Name: ひと多能性幹細胞からプリミティブかつ決定的な造血前駆細胞の分化を監督 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-01T12:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 37 s
Description: 学ぶ、ヒト多能性幹細胞からCD34+造血前駆細胞への分化プロトコル。WNTシグナルの段階的制御により、決定的または原始的造血プログラムへの細胞運命決定を誘導する方法を解説。再生医療研究に有用。

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この作品は、血液部門内科学、ワシントン州大学医科大学院によってサポートされています。CD は、国民の中心、肺および血の協会からの T32HL007088 によって支えられました。CMS は、血液学者賞のアメリカの社会によって支えられました。

<ol><li>Thomson, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282 (5391), 1145-1147 (1998).</li>
<li>Murry, C. E., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+embryonic+stem+cells+to+clinically+relevant+populations%3A+lessons+from+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development.</a> Cell. 132 (4), 661-680 (2008).</li>
<li>Ditadi, A., Sturgeon, C. M., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+view+of+human+haematopoietic+development+from+the+Petri+dish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A view of human haematopoietic development from the Petri dish.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 18 (1), 56-67 (2017).</li>
<li>Chen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythroid%2Fmyeloid+progenitors+and+hematopoietic+stem+cells+originate+from+distinct+populations+of+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Erythroid/myeloid progenitors and hematopoietic stem cells originate from distinct populations of endothelial cells.</a> Cell Stem Cell. 9 (6), 541-552 (2011).</li>
<li>McGrath, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+Sources+of+Hematopoietic+Progenitors+Emerge+before+HSCs+and+Provide+Functional+Blood+Cells+in+the+Mammalian+Embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Distinct Sources of Hematopoietic Progenitors Emerge before HSCs and Provide Functional Blood Cells in the Mammalian Embryo.</a> Cell Rep. 11 (12), 1892-1904 (2015).</li>
<li>McGrath, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transient+definitive+erythroid+lineage+with+unique+regulation+of+the+beta-globin+locus+in+the+mammalian+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A transient definitive erythroid lineage with unique regulation of the beta-globin locus in the mammalian embryo.</a> Blood. 117 (17), 4600-4608 (2011).</li>
<li>Palis, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+and+temporal+emergence+of+high+proliferative+potential+hematopoietic+precursors+during+murine+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Spatial and temporal emergence of high proliferative potential hematopoietic precursors during murine embryogenesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (8), 4528-4533 (2001).</li>
<li>Palis, J., Robertson, S., Kennedy, M., Wall, C., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+erythroid+and+myeloid+progenitors+in+the+yolk+sac+and+embryo+proper+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Development of erythroid and myeloid progenitors in the yolk sac and embryo proper of the mouse.</a> Development. 126 (22), 5073-5084 (1999).</li>
<li>Boiers, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphomyeloid+contribution+of+an+immune-restricted+progenitor+emerging+prior+to+definitive+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Lymphomyeloid contribution of an immune-restricted progenitor emerging prior to definitive hematopoietic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 13 (5), 535-548 (2013).</li>
<li>Bertrand, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cells+derive+directly+from+aortic+endothelium+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cells derive directly from aortic endothelium during development.</a> Nature. 464 (7285), 108-111 (2010).</li>
<li>Hadland, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+requirement+for+Notch1+distinguishes+2+phases+of+definitive+hematopoiesis+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A requirement for Notch1 distinguishes 2 phases of definitive hematopoiesis during development.</a> Blood. 104 (10), 3097-3105 (2004).</li>
<li>Kumano, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch1+but+not+Notch2+is+essential+for+generating+hematopoietic+stem+cells+from+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Notch1 but not Notch2 is essential for generating hematopoietic stem cells from endothelial cells.</a> Immunity. 18 (5), 699-711 (2003).</li>
<li>Medvinsky, A., Rybtsov, S., Taoudi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+origin+of+the+adult+hematopoietic+system%3A+advances+and+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Embryonic origin of the adult hematopoietic system: advances and questions.</a> Development. 138 (6), 1017-1031 (2011).</li>
<li>Robert-Moreno, A., Espinosa, L., de la Pompa, J. L., Bigas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RBPjkappa-dependent+Notch+function+regulates+Gata2+and+is+essential+for+the+formation+of+intra-embryonic+hematopoietic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">RBPjkappa-dependent Notch function regulates Gata2 and is essential for the formation of intra-embryonic hematopoietic cells.</a> Development. 132 (5), 1117-1126 (2005).</li>
<li>Chadwick, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+and+BMP-4+promote+hematopoietic+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Cytokines and BMP-4 promote hematopoietic differentiation of human embryonic stem cells.</a> Blood. 102 (3), 906-915 (2003).</li>
<li>Davis, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+a+GFP+reporter+gene+to+the+MIXL1+locus+of+human+embryonic+stem+cells+identifies+human+primitive+streak-like+cells+and+enables+isolation+of+primitive+hematopoietic+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Targeting a GFP reporter gene to the MIXL1 locus of human embryonic stem cells identifies human primitive streak-like cells and enables isolation of primitive hematopoietic precursors.</a> Blood. 111 (4), 1876-1884 (2008).</li>
<li>Kaufman, D. S., Hanson, E. T., Lewis, R. L., Auerbach, R., Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+colony-forming+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic colony-forming cells derived from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98 (19), 10716-10721 (2001).</li>
<li>Kennedy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+lymphocyte+potential+marks+the+emergence+of+definitive+hematopoietic+progenitors+in+human+pluripotent+stem+cell+differentiation+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">T lymphocyte potential marks the emergence of definitive hematopoietic progenitors in human pluripotent stem cell differentiation cultures.</a> Cell Rep. 2 (6), 1722-1735 (2012).</li>
<li>Ledran, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+hematopoietic+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+on+stromal+cells+derived+from+hematopoietic+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Efficient hematopoietic differentiation of human embryonic stem cells on stromal cells derived from hematopoietic niches.</a> Cell Stem Cell. 3 (1), 85-98 (2008).</li>
