配信方法を決定するかもしれない外部の変数と刺激を制限する必要の固定化や麻酔のための会計が含まれています。 ハチ心臓活動を研究するために使用されている別のアプローチは、部分的に、力変位変換器7を使用して、背部の血管収縮を測定し、その後、心臓を露出させるために、昆虫を分析することです。このプロトコルでは、心臓は継続的に生理食塩水やテストの共同の実行に浴びますmpoundsは、対象7への適用のために、この溶液中に溶解することができます。この方法及びそれらを前述の有意差は、腹側神経索は、中枢神経系は、心拍数5の調節に再生するために示されている役割を排除する、除去することです。結果は通常、非常に不安定なあるベースラインハートビートは、典型的には、生きている昆虫5,7で観察されるよりもはるかに低い周波数と振幅で安定するということです。どのようなこれらの方法の全てに共通しているの彼らが行われるために、ある程度の専門知識に加えて、高度に専門化し、しばしば高価な機器を必要とするということです。おそらく、最大の欠点は、これらのアプローチのいずれも、そのような潜在的にcardiomodulatory化合物のライブラリーをスクリーニングするように被験者の数が多い、試験伴う実験に特に適していないことです。 ここで説明されたアプローチの最大の強みそのシンプルさです。プロトコルは習得が比較的容易であり、セットアップは少しスペースを必要とし、最小限の金融入力が必要です。方法はいくつかの蜂、いくつかの手術器具、等張液、およびデジタル顕微鏡やデジタルカメラとの伝統的な顕微鏡のいずれかより少しが必要です。ハチは、背側血管を可視化するために解剖され、デジタルビデオは薬剤による治療前後の心拍数を記録するために使用されます。録画は、心拍数の変化を観察するために実際に必要ではないが、それは非常にスループットを増加させる（ すなわち 、一定時間内に処理可能な被験者の数）。研究者は一度にビデオの多数を記録し、後で都合のよいときにこれらのビデオを採点することによって、効率を最大限に高めることができます。このアプローチのもう一つの利点は、ビデオは調査員が採点処理が中断されるべきで、最初からやり直す、とvのためのそれを容易にすることを可能にするということですiewerバイアスを減少させるために治療を知らされます。

<table><tbody><tr><td>Dino-Lite Edge デジタルUSB顕微鏡</td><td>Dino-Lite</td><td>AM4815ZT</td><td>デジタル顕微鏡または同様のセットアップで十分です</td></tr><tr><td>顕微鏡スタンド</td><td>Dino-Lite</td><td>RK-10</td><td>デジタル顕微鏡</td></tr>に適した<tr><td>スタンド ラップトップまたはPC</td><td></td><td></td><td>デジタル顕微鏡に必要な</td></tr><tr><td>マイクロダイセクションはさみ(バンナス、8cm、ストレート、5mmブレード)</td><td>ワールド精密機器</td><td>14003</td><td>マイクロダイセクションに適した同様のハサミで十分です</td></tr><tr><td>マイクロダイセクション鉗子、10.2 cm、角度付き(2ペア)</td><td>ワールドプレシジョンインスツルメンツ</td><td>504482</td><td>マイクロダイセクションに適した同様の鉗子で十分です</td></tr><tr><td>リンガーズ溶液1/4強度錠剤&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>96724-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>解剖トレイ</td><td></td><td></td><td>マイクロダイセクションに適した任意の表面</td></tr><tr><td>シングルチャンネル 10 &micro;lピペット</td><td></td><td></td><td>10 & マイクロを正確に送達できる任意のデバイス;lボリューム</td></tr><tr><td>ピペットチップ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>小さなビーカーまたは水</td><td></td><td></td>の容器 <td>被験者間の機器をすすぐために使用されます</td></tr><tr><td>ハンドタリーカウンター</td><td>オフィスデポ</td><td>295033</td><td>同様の製品で十分です</td></tr><tr><td>タイマー</td><td>オフィスデポ</td><td>644219</td><td>同様の製品で十分です</td></tr><tr><td>脱イオン水</td><td></td><td></td><td>リンガー溶液とすすぎ器具の調製</td></tr></tbody></table>

心機能の研究のための解剖と観察ハニービー背側の船

Dissection and Observation of Honey Bee Dorsal Vessel for Studies of Cardiac Function

