Name: ネズミ大動脈挫傷：効率的インビボ平滑筋細胞の増殖と内皮機能のモデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: 学ぶ ネズミ大動脈挫傷モデルによる平滑筋細胞増殖と内皮機能の同時評価法。C57BL/6マウスを用いたこの手法は、血管形成術後の再狭窄メカニズム解明と新規治療戦略開発に貢献します。

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我々は、走査型電子顕微鏡サンプルを処理する彼女の技術的支援のために、メリーランド大学医学部の電子顕微鏡検査施設からのHsia Ru-ching博士に感謝します。

倫理声明：動物の取り扱いに関するプロトコールは、メリーランド大学の機関動物管理および使用委員会（IACUC）（プロトコールナンバー0416009）によって承認され、AAALAC国際規格に従って実施された。 1.外科手術<ol><li> 麻酔技術 <ol><li>生存手術に使用されたすべての器具を121℃で30分間蒸気滅菌して滅菌する。 </li><li>精密気化器を介して送達された100％O 2および2.5％イソフルランを有する誘導タンクを介して麻酔を誘導する。誘導後、イソフルランを中止し、チャンバをO 2でフラッシュする。フェイスマスクを介して1.5-2％のイソフルランおよび吸入により 1L /分のO 2で麻酔を維持する。 </li><li>人員を保護するために、誘導チャンバとフェイスマスクの両方を排ガス吸着用の木炭スカベンジャーに取り付けます。デモで適切な麻酔面を確保する有害な刺激（トウピンチ）に対する反応がないことを前提としている。 </li><li>手術中に熱的サポートを提供するために等温パッドを備えた外科用トレイからなる手術野を作成する。追加の等温パッドは、回復ケージ内の動物に熱的な支持を提供する。 </li></ol></li><li> 動物の準備 <ol><li> 10〜12週齢の雄C57BL / 6マウスについて以下の調査を行う。 </li><li>動物の腹部の腹面の毛を胸骨から鼠径部に脱毛剤または40番刃の電気クリッパーで除去する。 <ol><li>除毛剤の場合、この化合物を外科領域に2〜3分間塗布し、次いでそれを綿で取り除く。市販の水酸化カルシウムと水酸化ナトリウムの化合物を使用します。 </li></ol></li><li> 70％のアルコールで肩の上の領域を準備し、25ゲージまたはより小さい穴の針を用いてcarprofen（5mg / kg）を皮下注射する。この治療は動物の術後鎮痛を提供する。 </li><li>動物を手術野に移し、背臥位に置く。 </li><li>清潔な綿アプリケータまたは綿のガーゼで8-12％のプロビドン - ヨウ素を擦って手術部位を準備する。その後、70％アルコールで皮膚を2回すすいでください。 </li><li>角膜乾燥の発生を減少させるために眼の潤滑剤を両眼に置く。手術部位を滅菌ドレープで覆う。 </li></ol></li><li> 手術技法 <ol><li>剣状突起をすぐに尾側から骨盤に向かって伸びるようにして、メスを長さ約2〜2.5cmの中央腹部開腹切開にする。 </li><li>小腸と十二指腸を動員し、横方向に右に反射する。滅菌した綿のストリップを巻き上げ、注射のために滅菌生理食塩水を浸して、臓器を包み込み、暴露を改善する。 </li><li>小腸の右側に動員された小腸腹部を切開し、後腹膜を露出させ、左腎静脈から大動脈分岐部に腹部大動脈を露出させる（ 図1 ）。 </li><li>滅菌済みのコットンチップ付きアプリケータでは、5秒間に30回の連続破砕を行います。 </li><li>パッキングを取り外し、内臓が元の位置に戻るようにします。 </li><li>実行中の4-0吸収性モノフィラメント縫合糸（ポリジオキサノン）で筋膜を閉鎖する。皮膚は、実行中の6-0非吸収性モノフィラメント縫合糸（ナイロン）で閉鎖される。 </li></ol></li><li> 回復および手技後のケア <ol><li>処置の後、等温パッド上に清潔な寝具を備えた回復ケージに動物を入れ、動物が正常に歩行できるようになるまで熱的支持を継続する。胸骨の臥位を維持する能力を証明するまで動物を放置しないでください。 </li><li>手術後最初の4時間は毎時動物を監視する。一旦動物が普通に戻ってくると、<html>割り当てられた畜舎に割り当てます。それが完全に回復するまで、動物は別の動物の会社に収容されません。 </li><li>手術後最初の72時間、その後は週に少なくとも3回、動物を毎日2回監視する。監視には、週に3回動物の体重を測定することが含まれます。 </li><li>手術後最初の72時間、carpofen（5mg / kg）を1日2回皮下投与する。 </li></ol></li></ol> 2.組織の調達<ol><li> 安楽死の方法 <ol><li>所定の時点で動物を安楽死させる。 </li><li>精密気化器を介して送達された100％O 2および2.5％イソフルランを有する誘導タンクを介して麻酔を誘導する。 <ol><li>内皮の完全性を研究するために、エバンスブルー染料を動物に投与する。 注：エバンスブルーは、アルブミンに対して高い結合親和性を有する負に帯電したアゾ染料であり、無傷の内皮の不存在下でのみ血管を染色することができるs = &quot;xref&quot;&gt; 6。 </li><li>内皮完全性試験のために、安楽死の時点で、5mLの0.3％エバンスブルー染料で5mLのPBS、続いて5mLのPBSを生理的圧力で5分間灌流する。動物は、灌流処置の間に、麻酔の外科手術平面内に維持される。 </li></ol></li><li>深い麻酔の面を達成した後、胸骨切開術で胸を開きます。右心房からの血液の排出を可能にするために右心房に裂傷を作り、左心室にアクセスし、21G針でアクセスし、右心房からの流出液が透明になるまでリン酸緩衝生理食塩水（PBS）を注入する。 </li><li> PBSで灌流した後、正中線切開により腹部に入れます。 </li><li>もう一度、小腸を動かして腹部大動脈を露出させる腹部の右側に、隣接する組織から大動脈を鋭く切開し、左腎静脈から大動脈分岐部まで切除する。 </li><li>切除された大動脈を4％パラホルムアルデヒド組織処理が起こるまでの間、 <ol><li>内皮完全性試験のために、大動脈を縦に開き、管腔表面全体を露出させるワックスシートにピン止めする。エバンスブルー染料6による染色の程度によって、内皮の完全性の定性的評価を行う。 </li><li>他の組織学的検査では、大動脈を横断し、使用する組織学的方法によって決定されるように最適切断温度（OCT）化合物に埋め込む。7 。 </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+angiogenesis+and+arteriogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of angiogenesis and arteriogenesis.</a> Nat Med. 6 (4), 389-395 (2000).</li>
<li>Carmeliet, P., Moons, L., Collen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+angiogenesis%2C+arterial+stenosis%2C+atherosclerosis+and+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of angiogenesis, arterial stenosis, atherosclerosis and hemostasis.</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 8-33 (1998).</li>
<li>Baker, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparanase+Alters+Arterial+Structure%2C+Mechanics%2C+and+Repair+Following+Endovascular+Stenting+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Heparanase Alters Arterial Structure, Mechanics, and Repair Following Endovascular Stenting in Mice.</a> Circ Res. 104 (3), 380-387 (2009).</li>
