Name: 子宮内エレクトロポレーションは、神経部分集団の興奮とシングルセルの接続を研究するためのアプローチ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: 学ぶ子宮内エレクトロポレーションを用いた皮質ニューロンの構造的結合性と興奮性の解析法。ヒストロジーとパッチクランプ記録で個々のニューロンを詳細に評価し、発達神経生物学の理解を深めます。

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私たちは、その優れた技術支援のためと編集のためのLAヴァイスにR.・グティエレスとA.モラレスに感謝しています。 CGBはスペインMINISTERIOデCiencia電子Innovación（MICINN）、FPI-BES-2012から056011によって資金を供給されています。この作品はM.ナバレテにBBVA財団とSAF2014-58598-JIN（MINECO）からの助成金によっておよびラモンAreces財団と助成金SAF2014-52119-Rおよび（MINECOから）BFU2014-55738-REDTへの助成金によって賄われていましたM.ニエト。

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<li>Saito, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+electroporation+in+the+embryonic+mouse+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vivo electroporation in the embryonic mouse central nervous system.</a> Nat Protoc. 1 (3), 1552-1558 (2006).</li>
<li>Bullmann, T., Arendt, T., Frey, U., Hanashima, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transportable%2C+inexpensive+electroporator+for+in+utero+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Growth+Differ%22%5BJournal%5D)">A transportable, inexpensive electroporator for in utero electroporation.</a> Dev Growth Differ. , (2015).</li>
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<li>Miller, M., Peters, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maturation+of+rat+visual+cortex.+II.+A+combined+Golgi-electron+microscope+study+of+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Maturation of rat visual cortex. II. A combined Golgi-electron microscope study of pyramidal neurons.</a> J Comp Neurol. 203 (4), 555-573 (1981).</li>
<li>Cubelos, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cux-2+controls+the+proliferation+of+neuronal+intermediate+precursors+of+the+cortical+subventricular+zone%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Cux-2 controls the proliferation of neuronal intermediate precursors of the cortical subventricular zone.</a> Cereb Cortex. 18 (8), 1758-1770 (2008).</li>
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<li>Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+acute+hippocampal+slices+from+rats+and+transgenic+mice+for+the+study+of+synaptic+alterations+during+aging+and+amyloid+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li>
<li>Maravall, M., Stern, E. A., Svoboda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+intrinsic+properties+and+excitability+of+layer+2%2F3+pyramidal+neurons+during+a+critical+period+for+sensory+maps+in+rat+barrel+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Development of intrinsic properties and excitability of layer 2/3 pyramidal neurons during a critical period for sensory maps in rat barrel cortex.</a> J Neurophysiol. 92 (1), 144-156 (2004).</li>
<li>Karadottir, R., Attwell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+patch-clamping+of+cells+in+brain+slices+with+immunocytochemical+labeling+to+define+cell+type+and+developmental+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Combining patch-clamping of cells in brain slices with immunocytochemical labeling to define cell type and developmental stage.</a> Nat Protoc. 1 (4), 1977-1986 (2006).</li>
<li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+clamp+techniques+for+studying+ionic+channels+in+excitable+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes.</a> Annu Rev Physiol. 46, 455-472 (1984).</li>
<li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Dev Biol. 240 (1), 237-246 (2001).</li>
</ol>

著者らは、利害の衝突を宣言しません。

このプロトコルは、それらの接続とその興奮性を分析するために、C75BL / 6マウスの体性感覚皮質の神経細胞を標識する方法を詳細に説明しています。既存の方法に関しては、そのようなニューロンあたり軸索分岐の数、それらの正確な地形、およびそれらの解剖学的部位として、接続の識別側面を可視化します。電極の位置を変化させることにより、このような帯状皮質（電極と脳との間の同じ角度を維持したが、磁極の向きを変更する）または海馬5のような他の神経細胞集団を、標的、および同様に行うことができます希望の戦略に応じて、個々のニューロンまたはより広範な集団を標識実験、。すべてではない集団が等しくアクセスまたは同等に選択的に標識されているようしかし、これには限界があります。例えば、海馬では、選択的に遅く生まれCA1領域のニューロンが、EAを標的とすることが可能ですRLYエレクトロポレーションは、内側と外側の錐体細胞の不均一な集団をマーク。大脳皮質では、ニューロンは、IUE中に妊娠日連続的に生まれ、そのようにしている皮質層が影響を受けているかを決定します。以前IUEを実行すると、より深い神経細胞を標的とする（ <em...