<li>Ng, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+primitive+streak+gene+Mixl1+is+required+for+efficient+haematopoiesis+and+BMP4-induced+ventral+mesoderm+patterning+in+differentiating+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The primitive streak gene Mixl1 is required for efficient haematopoiesis and BMP4-induced ventral mesoderm patterning in differentiating ES cells.</a> Development. 132 (5), 873-884 (2005).</li>
<li>Pick, M., Azzola, L., Mossman, A., Stanley, E. G., Elefanty, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+in+serum-free+medium+reveals+distinct+roles+for+bone+morphogenetic+protein+4%2C+vascular+endothelial+growth+factor%2C+stem+cell+factor%2C+and+fibroblast+growth+factor+2+in+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Differentiation of human embryonic stem cells in serum-free medium reveals distinct roles for bone morphogenetic protein 4, vascular endothelial growth factor, stem cell factor, and fibroblast growth factor 2 in hematopoiesis.</a> Stem Cells. 25 (9), 2206-2214 (2007).</li>
<li>Vodyanik, M. A., Bork, J. A., Thomson, J. A., Slukvin, I. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+CD34%2B+cells%3A+efficient+production+in+the+coculture+with+OP9+stromal+cells+and+analysis+of+lymphohematopoietic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived CD34+ cells: efficient production in the coculture with OP9 stromal cells and analysis of lymphohematopoietic potential.</a> Blood. 105 (2), 617-626 (2005).</li>
<li>Vodyanik, M. A., Thomson, J. A., Slukvin, I. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukosialin+%28CD43%29+defines+hematopoietic+progenitors+in+human+embryonic+stem+cell+differentiation+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Leukosialin (CD43) defines hematopoietic progenitors in human embryonic stem cell differentiation cultures.</a> Blood. 108 (6), 2095-2105 (2006).</li>
<li>Yu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid+enhances+the+generation+of+hematopoietic+progenitors+from+human+embryonic+stem+cell-derived+hemato-vascular+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid enhances the generation of hematopoietic progenitors from human embryonic stem cell-derived hemato-vascular precursors.</a> Blood. 116 (23), 4786-4794 (2010).</li>
<li>Zambidis, E. T., Peault, B., Park, T. S., Bunz, F., Civin, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+progresses+through+sequential+hematoendothelial%2C+primitive%2C+and+definitive+stages+resembling+human+yolk+sac+development%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic differentiation of human embryonic stem cells progresses through sequential hematoendothelial, primitive, and definitive stages resembling human yolk sac development.</a> Blood. 106 (3), 860-870 (2005).</li>
<li>Sturgeon, C. M., Ditadi, A., Awong, G., Kennedy, M., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt+Signaling+Controls+the+Specification+of+Definitive+and+Primitive+Hematopoiesis+From+Human+Pluripotent+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Wnt Signaling Controls the Specification of Definitive and Primitive Hematopoiesis From Human Pluripotent Stem Cells.</a> Nat Biotechnol. 32 (6), 554-561 (2014).</li>
<li>Choi, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+hemogenic+endothelial+progenitor+and+its+direct+precursor+in+human+pluripotent+stem+cell+differentiation+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Identification of the hemogenic endothelial progenitor and its direct precursor in human pluripotent stem cell differentiation cultures.</a> Cell Rep. 2 (3), 553-567 (2012).</li>
<li>Ditadi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Definitive+Haemogenic+Endothelium+and+Arterial+Vascular+Endothelium+Represent+Distinct+Lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Human Definitive Haemogenic Endothelium and Arterial Vascular Endothelium Represent Distinct Lineages.</a> Nat Cell Biol. 17 (5), 580-591 (2015).</li>
<li>Conner, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+embryo+fibroblast+%28MEF%29+feeder+cell+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse embryo fibroblast (MEF) feeder cell preparation.</a> Curr Protoc Mol Biol. Chapter 23, Unit 23.2 (2001).</li>
<li>La Motte-Mohs, R. N., Herer, E., Zuniga-Pflucker, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+T-cell+development+from+human+cord+blood+hematopoietic+stem+cells+by+Delta-like+1+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Induction of T-cell development from human cord blood hematopoietic stem cells by Delta-like 1 in vitro.</a> Blood. 105 (4), 1431-1439 (2005).</li>
<li>Schmitt, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+T+cell+development+and+establishment+of+T+cell+competence+from+embryonic+stem+cells+differentiated+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Induction of T cell development and establishment of T cell competence from embryonic stem cells differentiated in vitro.</a> Nat Immunol. 5 (4), 410-417 (2004).</li>
<li>Holmes, R., Zuniga-Pflucker, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+OP9-DL1+system%3A+generation+of+T-lymphocytes+from+embryonic+or+hematopoietic+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">The OP9-DL1 system: generation of T-lymphocytes from embryonic or hematopoietic stem cells in vitro.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2009 (2), (2009).</li>
<li>Polychronopoulos, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+for+the+synthesis+of+indirubins+as+potent+and+selective+inhibitors+of+glycogen+synthase+kinase-3+and+cyclin-dependent+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Structural basis for the synthesis of indirubins as potent and selective inhibitors of glycogen synthase kinase-3 and cyclin-dependent kinases.</a> J Med Chem. 47 (4), 935-946 (2004).</li>
<li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecule-mediated+disruption+of+Wnt-dependent+signaling+in+tissue+regeneration+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Small molecule-mediated disruption of Wnt-dependent signaling in tissue regeneration and cancer.</a> Nat Chem Biol. 5 (2), 100-107 (2009).</li>
<li>Sugimura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+and+progenitor+cells+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem and progenitor cells from human pluripotent stem cells.</a> Nature. , (2017).</li>
<li>Ohgushi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathway+and+cell+state+responsible+for+dissociation-induced+apoptosis+in+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Molecular pathway and cell state responsible for dissociation-induced apoptosis in human pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 7 (2), 225-239 (2010).</li>
<li>Peschle, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic----Fetal+Hb+switch+in+humans%3A+studies+on+erythroid+bursts+generated+by+embryonic+progenitors+from+yolk+sac+and+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Embryonic----Fetal Hb switch in humans: studies on erythroid bursts generated by embryonic progenitors from yolk sac and liver.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 81 (8), 2416-2420 (1984).</li>
</ol>

