Name: マウス同所性膀胱腫瘍モデルおよび腫瘍検出システム (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: 学ぶマウス同所性膀胱腫瘍モデル構築法。非侵襲的な手法でC57BL/6JマウスにMB49 PSA細胞を移植し、腫瘍成長をモニタリングして膀胱内治療法の評価を可能にする信頼性の高い前臨床研究モデルを確立します。

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この研究は、シンガポール国立医学研究評議会（NMRC/CIRG/1335/2012）からの助成金によって資金提供されました。これはKesavan Esuvaranathan教授に授与されました。

<ol><li>Gunther, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+%28MB49%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li>
<li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of murine bladder cancer.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).</li>
<li>Chade, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathological+characterization+of+a+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Braz+J+Urol%22%5BJournal%5D)">Histopathological characterization of a syngeneic orthotopic murine bladder cancer model.</a> Int Braz J Urol. 34, 220-226 (2008).</li>
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<li>Kasman, L., Voelkel-Johnson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+bladder+cancer+model+for+gene+delivery+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">An orthotopic bladder cancer model for gene delivery studies.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50181(2013).</li>
<li>Ninalga, C., Loskog, A., Klevenfeldt, M., Essand, M., Totterman, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CpG+oligonucleotide+therapy+cures+subcutaneous+and+orthotopic+tumors+and+evokes+protective+immunity+in+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">CpG oligonucleotide therapy cures subcutaneous and orthotopic tumors and evokes protective immunity in murine bladder cancer.</a> J Immunother. 28, 20-27 (2005).</li>
<li>Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+and+Microenvironment+Modification+during+Progression+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tumor and Microenvironment Modification during Progression of Murine Orthotopic Bladder Cancer.</a> Clin Dev Immunol. , 865684(2011).</li>
<li>Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+for+detecting+and+treatment+monitoring+of+orthotopic+murine+bladder+tumor+implants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants.</a> J Urol. 145, 1297-1301 (1991).</li>
<li>Kikuchi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantitative+analysis+of+early+stage+orthotopic+murine+bladder+tumor+using+in+vivo+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging.</a> J Urol. 170, 1375-1378 (2003).</li>
<li>Sweeney, S. K., Luo, Y., O'Donnell, M. A., Assouline, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotechnology+and+cancer%3A+improving+real-time+monitoring+and+staging+of+bladder+cancer+with+multimodal+mesoporous+silica+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Nanotechnology and cancer: improving real-time monitoring and staging of bladder cancer with multimodal mesoporous silica nanoparticles.</a> Cancer nanotechnology. 7, 3(2016).</li>
<li>Tanaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+detection+of+bladder+cancer+in+an+orthotopic+murine+model+with+green+fluorescence+protein+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive detection of bladder cancer in an orthotopic murine model with green fluorescence protein cytology.</a> J Urol. 170, 975-978 (2003).</li>
<li>Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+to+monitor+bladder+cancer+cell+adhesion+in+vivo%3A+a+new+approach+to+optimize+a+syngeneic%2C+orthotopic%2C+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model.</a> BJU Int. 101, 120-124 (2008).</li>
<li>Newton, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-interleukin-10R1+monoclonal+antibody+in+combination+with+bacillus+Calmette--Guerin+is+protective+against+bladder+cancer+metastasis+in+a+murine+orthotopic+tumour+model+and+demonstrates+systemic+specific+anti-tumour+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anti-interleukin-10R1 monoclonal antibody in combination with bacillus Calmette--Guerin is protective against bladder cancer metastasis in a murine orthotopic tumour model and demonstrates systemic specific anti-tumour immunity.</a> Clin Exp Immunol. 177, 261-268 (2014).</li>
<li>Patel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transabdominal+micro-ultrasound+imaging+of+bladder+cancer+in+a+mouse+model%3A+a+validation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study.</a> Urology. 75, 799-804 (2010).</li>
<li>Wu, Q., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+response+of+orthotopic+bladder+tumors+to+granulocyte+macrophage+colony-stimulating+factor+therapy+using+the+prostate-specific+antigen+gene+as+a+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Monitoring the response of orthotopic bladder tumors to granulocyte macrophage colony-stimulating factor therapy using the prostate-specific antigen gene as a reporter.</a> Clin Cancer Res. 10, 6977-6984 (2004).</li>