樹状突起と軸索構造の開発が大脳皮質を含め、神経系における回路調節の重要な側面です。これは、多様な神経細胞亜集団の選択的な配線の間に重要な役割を果たしています。最近の報告数は、接続に加えて、神経細胞の分子多様性は、焼成の非常に特異的な様式の買収により反射され、ことが示されています。しかし、開発中に明確なニューロンのサブタイプの興奮性と接続性を決定するメカニズムだけでなく、コーディネートの程度は、まだよく、2は 1を理解されています。 生体内 loss-がと機能獲得型に特異的な遺伝子および回路の開発における彼らの影響力の発現レベルとの間の関係の研究を可能に分析します。 子宮内エレクトロポレーションでは （IUE）が広く研究するために使用される技術であり、それらの接続の全体的なパターンを研究するための特定のニューロン集団における目的の遺伝子の機能と。しかし、生きたマウスでは皮質層における軸索と樹状突起の形態学的特性を決定するために、まばらニューロンを標識することが不可欠です。 IUEと組み合わせたCre組換えシステムは、識別された皮質の薄層の個々の細胞によって放出された突起を解決するために、十分に低い密度でニューロンのまばらな集団をマークするために使用することができます。この方法は、電気穿孔脳（ 図1）の合理的な数の分析の後に定量的データを得るために、皮質ニューロン当たりの十分な数のラベル。この原稿は、接続のような微細な分析のための方法を提示しています。また別の実験において、分析するために同様の戦略を提示し、緑色蛍光タンパク質（GFP）の電流 - クランプ記録を行うことにより、ニューロンの電気的特性は、急性皮質切片から細胞を-electroporated。これらのプロトコールは汎用性がありますし、WTおよびトランスジェニック動物のニューロンの、また機能の損失と利益がIUE中に追加のプラスミドによって導入された神経細胞の興奮性と接続性の研究にも適用することができます。 このプロトコルは、胎生日（E）15.5におけるマウスのエレクトロポレーションについて説明したが、この技術は、E9.5 3及び生後（P）2~4の間の任意の年齢で行うことができます。初期段階でのエレクトロポレーションは、ニューロンおよび視床の前駆体および皮質の深層、後段のエレクトロポレーションマークより表面層（ 例えば、E15.5 IUEターゲット層II-IIIニューロン）を標的ながら。要約すると、単一細胞形態学的分析と電気生理学とIUEの組み合わせは、神経系のニューロンの巨大な構造的および機能的多様性の根底にある分子メカニズムを解明するための有用なツールです。