<li>Petrov, L., Laurila, H., Hayry, P., Vamvakopoulos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+aortic+angioplasty+for+genomic+studies+of+neointimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">A mouse model of aortic angioplasty for genomic studies of neointimal hyperplasia.</a> J Vasc Res. 42 (4), 292-300 (2005).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+cells+of+recipient+origin+mediate+intimal+expansion+after+aortic+allotransplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Path%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle cells of recipient origin mediate intimal expansion after aortic allotransplantation in mice.</a> Am J Path. 158 (6), 1943-1947 (2001).</li>
<li>Radu, M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+assay+to+test+blood+vessel+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An in vivo assay to test blood vessel permeability.</a> J Vis Exp. (73), e50062(2013).</li>
<li>Turbett, G. R., Sellner, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+optimal+cutting+temperature+compound+can+inhibit+amplification+by+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">The use of optimal cutting temperature compound can inhibit amplification by polymerase chain reaction.</a> Diagn Mol Pathol. 6 (5), 298-303 (1997).</li>
<li>Puchtler, H., Waldrop, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+Verhoeff%27s+elastica+stain%3A+a+convenient+stain+for+myelin+sheaths%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of Verhoeff's elastica stain: a convenient stain for myelin sheaths.</a> Histochem. 62 (3), 233-247 (1979).</li>
<li>Salic, A., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+method+for+fast+and+sensitive+detection+of+DNA+synthesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A chemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (7), 2415-2420 (2008).</li>
<li>Nelson, P. R., Yamamura, S., Mureebe, L., Itoh, H., Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+cell+migration+and+proliferation+are+mediated+by+distinct+phases+of+activation+of+the+intracellular+messenger+mitogen-activated+protein+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle cell migration and proliferation are mediated by distinct phases of activation of the intracellular messenger mitogen-activated protein kinase.</a> J Vasc Surg. 27 (1), 117-125 (1998).</li>
<li>Rzucidlo, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+pathways+regulating+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular%22%5BJournal%5D)">Signaling pathways regulating vascular smooth muscle cell differentiation.</a> Vascular. 17, Suppl 1. S15-S20 (2009).</li>
<li>Aoki, T., Sumii, T., Mori, T., Wang, X., Lo, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+disruption+and+matrix+metalloproteinase-9+expression+during+reperfusion+injury%3A+mechanical+versus+embolic+focal+ischemia+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier disruption and matrix metalloproteinase-9 expression during reperfusion injury: mechanical versus embolic focal ischemia in spontaneously hypertensive rats.</a> Stroke. 33 (11), 2711-2717 (2002).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MARCKS+Signaling+Differentially+Regulates+Vascular+Smooth+Muscle+and+Endothelial+Cell+Proliferation+through+a+KIS-%2C+p27kip1-+Dependent+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">MARCKS Signaling Differentially Regulates Vascular Smooth Muscle and Endothelial Cell Proliferation through a KIS-, p27kip1- Dependent Mechanism.</a> PLoS One. 10 (11), e0141397(2015).</li>
<li>Banai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+ear+model+of+injury-induced+arterial+smooth-muscle+cell-proliferation+-+kinetics%2C+reproducibility%2C+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Rabbit ear model of injury-induced arterial smooth-muscle cell-proliferation - kinetics, reproducibility, and implications.</a> Circ Res. 69 (3), 748-756 (1991).</li>
</ol>