<li>Luo, Y., Chen, X., O'Donnell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+prostate+specific+antigen+to+measure+bladder+tumor+growth+in+a+mouse+orthotopic+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Use of prostate specific antigen to measure bladder tumor growth in a mouse orthotopic model.</a> J Urol. 172, 2414-2420 (2004).</li>
<li>Coralli, C., Cemazar, M., Kanthou, C., Tozer, G. M., Dachs, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+the+reporter+green+fluorescent+protein+under+simulated+tumor+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Limitations of the reporter green fluorescent protein under simulated tumor conditions.</a> Cancer Res. 61, 4784-4790 (2001).</li>
<li>Biot, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preexisting+BCG-specific+T+cells+improve+intravesical+immunotherapy+for+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Preexisting BCG-specific T cells improve intravesical immunotherapy for bladder cancer.</a> Sci Transl Med. 4 (137), 137ra172(2012).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+near-infrared+cell+tracker+reagent+for+multiscopic+in+vivo+imaging+and+quantification+of+leukocyte+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A near-infrared cell tracker reagent for multiscopic in vivo imaging and quantification of leukocyte immune responses.</a> PLoS One. 2, 1075(2007).</li>
<li>Jozwicki, W., Brozyna, A. A., Siekiera, J., Slominski, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+of+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+cells+in+peripheral+blood+in+relation+to+urinary+bladder+cancer+malignancy+indicators+before+and+after+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Frequency of CD4+CD25+Foxp3+ cells in peripheral blood in relation to urinary bladder cancer malignancy indicators before and after surgical removal.</a> Oncotarget. , (2016).</li>
<li>Walk, E. L., McLaughlin, S. L., Weed, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+Ultrasound+Imaging+of+Mouse+Cervical+Lymph+Nodes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes.</a> J Vis Exp. , e52718(2015).</li>
<li>Rooks, V., Beecken, W. D., Iordanescu, I., Taylor, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonographic+evaluation+of+orthotopic+bladder+tumors+in+mice+treated+with+TNP-470%2C+an+angiogenic+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Academic+radiology%22%5BJournal%5D)">Sonographic evaluation of orthotopic bladder tumors in mice treated with TNP-470, an angiogenic inhibitor.</a> Academic radiology. 8, 121-127 (2001).</li>
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<li>Shi, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+enhancement+strategy+applied+in+ECL+biosensor+based+on+closed+bipolar+electrodes+for+the+detection+of+PSA%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Joint enhancement strategy applied in ECL biosensor based on closed bipolar electrodes for the detection of PSA.</a> Talanta. 154, 169-174 (2016).</li>
<li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrochemiluminescent+immunosensing+of+prostate-specific+antigen+based+on+silver+nanoparticles-doped+Pb+%28II%29+metal-organic+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Electrochemiluminescent immunosensing of prostate-specific antigen based on silver nanoparticles-doped Pb (II) metal-organic framework.</a> Biosensors & bioelectronics. 79, 379-385 (2016).</li>
<li>Kavosi, B., Salimi, A., Hallaj, R., Moradi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+electrochemical+immunosensor+for+PSA+biomarker+detection+in+prostate+cancer+cells+using+gold+nanoparticles%2FPAMAM+dendrimer+loaded+with+enzyme+linked+aptamer+as+integrated+triple+signal+amplification+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive electrochemical immunosensor for PSA biomarker detection in prostate cancer cells using gold nanoparticles/PAMAM dendrimer loaded with enzyme linked aptamer as integrated triple signal amplification strategy.</a> Biosensors & bioelectronics. 74, 915-923 (2015).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-species+comparison+of+orthologous+gene+expression+in+human+bladder+cancer+and+carcinogen-induced+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cross-species comparison of orthologous gene expression in human bladder cancer and carcinogen-induced rodent models.</a> Am J Transl Res. 3, 8-27 (2010).</li>
<li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Novel+Bladder+Cancer+Xenograft+Model+in+Humanized+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+physiology+and+biochemistry+%3A+international+journal+of+experimental+cellular+physiology%2C+biochemistry%2C+and+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Novel Bladder Cancer Xenograft Model in Humanized Immunodeficient Mice.</a> Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 37, 1355-1368 (2015).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