著者は、彼らは競合する金銭的な利益があることを宣言します。

このプロトコルでは、プリミティブ型または決定的な造血前駆細胞の分化の急速、血清無料、実質無料のメソッドについて説明します。プリミティブ型または決定的な造血前駆細胞の中胚葉性仕様は、一意にカノニカル WNT シグナルの小分子阻害剤を悪用当社のプロトコルを使用して確実に実現できます。CHIR9902133 GSK3β 阻害剤によるステージ固有 wnt シグナルの活性化を生じさせる決定的な造血中胚葉、一方 IWP234 PORCN 阻害剤による WNT 阻害は原始造血中胚葉26を指定します。注記のうち、このメソッドは確実与えない上昇 (図示せず) engraftable HSC のような人口に。ただし、この方法で生成された決定的な造血前駆細胞は、潜在的な将来の医療アプリケーションを強調表示生着の遺伝子による潜在的な35に適しています。
成功 hPSC 分化に重要な決定要因は、hPSCs から形成され...

ひと多能性幹細胞 (hPSCs) ヒト胚性幹細胞 (hESCs)、ひと誘導多能性幹細胞 (hiPSCs) を包含として定義され、適切な成長条件下で自己更新を受けていない唯一のユニークな能力を持っています。また、あらゆる細胞に分化する能力が 3 つの胚葉から派生: 外胚葉、中胚葉、内胚葉の1。これらのユニークな能力のためは、hPSCs は、再生医療、疾患モデル作製、細胞ベースの治療2に偉大な約束を保持します。種類の細胞は、hPSCs から正常に分化されている、1 つの重要な課題は大人っぽい hPSC 由来造血幹細胞 (造血)、決定的な造血前駆細胞の in vitro仕様。
HPSCs から人間の HSCs の発展に 1 つの可能性があります障壁ヒト胚3で複数の造血プログラムの存在であります。現れる、「原始的な造血、」と呼ばれる最初のプログラムは胚の卵黄嚢の組織内で起きると巨核球、マクロファージ、赤芽球前駆細胞 (EryP フロン) の一時的な生産が最大の特徴です。特に、このプログラムは、造血に上昇を与えないもそれは T および B リンパ球前駆細胞に上昇を与えるが。ただし、卵黄嚢では、エリスロ骨髄前駆 (EMP4,5,6,7,8) など、制限された決定的な造血前駆細胞に上昇を与えるは一過性赤血球欠乏リンパ プライミング多能性前駆 (LMPP9)。ただし、EMPs でも LMPPs でもない、完全に多能性または成人レシピエントにおける HSC のような生着が可能です。対照的に、開発で後で古典的な定義の「決定的な」造血プログラムは、HSC を含むすべての成人造血系統に上昇を与える、適切な胚大動脈性腺発生地域で指定されます。これら胎児内決定的な造血細胞の仕様は、hemogenic (彼) 内皮3,10,11 から内皮-造血移行を介しての Notch 依存的ファッション ,12,13,14。溶解能力は別として潜在的な multilineage とこれらの細胞の依存性のノッチを EMP と (文献参照3,13 LMPP からこれらの決定的な造血前駆細胞を区別するために使用できます。).
HPSCs からプリミティブと決定的な造血仕様を支配する機構を理解することは可能性が高いさまざまな hPSC ラインの決定的な造血前駆細胞の再現性のある生産に不可欠。最近まで、プリミティブと決定的なの多能性造血前駆細胞を分離できれば hPSC 微分のプロトコルには、15,16,17,18がありませんでした。 19,20,21,22,23,24,25。最初に牛胎児血清 (FBS) および/または間質共培養を使用多くのアプローチ説明プリミティブと決定的な造血潜在的な15,16、混合 hPSC 分化の造血の可能性 17,19,22,23,25。さらに、造血無血清の多くのプロトコルは、港湾の造血潜在的な18,20,21, hPSCs から中胚葉の仕様は信号の要件を説明しています。24します。 ただし、これらのメソッドはまだ両方のプログラムの異種混合物に上昇を与えた、と臨床応用と理解の発達メカニズムの使用は限定される場合があります。
我々 は最近概説アクチビン/節点と hPSC から派生した中胚葉18,26 からプリミティブと決定的な造血仕様における WNT シグナルのステージ固有の信号要件を持つこれらの研究で構築して.ステージ固有 WNT 信号操作の使用は、専らプリミティブまたは決定的な造血前駆細胞26排他的のいずれかの仕様に、後者は特にユニークです。中胚葉仕様、中に PORCN 阻害剤 IWP2 とカノニカル WNT シグナル伝達の阻害の結果 CD43 の仕様で+ EryP フロン ・骨髄前駆細胞、リンパ球検出可能性のないです。対照的に、カノニカル WNT シグナル GSK3β 阻害剤、CHIR99021 と分化の段階で同じ刺激検出 CD43 の完全な不在で起因した+ EryP フロン、同時にリードしながらに、CD34 の仕様+CD43−彼。この人口が骨髄性、所有していたHBG-赤芽球と T リンパ球の可能性を表現します。以降の解析には、CD7327,28 ・ CD18428、その造血可能性の表現としてはノッチ依存28だったこれが識別されます。さらに、単一細胞のクローン性解析は、これらの決定的な造血系統の多能性の単一細胞28が由来することを示した。一緒に取られて、これらの研究は、純粋な原始造血前駆細胞や多能性 NOTCH 依存的決定的な造血前駆細胞、ステージ固有 WNT 操作ができますを示します。
ここでは、我々 は WNT シグナリング中胚葉のパターン形成とその下流の造血系統の試金の操作を介して排他的プリミティブまたは決定的な造血系細胞を生成する我々 の差別化戦略を概説します。このプロトコルは、再生医療用 hPSCs からプリミティブ型または決定的な造血前駆細胞の生産に興味を持っている研究者に大きな価値です。

