ウサギの乳腺への管内配達

この手順の全体的な目標は、ウサギの乳管に水溶液を送達し、超音波画像法によって管内送達を視覚化することです。この方法は、治療薬が他の投与部位と比較して乳管環境とどのように相互作用するかなど、乳房生物学分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、画像造影剤または評価されるべき任意の潜在的な治療法を、乳房病変が生じる組織に局所的に投与できることである。

この手法を実演するのは、私の研究室の技術者であるアメリア・クラークです。この手順を開始するには、鼠径乳頭の3番目と4番目のペアの周りの領域で麻酔をかけたウサギの尾腹部を慎重に剃ります。髪の毛の大部分を取り除いたら、剃毛部分に脱毛クリームを塗り、塗布後10分後に、ぬるま湯で濡らした湿らせたペーパータオルを使用してクリームを取り除きます。

次に、アルコールに浸したガーゼパッドでその部分を拭いて、注射部位を清掃します。ウサギを背側に置き、吸収パッドに再循環する温水ブランケットが敷かれたV字型のトラフに入れます。造影剤を調製するには、製造元の指示に従って

次に、バイアルを静かに揺らして混ぜます。ここで使用している造影剤は、溶解後4〜6時間室温で安定です。この手順では、注入する鼠径乳頭の3番目と4番目のペアを見つけます。

次に、0.2ミリリットルの滅菌0.9生理食塩水を、22ゲージの針が付いた1ミリリットルのルアーロックツベルクリンシリンジにロードします。生理食塩水がシリンジに入ったら、22ゲージの針を廃棄し、滅菌済みの25ゲージの針と交換します。次に、グアゼパッドで85%イソプロピルアルコールでその部分をやさしく拭きます。

針の斜角を上にし、注射器を動物の体と平行にして、針を乳頭の側面に挿入し、0.1〜0.2ミリリットルの生理食塩水をゆっくりと注入して、管の開口部をよりよく視覚化できるようにします。その後、0.2ミリリットルの注射液を1ミリリットルのルアーロックツベルクリン注射器にロードします。親指と人差し指で乳頭を優しく持ち、少し持ち上げて管内注射を行います。

乳頭の持ち上げ位置を維持しながら、25ゲージの鈍い先端針を使用して目的のダクトを慎重にカニューレ状にします。カニューレ挿入後、ルアーロックシリンジをブラントチップ注入針のハブにゆっくりとねじり、所定の位置に固定します。乳頭を持ち上げ、溶液をゆっくりと注入して、ダクト内で急速に移動する流体によって引き起こされる潜在的な損傷を最小限に抑えます。

次に、遠心分離した超音波ジェルを目的の領域の皮膚にたっぷりと塗布します。ゲルに気泡が入っていないことを確認してください。次に、イメージング深度を 6 ミリメートルに設定します。

21メガヘルツトランスデューサーをゲルに接触させ、Bモードで対象領域をスキャンします。スキャンした領域(管の開口部や管全体を含む)の造影剤を観察して、管内送達が成功したことを確認します。次に、画像をキャプチャして保存します。

ガーゼパッドで動物の皮膚から超音波ジェルを取り除きます。その後、注射部位を検査し、乳頭領域や周囲の組織に外傷の兆候がないことを確認します。乳頭の周囲の腫れは、乳管内注射が成功したのではなく、乳腺脂肪パッド注射を示している可能性があります。

造影剤は送達直後に局在化し、送達後30分、送達後45分で可視化されます。試薬が乳管内に残留するため、このプロセスの期間中、可視化することができます。この画像は、0.2ミリリットルのエバンスブルー溶液を管内注射した後の外観を示しています。

皮膚を開くと、エバンスブルーは乳管樹全体の視覚化を可能にし、無傷の管構造を確認します。そして、この画像は、カーミンミョウバンで固定および染色した後の鼠径乳腺の領域のマウント標本全体を示しています。この技術を習得すると、麻酔が効くまでの時間を除いて、約15分で完了します。

この手順を試みるときは、乳頭を持ち上げて管をまっすぐにすることを覚えておくことが重要です 管内分娩中。常に、所属機関の動物福祉ガイドラインに従ってください。この手順に続いて、高度なイメージングや、リゾや免疫組織化学などのエンドポイント組織分析などの他の方法を実行して、治療薬の送達によって誘発される薬力学または組織レベルの形態学的変化に関する追加の質問に答えることができます。

この技術の開発後、乳腺生物学の研究者は、将来、乳管でのイメージング剤や治療薬の送達を探求する道を開きます。このビデオを見た後、ウサギの乳腺への管内分娩を行う方法についてよく理解しているはずです。