Name: ウサギの乳腺への管内配達 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: 学ぶウサギの乳腺への管内配達法と高解像度超音波イメージングによる可視化技術。局所投与による治療薬の相互作用評価と乳房病変研究への応用を理解できます。

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著者らは、Breast Cancer Research FoundationおよびAmerican Association for Cancer ResearchからのTranslational Breast Cancer Research Grant（14-60-26-BROC to AB)からの支援に感謝しています。

動物被験体を使用した手順は、テキサス大学オースティン校の施設内動物管理使用委員会によって承認されています。 1.術前の準備<ol><li>各ウサギの体重を記録します。すべての前臨床試験と同様に、潜在的な毒性を評価するために定期的に動物の体重を監視します。 </li><li>ウサギを麻酔する前に、30秒間500×gで、市販の超音波ゲルとスピンで50 mLのコニカルチューブを埋めます。遠心分離終了時のゲルで目に見える泡があってはなりません。 </li><li> 0.75ミリグラム/ kgの用量でアセプロマジン筋肉内には0.1mg / kgの用量でグリコピロレートを皮下に投与し、。バイタルサインや行動を監視しながら有効にする鎮静のために15〜20分待ちます。 注：グリコピロレートは、徐脈を防止し、呼吸器およびGI分泌を低下させる抗コリン薬です。アセプロマジンはpremedicatiとして機能鎮静剤であります麻酔のために。 </li><li>ケタミン35mgの/キロとキロのキシラジン皮下麻酔薬としては5mg /を管理します。しかし、オペレータは、より経験豊富になるとケタミンとの3mg / kgの15 mgの薬剤の投与量を減少させ、より迅速に管内の配信を達成することができるように/キシラジンの皮下キロ。これは麻酔時間と麻酔から回復する動物に要する時間を短縮します。 </li><li>チェックして、心拍数、SPO 2、温度、呼吸数、および粘膜の色ごとに15分を記録。両眼に眼の潤滑剤を塗布します。 注：のみ適切な訓練を受けており、それらの機関のIACUCによって承認された職員は、麻酔を管理または監視する必要があります。獣医の麻酔モニタの使用はバイタルサインを取得するのを助けることができると推奨されています。獣医の麻酔モニタは、しかし、手動で動物を15分ごとにチェックする必要性を置き換えるものではありません。 fは、製造元の指示を参照してください。または獣医学的監視の適切な使用。 </li><li>穏やかなつま先のピンチによって麻酔の開始を確認します。ウサギは、続行する前に非応答性であるべきです。 </li><li>慎重に鼠径乳首3番目と4番目のペアの周りの領域にウサギの尾側腹部を剃ります。 </li><li>削除髪の大部分では、剃った領域に店頭脱毛クリームを適用します。暖かい水で湿らせた湿ったペーパータオルを使用して、塗布後のクリーム10分を削除してください。 注：ウサギの皮膚が敏感な/非常に壊れやすいです。脱毛クリームは、せいぜい10分のために使用されるべきです。実際には、5分で「テスト・スポット」を試してみて、テストのみスポットがより長い期間が必要とされる示している場合に長く残すために安全です。 </li><li>注射部位を洗浄する際には、アルコールに浸したガーゼパッドで拭きます。 </li><li>再循環温水​​ブランケットと吸収パッドが並んでV字型の溝で、その背にウサギを置きます。 </li></ol> 2. Prを造影剤のeparation <ol><li>製造業者の説明書に従って、非標的化造影試薬を再構成します。混合する優しく上下にピペット。 