Name: MitoCeption：神経膠芽腫幹細胞に単離されたヒトMSCミトコンドリアの転送 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 13 s
Description: 学ぶMitoCeptionプロトコルで、ヒトMSCから神経膠芽腫幹細胞へミトコンドリアを転送する方法。単離されたミトコンドリアの代謝効果を独立して評価し、がん生物学の理解を深める技術です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

我々は提供するために、FACS分析のヘルプはモンペリエRIOイメージング施設（MRI）をアンドレア・パルメジャーニ（L2CとDIMNP、モンペリエ）、ブノワCharlotの（IES、モンペリエ）と同様に有用な議論のための研究室のメンバー、クリストフDuperrayに感謝しますFACSおよび共焦点顕微鏡のための適切な環境を提供します。 BNMはLabEx Numev（大会ANR-10-LABX-20）から大学院の交わりによってサポートされていました。 ABは、ワルシャワと欧州連合（EU）の大学（nはPOKL.04.01.02-00-221 / 12°）から学部交わりによってサポートされていました。 MLVは、科学研究のためのナショナルセンター（CNRS）からスタッフの科学者です。

1日目間葉系幹細胞の1ラベリング（MSC）ミトコンドリア（オプション） <ol><li> 1日目に培養液中で4×10 5 MSCを有するように二日、ミトコンドリアの準備の前に、10ミリリットルαMEM/ FBS 10％で、100ミリメートル培養皿にヒトMSCをシード。 </li><li> PBS（4ml）でMSCをすすぎ、4ミリリットルαMEM/ FBS、1％を追加（37℃に予め温め）。 </li><li> 37℃のインキュベーター中で30分間、細胞をミトコンドリア生体染色色素の必要量を添加し、インキュベートします。 </li><li> 、ミトコンドリア色素溶液を外し予め温め4ミリリットル（37°C）αMEM/ FBS、1％で細胞を2回洗浄し、バック4ミリリットルαMEM/ 10％FBSを追加します。 37℃で細胞をインキュベートします。 </li><li> 2時間後、30分と、別の時間後に培地を変更します（10ミリリットルαMEM/ FBS 10％）。 </li></ol> 1日目神経膠芽腫幹細胞（GSC）の2ラベリング（オプション、ディスカッションセクションを参照してください） <table border="1" fo:keep-together.within-ページ= &quot;1&quot;のfo：キープで-next.within-ページ= &quot;常に&quot;&gt; <tbody><tr><td> 細胞培養培地 </td><td> 組成 </td></tr><tr><td rowspan="5"> GSC基礎培地</td><td> DMEM / F-12を補充し</td></tr><tr><td>インスリンの20mg / mlの</td></tr><tr><td> N2サプリメント1倍</td></tr><tr><td>グルコース3グラム/ L </td></tr><tr><td> L-グルタミン2mMの</td></tr><tr><td rowspan="9"> GSCの増殖培地</td><td>基礎培地に入れます： </td></tr><tr><td> B27サプリメント、1× </td></tr><tr><td> EGFを10ng / mlの</td></tr><tr><td> bFGFを10ng / mLの</td></tr><tr><td> Fungine 10 mg / mlで</td></tr><tr><td>ファンギゾン0.25 mg / mlで</td></tr><tr><td>ヘパリンの2mg / mlの</td></tr><tr><td>シプロフロキサシンを2μg/ mlの</td></tr><tr><td>ゲンタマイシンを2μg/ mlの</td></tr><tr><td rowspan="4"> MSCの増殖培地</td><td> ＆＃945; MEMはを補っ</td></tr><tr><td> L-グルタミン2mMの</td></tr><tr><td> 10％FBS </td></tr><tr><td> bFGFを2 ngの/ mlの</td></tr></tbody></table> 表1：培養培地。 <ol><li>ポリHEMAコーティングした細胞培養フラスコ上のニューロスフェアとして成長GSCs（GB4細胞株32（10×10 6細胞）（ステップ3.12から3.1を参照してください）解離します。 </li><li> 10 5細胞で48ウェルプレート中の種子GSCs /ウェルでGSCの増殖培地（500μl）を（ 表1参照します）。 </li><li> 20℃で5分間、270×gでプレートを遠心。 </li><li>細胞生体染色色素の必要量を加え、37℃で30分間インキュベートします。 </li><li> 48ウェルプレートのウェル当たりGSC基礎培地（ 表1）の500μLを加えます。 </li><li> 5分間、20℃で270×gでプレートを遠心。上清を吸引除去します。 </li><li>繰り返しは、2.6から2.5まで繰り返します。 </li><li> GSC基礎培地500μlを加え、37℃で30分間インキュベートします。 </li><li> 5分間、20℃で270×gでプレートを遠心。上清を吸引除去します。 </li><li> 48ウェルプレートのウェルあたりGSC増殖培地500μlを加え、37℃のインキュベーターでインキュベートします。 注：GSCsの量を示した（10×10 6細胞）を、異なる用量応答実験とFACSの制御を行うことができます。実験条件をより正確に定義すると、この量を縮小することができます。 </li></ol> 2日目神経膠芽腫幹細胞の3播種<ol><li> 50mlのチューブ中20℃で、5分間、270×gで遠心分離することによってGSCのニューロスフェア（10×10 6細胞）を収集します。 </li><li> HBSS 5mlで細胞を洗浄し、20℃で5分間、270×gで遠心。 </li><li>上清を吸引除去します。 </li><li>静かに10×10あたり（100μlのトリプシン-EDTA（0.25％）でGSCペレットを再懸濁<s&gt; 6細胞）まで</li><li> 3分間37℃でインキュベートします。 </li><li> 10μlののCaCl 2（20mMの）と2μlのDNアーゼI（10mg / ml）を追加します。 </li><li>優しくP200ピペットでピペッティング（30-50x）によってニューロスフェアを解離。気泡を避けてください。すべてGSCsが解離して、顕微鏡下で確認してください。 </li><li> 10μlのトリプシン阻害剤（5％）、10mlのHBSSを追加します。 </li><li> 20℃で7分間、270×gで遠心分離GSCs。 </li><li>上清を捨て、10ミリリットルGSC基礎培地（ 表1）を追加します。 </li><li>トーマ計数室でGSCsをカウントした後、20℃で7分間、270×gで細胞を遠心します。 </li><li> 10 6 GSCs / mlの細胞濃度に達するようにGSC増殖培地（ 表1）の適切な量を加えます。 </li><li>シード10、96ウェルプレートのウェルあたり5 GSCs（100μlの細胞懸濁液）。 </li><li>ボットでGSCsを取得するために20℃で7分間、270×gでプレートを遠心井戸のトム。 </li><li>第5節まで37℃で96ウェルプレートをインキュベートします。 </li></ol> 2日目 4. MSCミトコンドリアの単離<ol><li> 4℃にマイクロチューブの遠心分離温度を調整します。 </li><li>ミトコンドリア抽出（200μlの試薬Aと400μlの試薬C、EDTA不含プロテアーゼ阻害剤を含有するの両方）のための試薬を含む二1.5 mlチューブ「A」と「C」を調製します。 「MSC」と「水戸」と表示された2他のチューブを準備します。氷の上ですべてのチューブを保管してください。また、ミトコンドリアの段階希釈用チューブを準備します。 </li><li>予め温めた10ミリリットル（37℃）PBSで洗浄するのMSC。 </li><li> 2ミリリットルのトリプシンを洗浄のMSC（EDTAなし）10秒間、1mlのトリプシン（EDTAなし）を追加します。 37℃で5〜10分間細胞をインキュベートします。 </li><li> 10ミリリットルαMEM/ FBS 10％、50mlのチューブへの転送を追加することにより、MSCを回復します。 </li><li> 20℃で5分間、270×gで遠心分離細胞。 </li><li>上清を捨て、追加細胞ペレットを10ミリリットルαMEM/ FBS 10％。 </li><li> Malassez数える室とMSCをカウントします。 </li><li>遠心分離機のMSC（4-5×10 5）20℃で5分間、270×gで。 </li><li>上清を捨て、細胞ペレットに1メートルの氷冷αMEM/ FBSに10％を追加して（ステップ4.2で調製）「MSC」で標識したチューブに細胞を移します。チューブを氷上に保管してください。 </li><li>遠心機で4℃で5分間、900×gでMSCを含有するチューブ。 </li><li>チューブから全ての残留培地を除去。 </li><li>ミトコンドリア単離試薬A（EDTAフリープロテアーゼ阻害剤を含む）の200μlのを追加します。 5秒間中速でボルテックスし、正確に2分間氷上でチューブを残します。 </li><li> 10秒間最大速度でミトコンドリアの単離試薬B.渦の2.5μLを追加し、氷上でチューブを残します。 5分間、30秒ごとに繰り返します。 </li><li> （EDTAフリープロテアーゼ阻害剤を含む）ミトコンドリア単離試薬Cの200μlのを追加します。チューブを傾けることによりミックス（ROughly 30回、ない渦を行います）。 4℃で10分間、700×gでチューブを遠心。 </li><li> （ステップ4.2で調製）「水戸」チューブに（MSCのミトコンドリアを含む）上清を移します。 </li><li>ミトコンドリアペレットを得るために3000×gで遠心分離し、4℃で15分、。上清を捨てます。ペレットは、単離されたミトコンドリアが含まれています。 </li><li>ミトコンドリアペレットを得るために、そして試薬Cの200μlを、12,000×gで遠心分離、4℃で5分間でミトコンドリアペレットを洗浄します。 </li></ol> GSCsに単離されたMSCミトコンドリアの5転送（MitoCeption） <ol><li> MSCは（4×10 5）から単離したミトコンドリアペレットに予備冷却（0℃）GSC増殖培地200μlを追加します。 </li><li>一貫GSCsにミトコンドリア懸濁液の20μlのを追加する（GSC増殖培地中の）ミトコンドリアの準備を希釈します。 </li><li> 96ワットのウェルに単離ミトコンドリアのボリュームを追加します。エルプレートは、所望の濃度（0.1〜10μgの）で、（ステップ3.15から）GSCsを含みます。少なくとも一度表面全体を覆って、ウェルの底に近い、ゆっくりとミトコンドリアを追加します。 </li><li> MSCのミトコンドリアの重要な色素漏出を制御するために、GSCの増殖培地のみ（GSCs）を（生体染色色素漏れ検出のためのパート6.2を参照）を含む96ウェルプレートのウェルにミトコンドリアの準備（0.1から10μg）の同量を追加します。 </li><li>遠心し、4℃で15分間1500×gでMSCのミトコンドリア（ステップ5.3）とミトコンドリアの受信者GSCsとコントロールプレート（ステップ5.4）を含む96ウェルプレート。 </li><li>すぐに遠心分離した後、37℃の細胞インキュベーターで培養プレートを置きます。 注：ミトコンドリア転送プロトコルがSYSTに応じて調整することができる遠心分離の数と、十分な遠心力で培養した細胞のミトコンドリア懸濁液を遠心分離に依存していますミトコンドリアドナー/レシピエント細胞のEM。 </li></ol> 3日目 FACSおよび共焦点イメージングによってミトコンドリア転送6.分析<ol><li> FACS分析のためGSCサンプルの調製 注：MSCミトコンドリアを予め生体染色色素（セクション1）で標識した場合、効率は24時間ミトコンドリア転写後、FACSによってモニターすることができます。 <ol><li>遠心分離機20℃で5分間、270×gでMitoCepted GSCsで96ウェルプレート。 </li><li>上清を捨てます。 </li><li>各ウェルに100μlのトリプシン（EDTAなし）を追加します。 3分間37℃でインキュベートします。上下にピペットで24時間の期間内に形成されたニューロスフェアを解離します。 </li><li> GSC基礎培地100μlを加えます。 </li><li> 20℃で5分間、270×gでプレートを遠心し、上清を捨てます。 </li><li> FACSに300μlのGSC基礎培地と転送再懸濁GSCsは、チューブを適応しました。 </li><li> FACS ANを実行しますalysis。 </li></ol></li><li> 単離ミトコンドリアからのミトコンドリアの重要な色素漏出のための制御（FACS） 注：このステップの目的はむしろ、本物のMSCのミトコンドリアの転送を反映ではないでしょう背景FACS信号、MitoCeption（ステップ5.3）に使用される標識されたMSCのミトコンドリアからの生体染料の単なる漏れを決定することです。 <ol><li> 3.15にステップ3.1で説明したようにGSC細胞をシード。 </li><li> 37℃で1時間細胞をインキュベートします。 </li><li>遠心分離機20℃で5分間、1500×gで（ステップ5.4から5.6まで）のみミトコンドリアを含む96ウェルプレート。 </li><li> GSC 96ウェルプレート（ステップ6.2.2）から培地を吸引し、ミトコンドリアのみ（ステップ6.2.3からの上清）とインキュベートした媒体によってそれを置き換えます。 </li><li> 2時間37℃でGSCsを含む96ウェルプレートをインキュベート。 </li><li>手順でFACS分析のために6.1.7に6.1.1のように進みます。 </li></ol></li><li> GSC SAMPの調製共焦点イメージングのためのレ 注：GSCsにMSCミトコンドリアの転送は蛍光イメージングにより分析される場合、MSCおよびGSCs両方ミトコンドリア（ステップ1）および細胞（ステップ2）バイタル染料でそれぞれ、予め標識される必要があります。 <ol><li>ステップ6.1.5に6.1.1のようにGSCsを準備します。 </li><li> 35mm培養皿中で2％FBS及びシード（ガラスボトム）を含有する2ml中に再懸濁GSCs GSC増殖媒体。 </li><li> 24時間後に転送された蛍光MSCミトコンドリアとGSCsに共焦点イメージングを実行します。 </li></ol></li></ol>

<ol><li>Vafai, S. B., Mootha, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+disorders+as+windows+into+an+ancient+organelle%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial disorders as windows into an ancient organelle.</a> Nature. 491 (7424), 374-383 (2012).</li>
<li>Nunnari, J., Suomalainen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria%3A+in+sickness+and+in+health%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mitochondria: in sickness and in health.</a> Cell. 148 (6), 1145-1159 (2012).</li>
<li>Chandel, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+as+signaling+organelles%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Mitochondria as signaling organelles.</a> BMC Biol. 12 (1), 34(2014).</li>
<li>Schulze, A., Harris, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+cancer+metabolism+is+tuned+for+proliferation+and+vulnerable+to+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">How cancer metabolism is tuned for proliferation and vulnerable to disruption.</a> Nature. 491 (7424), 364-373 (2012).</li>
<li>Peiris-Pages, M., Martinez-Outschoorn, U. E., Pestell, R. G., Sotgia, F., Lisanti, M. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4879746/">Cancer stem cell metabolism.</a> Breast Cancer Res. 18 (1), 55(2016).</li>
