Name: 周辺照射による疲労のマウスモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 15 s
Description: 学ぶ 周辺照射による疲労誘導法を用いてマウスの疲労様行動を測定する方法。自発的な回し車走行活動の減少を指標とし、放射線関連疲労のメカニズム解明に貢献する信頼性の高いモデルを提供します。

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著者らは、寛大にマウス表現型解析方法で彼女の専門知識を共有するため、彼女の継続的な技術支援のため、ならびにための国立心臓、肺、および国立衛生研究所の血液研究所（NHLBI）（NIH）のミケーレ・アレンに感謝したいと思います私たちは、遮蔽装置を開発助けるためNHLBIのティモシー・ハント。この研究は、NIHの看護研究の国立研究所の学内研究部門によってサポートされており、検証試験の一部は社会財団看護オンコロジーからの助成金によってサポートされています。

倫理に関する声明：この研究は、米国立衛生研究所（NIH）動物実験委員会によって承認されました。動物の取り扱いと研究成果の測定に参加するすべての研究者が適切に動物管理使用のNIH事務所と国立心肺血液研究所マウス表現型コアによって訓練されました。本研究で用いたすべての動物実験の側面、住宅、環境条件は実験動物の管理と使用11用のガイドを遵守していました。 1.住宅と実験動物注：ハウス実験を通して個別に（到着時にはおよそ5週齢）の雄C57BL / 6マウスと食物および水を自由摂取のアクセスを提供します。すべてのケージは、光位相が午後6時午前6時と暗期で始まると12：12時間の明暗サイクルで保持されます。 <ol><li>マウスを特定し、個々の標準換気に割り当てますDマウスケージ。回復するための識別手続き後24時間を許可します。 注：テール入れ墨が耳タグが走行輪に引っ掛かる可能性を排除するための識別の手段として推奨されています。マウスのケージに書かれた番号と一致する尾の数字で、各マウスの尾の数刺青。 </li><li> 1日3分間静かに各マウスを扱う、マウスは、少なくとも3日間以上ケージに順応することを可能にします。 </li></ol>ホイール順化およびベースラインを実行している2 <ol><li>個々のVWRAケージ、連続記録のための電子カウンタに接続されたランニングホイールを装備し、それぞれにマウスをご紹介します。 注：すべてのホイールカウンタは、単一のUSBインターフェイスを介してコンピュータに接続する（材料リストを参照してください）。コンピュータソフトウェアは、距離が指定された総duratioの各指定の時間間隔を横切って旅し、平均速度、車輪の回転数を算出し、n個。記録が停止すると、データが自動的にテキストとしてとスプレッドシートの両方として保存されます。 </li><li>コンピュータソフトウェアインタフェースを介してVWRAの記録を開始します。少なくとも5日間に1時間と持続時間に間隔を記録する設定します。少なくとも5日間VWRAを記録し続けます。 注：ステップ2.2の終わりに、すべてのマウスは、毎日の車輪走行活動の比較的一定量を達成する必要があります。そうでない場合には、任意の外れ値を識別して排除します。 </li><li> VWRAはソフトウェアインタフェースを介して記録を停止し、（車輪を実行せずにケージ）ステップ1.1で説明したそれらの標準ケージにマウスを返します。 </li><li>偽照射対照または照射群のいずれかにマウスをランダム。 </li></ol> 3.照射注：3つの連続した日間、1日に1回、両方のグループにすべてのマウスに対して、次の手順を実行します。毎日同じ順序でマウスを扱います。 <ol><li>の腹腔内注射することにより、各マウスを麻酔ケタミン（100mg / kg）およびキシラジン（10mg / kg）の混合物。 </li><li>つま先のピンチで麻酔を確認し、麻酔下ながら乾燥を防ぐために、目に軟膏を使用しています。 </li><li>鉛遮蔽装置に麻酔マウスを転送します。唯一の下腹部/骨盤領域が露出するようにシールドにマウスを配置します。 注：シールドは、それはマウスの小、標的領域への放射線被曝を可能にするの間の狭いオープンスペースで「ボックス」2本のリードで構成されている（ 図1参照）。 </li><li>シールド内の位置でマウスの尾の付け根を確保するために医療用テープを使用してください。 注：ステップ3.4はオプションですが、そうすることが、マウスの位置は、次のステップ中に変化しないことを確実にするのに役立つことができます。 </li><li>シールド内の動物の位置が維持されることを確認して、照射に遮蔽装置を運びます。 </li><li>マウスは照射群である場合、DOSで800センチグレイをお届け約110センチグレイ/分の電子速度。マウスは、偽照射対照群である場合には、等価時間のために非アクティブ照射でマウスを残します。 注：最適な照射装置の設定は、特定のデバイスに依存します。 137セシウム源から送ら110センチグレイ/分の線量率は、ここで使用される照射の中央の線量率です。露光時間は800 cGyで、所望の総用量に達するように調整しました。 </li><li>照射とシールドからマウスを外し、ステップ1.1で説明した元の、標準のケージに戻します。 </li><li>それは胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻したまで継続的にマウスを監視します。 </li></ol> 4.放射線誘発疲労測定<ol><li>照射の3日連続の完了後に日に、ステップ2.1で説明した個々のVWRAケージにマウスを転送します。 </li><li>ここで録音設定を除いて、ステップ2.2で説明したように録音VWRA、15日以上の期間。 15日の終わりには、手動でソフトウェアインタフェースを介してVWRA記録を停止します。 注：各記録期間からのデータは自動的に記録の期間を通して、すべての動物（列）と、すべての間隔（行）のための回転、距離、速度の測定値をそれぞれ含むスプレッドシートとして保存されます。前照射VWRAのための1つ、および照射後VWRAための1：実験の終了時に、記録ソフトウェアによって生成された2つのスプレッドシートがあります。 </li></ol>