注： - 再構成後6時間、このプロトコルで使用される造影剤は、4室温で安定です。静かに各検索の間にバイアルを揺すります。 注：必要な溶液の量は、注入されるダクトの数に依存します。ウサギは乳首あたり4腺管開口部、および液0.2 mLのを持っている大人のニュージーランドホワイトラビット（Oryctolaguscuniculus）の1乳管ツリーを満たすのに十分です。したがって、0.8mLの総容量は、一つ乳腺に送達することができます。 </li></ol> 3.管内配達<ol><li>注入されるべき適切な乳首の位置を確認します。動物がその背側に配置されたときに、それらが容易に可視化されているよう鼠径乳首の3 番目と4 番目のペアは、推奨されています。 </li><li> 0.9％滅菌生理食塩水の負荷を0.2mL22 G針で1 mLのルアーロックツベルクリン注射器。適切に生理食塩水を注射器になると22 G針を処分し、無菌の25ゲージの針に交換してください。ゆっくりガーゼパッド上の85％のイソプロピルアルコールで拭きます。 </li><li>ニードルアップや動物の体内に注射器の並列のベベルでは、乳頭の側に針のベベルを挿入し、ゆっくりと生理食塩水の0.1から0.2 mLのを注入します。これは、乳管開口部のより良い視覚化を可能にします。 </li><li>負荷1 mLのルアーロックツベルクリン注射器に注射液0.2 mLです。 </li><li>親指と人​​差し指で軽く乳首を持って、管内の注射のためにそれを配置するために少し持ち上げ、ウェアラブル眼ルーペは、乳管開口部を視覚化するのを助けることができます。 </li><li>乳首の上昇位置を維持しながら、慎重に25 G鈍先端の針を使用して、関心のダクトにカニューレを挿入。 </li><li>挿管後、軽く鈍-トンのハブのルアーロックシリンジをねじりますそれが所定の位置にロックされるまで、腹腔注射針。 </li><li>乳首を持ち上げて、急速にダクト内の流体を移動させることによって引き起こされる潜在的な損傷を最小限に抑えるために、ゆっくりとソリューションを注入。液を注入する際、時間がない時に抵抗があるはずです。 </li></ol> 4.超音波画像<ol><li>関心領域の皮膚に遠心分離、超音波ゲルのリベラルな量を適用します。これらは、画像品質を妥協するように、ゲル中に気泡がないことを確認してください。 </li><li> 6ミリメートルにイメージング深さを設定します。ゲルと接触して21 MHzのトランスデューサーを配置し、Bモードでの関心領域をスキャンします。乳管開口部とダクトを通して含む走査領域における造影剤を観察します。 注：これらの設定は、特定の光音響超音波機器で使用するために開発されてきました。詳細については、材料の表を参照してください。乳房を最適化する送信電力及び他の撮像システムの撮像深さを調整する必要があるかもしれません腺の可視化。 </li><li>ガーゼパッドを動物の皮膚からの超音波ゲルを削除します。 </li></ol> 5.術後ケア<ol><li>乳頭領域に対するまたは周囲の組織への外傷の兆候があってはならない、と乳首を囲む領域で膨潤が可能性が高い乳房脂肪パッド注射ではなく、成功した管内注射を示し：注射部位を観察します。 </li><li>胸骨の位置にウサギを置きます。必要に応じて、静脈内に辺縁耳静脈にヨヒンビンの0.2ミリグラム/キログラムを与えます。これは、キシラジンの効果を逆転し、動物が麻酔からより迅速に回復することができます。 </li><li>動物が応答、警告であり、胸骨位置を維持するまで、回復期間を通してウサギを15分ごとに監視します。 注：この手順は、組織の損傷や腫れが生じてはなりません。赤みや腫れが認められた場合、動物が警告とできるようになると、メロキシカムは0.1〜0.2mg / kgのPOの用量を投与経口薬を服用します。さらに指導のために金融機関の獣医のスタッフにお問い合わせください。 </li></ol>