<table><tbody><tr><td>Iscoveの変更されたDulbeccoの媒体(IMD)</td><td>Corning</td><td>10-016</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovineの血清(FBS)、ESの細胞評価</td><td>Gemini Bioproducts</td><td>100-500</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovineの血清(FBS)</td><td>Hyclone</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミン、200 mMの解決</td><td>生命技術</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>生命テクノロジー</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>0.25% トリプシン-EDTA</td><td>ライフテクノロジー</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>0.05% トリプシン-EDTA</td><td>ライフテクノロジー</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>ゼラチン、豚皮、タイプA</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>G1890</td><td></td></tr><tr><td>アルファ-MEM</td><td>ライフテクノロジー</td><td>ズ 12000-022</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>コーニング</td><td>10-092-CV</td><td></td></tr><tr><td>ノックアウト血清代替</td><td>ライフテクノロジー</td>ズ <td>10828028</td><td>"KOSR"非</td></tr><tr><td>必須アミノ酸 (NEAA)</td><td>ライフテクノロジー</td>ズ <td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>b-メルカプトエタノール 55 mM 溶液</td><td>ライフテクノロジー</td>ズ <td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>塩酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>フラクション V, ウシ血清アルブミン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>BP1605</td><td></td></tr><tr><td>ハムズ F12</td><td>コーニング</td><td>10-080</td><td></td></tr><tr><td>N2 サプリメント</td><td>ライフテクノロジー</td>ズ <td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>B27 サプリメント、ビタミンA無し</td><td>ライフテクノロジー</td>ズ <td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Stempro-34 (SP34)</td><td>ライフテクノロジー</td><td>ズ 10639011</td><td>「SP34」</td></tr><tr><td>成長因子減少マトリゲル</td><td>コーニング</td><td>354230</td><td>"MAT"</td></tr><tr><td>L-absorbic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4403</td><td></td></tr><tr><td>ヒト血清トランスフェリン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10652202001</td><td></td></tr><tr><td>モノチオグリセロール(MTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6145</td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼ B</td><td>ロシュ</td><td>11088831001</td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼII</td><td>ライフテクノロジー</td><td>ズ 17101015</td><td></td></tr><tr><td>DNaseI</td><td>カルバイオケム</td><td>260913</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水 (PBS)</td><td>Life Technologies</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>R&Dシステムズ</td><td>233-FB</td><td></td></tr><tr><td>BMP4</td><td>R&Dシステム</td><td>ズ314-BP</td><td></td></tr><tr><td>アクティビンA</td><td>のR&Dシステムズ</td><td>338-AC</td><td></td></tr><tr><td>VEGF</td><td>R&Dシステム</td><td>ズ293-VE</td><td></td></tr><tr><td>SCF</td><td>R&Dシステム</td><td>ズ 255-SC</td><td></td></tr><tr><td>IGF-1</td><td>R&Dシステムズ</td><td>291-G1</td><td></td></tr><tr><td>IL-3</td><td>R&Dシステム</td><td>ズ203-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-6</td><td>R&Dシステムズ</td><td>206-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-7</td><td>R&Dシステム</td><td>ズ207-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-11</td><td>R&Dシステムズ</td><td>218-1L</td><td></td></tr><tr><td>TPO</td><td>のR&D Systems</td><td>288-TP</td><td></td></tr><tr><td>EPO</td><td>Peprotech</td><td>100-64</td><td></td></tr><tr><td>FLT-3 リガンド (FLT3-L)</td><td>R&D Systems</td><td>308-FK</td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Tocris</td><td>4423</td><td></td></tr><tr><td>IWP2</td><td>Tocris</td><td>3533</td><td></td></tr><tr><td>Angiotensin II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9525</td><td></td></tr><tr><td>Losartan Potassium</td><td>Tocris</td><td>3798</td><td></td></tr><tr><td>CD4 PerCP Cy5.5 Clone RPA-T4</td><td>BD Biosciences</td><td>560650</td><td>希釈率 1:100;T細胞アッセイ</td></tr><tr><td>CD8 PE クローン RPA-T8</td><td>BD Biosciences</td><td>561950</td><td>希釈 1:10;T細胞アッセイ</td></tr><tr><td>CD34 APC Clone 8G12</td><td>BD Biosciences</td><td>340441</td><td>希釈 1:100;EHTアッセイ</td></tr><tr><td>CD34 PE-Cy7 クローン 8G12</td><td>BD Biosciences</td><td>348801</td><td>希釈 1:100;造血性内皮</td></tr><tr><td>CD43 FITC クローン 1G10</td><td>BD Biosciences</td><td>555475</td><td>希釈 1:10;造血性内皮</td></tr><tr><td>CD45 APC-Cy7 クローン 2D1</td><td>BD Biosciences</td><td>557833</td><td>希釈 1:50;T細胞アッセイ</td></tr><tr><td>CD45 eFluor450 Clone 2D1</td><td>BD Biosciences</td><td>642284</td><td>希釈 1:50;EHTアッセイ</td></tr><tr><td>CD56 APC Clone B159</td><td>BD Biosciences</td><td>555518</td><td>希釈 1:20;T細胞アッセイ</td></tr><tr><td>CD73 PE Clone AD2</td><td>BD Biosciences</td><td>550257</td><td>希釈 1:50;造血性内皮</td></tr><tr><td>CD184 APC クローン 12G5</td><td>BD Biosciences</td><td>555976</td><td>希釈 1:50;造血性内皮</td></tr><tr><td>4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール (DAPI)</td><td>BD Biosciences</td><td>564907</td><td>希釈率 1:10,000;T細胞アッセイ</td></tr><tr><td>OP9 DL4細胞</td><td></td><td></td><td>Holmes、R.およびJC Zuniga-Pflucker。コールドスプリングハーブプロトック、2009年。2009(2): p. pdb prot5156</td></tr><tr><td>MethoCult H4034</td><td>Stemcell Technologies</td><td>4034</td><td>"MeC"</td></tr><tr><td>Milli-Q 浄水システム</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5% CO2 インキュベーター</td><td></td><td></td><td>37 °C に設定</td></tr><tr><td>マルチガスインキュベーター</td><td></td><td></td><td>37°C、5% CO2、5% O2</td></tr><tr><td>6 ウェル組織培養プレート</td><td>コーニング</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>24ウェル組織培養プレート</td><td>コーニング</td><td>353226</td><td></td></tr><tr><td>6ウェル低接着組織培養プレート</td><td>コーニング</td><td>3471</td><td></td></tr><tr><td>24ウェル低接着組織培養プレート</td><td>コーニング</td><td>3473</td><td></td></tr><tr><td>35mm組織培養皿</td><td>コーニング</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>ブラントエンドニードル、16ゲージ</td><td>コーニング</td><td>305198</td><td></td></tr><tr><td>3ccシリンジ</td><td>コーニング309657</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 mLポリプロピレン試験管</td><td>コーニング</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>5 mLポリスチレン試験管</td><td>コーニング</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>15 mLポリプロピレン円錐形</td><td>コーニング</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>50 mLポリプロピレン円錐形</td><td>コーニング</td><td>430921</td><td></td></tr><tr><td>2 mL血清ピペット</td><td>コーニング</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>5 mL血清ピペット</td><td>Corning</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 血清ピペット</td><td>Corning</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>25 mL 血清ピペット</td><td>Corning</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>セルスクレーパー</td><td>Corning</td><td>353085</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mL クライオバイアル</td><td>Corning</td><td>430488</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 試験管 40 & micro;M細胞ストレーナー</td><td>Corning</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>40 & micro;M細胞ストレーナー</td><td>コーニング</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養遠心分離機</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>バイオセーフティフード</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FACS AriaIIまたは同等の</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSRiiまたは同等の</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJoソフトウェア</td><td>TreeStar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ウォーターバス</td><td></td><td></td><td>37°C</td></tr><tr><td>で設定0.22 以上Mろ過システム</td><td>コーニング</td><td></td><td></td></tr><tr><td>オートクレーブ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4C冷蔵庫</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>-20C冷凍庫</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>-80C冷凍庫</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ひと多能性幹細胞からプリミティブかつ決定的な造血前駆細胞の分化を監督