この作品は退役軍人病キャリア開発賞（1IK2BX001553-01）（TSM）と血管治療EJワイリー奨学金（TSM）によって資金提供されました。

本発明者らは、内側過形成および内皮障壁機能不全を生じるマウス大動脈損傷モデルの効果を特徴付けた。大動脈内膜に沿った部分的なEC剥離は、細胞 - 細胞接触の喪失および細胞突起の増強を伴った。相応して、内皮バリア機能が有意に損なわれ、マイトジェン感受性シグナル伝達経路を刺激し、VSMCの増殖および血管壁の肥厚をもたらした。このモデルの強みは、他の大動脈モデルと比べて技術的に習得して実行することが技術的に容易であり、傷害および内皮機能に対する増殖応答の両方を同時に評価できることです。このプロトコルの重要なステップは、実際の挫傷です。圧挫傷害の程度の変動は、様々な程度の傷害をもたらし、従って、変動する量の平滑筋細胞増殖をもたらす可能性がある。私たちの研究室でこのばらつきを減らす1つのステップは、治療または実験条件が盲目になっている患者さんは、圧傷によるけがをすべて行います。 このモデルの限界は、臨床的に関連するヒト疾患プロセスに対する一般性である。このモデルでは、VSMCの初期の堅牢な増殖応答にもかかわらず、再狭窄の後期事象、すなわち新生内膜が発現しないというモデルをモデル化していない。サ...