プロトコルの中で最も重要なステップは、1）が正常細胞株の腫瘍形成性を維持しています。 2）マウスにおける腫瘍細胞移植の前に測定可能なPSAの分泌を確実。腫瘍の大きさのばらつきを低減するように、3）移植のための単一細胞懸濁液を生成します。そして4）腎臓における腫瘍細胞移植の結果、膀胱尿管逆流を防止するために、遅い速度で細胞を浸透させます。 in vitroでの長時間の経過後、MB49 / MB49-PSAの細胞は、マウスにおいて腫瘍を生成することができないことによって示されるように、それらの腫瘍形成性を失う可能性があります。これは、マウスを治療した後に硬化されるか否かの交絡因子である可能性があります。細胞株は、腫瘍を形成することができないため、腫瘍の非存在下では、原因で、免疫原性の腫瘍または全く腫瘍を有するマウスから自然に治癒したマウスの治療により硬化マウスを区別することは不可能です。これに対処する一つの方法は、再通路をするマウスにおける細胞SUを生成することによるものですB-皮膚腫瘍。この再継代が頻繁に行われる場合、過度に攻撃的な腫瘍を発生します。微妙なバランス...

この方法の目的は、腫瘍移植なしのマウスは、エンドポイント分析で硬化されたと考えられないように、マウス同所性膀胱腫瘍を生成し、可能な限り正確に移植された腫瘍を監視することです。全体として、示された方法は、実験的な分析のためにマウスの多くの必要性を低減し、治療結果を決定する際に高い精度を確保します。 注入し、腫瘍細胞を皮下臨床疾患の環境を再現または治療戦略の開発を可能にしないように癌の同所性モデルの開発は、重要です。膀胱のアーキテクチャは、直接、最小限の全身作用を持つ膀胱に膀胱癌治療の点滴注入を可能にします。したがって、例えば、同所性モデルとして、この環境を再現する動物モデルは、新しい治療法を評価することが重要です。いずれの実験のセットアップから引き出された結論はdependenされていますモデルの限界時のトン。 いくつかの技術は、マウスにおける同所性膀胱腫瘍の産生のために開発されてきました。これらは、膀胱のグリコサミノグリカン層を損傷注入する腫瘍細胞を有効に頼ります。使用される技術は、膀胱1,2内の1つのサイトで、腫瘍の発生につながる、膀胱壁に損傷の一点につながる電気焼灼を含みます。しかし、電気メスを用いた腫瘍移植の成功率は、オペレータに依存10から変化している - 90％、およびそれが腹腔内現像腫瘍を引き起こす、膀胱壁がパンクする危険性を含みます。化学焼灼は硝酸銀、損傷膀胱壁3を用いて行われます。同様に、酸は、膀胱壁4を損傷するために使用されています。トリプシンはまた、ウェル5のように、膀胱に損傷を与えるために使用されています。これらの方法は、膀胱内の複数の腫瘍の発達をもたらすことができます。化学物質は長すぎるために膀胱壁に接触して残っている場合はさらに、膀胱に重大な損傷の危険性があります。 Ninalga らによって開発された方法。正に帯電したポリ-L-リジン（PLL）被覆膀胱壁への6分子を使用します。これは、膀胱のグリコサミノグリカン層に固執する負に帯電した腫瘍細胞を可能にします。この方法は、一般に、膀胱内に開発複数の腫瘍を生じるが、腫瘍移植80である- 100％の4,7。技術的には、また、実行するための最も簡単な手順です。開発腫瘍があってもサイズがかなりあることを確実にするために、腫瘍細胞は、移植前に大きな塊にグループ化されていないことが重要です。 治療効果を評価するためには、かなり類似したサイズの腫瘍を有するマウスにこの研究を実行するのが最善です。したがって、すぐに移植後に腫瘍の大きさを定量化することができ、良好な検出システムは、重要です。いくつかの戦略は、蜂を持っていますn個の腫瘍を評価するために使用されます。これらは、磁気共鳴イメージング（MRI）8-10、蛍光11、生物発光12,13、超音波14、および酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）15,16を含みます。 MRIと超音波が腫瘍細胞の改変を必要としないが、MRIのために敏感な機器およびコントラスト剤が必要とされています。 luminescence-、蛍光 - 、およびELISAベースのアッセイは、これらの方法によって検出することができるマーカータンパク質を発現する腫瘍細胞の改変を必要とします。発光のために、基板は、ルシフェラーゼ活性の検出のために必要とされます。このように、追加されたステップおよびコストの増大があります。発光と蛍光の両方が特殊な装置を必要とします。蛍光を生成するために、分子酸素によって触媒される緑色蛍光タンパク質（GFP）の環化は、必要とされます。このように、GFP発現は、このかなり信頼性の低いマーカー作り、酸素へのアクセスに応じて、腫瘍塊内で可変であってもよいです<sup&gt; 17。代用マーカーとして、ヒト前立腺特異抗原（PSA）15,16を分泌するマウス膀胱癌細胞株MB49の変更は、別の戦略です。これらのマーカーはまた、実験の終了時に、腫瘍の存在を確認し、それらを免疫組織化学の代替を製造する代替手段を提供します。この研究は、同所腫瘍移植のPLL方式を報告し、腫瘍の検出システム、すなわちELISA、蛍光、および超音波イメージングの比較を示します。