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

再生医療の主な目的の 1 つは、生成、造血幹細胞 (造血) ひと多能性幹細胞 (hPSCs) 由来のメンテナンスです。最近まで、造血に hPSCs を区別するための努力は主に HSC 可能性を欠いて、代わりに卵黄嚢造血のような造血前駆細胞を生成しています。これらの結果の造血前駆細胞は、様々 な成人造血器疾患、リンパ系統の特にそれらの in vitro疾患モデル作製のためのユーティリティ限られている可能性があります。しかし、最近ここの概要ステージ固有分化プロトコルを使用して hPSCs からエリスロ骨髄リンパ多能決定的な造血前駆細胞を生成する方法を説明しました。基底膜マトリックス コーティング容器に hPSCs の酵素分解による胚様体 (EBs) が形成されています。EBs は、中胚葉に GSK3β 阻害剤の CHIR99021 でその後決定的な造血プログラムに指定されている組換え BMP4 によって区別されます。また、原始造血は PORCN 阻害剤の IWP2 によって指定されます。造血はさらに VEGF 組換え添加および支持造血サイトカインを介して駆動されます。このメソッドを使用して生成された結果の造血前駆細胞疾患と発達モデル、体外に使用される可能性があります。

HPSCs からプリミティブと決定的な造血前駆細胞の誘導を描いた回路図は図 1に示します。中胚葉分化、造血前駆仕様に続いての 2 ~ 3 日中に発生するカノニカル WNT によるパターニングします。
代表フローサイトメトリーによる解析とコロニー形成 hPSC 由来造血分化文化のセルロースの試金は図 2のとおりです。IWP2 扱われる分化培養を行えば、異なる CD34+CD43−と CD34低/−CD43+人口、CHIR 扱われる分化文化が &#60; 1 %cd43 の 8 日目で細胞の+分化 (図 2 a、B)...

ここで、提示ひと多能性幹細胞 (hPSC) 培養のプロトコル、CD34 に hPSCs を区別するために使用される+造血前駆細胞。このメソッドは、排他的に決定的なまたは原始的な造血プログラムのいずれかのセルを指定するカノニカル WNT のステージ固有操作を使用します。