ヨーロッパミツバチ、Apis mellifera L.は、蜂蜜の生産と作物受粉サービスの提供で知られる貴重な農業および商業資源であり、記憶と学習、老化などの研究に使用される重要なモデル社会昆虫でもあります。ここでは、昆虫の心臓の役割を果たす背側血管を視覚化するために、ミツバチの背側腹壁を解剖するための詳細なプロトコルについて説明します。解剖が成功すると、適切な条件下で長期間安定した心拍を維持できる機能的な心臓が露出します。これにより、研究者は心臓調節化合物を背側血管に適用することにより、心拍数を操作できます。研究者は、デジタル顕微鏡またはデジタルカメラを搭載した顕微鏡のいずれかを使用して、試験化合物による治療前後の背側血管のビデオ記録を行うことができます。その後、治療後の心拍数の変化や心拍パターンの変化を判断するために、ユーザーの都合の良い時間にビデオを採点できます。このプロトコルの利点は、セットアップが比較的安価で、習得が容易で、スペースや機器をほとんど必要とせず、実施にかかる時間が非常に短いことです。

このプロトコルを使用して試験される可能性があり薬理学的に活性な化合物の多くは水溶性ではないので、試験化合物が背容器を浸すために使用される等張液を介して配信されることを可能にする信頼性の高い溶媒が必要です。ジメチルスルホキシド（DMSO）は、一般に、動物8に実験薬物および他の化合物を送達するためのビヒクルとして使用される溶剤であり、ミツバチ心臓活動9に殺虫剤の影響を調べた研究では、この目的のために首尾よく使用されてきました。その結果、DMSOは、それが最初cardiomodulatory活性について試験することを必要と背容器に試験化合物を送達するための潜在的な手段として選択しました。このプロトコルでは、解剖背容器は、最初四半期強度リンゲル液10μlに浸され、その後、心拍数は、試験化合物を添加する前に決定されます。試験化合物は、ARE 1/4強度リンゲル液に溶解したDMSO10μlに既知濃度で送達した後、背容器は心拍数の後続の変化を観察します。 <p class="jove_content" fo:keep-together...

ミツバチや他の昆虫の腹部背側血管は、哺乳類の心臓と同等の機能として機能し、栄養素の輸送、老廃物の除去、免疫機能などにおいて重要な役割を果たしています。ここでは、ミツバチの心拍数の視覚化と薬理学的操作のためのプロトコルについて説明します。

The European honey bee, Apis mellifera L., is a valuable agricultural and commercial resource noted for producing honey and providing crop pollination ...