<table><tbody><tr><td>MB49-PSA細胞</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>ref (Wu QH, 2004)</td></tr><tr><td>RPMI 1640 media</td><td>HyClone</td><td>SH30027.01&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコのモディファイドイーグルスミディアム(DMEM)メディア</td><td>Biowest</td><td>L0102</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清(FBS) 南米</td><td>バイオウエスト</td><td>S1810</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清(FBS) 南米、プレミアム</td><td>バイオウエスト</td><td>S181B</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清(FBS)</td><td>HyClone</td><td>SH30088.03&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミン</td><td>Biowest</td><td>X0550</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>Biowest</td><td>L0022</td><td></td></tr><tr><td>ハイグロマイシン B</td><td>Invitrogen</td><td>10687-010</td><td></td></tr><tr><td>遊離 PSA (ヒト) ELISA キット</td><td>Abnova</td><td>KA0209</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol RNA抽出用試薬&nbsp;</td><td>Ambion</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>大容量 cDNA 逆転写キット with RNase Inhibitor</td><td>Applied Biosystems</td><td>4374967</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Universal PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4304437</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay;Mouse Actb</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Mm00607939_s1</td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay &ndash;ヒトKLK3</td><td>応用バイオシステム</td><td>ズ4331182</td><td>Hs00426859_g1</td></tr><tr><td>C57BL / 6J女性マウス</td><td>生体内</td><td></td><td>4〜6週間古い</td></tr><tr><td>麻酔(75 mg / kgケタミンおよび1 mg / kgメデトミジン)</td><td>地元の薬局</td><td></td><td></td></tr><tr><td>逆転薬(1 mg / kgアチパメゾール)</td><td>地元の薬局</td><td></td><td></td></tr>耳<tr><td>パンチ</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>72893-01</td><td></td></tr><tr><td>ハルトマンの溶液または複合乳酸ナトリウム</td><td>Bブラウン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>眼科軟膏 - Duratears滅菌眼潤滑剤軟膏</td><td>アルコン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ヒートパック - HotHandsハンドウォー</td><td>マーHeatmax株式会社</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IntrocanチェルトIVカテーテル</td><td>Bブラウン</td><td>4251300</td><td>24 G x 3/4&プライム;</td></tr><tr><td>アクアゲル潤滑ゼリー</td><td>ローカル薬局</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ポリ-L-リジン溶液、0.01%、</td><td>シグマ</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete、ミニ、EDTAフリー プロテアーゼ阻害剤 カクテル</td><td>ロシュ</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>クォンティクロム クレアチニン アッセイ キット</td><td>バイオアッセイ システム</td><td>DICT-50&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>蛍光色素 - VivoTrack 680</td><td>Perkin Elmer</td><td>NEV12000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater-ICE 凍結組織トランジションソリューション</td><td>Ambion</td><td>4427575</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>カタログ番号</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Equipment and Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 Realtime PCR System</td><td>AppliedBiosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 ソフトウェア v2.3</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>代謝ケージ</td><td>技術&nbsp;</td><td>12ケージ</td><td></td>用縦型ラック</tr><tr><td>BD FACSCanto Iシステム&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSDiva software v7</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS SpectrumCT in vivo イメージングシステム&nbsp;</td><td>キャリパーライフサイエンス&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>リビングイメージソフトウェア v3.1</td><td>キャリパーライフサイエンス&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100イメージングシステム&nbsp;</td><td>ビジュアルソニックス&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