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

本手法の全体的な目的は、段階特異的なシグナル操作アプローチを用いて、ヒト多能性幹細胞を原始造血または決定造血プログラムへと分化誘導することです。この手法は、ヒトの決定造血におけるシグナルおよび転写調節因子の解明など、この分野における多くの重要な課題に対処することが可能です。本技術の主な利点は、段階特異的な操作を即座に適用できる点にあります。本手順の実演を行うのは、私の研究室のポストドクターであるCarissa Degeです。プロトコルの開始にあたり、あらかじめ準備したヒト多能性幹細胞株（HPSC）を用意します。HPSCは、5% CO2濃度の37°Cインキュベーター内で、マウス胚性線維芽細胞（MEF）上で70%から80%のコンフルエンシーまで増殖させておきます。HPSC培地を吸引し、各ウェルに37°Cに温めた0.25% Trypsin EDTAを1 mL加え、1分間放置します。1分後、トリプシンを吸引し、各ウェルに1 mLのストック培地を加えます。セルスクレイパーを使用して、プレートから細胞を剥離させます。その後、各ウェルに1 mLの洗浄バッファーを加えます。2 mLのセロロジカルピペットを用いて、細胞を3〜5回ピペッティングし、大きな凝集塊を分散させます。その後、細胞を50 mLのコニカルチューブに移します。HPSCsを330 x Gで5分間遠心分離します。遠心後、HPSC培地を加えて細胞を再懸濁します。次に、再懸濁したHPSCを2 mLずつMATコード付きプラスチックウェアの各ウェルに分注し、一晩インキュベートします。24時間後、培地を吸引し、37°Cの0.05% Trypsin EDTAに置換して1分間処理します。Trypsin EDTAを吸引します。1 mLのストック培地を加え、セルスクレイパーで細胞を強力に掻き出します。その後、1 mLの洗浄用培地を加えます。2 mLのセロロジカルピペットを用いて、細胞を3回ピペッティングして混和し、50 mLコニカルチューブに移します。細胞を220 x Gで5分間遠心分離します。次に、培地を吸引し、20 mLの洗浄用培地を加え、5 mLセロロジカルピペットを用いて細胞を穏やかに再懸濁します。遠心分離と吸引後、胚様体（EB）をDay Zero培地で慎重に再懸濁します。10 mLセロロジカルピペットを用いて、EBを含む分化培地を2 mLずつ、6ウェル低接着細胞培養ディッシュの各ウェルに分注します。その後、EBを37°C、5% CO2、5% O2のマルチガスインキュベーター内に配置します。24時間後、Day One培地を2 mL添加します。マルチガスインキュベーター内で細胞を一晩培養します。18時間後、5 mLセロロジカルピペットを用いてEBを穏やかに回収し、100 x Gで5分間遠心分離します。培養物全体を10 mLのIscove's Modified Dulbecco Medium（IMDM）で洗浄し、混合します。デブリを除去するため、100 X Gで5分間、培養物を再度遠心分離し、培地を吸引します。P1000ピペットを用いて、Day Two MediaでEBを穏やかに再懸濁させます。次に、6ウェル低接着細胞培養プレートの各ウェルに、EB液を2 mLずつ分注します。定常性造血前駆細胞または原始性造血前駆細胞をそれぞれ分化させるため、3 µMのCHIR99021またはIWP2を添加します。プレートを37°Cのマルチガスインキュベーターで30時間インキュベートします。30時間後、2mLセロロジカルピペットを用いてEBを回収し、50mLコニカルチューブに移して330 x Gで5分間遠心分離します。EBを穏やかに再懸濁し、10mLのIMDMで洗浄します。EBをDay Three Mediaで再懸濁し、低接着6ウェルプレートの各ウェルに2mLずつ分注します。細胞を37°Cのマルチガスインキュベーターで72時間培養します。72時間の培養後、各ウェルにDay Six Mediaを2 mL加えます。その後、EBを37°Cのマルチガスインキュベーターでさらに48時間培養します。分化8日目にCHIR99021で処理したEBを回収し、次のセクションに進みます。EBを330 x Gで5分間遠心分離します。その後、上清を吸引除去します。次に、0.25% Trypsin EDTA 2 mLをEBに加えます。