<table><tbody><tr><td>pCAG-Cre</td><td>Addgene</td><td>13775</td><td></td></tr><tr><td>pCALNL-GFP</td><td>Addgene</td><td>13770</td><td></td></tr><tr><td>pCAG-DsRed2</td><td>Addgene</td><td>15777</td><td></td></tr><tr><td>pCAG-GFP</td><td>Addgene</td><td>11150</td><td></td></tr><tr><td>Fast Green</td><td>Carl Roth</td><td>301.1</td><td></td></tr><tr><td>EndoFree Plasmid Maxi Kit</td><td>QIAGEN</td><td>12362</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen (Rimadyl)</td><td>ファイザー社</td><td>1615 ESP</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン (IsoFlo)</td><td>アボット (エステベ)</td><td>1385 ESP</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン (イマルジーン)</td><td>メリアル</td><td>2528-ESP</td><td></td></tr><tr><td>キシラジン (Xilagesic)</td><td>カリエ</td><td>0682-ESP</td><td></td></tr><tr><td>ポビドン ヨウ素</td><td>メダ</td><td>694109.6</td><td></td></tr><tr><td>眼軟膏 (リポラック)</td><td>アンジェリーニ</td><td>65.277</td><td></td></tr><tr><td>ハンクス平衡塩溶液 (HBSS)</td><td>Gibco by Life Technologies</td><td>24020-091</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>Sigma -Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>メス ハンドル # 3 - 12 cm</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>メス ブレード # 10</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>10010-00</td><td></td></tr><tr><td>アドソン鉗子-鋸歯状 - ストレート 12 cm</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>1106-12</td><td></td></tr><tr><td>硬化ファインハサミ - ストレート 11 cm</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>14090-11</td><td></td></tr><tr><td>はさみ メゼンバウム ネルソン湾曲 L=14.5 cm</td><td>テレフレックス</td><td>PO143281</td><td></td></tr><tr><td>細い湾曲した先端 - スタイル 7 デュモクセル</td><td>デュモン</td><td>0303-7-PO</td><td></td></tr><tr><td>デュモン #5 鉗子-イノックス</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>マチュー ニードル ホルダー - 鋸歯状</td><td>ファインScience Tools</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip Applier</td><td>Braintree scientific, Inc</td><td>ACS&nbsp;APL</td><td></td></tr><tr><td>9 mm オートクリップ</td><td>MikRon Precision, Inc.</td><td></td><td></td>205016</tr><tr><td>縫合糸 - Polysorb 6-0</td><td>Covidien</td><td>UL-101</td><td></td></tr><tr><td>電気カミソリ&nbsp;</td><td>パナソニック</td><td>ER 240</td><td></td></tr><tr><td>ホウケイ酸ガラスキャピラリー (100 mm, 1.0/0.58 外径/内径)</td><td>ワールド精密機器</td><td>1B100F-4</td><td></td></tr><tr><td>キャリブレーション済みマイクロキャピラリーピペット用アスピレーターチューブアセンブリ</td><td>Sigma -Aldrich</td><td>A5177-5EA</td><td></td></tr><tr><td>ガーゼ (アポサン)</td><td>Laboratorios Indas, S.A.U.</td><td>C.N. 482232.8</td><td></td></tr><tr><td>綿棒 (スターコット)</td><td>アルバサ</td><td>ニー</td><td></td></tr><tr><td>ドル 25 g (BD Microlance 3)</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>300600</td><td></td></tr><tr><td>ショ糖</td><td>シグマ -アルドリッチ</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>シグマ -アルドリッチ</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>OCT 化合物</td><td>さくら</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>組織培養皿100 x 20 mm</td><td>Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>GFP Tag Polyclonal Antibody</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11122</td><td></td></tr><tr><td>Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 conjugate</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11008</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>10270106&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>トリトン X-100</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>X100-500ML</td><td></td></tr><tr><td>エレクトロポレーター ECM 830&nbsp;</td><td>BTX ハーバード 装置</td><td>45-0002</td><td></td></tr><tr><td>白金電極 650P 7 mm</td><td>ネパジェネ</td><td>CUY650P7</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡&nbsp;蛍光イメージング用 - MZ10F</td><td>ライカ</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>VIP 3000 イソフルオラン気化器</td> Matrx-TCS-SP5 <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>レーザースキャンシステム</td><td>ライカ</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>アクシオーバート 200 顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>クライオスタット - CM 1950</td><td>ライカ</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>P-97 マイクロピュラー</td><td>サッター機器会社</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>パッチクランプ解析ソフト (p-Clamp Clampfit 10.3)</td><td>分子デバイス</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>アクイジションソフトウェア (MultiClamp 700B Amplifier)</td><td>電動</td><td></td>マイクロマニピュレーター+回転ベースDD1440A<td></td>分子デバイス</tr><tr><td>&nbsp;</td><td>サッターインストゥルメント</td><td>MP-225</td><td></td></tr><tr><td>エアテーブル</td><td>ニューポート</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>ミニチュア蠕動ポンプ</td><td>WPI</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

子宮内エレクトロポレーションは、神経部分集団の興奮とシングルセルの接続を研究するためのアプローチ

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

神経系は、異なる神経細胞の種類の巨大な範囲で構成されています。これらのニューロンの亜集団は、軸索の接続の他の特徴、それらの異なる樹枝状の形態、それらの特定のパターン、およびそれらの選択的な焼成反応の間、ことを特徴とします。開発中の分化のこれらの側面を担当する分子・細胞メカニズムはまだよく理解されていません。 ここでは、標識に結合されたプロトコルを記述し、皮質ニューロンの構造的な接続性と興奮性を特徴づけます。 子宮内エレクトロポレーション（IUE）プロトコルの変更は、ニューロンのまばらな人口の標識化を可能にします。これは、順番に、個々のニューロンの樹状突起と軸索の識別と追跡、正確な軸索突起の層状場所の特性評価、および形態計測分析を可能にします。 IUEはまた、興奮性の変化を調べるために使用することができ野生型（WT）またはエレクトロポレーションの脳の急性スライスからホールセル記録とそれを組み合わせることにより、遺伝的に改変された神経細胞。これら2つの技術が構造的および機能的接続性の及び開発中に神経細胞の多様性を制御する分子機構のカップリングのより良い理解に貢献しています。これらの発生プロセスは、軸索の配線、ニューロンの機能的多様性、および認知障害の生物学上重要な意味を持ちます。