このプロトコルの全体的な目標は、心臓調節剤を背側血管に直接適用することに起因するミツバチの心拍数の変化を観察することです。この方法は、昆虫の生理学、特に花粉媒介者の健康に関連する重要な質問に答えることができます。この手法の主な利点は、そのシンプルさにより、費用対効果が高く、実行が容易になることです。コロニーから適切な数のミツバチを集めます。賢明な対策は、解剖の失敗を説明するために50%の余剰を含めることであり、熟練した研究者でさえ計画する必要があります。実験室に収容されている間、ミツバチに水と食物の供給源を提供します。ハウジングの持続時間が6時間未満の場合は、少なくとも50%のショ糖溶液へのアクセスを提供します。長期間の場合は、蜂蜜へのアクセスも提供します。ミツバチを摂氏約32度、相対湿度60〜80%で一晩飼育します。採集したばかりのミツバチは解剖しやすいので、早めに解剖を進めてください。解剖の前に、ミツバチを二酸化炭素に短時間さらして、ミツバチの動きを減らすのに十分な麻酔をかけます。麻酔の深さは解剖をより困難にする可能性があるため、ガスの使用はできるだけ少なくしてください。ミツバチは解剖時に生きていなければなりません。まず、鉗子またはマイクロダイセクションハサミを使用して、脚と翼を取り除きます。各操作の後、ツールを蒸留水ですすいでください。次に、鉗子で蜂を拘束し、ハサミを使用して、第1と第2のテルギットの間、背側腹壁に沿って横方向に切ります。次に、鉗子で2番目のテルジャイトの後端を軽くつかみ、最初の切開部から針まで蜂の両側に沿って縦方向に慎重に切ります。消化管に穴を開けないでください。次に、細い鉗子を使用して、背側の腹壁を腹部の残りの部分から慎重に分離します。次に、スティンガーをそっと取り外し、背腹壁に付着したままの消化管の部分を慎重に取り除きます。腸の内容物は、背側血管の視覚化を覆い隠す可能性があるため、放出しないでください。次に、背側血管の視覚化を改善するために、最終的なタージャイトを取り除きます。次のステップは、背側血管が見えるようにステージを調整し、その視界を妨げる余分な腹壁を切り取ることです。背側の腹壁の形状は、適切に配置されている場合、浅いカップまたはボウルに似ている必要があります。背側血管を推奨される等張性溶液10マイクロリットルで覆って、その物理的状態を維持し、背側血管の視覚化を妨げる残りの膜をすべて取り除きます。.等張液を添加すると、緩い膜が浮き上がり、背側血管の視界が遮られる可能性があります。これらの膜片は細い鉗子で取り外すことができますが、背側血管を傷つけないように注意してください。最初は心拍がないように見えるかもしれませんが、等張液で数分後には、心臓は通常鼓動を再開します。溶液に浸したままにしておくと、心臓は何時間も鼓動し続けることができます。背側の血管が安定して連続した心拍に達するまで、邪魔されずに座らせます。これは通常、5分以内に行われます。ハンドタリーカウンターを使用してベースライン心拍数を測定するか、より正確にするために、実験のビデオ録画を作成し、後で測定を行います。最初の治療の前に、少なくとも 1 分間の安定した心拍を記録してください。次に、バスと同じ等張溶液に理想的に溶解されている潜在的なカーディオモジュレーターを適用する準備をします。このため、推奨される溶液にはDMSOが含まれており、ほとんどの化合物を可溶化することができます。試験化合物を追加した後、心拍数の変化を測定する前に少なくとも1分待ってください。心拍数を正確に測定するには、少なくとも1分間のデータが必要であり、通常は数分のデータが必要です。さまざまな DMSO 濃度を含むさまざまな等張性溶液を使用して、心拍数への影響について試験しました。5%と10%のDMSOは心拍数を有意に減少させましたが、1%のDMSO等張液は減少しませんでした。そこで、1パーセントの溶液を実験に使用しました。無脊椎動物のよく特徴付けられた復調剤であるオクトパミンは、ビヒクルに対してテストされました。オクトパミンの濃度が高いほど心拍数が有意に増加し、アッセイの有用性が実証されました。このビデオを見れば、背側血管を視覚化するための解剖方法や、潜在的な心電調節剤がミツバチの心拍数に及ぼす影響をテストする方法について、十分に理解できるはずです。このテクニックを習得すると、適切に実行すれば数分で解剖を完了することができます。

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ここでは、中隔動脈がカニュール化および加圧されるように、動脈灌流圧および流れを維持する動脈灌流圧および流れのex...

マウス心臓における毛細血管、細動脈、および周囲細胞の動的測定とイメージング

複雑な解剖学的構造のため、心臓サンプルの一貫して再現可能な解剖および採取プロトコルを実装するのは難しい場合があります。この原稿は、いくつかの標準的な心臓解剖プロトコルの重要な要素を提示し、肉眼検査アプローチと組織病理学的検査に一般的に使用されるサンプリング部位の両方を強調しています。...

循環器疾患大型動物モデルにおける心臓の解剖技術と組織学的サンプリング

ショウジョウバエの心臓切片作製および蛍光イメージングプロトコルは、心臓の構造と病状の研究を簡素化します。このアプローチには、従来の解剖に必要な技術的専門知識をバイパスして、簡単な切片作成、染色、およびイメージングが含まれます。これにより、アクセシビリティが向上し、ショウジョウバエは、より広範な科学コミュニティ内で心臓関連研究のモデルとしてより広く利用できるようになります。...

クライオ切片による ショウジョウバエ の心臓蛍光染色のための新規で効率的な方法

学ぶミツバチ心機能の解剖観察法。背側血管への薬剤適用で心拍変化を可視化し、昆虫生理と花粉媒介者の健康研究に貢献する簡便で再現性の高い手法です。

心機能の研究のための解剖と観察ハニービー背側の船

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