マウス同所性膀胱腫瘍モデルおよび腫瘍検出システム

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

このプロトコルは、ヒト前立腺特異抗原（PSA）、および腫瘍移植の確認のための手続きを分泌するように改変されたマウス膀胱癌細胞株MB49を使用して、雌C57BL / 6Jマウスに膀胱腫瘍の発生について記載しています。簡潔には、マウスは、注射可能な薬剤を使用して麻酔し、仰臥位に配置するために形成されています。尿が膀胱から空いており、ポリ-L-リジン（PLL）の50μLをゆっくりと24 G IVカテーテルを用いて、10μL/ 20秒の速度で滴下します。これは、カテーテルを栓により20分間膀胱内に残されています。カテーテルを除去し、PLLは、膀胱に優しい圧力で空きました。これは、10μL/ 20秒の速度でマウス膀胱癌細胞株（1×10 5細胞/ 50μL）の注入が続きます。カテーテルは、早期の避難を防止するために栓をされています。 1時間後、マウスを反転薬物と復活され、膀胱が空にされます。遅い点滴速度が重要であり、それは腫瘍が上部尿路に、腎臓に発生させることができます膀胱・尿管逆流を減少させるので。細胞株は、よく、これは移植後凹凸腫瘍サイズをもたらすことができるように、細胞の凝集を減少させるために再懸濁されるべきです。 この技術は、高効率で腫瘍を誘導します。腫瘍の成長は、尿中のPSA分泌によって監視されています。 PSAマーカーのモニタリングは、膀胱内の腫瘍の存在を検出するための超音波又は蛍光イメージングよりも信頼性が高いです。放置すれば4週間 - マウスの腫瘍は、一般に、約3により最大サイズ悪影響を与える健康に達します。腫瘍増殖をモニタリングすることによって、正常に腫瘍を移植されなかったものから硬化したマウスを区別することが可能です。唯一のエンドポイント分析を用いて、後者は、誤って治療することによって硬化されていると仮定することができます。

MB49細胞からのPSAの分泌は、増殖培地と共に変化することが見出されました。これは、増加したPSA分泌（ 図1A）をもたらすため、MB49-PSAは、DMEM培地で増殖させます。 PSA ELISAおよびリアルタイムPCRの感度を決定するために、MB49-PSA分泌細胞の異なる数がMB49親細胞と混合しました。リアルタイムPCR分析は100 PSA分泌細胞/ 1×10 6細胞（ 図 1C）を検出しながら、PSA ELISAは、1×10 5 PSA分泌細胞/ 1×10 6細胞（ 図1B）の最小値を検出します。このように、リアルタイムPCRは、ELISAより高感度であるが、それだけで全膀胱を行うことができます。これは、エンドポイント分析にその有用性を制限しています。膀胱に開発複数の腫瘍における腫瘍移植結果のPLL方式（ 図2A）。代謝ケージ...

このプロトコルは、雌のC57BL / 6Jマウスにおけるマウス同所性膀胱腫瘍の発生および腫瘍増殖の監視について説明します。

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

この非外科的手法の全体的な目的は、膀胱内療法の評価に向けて容易にモニタリング可能な、非筋層浸潤性膀胱腫瘍をマウスに正位的に安定して作製することです。この手法は、新規の膀胱内療法の評価など、膀胱癌分野における重要な課題の解決に寄与します。この手法の主な利点は、マウスへの腫瘍移植とその後Growthのモニタリングが容易であり、治療に対する反応を正確に判定できることです。移植の前日、細胞が約80%コンフルエントに達した時点で、MB49 PSA腫瘍細胞を完全DMEM培地を用い、1対2の分割比で継代します。処置当日に細胞を回収して計数し、細胞が十分に健全であることを確認してください。細胞懸濁液と4% Trypan Blueを等量ずつ混合し、ヘモサイトメーターを用いて青色に染まっていない生存細胞数をカウントします。細胞生存率は80%以上である必要があります。次に、細胞を15 mL centrifuge tube内で2 × 10⁶ cells/mLの濃度で再懸濁し、DMEMで3回洗浄します。その後、注入するまで冷やして保存します。雌マウスを麻酔させた後、体重 10 g あたり 1 mL のハートマン液を腹腔内投与し、水分補給を行います。麻酔中は1〜2時間ごとにこれを繰り返します。次に、両眼に滅菌眼軟膏を塗布し、必要に応じて再塗布します。その後、体温を維持するため、ヒートパッド上のペーパータオルにマウスを仰臥位で置きます。続いて、後肢をテープで固定します。次に、下腹部に軽く圧力をかけ、1.5 mLチューブに尿を採取して、尿中PSAの基線レベルを測定します。次に、1 mLシリンジに滅菌済みPLLを充填し、針を除去した24ゲージのIVカテーテルを装着します。カテーテルの先端に潤滑剤を塗布してください。次に、カテーテルを尿道に挿入し、鉗子を用いて膀胱まで導きます。抵抗を感じたら停止してください。その後、膀胱尿管逆流を防ぐため、20秒ごとに10 µLの割合で、PLL 50 µLをゆっくりと注入します。次に、流出を防ぐためにストッパーを装着し、カテーテルを膀胱内に20分間留置します。20分後、カテーテルを抜き、下腹部を軽く押して膀胱内の内容物をすべて排出させます。その後、1 mLシリンジを用いて、カテーテル内に残っている内容物を洗い流してください。次に、ピペッティングによりMB49 PSA細胞を十分に混合し、1-mLシリンジに充填します。これまでと同様にカテーテルを装着し、潤滑剤を塗布します。これまでと同様にカテーテルを膀胱に挿入します。次に、20秒間に10 µLという緩やかな速度で細胞を注入し始めます。そのまま1時間待ちます。1時間後、カテーテルを取り外し、膀胱内の内容物をすべて排出させます。その後、マウスを放し、腹側を下にした状態で配置して、アチパメゾールを注射して覚醒させます。

