定量的および前臨床治療の縦評価のための転移性腎細胞癌の同系マウスモデル

免疫適格マウスにおける腎細胞癌の同所性モデルの実装では、研究者、同じ動物における原発性腎腫瘍および肺転移の存在によって定義される臨床的に関連するシステムを提供します。このシステムは、前臨床in vivoでの様々なトリートメントをテストするために使用することができます。

この手順の全体的な目標は、腫瘍の成長と転移、および抗腫瘍療法の有効性を研究するための腫瘍細胞の腎内移植を通じてマウスの同所性腎腫瘍を確立することです。この方法は、腎臓がんの前臨床モデルにおける新しい治療法がどれほど効果的であるかなど、泌尿器腫瘍学分野の重要な質問に答えるために使用できます。この技術の主な利点は、腎内腫瘍移植が、臨床腎細胞癌の病因を模倣した原発性肺転移性腎腫瘍を確立することです。

Renca腫瘍細胞を調製するには、まずPBSですすいだ後、0.25%トリプシンとHBSSで細胞培養物を剥離します。5分後にComplete RPMI Mediumで反応を中和します。細胞を円錐形のチューブに移して遠心分離し、ペレットを新鮮なHBSSに再懸濁します。

カウント後、HBSSの1ミリリットルあたり6個の細胞濃度の10倍に体積を調整し、18ゲージの針を備えた1ミリリットルのシリンジに細胞を引き込みます。次に、滅菌外科用ドレープを加熱パッドにかぶせ、つま先をつまんで適切な鎮静レベルを確認します。マウスの左脇腹から毛を取り除き、獣医軟膏を目に塗ります。

次に、5%ポビドンヨード消毒剤で移植部位を綿棒で拭き取り、滅菌メスを使用して、腹膜を貫通しないように注意しながら、左側に1〜1.5センチメートルの切開を行います。ハサミを使用して真皮を腹膜から分離し、切開部位を滅菌綿ガーゼで軽くたたいて血液を取り除きます。次に、左手で頭をつかみ、右手で脇腹を支えて、腹膜を介して脾臓を見つけます。

右手の1本の指を使って、マウスを下から触診します。腎臓が見えるはずです。腹膜と腎臓全体に緊張を与えるために動物をしっかりと保持し、アシスタントに0.1ミリリットルのレンカ細胞を無傷の腹膜を通して腎臓の中心にゆっくりと送達してもらいます。

針を5〜10秒間所定の位置に保持して、細胞の逆流を減らします。次に、シアノアクリレート組織接着剤の薄層で切開部を閉じます。実験のエンドポイントでは、はさみを使用して、胸郭、首、唾液腺を通じて腹部の中央から始めて、正中線を切開します。

ハサミや鉗子を使って、肺組織を傷つけずに肋骨を丁寧に切除し、結合組織を切除して気管を露出させます。18ゲージの針を装備した3ミリリットルの注射器に10%インドインクとPBSを入れます。次に、鉗子を使用して、気管の下に絹の縫合糸を慎重に通し、緩い結び目を作ります。

次に、針を慎重に気管に挿入し、1〜1.5ミリリットルのインディアインク溶液で肺をゆっくりと膨らませます。気管の周りの結び目をしっかりと引っ張ってインクの逆流を抑制し、次に針を取り外し、結合組織を慎重に切り取って膨らんだ肺を取り除きます。5ミリリットルのフェケテ溶液が入った15ミリリットルの円錐形チューブに肺を室温で化学吸引フードに固定します。

24〜48時間後、無傷の汚れ取りた肺を取り出し、35 x 10ミリメートルのシャーレで葉を慎重に引き離します。次に、解剖顕微鏡で白い腫瘍結節の数を数えます。マウス腎内Renca細胞移植が成功すると、腎臓での腫瘍発生と肺への転移がもたらされ、腫瘍担持動物は、腫瘍移植された腎臓の重量増加によって測定される強力な腫瘍量を示します。

観察されたように、Renca腫瘍は、サイトケラチン8および18の免疫組織化学的染色によって同定できます。ルシフェラーゼを発現するRenca細胞株の移植により、インドリンク肺の膨張によってさらに確認されたように、生物発光イメージングによる腎臓の腫瘍負荷と肺への転移の追跡が可能になります。このテクニックを習得すると、適切に実行すれば、マウス1匹あたり5分以内に完了することができます。

この手順を試みる際には、正確な腎内腫瘍移植を確実にするために、腹膜を通じて腎臓を明確に識別することを覚えておくことが重要です。この手順に続いて、前臨床薬物試験などの他の方法を実行して、新薬が腎内腫瘍の成長または転移にどの程度影響を与えるかなどの追加の質問に答えることができます。このビデオを見た後、マウスに同所性腎腫瘍を確立するための腎内腫瘍細胞移植の実施方法について十分に理解しているはずです。

生きた動物や手術器具を扱う作業は危険な場合があり、この手順を実行する際には、施設の動物の取り扱いガイドラインに従うことや、無菌の手術エリアや器具を維持することなどの予防措置を常に講じる必要があることを忘れないでください。