詳細にと開発を通じて神経細胞の形態学的変化を特徴づけるために、まばらニューロンを標識することが不可欠です。この酵素を取り入れるだけのニューロンがGFP（ 図1A）を発現するようのCreリコンビナーゼ希釈システムは、神経細胞のまばらな集団において、目的の遺伝子の発現を可能にします。この戦略を使用して、層II-IIIが標的とE15.5でIUEによって標識されています。 1μg/μLでCAG-DsRed2のは、コントロールとして同時エレクトロポレーションであり、生きている動物に正のエレクトロポレーションの脳を識別します。重要なことには、抗GFP抗体で染色した後、信号は、それらの樹状突起の形態及び軸索（ 図1D及びE）の明確な可視化を可能にするのに十分に強いです。 IUEと電気後、細胞全体の記録から得られたパラメータの分析は、同時ために使用されさまざまな条件...

この原稿は、単一細胞レベルおよび蛍光標識された神経細胞の興奮で、ニューロンの構造的接続性を記述するために子宮内エレクトロポレーション（IUE） で使用するプロトコルを提供します。組織学は、樹状突起および軸索突起を特徴付けるために使用されます。急性スライスにおける全細胞記録は、興奮性を調査するために使用されます。

The nervous system is composed of an enormous range of distinct neuronal types. These neuronal subpopulations are characterized by, among other features, ...