EBを5秒間ボルテックスし、37 °Cのウォーターバスで8分間インキュベートします。その後、停止溶液5 mLを加え、EBを遠心分離します。次に、上清を吸引します。EBを5 mLのCollagenase IIに再懸濁します。チューブを5秒間ボルテックスし、その後、EBを37°Cのウォーターバスでインキュベートします。60分後、EBを5秒間ボルテックスし、5 mLの停止溶液を加えます。遠心分離後、上清を吸引し、細胞を1 mLのFACSバッファーで再懸濁します。未解離の細胞塊を除去するため、細胞を40 µmのセルストレーナーに通します。その後、抗体ラベル化およびCD34陽性造血内皮前駆細胞のFACS分離に進みます。FACSによる分離後、細胞をHE培地で再懸濁します。細胞を96ウェル低接着培養プレートに50 µLずつ分注し、一晩インキュベートします。翌朝、造血前駆細胞は6～10個の細胞からなる凝集塊を形成しているはずです。再凝集させた細胞を50 µLずつ、24ウェルMATコードプレートの中心に緩やかに移します。細胞が付着するまで、プレートをマルチガスインキュベーター内に4〜6時間静置します。4〜6時間後、細胞の付着を確認した後、調製したばかりのHE培地を各ウェルに1 mLずつゆっくりと加えます。造血細胞が見えるまで、マルチガスインキュベーター内で細胞をインキュベートします。次に、細胞からHE培地を静かに取り除き、40 µmのセルストレーナーに通して透過液を回収することで、確定造血前駆細胞を回収します。残った接着細胞には、0.25% Trypsin EDTAを0.5 mL添加し、37 °Cのインキュベーターで5分間インキュベートします。トリプシン処理後、各ウェルに0.5 millilitersの停止溶液を加えます。同一の40-micronセルストレーナーに細胞を通し、全ての付着細胞と非付着細胞を回収して遠心分離します。OP9培地を用いてOP9 DL4細胞を培養しているウェルに、FACSで単離した細胞を2, 000から10, 000個添加します。37°C、5% CO2インキュベーターで培養します。4〜5日ごとに細胞を継代するため、1 mLピペットで細胞をトリチュレーション（攪拌）します。40 µmフィルターに通して凝集塊を除去します。遠心分離後、培地を吸引します。細胞を2 mLの新鮮なT細胞培地で再懸濁し、新鮮なOP9 DL4細胞上に播種します。少なくとも21日間の共培養後、細胞を激しくピペッティングし、40 µmフィルターに通して細胞残渣を除去します。330 x Gで5分間遠心分離し、上清を吸引した後、標準的なフローサイトメトリーに進みます。フローサイトメトリーの結果、IWP2処理した分化培養物では、CD34陽性・CD43陰性およびCD34低発現・CD43陽性の明確な集団が認められました。一方、CHIR処理した分化培養物では、分化8日目におけるCD43陽性細胞は1%未満でした。IWP2条件下で誘導され、9日目に単離された原始造血前駆細胞は、メチルセルロースアッセイにおいて主に原始赤血球系および骨髄系前駆細胞へと分化します。CHIR99021処理から誘導されたCD34陽性CD43陰性集団は、血管内皮前駆細胞に加え、CD34陽性、CD43陰性、CD73陰性、CD184陰性の造血内皮細胞を含む不均一な集団です。これをFACSで単離すると、最初は内皮様細胞の単層を形成し、その後、内皮造血転換（EHT）を経て、円形で屈折率が高く非接着性の造血細胞となります。これらの造血細胞は、フローサイトメトリーを用いてCD34およびCD45の発現を評価することができます。EHTアッセイから単離された造血前駆細胞は、メチルセルロースアッセイに使用することができ、大型のバースト状赤芽球コロニー形成単位、小型赤芽球コロニー形成単位、および骨髄系前駆細胞を形成します。CHIR99021由来のCD34陽性、CD43陰性、CD73陰性、CD184陰性の造血前駆細胞およびIWP2由来のCD34陽性、CD43陰性の造血前駆細胞を用いたTリンパ球アッセイ能の代表的なフローサイトメトリー分析では、CHIR由来の前駆細胞にCD45陽性、CD56陰性、CD4陽性、CD8陽性の集団が存在することが示されており、これは投入したCD34陽性集団内の造血能を示唆しています。このビデオを視聴することで、ヒト多能性幹細胞を原始的または決定的な造血前駆細胞へと分化させる方法について十分な理解を得ることができます。