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</ol>

この研究は、学内研究部門、看護研究の国立研究所、国立衛生研究所によってサポートされていました。

我々は、罹患率または死亡率を混乱することなく、マウスにおけるVWRAの減少を誘導するためにターゲット周辺照射を使用してプロトコルを記載しています。重要なことは、単純な遮蔽装置は、骨盤がん患者によって受信された放射線治療を模倣し、一貫して所望の領域を標的とするために、このプロトコルで照射することができます。脳または全身照射8,9を含む既存のCRFモデルとは対照的に、このモデルは、末梢標的照射手順は、中央に駆動疲労挙動に影響を与えることができる方法を探ります。当社の代表的な結果では、このように配信周辺照射は約1週間後に完全な回復と疲労のような動作を生成するのに十分であることを示しています。 疲労の対策として、VWRAは最小限のトレーニングと実験時間を必要とする、1日24時間、距離と速度のシンプルかつ客観的な評価を可能にします。それはやりますエスは、施設空間の可能制限要因となって、個々のケージの住宅マウスが必要です。個々の住宅は、おそらく不安<sup class="xre...

がん関連疲労（CRF）は、しばしば癌治療1を受けている患者に影響を与える悲惨な、高価な状態です。疲労は、最近の活性に比例も残りによって軽減でもない、それは気分、意欲、関心、および認知2に関連する擾乱の多種多様に関連付けられています。ヘモグロビンレベルおよび種々のホルモン系の機能である場合においても、炎症およびサイトカインのレベルと相関することが多くの場合に示されているがCRFの生物学的な原因は、不明である（参照Saligan ら 3生物学のレビューのためにCRFの研究）。 動物モデルを用いて制御の研究では、この複雑な条件に関連付けられた動作と生物学を理解するために必要です。一方、腫瘍関連4または化学療法に関連した5、6脂肪igueは齧歯類モデルで研究されている、CRFの病因は、治療特異的であってもよいです。放射線療法に関連するCRFを調べるために、我々のグループは最近、照射疲労7のマウスモデルを開発しました。脳または全身照射8,9を含む既存のCRFモデルとは対照的に、このモデルは、中央駆動型の挙動の変化は、疲労のような、末梢標的照射手順によってトリガすることができる方法を探ります。 ここで説明する手順は、照射による下腹部/骨盤領域を標的とするために、鉛の遮蔽を使用して、骨盤のがん患者に投与、放射線療法をモデル化するために設計されています。しかし、鉛遮蔽または実験動物へのその配置を相対的に変更することによって、この手順は、身体の他の部分の照射をモデル化するために適合させることができます。自主ホイールランニング活動（VWRA）は疲労のようなbehavioを測定するために使用されますR;それが自発的かつ正常な動作10だから、それは他の行動と生物学的試験の同時使用を可能にしなければなりません。我々は、末梢照射明白な病的状態7を引き起こすことなく、マウスにおけるVWRAを低減するのに十分であることを見出しました。このモデルを用いた将来の実験は、免疫および他の生物学的シグナル伝達に対する末梢照射だけでなく、CRFに関連した赤字を生み出すことができる中枢神経系の下流の変化の影響を明らかに役立つことがあります。