再狭窄 （バイパス手術、血管形成術、またはステント留置）後のこれらの処置の耐久性を低下させる重大な問題である。すべての血管再生手順は、再狭窄に悩まされている。再狭窄（薬物溶出ステントおよび薬物被覆バルーン）を防止するための現在の戦略は、血管平滑筋細胞（VSMC）および内皮細胞増殖（EC）の両方を阻害する。結果的に、これらの介入は、VSMC媒介性再狭窄を予防するが、内皮の再生も妨げる。損なわれていない内皮がなければ、出血合併症のリスクのある現場血栓症のリスクを低下させるために、患者は強力な抗血小板薬を必要とする。理想的な療法は、内皮の再生を促進しながらVSMCの増殖を阻害するであろう。したがって、 インビボで VSMC増殖および内皮バリア機能を同時に研究する必要がある。 現在、再狭窄のマウスモデル1 。これらのモデルには、頸動脈結紮および大腿動脈ワイヤ損傷2が含まれる 。大動脈モデルは、ステント配置3 、バルーン損傷4 、および大動脈同種移植5を含む 。現在のモデルはすべて制限されています。頸動脈結紮は、フロー媒介新生内膜病変を生じ、内皮傷害を有しない。さらに、頚動脈および大腿動脈の両方は、ヒトの血管よりも数倍少ない細胞層を有し、それらの翻訳値を制限する。直径約1.3mmのマウス大動脈は、臨床的に関連する（冠状動脈）ヒト動脈に近似する唯一の血管である（3）。 マウス大動脈モデルの翻訳能にもかかわらず、現在のモデルには限界があります。これらのモデルには、高度なマイクロサージカルスキルと、血管形成バルーンやステントなどの特殊な機器が必要です。ここでは、VSMC増殖を同時に誘導し、内皮バリア機能を破壊する新規で再現可能な技術である。

<table><tbody><tr><td>眼用潤滑剤</td><td>Dechra</td><td>17033-211-38</td><td>医薬品</td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>VetOne</td><td>502017</td><td>医薬品</td></tr><tr><td>カルプロフェン</td><td>Zoetis</td><td>26357</td><td>医薬品</td></tr><tr><td>精密気化器</td><td>サミットメディカル</td><td>10675</td><td>外科用品</td></tr><tr><td>チャコールスカベンジャー</td><td>ビックフォード株式会社</td><td>80120</td><td>外科用品</td></tr><tr><td>等温パッド</td><td>ハーバード装置</td><td>50-7053-R</td><td>外科用品</td></tr><tr><td>滅菌綿先端アプリケーター</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>23-400-124</td><td>外科用品</td></tr><tr><td>4-0 吸収性モノフィラメント縫合糸&nbsp;</td><td>Ethicon、Inc</td><td>J310</td><td>外科用品</td></tr><tr><td>5-0非吸収性モノフィラメント縫合</td>糸<td>Ethicon、Inc</td><td>1666</td>外科<td>用品</td></tr><tr><td>21ゲージ×1インチ針</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>305165</td><td>外科用品</td></tr><tr><td>25ゲージ×1インチ&nbsp;針</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>305125</td><td>外科用品</td></tr><tr><td>乾燥滅菌器</td><td>セルポイント&nbsp;</td><td>7770</td><td>外科用品</td></tr><tr><td>ファインハサミ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14058-09</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>アドソン鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11006-12</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>デュモン #5 ファイン</td><td>サイエンス ツール</td><td>11254-20</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>バンナス スプリング ハサミ 3 mm 刃先</td><td>ファイン サイエンス ツール</td><td>15000-00</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>ニードルドライバー</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>91201-13</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>メスハンドル #4</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>10004-13</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>メスブレード #10</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>10010-00</td><td>手術器具</td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>ロンザ</td><td>17-516F</td><td>組織処理用試薬</td></tr><tr><td>エバンス ブルー</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2129</td><td>組織処理用試薬</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>組織処理用試薬</td></tr><tr><td>モデリングワックス</td><td>Bego</td><td>40001</td><td>組織処理用試薬</td></tr><tr><td>OCT化合物</td><td>Tissue-Tek Sakura</td><td>4583</td><td>用試薬組織処理</td></tr><tr><td>マイヤーのヘマトキシリン溶液</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MHS16</td><td>免疫組織学的分析用試薬</td></tr><tr><td>エオシン Y 溶液 アルコール&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT110316</td><td>免疫組織学的解析用試薬</td></tr><tr><td>エラスチン染色キット</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT25A</td><td>免疫組織学的解析用試薬</td></tr><tr><td>Click-it Edu Alexa-488 イメージングキット</td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>免疫組織学的解析用試薬</td></tr><tr><td>抗Erk1/2抗体</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>4695</td><td>免疫組織学的試薬分析</td></tr><tr><td>抗リン酸化Erk1/2抗体</td><td>細胞シグナル技術</td><td>4370</td><td>免疫組織学的分析用試薬</td></tr><tr><td>抗p27kip1抗体</td><td>細胞シグナル伝達技術</td><td>3698</td><td>免疫組織学的分析用試薬</td></tr><tr><td>トリクロロ酢酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9159</td><td>免疫組織学的分析用試薬</td></tr></tbody></table>