この子宮内電穿孔法の全体的な目的は、正常および実験的条件下における皮質ニューロンの構造的接続性と興奮性を特性評価することです。本手法は、脳の構造的・機能的接続性の解明や認知障害の生物学など、発達神経生物学における重要な疑問への回答に寄与します。この技術の主な利点は、少数のニューロン集団を標識できるため、樹状突起を可視化し、個々のニューロンにアクセスすることが可能となり、より効率的でより模倣的な定量分析が行える点にあります。注入前に、単一細胞ラベリングまたは標準的なパッチクランプ研究のいずれかに合わせ、手術1回あたり10 µLのDNA混合液を準備します。次に、指で胚を慎重に操作し、終脳の位置を確認します。続いて、準備したホウケイ酸ガラスキャピラリーをマウスピペットに装着します。血管を避けながら針先を子宮に通し、側脳室に到達させます。その後、大きな青いスポットが観察されるまで、Fast Greenで着色したDNA溶液を約1 µLゆっくりと注入します。この手順において、DNAの注入は極めて重要なステップです。この操作は、可能な限り穏やかに行う必要があります。次に、7 mmの白金電極を胚の頭部に側方から配置し、白金電極を介して電圧を印加します。この手順では、固定した脳を4°Cで10 mLの30% sucrose（PBS溶液）に浸し、脳が沈下するまで1〜2日間凍結保護します。次に、1立方センチメートルのアルミホイルのキューブを用意し、キューブの3分の2までOCTを満たします。その後、脳をキューブに入れ、ドライアイスで凍結させます。続いて、凍結した脳を-80 °Cで保存します。クライオスタットで脳を切片化するには、検体ディスクの表面にOCTを1滴滴下します。組織ブロックからアルミホイルを剥がし、液状のOCTの上にブロックを希望の向きに配置します。組織ブロックが固定されるまで、しっかりと圧力をかけます。次に、試料ディスクをクライオスタットの試料ヘッドに挿入し、切片作成のために試料の向きを調整します。その後、厚さ50-100 µmで切片を作成し、浮遊した凍結切片を細筆を用いてPBSに回収します。続いて、0.5% Triton X-100を含む5%胎児牛血清含有PBSを用い、室温で1時間、切片をブロッキングします。次に、ブロッキング溶液で1:500に希釈した一次抗体とともに、4 °Cで一晩インキュベートします。翌日、切片をPBSで3回洗浄します。ブロッキング溶液で1:500に希釈した二次抗体を加え、切片を室温で1時間インキュベートします。次に、切片をPBSで3回洗浄します。その後、0.5% Triton X-100を含むPBSを用いて、切片をdapEで10分間対比染色します。切片をPBSで洗浄し、封入剤で封入します。ニューロンを再構成するために、脳切片を高倍率かつ高解像度で撮影します。次に、撮影ソフトウェアでタイルスキャンを選択し、すべての樹状突起と軸索突起を含む関心領域をカバーします。情報の損失を防ぐため、Z軸方向に十分な数のスタックを撮影してください。その後、画像を開き、メニューからセグメント線（segmented line）オプションを選択します。ニューロンの構造に沿って線を引きます。続いて、[Analyze]、[Tools]、[ROI manager]の順に進み、[Add]をクリックして線を保存します。解析対象のニューロンのすべての軸索または樹状突起に対して、このプロセスを繰り返します。ROIマネージャーメニューの「Measure」を押し、長さを測定します。測定値をテキストファイルまたはスプレッドシートに書き出し、解析に使用します。GFPをエレクトロポレーションしたマウスから、GFPを発現しているニューロンの記録を行うには、脳を冷却した培養皿に置きます。小さなハサミで小脳を切除します。次に、スパチュラで脳を持ち上げ、ペーパータオルで水分を拭き取ります。脳の腹側尾側面をビブラトーム用ホルダーに接着します。氷冷したACSFを満たしたビブラトームにホルダーを設置し、ビブラトームチャンバー内が常にカルボゲンで飽和されていることを確認してください。その後、15分以内に300 µmの冠状断切片を作成し、急性スライスを得ます。次に、急性切片をカルボゲンでバブリングしながら、ACSF中で25 °Cで少なくとも60分間インキュベートします。60分後、パステールピペットまたは小型ブラシを用いて、切片を記録チャンバーに転送します。切片をハープで固定し、ACSFを2 mL/minの速度で灌流します。GFP陽性ニューロンをパッチクランプするためには、まず顕微鏡の10倍対物レンズで目的の領域を特定します。次に、60倍対物レンズを用いてGFP陽性細胞を探します。その後、記録用電極に細胞内液を満たします。続いて、ガラスピペットをピペットホルダーにセットします。その後、ピペットチップをバスの中に配置し、チップに焦点を合わせます。ピペットがバスに入ったら、背圧制御システムを介して正圧をかけます。ピペット内に背圧を維持しながら、視覚的なガイドに従って目的の細胞に近づけます。細胞表面に小さなくぼみが現れたら、圧力を解放します。この時点で、1 GΩ以上の抵抗を持つ強固なシール（ギガシール）が形成されます。それ以外の場合は、軽い陰圧をかけてシール形成を促進します。シール形成中、保持電位クランプを60 millivoltsに設定します。ギガオームシールが形成されたら、吸引パルスを与えて細胞膜を破裂させ、ホールセルモードに移行します。ホールセルモードになったら、電圧クランプから電流クランプモードに切り替え、記録を開始します。これらの画像は、胚齢15.5日における子宮内電穿孔法による層2/3ニューロンへのベクター導入を示しており、冠状断切片は生後16日に作製されました。コントロールとしてCAG DsRed2ベクターを共導入しました。GFPは、CALNL GFPベクター中のLoxP部位の組み換えを可能にするcreを取り込んだニューロンでのみ発現します。ここでは、疎らに標識された別のGFP陽性ニューロンの樹状突起の高倍率共焦点画像を示します。これは、GFPをエレクトロポレーションした錐体ニューロンを、明視野および緑色蛍光条件下で観察したものです。これは、第2/3層にあるCAG-GFP電極導入したコントロールニューロンの典型的かつ規則的なスパイク応答です。この手法に習熟すれば、適切に行った場合、子宮内電極導入は30分で、パッチクランプ記録は半日で完了させることができます。この手順を行う際は、母体へのストレスを軽減し、胎仔の生存率を高めるために、可能な限り迅速に手術を行うことが重要です。本手順に続いて、特定の遺伝子の発現とサロゲート（代用組織）の発達への影響との関係など、追加の疑問を明らかにするために、発現解析などの他の手法を行うことができます。本技術の開発により、発達神経科学分野の研究者がマウスにおけるニューロンのコネクティビティや形態を探索する道が開かれました。このビデオを視聴することで、子宮内操作を用いて、単一細胞レベルでのニューロンの構造とコネクティビティ、および蛍光標識されたニューロンの興奮性を解析する方法について十分に理解できるはずです。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

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子宮内エレクトロポレーションは、神経部分集団の興奮とシングルセルの接続を研究するためのアプローチ

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