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</ol>

著者らは開示するものは何もない。

ウサギの乳腺へ管内送達のこの方法は、超音波造影試薬および不可欠な染料および治療薬を含む多くの他の水溶液に使用することができます。以前の研究は、ホルモン17、18、19の管内送達を実証しました。げっ歯類モデル、核酸8の管内送達、化学療法剤6,7、及びナノ粒子のキャリア8において、20は、行われています。ここで説明するプロトコルは、これらの用途に適合させることができました。 一部のアプリケーションでは、エバンスブルー生体染色色素によって管内送達確認は、皮膚を通して可視化されるように、十分である可能性があります。しかし、皮膚...

<html>治療薬の管内送達は、齧歯類モデルおよび早期臨床試験3、4、5、6、11、12で検討されています。私は勉強最近のフェーズは、管内カルボプラチンまたは浸潤癌2の治療のために乳房切除術を待っている女性では管内ペグ化リポソームドキソルビシンの安全性と実現可能性を実証しました。 管内送達のための以前のプロトコルは、マウスおよびラット乳腺6、7、8、9のために開発されています。研究目的、管内腫瘍細胞注射および癌遺伝子のレンチウイルスベクターの送達のためにも、げっ歯類モデルで実施されていますREF &quot;&gt; 13、14、15、16が、管内デリバリプロセスのインビボモデルにおける理想的な治療用化合物の新規なクラスの開発を可能にし、前臨床評価を容易にするはずである。げっ歯類とヒトとの間の解剖学的差異は、これらの変換を複雑にしています研究。 マウスとは異なり、各ダクトは別々の乳首で終了した、ヒト乳房は5〜9の独立性乳管システム、乳首で終わる独立した開口部を有する各構成されています。ウサギの乳腺は、4つの独立した腺管システム、単一乳首の4つのオリフィスのうちの1つを介してそれぞれ個別にアクセスを抱きます。ウサギモデルは、より密接に人体解剖学と一致し、より関連性の文脈で管内薬物送達の研究を可能にします。 ここでは、管内の配信を評価するために2つの手法を使用します。の同時投与生体色素が皮膚を通して可視化を可能にし、方法の簡単かつ迅速な確認を提供します。いくつかの用途のために、管のより高い解像度のマッピングが好ましい場合があります。我々は、非標的コントラスト試薬の管内配信を通じてここダクトの超音波イメージングのためのプロトコルを提示します。

<table><tbody><tr><td>MicroMarker ノンターゲット造影剤</td><td>VisualSonics</td><td>VS-11694</td><td></td></tr><tr><td>ルアーロック 1 mL シリンジ</td><td>BD</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>グリコピロレート 0.2 mg/mL</td><td>ウェッジウッド コンパウンディング ファーマシー</td><td>GLYCOP-INJ013VC</td><td>保存期間 6ヶ月、供給が限られている場合があります。&nbsp;</td></tr><tr><td>硫酸アトロピン0.5 mg / mL</td><td>動物用医薬品インターナショナル</td><td>15320764</td><td>グリコピロレートが利用できない場合。グリコピロレートと併用しないでください。</td></tr><tr><td>ケタミン HCL 100 mg/mL</td><td>アニマルヘルス</td><td>インターナショナル</td> <td>21250699<a href="http://www.animalhealthinternational.com/">http://www.animalhealthinternational.com/</a</td></tr><tr><td>>アセプロマジン 10 mg/mL</td><td>アニマルヘルス インターナショナル</td><td>17640541</td><td></td></tr><tr><td>キシラジン 20 mg/mL</td><td>アニマル ヘルス インターナショナル</td><td>20101547</td><td></td></tr><tr><td>ヨヒンビン 0.2 mg/mL</td><td>アニマルHealth International</td><td>14588965</td><td></td></tr><tr><td>Hair Removing Cream</td><td>Veet</td><td></td><td>敏感肌用ソリューション。お近くの小売店からお買い求めいただけます。</td></tr><tr><td>鈍い先端の注入の針</td><td>Saiの注入技術</td><td>B14-50</td><td><a href="http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles">http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles</a></td></tr><tr><td>獣医の脈拍のオキシ</td><td>メーターEdanUSA</td><td>VE-H100B</td><td><a href="http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html">http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html</a></td></tr><tr><td>温水ポンプ</td><td>Gaymar</td><td>TP700</td><td></td></tr><tr><td>温水ブランケット</td><td>アニマルヘルス インターナショナル</td><td>21232696</td><td>Maxi-Therm Lite 加温パッド</td></tr><tr><td>超音波システム</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo 2100</td><td></td></tr></tbody></table>