<table><tbody><tr><td>C57BL/6マウス</td><td>チャールズリバー</td><td></td><td>株コード027(http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/c57bl-6n-mouse)</td></tr><tr><td>ケタミンHCl</td><td>パト</td><td>ニー100mg</td><td></td> / mL原液</tr>キシ<tr><td>ラジンHCl</td><td>ロイド研究所</td><td></td><td>100mg / mL原液</td></tr>げ<tr><td>っ歯類タトゥーシステム</td><td>AIMS-3</td><td></td><td>http://animalid.com/lab-animal-identification-systems/ats-3-general-rodent-tattoo-system</td></tr><tr><td>鉛シールド装置</td><td>(特注)</td><td></td><td>ターゲット照射のために、厚さ1インチの鉛シールドを2つの箱に並べ、その間に1インチの隙間を設けて対象を絞</td></tr>った<tr><td>プレキシガラスシールド容器</td><td>(特注)</td><td></td><td>発泡スチロールを充填したプレキシガラス容器です。発泡スチロールの切り欠きがリード線のシールドを所定の位置に保持します。</td></tr><tr><td>GammaCell 40 Exactor</td><td>Best Theratronics</td><td></td><td>http://www.theratronics.ca/product_gamma40.html</td></tr><tr><td>RAD Disk Ultra</td><td>Best Theratronics</td><td></td><td>http://www.theratronics.ca/product_rad.html</td></tr><tr><td>Mouse Single Activity Wheel Chamber</td><td>Lafayette Instrument Company</td><td>#80820</td><td>http://www.lafayetteneuroscience.com/product_detail.asp?itemid=980</td></tr><tr><td>アクティビティ ホイール カウンターコンピューター監視</td><td>ラファイエット楽器会社</td><td>#86061</td><td></td></tr>ホイール<tr><td>カウンター用 http://www.lafayetteneuroscience.com/product_detail.asp?itemid=1052 モジュラーケーブル</td>ラ<td>ファイエット楽器会社</td><td>#86051-7</td><td></td></tr>アクティビティ<tr>ホイールカウンターラ<td>ファイエット楽器会社</td><td>のためのUSBコンピューターインターフェース</td> <td>#86056A http://www.lafayetteneuroscience.com/product_detail.asp?itemid=1046</td><td>http://www.lafayetteneuroscience.com/product_detail.asp?itemid=1047</td></tr><tr><td>アクティビティホイールモニターソフトウェア</td><td>Lafayette Instrument Company</td><td>#86065</td><td>http://www.lafayetteneuroscience.com/product_detail.asp?itemid=1053</td></tr></tbody></table>

周辺照射による疲労のマウスモデル

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

がん関連疲労（CRF）は、しばしば放射線療法を含む癌治療を受けている患者に影響を与える悲惨な、高価な状態です。ここでは、マウスでの疲労のような挙動を誘発することを目標と周辺照射を使用する方法について説明します。適切なシールドでは、照射は、骨盤の癌を有する個人が受けた放射線治療をモデル化するための努力で、脳を温存、マウスの下腹部/骨盤領域を対象としています。私たちは、明らかな病的状態を引き起こすことなく、自発的ホイールランニング活動（VWRA）により測定したマウスにおける疲労のような挙動を誘導するのに十分な照射線量を提供します。車輪走行がマウスにおいて正常な、自発的な行動であるため、その使用は、他の行動試験または生物学的な対策にはほとんど交絡効果を持っている必要があります。したがって、車輪走行疲労の挙動および生物学的相関を理解するで実現可能な結果の尺度として使用することができます。 CRFは頻繁に共同で複雑な状態であります罹患率、およびおそらく両方癌およびその種々の処理に関連した原因があります。このホワイトペーパーで説明する方法は、疲労のような末梢性トリガーが、集中駆動型行動の開発と持続性を説明することができる生物学的ネットワークを探索するために、より一般的に、CRFの発展に貢献し、放射線誘発性の変化を調査するために有用です。

マウスの3つのバッチは、上記のプロトコルを介して実行されました。 16偽および照射20（2400 cGyで、3×800センチグレイ/日）マウスの合計がありました。照射の3日連続の後、照射群が有意に偽に比べVWRAの低下を示した（混合反復測定ANOVA：照射処理、F 1,13 = 19.233、p &lt;0.001の主な効果）。効果は最低の平均VWRA距離は放射線（ 図2A）の後、三日目に発生すると、照射（単純主効果はp &lt;ボンフェローニ補正付き0.05）後の最初の7日間、有意でした。日25と26で、何もデータが原因で他の行動試験に収集されませんでした。 図2Bは、照射後に前からVWRAの変化の分布を示しています。試験されたマウスの大部分が疲労のような症状を示したが（縮小In個の車輪走行活性）、ほとんど変化またはVWRA（ 図2B、</st...