ネズミ大動脈挫傷：効率的<em&gt;インビボ</em&gt;平滑筋細胞の増殖と内皮機​​能のモデル

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

血管形成術かバイパス手術かにかかわらず、動脈再構築は、内皮破壊および血管平滑筋細胞（VSMC）増殖を引き起こす医原性外傷を伴う。一般的なマウスモデルは、頸動脈および大腿動脈などの小型血管を研究する。本明細書では、VSMC増殖および内皮バリア機能の両方を大きな血管において同時に評価することができるin vivoシステムを記載する。我々は、C57BL / 6マウスの損傷に対する腎臓下大動脈反応を研究した。大動脈は、左腎静脈から大動脈分岐部に損傷を受け、コットン先端のアプリケータを用いて5秒間30回の経壁破砕を行った。形態学的変化は、従来の組織学を用いて評価した。大動脈壁の厚さを内腔表面から外膜まで測定した。 VSMCの増殖を実証するために、DAPIおよびα-アクチンによるEdUの統合および対比染色を用いた。内膜肥厚形成の既知のモデレーターであるERK1 / 2の活性化が抑制されたウエスタンブロット分析によって採取した。炎症の影響は、B細胞、T細胞、およびマクロファージの免疫組織化学によって決定した。内皮のEnフェイス切片を走査型電子顕微鏡（SEM）で視覚化した。 Evans Blue染色で内皮バリア機能を測定した。経壁損傷により大動脈壁が肥厚した。この損傷はVSMC増殖を誘発し、損傷後3日目に最も顕著であり、ERK1 / 2の早期活性化およびp27 kip1発現の減少を引き起こした。傷害は、B細胞、T細胞、または血管壁におけるマクロファージの浸潤を増加させなかった。傷害は部分的な内皮細胞の脱落および細胞 - 細胞接触の喪失を引き起こした。傷害は、内皮バリア機能の有意な喪失をもたらし、これは7日間後にベースラインに戻った。マウス経壁鈍的大動脈傷害モデルは、大血管におけるVSMC増殖および内皮バリア機能の両方を同時に研究するための効率的なシステムを提供する。

OCTに埋め込まれた横断切片の大動脈を切開し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、次いでVerhoeff-Van Gieson（VVG）染色でカウンター染色し、内外の弾性薄層7を同定した。クラッシュ損傷は、偽手術（開腹術および小腸の動員のみ）で処置した動物の大動脈と比較して、大動脈壁の肥厚を誘導した。外膜から内腔までの距離によって評価した壁の厚さは、損傷の3日後に最大​​であった（42.2±1.7μm対開腹術のみについて22.1±1.1μm）（ 図 2A〜B）。傷害は、より丸みのある外観および内腔表面の不規則な輪郭を有する細胞を生じた（ 図2C ）。 損傷を受けた大動脈の壁の肥厚の増加は、少なくとも部分的には、内側血管平滑筋の増殖の増加によって媒介される細胞を洗浄する。壁肥厚が細胞肥大とは対照的に増殖の増加によるものであることを証明す...