ウサギの乳腺への管内配達

Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland

乳癌のためのローカライズされた管内の治療は、腫瘍への効率的な送達および減少全身毒性及び副作用1、2、3、4、5、6、7を含む潜在的な利点を提供します。これらの処理は、より広く適用することができる前に、しかし、いくつかの課題が残っています。適切な動物モデルにおける管内治療法の開発と検証は、患者のための管内治療戦略の開発を促進します。マウス乳腺広く乳腺発達および腫瘍形成のモデル系として使用されてきたが、解剖学的構造は、人間の腺と区別されます。大きな動物モデルは、ウサギのような乳腺構造と管内治療の開発のためのより良好なモデルとして役立つことができます。 C INマウスにontrast、ここで10乳管の木は空間的に分離した乳首の各終端は、ウサギの乳腺は、より密接1乳頭内の別の開口部を通ってその出口複数の重複乳管システムで、人間の腺に似ている、体軸に沿って分布しています。ここでは、直接ウサギ乳管に、高解像度の超音波画像で配信自体の可視化のための試薬の送達のための低侵襲的な方法を提示します。

ここでは、ウサギの乳管の造影試薬の管内送達は、組織（ 図2）への外傷なしで達成することができることを示しています。ウサギでは、4つの別々の導管システムは、1つの乳頭に収束するので、アクセスし、この方法を使用して個別に撮像することができます。個々の管の開口部は、容易に可視化されます。 図2Bのカニューレを挿入し、ダクトに隣接する第2の管の開口部をマーキング矢印に注意してください。 線形撮像モードにおける非標的造影試薬での高解像度の超音波画像は、管内送達のリアルタイム読み出しを提供することができます。代表的な画像は、45分後に配信（ 図3）までの試薬の検出を示しています。この技術は、ダクトを介して治療的送達の速度を監視するために有用であり得ます。 <p class="jove_content" fo:keep-together.within-pag...

ここでは、管内注射を通じてウサギの乳腺に試薬を局所的に送達する技術について説明します。また、造影剤の高解像度超音波イメージングによる可視化と送達確認のためのプロトコールについても述べます。

Localized intraductal treatments for breast cancer offer potential advantages, including efficient delivery to the tumor and reduced systemic toxicity and ...

本手順の全体的な目的は、ウサギの乳管に水溶液を注入し、管内への送達を超音波イメージングで可視化することです。この手法は、治療薬が他の投与部位と比較して乳管環境とどのように異なる相互作用を持つかなど、乳腺生物学分野における重要な疑問を解決するのに役立ちます。この技術の主な利点は、イメージング用造影剤や評価対象となる潜在的な治療薬を、乳腺病変が発生する組織に局所的に投与できる点にあります。本手法の実演は、私の研究室の技術者であるAmelia Clarkが行います。まず、麻酔をかけたウサギの第3および第4鼠径乳頭周辺の尾側腹部を慎重に剃毛します。大部分の毛が除去された後、剃毛部位に除毛クリームを塗布し、塗布から10分後に、温水で濡らしたペーパータオルを用いてクリームを取り除きます。次に、アルコールを浸したガーゼパッドで注入部位を拭いて清浄にします。吸収性パッドと温水循環ブランケットを敷いたV字型のトラフに、ウサギを背臥位で安置します。造影剤を準備するため、製造元の指示に従って溶解させます。その後、バイアルを静かに揺らして混ぜ合わせます。ここで使用する造影剤は、再構成後4〜6時間は室温で安定しています。この手順では、注射を行う第3および第4の鼠径乳頭を特定してください。次に、滅菌済みの0.9%生理食塩水0.2 mLを、22Gの針を装着した1 mLルアーロック結核用注射器に充填します。生理食塩水を注射器に入れたら22Gの針を廃棄し、滅菌済みの25Gの針に交換します。続いて、ガーゼパッドに85%イソプロピルアルコールを浸し、該当部位を優しく拭きます。針の刃先を上に向け、シリンジを動物の体に平行にし、乳頭の側面から針を挿入して、管開口部をより明確に視認できるように、生理食塩水を0.1から0.2ミリリットルゆっくりと注入します。その後、1ミリリットルのルアーロック結節結核用シリンジに注入液0.2ミリリットルを充填します。親指と人差し指で乳頭を軽く持ち、わずかに持ち上げてから、管内注入を行います。乳頭を持ち上げた状態を維持しながら、25ゲージの鈍端針を用いて目的の乳管に慎重にカニューレを挿入します。カニュレーション後、鈍端注入針のハブ部分でルアーロックシリンジをゆっくりと回し、固定されるまでロックします。乳頭を持ち上げたまま、溶液をゆっくりと注入し、乳管内での急激な流体移動による潜在的な損傷を最小限に抑えます。次に、遠心分離した超音波ジェルの十分な量を、目的部位の皮膚に塗布します。気泡が含まれていると画像品質が低下するため、ジェルに気泡がないことを確認してください。続いて、イメージング深度を6 mmに設定します。21 MHzトランスデューサをゲルに接触させ、Bモードで関心領域をスキャンします。管腔開口部および管全体を含め、スキャン領域内の造影剤を観察し、管内への注入が成功した