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

膀胱腫瘍は、カテーテル、局所焼灼、および火傷のサイトへの癌細胞のその後の付着を介して低侵襲的にメスのマウスで確立されている。...

マウス膀胱癌の同所性モデル

超音波検査および生物発光イメージングによる膀胱内に配達Sarnaのとモニタリング腫瘍成長の抗腫瘍効果を評価するために同所性膀胱腫瘍モデルを確立します。...

同所性膀胱腫瘍モデルと膀胱内Sarnaの治療の評価

このビデオでは、培養膀胱腫瘍オルガノイドのマウス膀胱への同所性移植について説明し、腫瘍の発生に対する臓器環境の役割を研究します。...

膀胱腫瘍オルガノイドモデル:レシピエントマウス膀胱への膀胱オルガノイドの同所性移植法

このビデオでは、マウスモデルの膀胱にがん細胞を送達する膀胱内手順について説明します。この手順は、治療戦略の開発に使用できる同所性膀胱腫瘍モデルを生成するのに役立ちます。...

マウスモデルにおける同所性膀胱腫瘍のモデリング:マウス膀胱への癌細胞の膀胱内投与の手順

起源の臓器への癌細胞の移植は、新規治療法を評価するための有用な前臨床モデルとして役立つことができる。 MB49膀胱癌細胞は、膀胱内注入後の膀胱内に成長させることができる。このプロトコルは、腫瘍移植およびアデノウイルス引渡しのために、マウスの膀胱のカテーテル法を示しています。...

遺伝子送達研究のための同所膀胱癌モデル

主な侵襲的同所性膀胱癌異種移植片を接種するために確立された技術は、開腹手術と膀胱の動員を必要とします。この手順では、マウスに有意な病的状態を負わせる技術的に困難であり、時間がかかる。したがって、我々は、経皮的アプローチは、超音波誘導を利用して、高精度を開発した。...

マウス同所性膀胱異種移植片の最小侵襲性の確立

マウス膀胱腫瘍は N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) ニトロソアミン発がん性物質 (BBN) で誘導されます。膀胱腫瘍の世代は異質です。したがって、ランダム化実験的な治療の前に腫瘍負荷の正確な評価が必要です。腫瘍の大きさおよび段階を評価する高速で信頼性の高い MRI...

核磁気共鳴化学発癌剤誘発マウス膀胱腫瘍の評価

このプロトコルは、発癌性癌誘発性マウス膀胱癌に由来する膀胱腫瘍オルガノイドの三次元体内培養を確立するための詳細な実験ステップを提供する。腫瘍オルガノイドの受動法、遺伝子工学、および正体移植を含む培養方法が記載されている。...

マウス膀胱腫瘍オルガノイドの培養、操作、および正体移植

卵巣癌の腹膜播種の多段階プロセスを明確にするために、現在の研究では、これらの腫瘍細胞と同所接種を介して元の腫瘍の開発と腹膜転移のマウス実験モデルを提示します。...

オリジナル腫瘍の開発のマウス実験モデルと腹膜転移<em&gt;経由で</em卵巣癌細胞で&gt;同所接種

我々は、マウスでの疲労のような挙動を誘発することを目標と周辺照射を使用する方法について説明します。選択された非致死照射線量は、自発的ホイールランニング活動の一週間の削減につながります。...

周辺照射による疲労のマウスモデル

学ぶマウス同所性膀胱腫瘍モデル構築法。非侵襲的な手法でC57BL/6JマウスにMB49 PSA細胞を移植し、腫瘍成長をモニタリングして膀胱内治療法の評価を可能にする信頼性の高い前臨床研究モデルを確立します。

マウス同所性膀胱腫瘍モデルおよび腫瘍検出システム

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