directed-differentiation-primitive-definitive-hematopoietic

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

発生生物学

人工多能性幹（iPS）細胞からTリンパ球の生成は、T細胞ベースの免疫療法のために胚性幹細胞を使用する代替アプローチを提供します。メソッドは、どちらを利用することによってことを示しています...

Tリンパ球に向かって誘導多能性幹細胞の分化の指示

私たちは、発生生物学からの知識と公開された研究に基づいて、ヒト胚性幹細胞とヒト人工多能性幹細胞の両方からA9中脳ドーパミン作動性ニューロンを効率的に生成するための最適化されたプロトコルを開発しました。これは、パーキンソン病の疾患モデリングと細胞補充療法に役立ちます。...

ヒト多能性幹細胞からドーパミン作動性ニューロンの分化を監督

このプロトコルは、転写因子の強制発現を通じて、ヒト多能性幹細胞からの血行性内皮および多能性造血前駆細胞の効率的な誘導について説明しています。...

ヒト多能性幹細胞における転写因子の過剰発現によって、造血内皮と血液の直接誘導

ここで説明するプロトコルは、転写因子の最小セットの過剰発現によるマウス胚性線維芽細胞における造血プログラムの誘導を詳述しています。この技術は、造血、血液疾患、造血幹細胞移植の将来の研究のためのプラットフォームを提供するために、人間のシステムに変換される可能性があります。...

転写因子との再プログラミングマウス胚線維芽細胞造血プログラムを誘導するために

ここで、フィーダーおよびキセノフリー状態でヒト多能性幹細胞から血原性内皮を正確に形成するプロトコルを提示する。この方法は、疾患のモデリングと治療化合物のスクリーニングに幅広い応用を持つことになります。...

フィーダーとゼノフリーの定義条件におけるヒト多能性幹細胞からの血原性内皮分化

ここでは、4つの骨髄系統に対する臍帯血由来CD34+造血幹細胞および前駆細胞の免疫発食特性特性およびサイトカイン誘導分化のためのプロトコルを提示する。このプロトコルの応用には、CD34+細胞の骨髄性分化に対する骨髄疾患変異または小分子の影響に関する調査が含まれる。...

ヒト臍帯血由来CD34+造血幹細胞および前駆細胞のパンミエロイド分化

このプロトコルは、血球性幹および前駆細胞を生成する転写因子GATA2、GFI1BおよびFOSの強制発現によるヒト皮膚線維芽細胞における血球形成プログラムの誘導を示す。...

転写因子の強制発現によるヒト線維芽細胞のヘモジェニックリプログラミング

本稿の目的は、多能性幹細胞からのヒト肝前駆物質分化を誘導する標準化されたアプローチを提供することです。すぐに使用できるメディア製剤を用いたこの手順の開発は、生物医学の研究と翻訳のためのヒト肝細胞を生成する容易なシステムをユーザーに提供する。...

定義された分化系を用いた多能性幹細胞からの肝前駆体仕様

ここに提示されるのは、約1週間でヒト多能性幹細胞から血原性内皮細胞を指向的に分化させるための簡単なプロトコルです。...

ヒト多能性幹細胞からの血原性内皮細胞の指向性分化

このプロトコルは、人工多能性幹細胞(iPS細胞)からのヒト破骨細胞の微分を示し、破骨細胞および破骨細胞の前駆細胞の性格描写のための方法を記述する。...

ヒト人工多能性幹細胞からの破骨細胞の分化と特性評価

学ぶ、ヒト多能性幹細胞からCD34+造血前駆細胞への分化プロトコル。WNTシグナルの段階的制御により、決定的または原始的造血プログラムへの細胞運命決定を誘導する方法を解説。再生医療研究に有用。

ひと多能性幹細胞からプリミティブかつ決定的な造血前駆細胞の分化を監督

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