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

このビデオでは、マウスの乳腺の管に注射ミックスを送達する管内注射技術について説明しています。...

管内注射:マウス乳腺の管に注射ミックスを送達する

このビデオでは、ウサギの乳管に目的の溶液を投与する技術について説明し、造影剤の高解像度超音波イメージングによって送達を確認します。...

ウサギの乳管内注射:ウサギの乳腺への目的の溶液の局所的な送達

このビデオでは、腹腔鏡検査によってレシピエントの雌ウサギの卵管に胚を移植する技術について説明しています。それは卵管を通る移動の間にウサギの胚のリモデリングを可能にし、最終的に成功した着床を助ける。この技術は、保存されている胚にも効率よく使用できます。...

ウサギへの胚移植:排卵レシピエント雌ウサギモデルの卵管への胚の腹腔鏡ガイド下移植の手順

マウス乳腺水性試薬の非侵襲管内送達のためのプロトコルが記載されている。この方法は、特に乳管を対象とした乳腺の乳首にローカライズ注入を利用しています。この技術は、siRNA、化学療法剤および小分子を含む化合物の様々な適合可能である。...

マウス乳腺に局在薬物送達のための管内注入

この記事では、母体免疫の翻訳的に適切なモデルで粘膜免疫を評価する手段として、鼻腔内ワクチンの投与と授乳中ウサギ(Oryctolagus cuniculus)からのミルクの採取について説明し、実証する。...

ニュージーランド白ウサギにおける母体免疫の研究における鼻腔内免疫とミルクコレクション (オリクトラグス・キュニクルス)

マウスモデルにおける乳癌の予防および局所治療のためのエタノールベースのアブレーション溶液の管内送達およびX線可視化

乳癌の画像誘導予防治療のためのラット乳管樹への化学的切除液の送達のための手順が記載されている。乳腺上皮細胞は、乳頭開口部への直接カニューレ挿入および70%エタノールベースのアブレーション溶液の管内注入により、最小限の側副組織損傷で標的にすることができる。...

ラットモデルにおける乳癌予防のための乳管内エタノール焼灼治療のX線可視化

本プロトコルは、乳頭 を介した...

インビボ 乳腺内注射によるマウス乳腺上皮細胞への遺伝子導入

このプロトコルは、ウサギ乳腺の乳管樹系への画像誘導注入の手順を提示します。X線造影剤を含むエタノールベースのアブレーション溶液を、透視リアルタイムイメージングにより、すべての乳頭開口部に制御注入することを実証します。...

ウサギモデルにおける乳がん予防のための管内エタノールベースのアブレーション注入のX線可視化

本プロトコルは、マウス乳腺における並行 したin vivo...

マウス乳腺における遺伝子ノックアウトと活性化の並行 生体内 スクリーニング

学ぶウサギの乳腺への管内配達法と高解像度超音波イメージングによる可視化技術。局所投与による治療薬の相互作用評価と乳房病変研究への応用を理解できます。

ウサギの乳腺への管内配達

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