我々は、マウスでの疲労のような挙動を誘発することを目標と周辺照射を使用する方法について説明します。選択された非致死照射線量は、自発的ホイールランニング活動の一週間の削減につながります。

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

この手順の全体的な目的は、末梢照射によって誘発される疲労様行動を測定することです。この手法は、疲労、特に放射線照射に関連する疲労に関する重要な疑問を解決するのに役立ちます。例えば、照射後の疲労における免疫系と中枢神経系の異なる役割を探索するために利用できます。この手法の主な利点は、末梢照射を用いることで、本質的に駆動される疲労挙動に特異的に影響を与えられる点にあります。まず、マウスをシャム照射コントロール群または照射群のいずれかにランダムに割り当てます。次に、テイルタトゥーにより5週齢の雄マウスを識別し、各マウスを個別の標準的な換気付きマウスケージに配置します。マウスをさらに少なくとも3日間ケージに慣らし、1日3分間、各マウスを優しくハンドリングします。次に、マウスを個別の自発的ホイール走行活動（VWRA）ケージに導入します。各ケージには、連続記録用の電子カウンターに接続されたランニングホイールが装備されています。コンピュータソフトウェアのインターフェースを通じて、VWRAの記録を開始します。記録間隔を1時間、期間を少なくとも5日間に設定します。最後に、5日後、ソフトウェアインターフェースを介してVWRAの記録を停止し、マウスをランニングホイールのない標準ケージに戻します。マウスを麻酔した後、足指を挟んで麻酔が有効であることを確認します。乾燥を防ぐため、眼に軟膏を塗布します。次に、麻酔をかけたマウスを鉛遮蔽装置に移します。下腹部と骨盤領域のみが露出するように、遮蔽装置内でマウスを配置します。次に、医療用テープを使用してマウスの尾の基部を遮蔽物の中の所定の位置に固定し、照射中に位置がずれないようにします。マウスが照射群である場合は、約110 centigray/minの線量率で800 centigrayを照射します。マウスが擬似照射対照群である場合は、非作動状態の照射装置内に同時間留置します。照射が完了したら、マウスを照射装置と遮蔽体から取り出し、元の標準ケージに戻します。マウスが胸腹臥位を維持できる十分な意識を取り戻すまで、継続的に観察してください。3日連続の照射後、マウスを個別のVWRAケージに移します。最後に、放射線誘発性の疲労を捉えるため、15日間にわたってVWRAを記録します。放射線照射後、最初の7日間で有意な効果が認められ、平均VWRA距離は照射後3日目に最小となりました。ここでは、照射前後のVWRAの変化の分布を示します。テストしたマウスの大部分に疲労のような症状が見られましたが、VWRAにほとんど変化がない、あるいは増加さえしたマウスも少数存在しました。この手順を行う際は、照射中のマウスが完全に麻酔状態にあることを確認することが重要です。わずかな動きであっても、照射の標的設定や線量に影響を与える可能性があるためです。このビデオを視聴することで、

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ここでは、緑色蛍光タンパク質発現膵臓がん細胞（PANC-1 GFP)をBalb-c Ola Hsd-Fox1nuマウスの膵臓に同所的に移植し、腫瘍の進行と転移を評価する手順を紹介します。...

膵臓がんの蛍光同所性マウスモデル

本発明者らは、腫瘍細胞またはオルガノイドをマウスの盲腸に注入することによる同所性結腸直腸腫瘍の確立およびこのモデルからの循環腫瘍細胞（CTC）のその後の単離について記載する。...

結腸直腸癌モデルマウスにおける循環腫瘍細胞の単離

分節型アデノクロス感染による結腸直腸癌の遺伝子操作されたマウスモデルの確立および高解像度大腸内視鏡によるその監視が提示されている。...

散発性結腸直腸癌の遺伝子操作マウスモデル

学ぶ 周辺照射による疲労誘導法を用いてマウスの疲労様行動を測定する方法。自発的な回し車走行活動の減少を指標とし、放射線関連疲労のメカニズム解明に貢献する信頼性の高いモデルを提供します。

周辺照射による疲労のマウスモデル

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