心血管手術（バイパス手術、血管形成術、またはステント留置）後の再狭窄は、これらの処置の耐久性を低下させる重大な問題である。理想的な療法は、平滑筋細胞（VSMC）の増殖を阻害し、内皮の再生を促進する。インビボでのVSMC増殖および内皮機能の同時評価のためのモデルを記載する。

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell ...

本手順の目的は、血管平滑筋細胞の増殖と再内皮化を同時に評価できる動物モデルを作成することです。この手法は、血管介入後の再狭窄のメカニズムは何かという、血管生物学分野における重要な問いに答えるのに役立ちます。本手法により、血管平滑筋細胞の増殖と再内皮化のin vivoでの同時評価が可能になります。血管介入後の再狭窄を促進または減衰させる両方の主要なイベントについて。手順のデモンストレーションは、私の研究室の博士研究員であるDan Yu博士が行います。足趾への刺激に反応がないことを確認した後、麻酔をかけた10～12週齢のC57BL/6雄マウスの、胸骨から鼠径部までの腹側腹部の除毛を行います。次に、肩領域を70% ethanolで消毒し、25G以下の針を用いて適切な鎮痛剤を投与します。その後、等温パッドで加熱した手術トレイの上に動物を仰臥位で配置します。手術部位をベタジンまたはクロルヘキシジンで洗浄し、アルコールでリンスします。以上の2つのステップをさらに2回繰り返します。動物の眼に軟膏を塗布します。腹部正中切開を行った後、小腸と十二指腸を右側に寄せます。新しい綿棒を使用して、後腹膜および左腎静脈から大動脈分岐部までの方腹大動脈を露出させます。次に、別の滅菌綿棒を用いて、大動脈に5秒間の圧砕を30回連続して行います。最後の圧砕を加えた後、綿ロールを取り除き、内臓を元の位置に戻します。その後、編み込み吸収性縫合糸を用いて筋膜を閉鎖し、続いて6-0の非吸収性モノフィラメント縫合糸を用いて皮膚を連続縫合します。動物を清潔な敷材が入った回復用ケージに入れ、完全に意識が回復するまで観察します。損傷した心臓組織の内皮整合性を解析するため、適切な実験時点において、放血後の心臓の左心室に21ゲージの針を挿入します。右心房からの流出液が透明になるまでPBSを注入し、次に0.3% Evans blue染料5 mLを生理学的圧力で5分間かけて灌流させ、続いて新鮮なPBS 5 mLを灌流させます。PBS注入の終了後、正中切開で腹部を開き、実演した通りに小腸を腹部の右側に移動させて、腎下大動脈を露出させます。大動脈を隣接組織から鋭的に剥離し、左腎静脈から大動脈分岐部までを切り出し、4%パラホルムアルデヒドに保存します。固定後、大動脈を縦方向に切り開き、組織をワックスシートにピンで固定して管腔面全体を露出させ、エバンスブルー染色の程度によって内皮の完全性を定性的に評価します。圧挫損傷は、偽手術を行った動物の大動脈と比較して大動脈壁の肥厚を誘発し、損傷から3日後に最大の壁厚が観察されます。また、この損傷により細胞は円形に近い外観となり、それに伴い管腔表面の輪郭が不規則になります。EdUの取り込みにより、損傷した大動脈における壁肥厚の増加は、少なくとも部分的に中膜血管平滑筋細胞の増殖増加によって

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Biology

生物学

我々は、ステップバイステップの手順および必要な器具の説明など、ネズミspinotrapezius筋における新規動脈結紮モデルを示しています。我々は、手術や生体共焦点顕微鏡を用いた血管網の再構築と機能的な血管拡張に関連する関連するアウトカムの測定について説明します。...

微小血管機能およびリモデリングに動脈結紮の影響を評価するためにネズミSpinotrapeziusモデル

マウス頸動脈内ステント移植のモデルが記載されている。他の同様の方法に比べて、この手順が異なる薬剤溶出ステントおよび再狭窄の分子機構に対する血管壁の反応便利な方法で勉強する可能性を提供し、非常に、迅速かつ簡単にアクセスできます。...

再狭窄の研究のための頸動脈内ステント留置のマウスモデル

動脈瘤のエンドグラフト除外後の組織学的および生化学的な修正は、まだ不明である。我々は、マウス動脈瘤でエンドグラフト移植の新たなモデルを記述する。永続的な循環血液ストリームインタフェース、新しい血管内生体材料の評価の有無にかかわらず血栓分析を通して、このモデルでは、より良い血管内動脈瘤の除外病理生物学を理解するのに役立ちます。...

血管内大動脈瘤の修復の新しいマウスモデル

動脈裸出損傷後の再内皮の細胞および分子メカニズムを理解することは、動脈の血栓症および再狭窄を予防する上で極めて重要です。ここでは、下腹部大動脈の再現性動脈裸出損傷のためのプロトコルについて説明します。手順は、マウスモデルを使用して、内皮の再生を制御する機序を研究するために開発されました。...

マウスモデルにおける下腹部大動脈クランプすることにより、再現性動脈侵食に起因けが

ここで体内のクローン解析運命マッピング、大動脈植と単離平滑筋細胞の詳細を使用して萌芽期および周産期のマウス大動脈を勉強するためのプロトコル。これらの多様なアプローチは、通常開発の萌芽期および周産期の大動脈の疾患の病態形成の調査を促進します。...

体内と組織や細胞植アプローチを使用して形態形成と胚および周産期の大動脈の病因を研究するには

ここでは、prelabelled の間葉系細胞がラット大動脈由来血管内皮ネットワークとの共培養して大動脈リング測定の新たな応用を提示します。この手法では、間葉系間質細胞 (MSCs) ホーミングと内皮細胞ネットワークとの統合の可視化、ネットワークのプロパティの定量化と MSC immunophenotypes...

大動脈リング共培養アッセイ:体外間葉系間質細胞の血管新生の可能性を評価するために便利なツール

この記事は、大動脈バルーン傷害の後 myointimal 過形成 (MH)...

マウスの腹部大動脈 Myointimal 過形成を誘導するために気球を利用した傷害

放射線不透過性鉛ベースのシリコーンゴムを使用して大動脈径の大動脈瘤マウスモデルで定量化のためマウスの血管を灌流する詳細な方法について説明します。...

Aortopathy β-アミノプロピオニ トリルによる大動脈瘤と解離のマウスモデルでのマイクロ CT 定量分析

本プロトコルは、マウスモデルにおける頸動脈瘤を1回の外科手術による誘発のための標準化された外科的方法を説明しています。...

頸動脈瘤形成のマウスモデル

ここでは、大腿動脈吻合のマウスモデルを紹介し、血管吻合狭窄を研究し、シミュレートするための貴重な動物モデルを研究者に提供します。この開発は、この疾患の根底にある病態生理学の理解を深め、血管疾患のより正確で効果的な研究を促進するために重要です。...

大腿動脈吻合管狭窄症に対するマウスモデルの開発

このプロトコルは、エラスチン感作と血管周囲エラスターゼの適用を用いてC57BL/6マウスにおける腹部大動脈瘤(AAA)を繰り返しかつ信頼性の高い誘導方法として提供し、免疫増細成分を含むAAAモデルとして提供します。...

エラスチン感作および血管周囲エラスターゼを用いたマウス腹部大動脈瘤モデルの信頼性の高い作成

学ぶ ネズミ大動脈挫傷モデルによる平滑筋細胞増殖と内皮機能の同時評価法。C57BL/6マウスを用いたこの手法は、血管形成術後の再狭窄メカニズム解明と新規治療戦略開発に貢献します。

ネズミ大動脈挫傷：効率的

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