<li>LeBleu, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PGC-1alpha+mediates+mitochondrial+biogenesis+and+oxidative+phosphorylation+in+cancer+cells+to+promote+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">PGC-1alpha mediates mitochondrial biogenesis and oxidative phosphorylation in cancer cells to promote metastasis.</a> Nat Cell Biol. 16 (10), 992-1003 (2014).</li>
<li>Liu, S., Feng, M., Guan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+DNA+sensing+by+STING+signaling+participates+in+inflammation%2C+cancer+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial DNA sensing by STING signaling participates in inflammation, cancer and beyond.</a> Int J Cancer. 139 (4), 736-741 (2016).</li>
<li>Islam, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+from+bone-marrow-derived+stromal+cells+to+pulmonary+alveoli+protects+against+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer from bone-marrow-derived stromal cells to pulmonary alveoli protects against acute lung injury.</a> Nat Med. 18 (5), 759-765 (2012).</li>
<li>Pasquier, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+transfer+of+mitochondria+from+endothelial+to+cancer+cells+through+tunneling+nanotubes+modulates+chemoresistance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Preferential transfer of mitochondria from endothelial to cancer cells through tunneling nanotubes modulates chemoresistance.</a> J Transl Med. 11, 94(2013).</li>
<li>Plotnikov, E. Y., Khryapenkova, T. G., Galkina, S. I., Sukhikh, G. T., Zorov, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoplasm+and+organelle+transfer+between+mesenchymal+multipotent+stromal+cells+and+renal+tubular+cells+in+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Cytoplasm and organelle transfer between mesenchymal multipotent stromal cells and renal tubular cells in co-culture.</a> Exp Cell Res. 316 (15), 2447-2455 (2010).</li>
<li>Spees, J. L., Olson, S. D., Whitney, M. J., Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+between+cells+can+rescue+aerobic+respiration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer between cells can rescue aerobic respiration.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (5), 1283-1288 (2006).</li>
<li>Liu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+rescue+injured+endothelial+cells+in+an+in+vitro+ischemia-reperfusion+model+via+tunneling+nanotube+like+structure-mediated+mitochondrial+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells rescue injured endothelial cells in an in vitro ischemia-reperfusion model via tunneling nanotube like structure-mediated mitochondrial transfer.</a> Microvasc Res. 92, 10-18 (2014).</li>
<li>Bukoreshtliev, N. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+block+of+tunneling+nanotube+%28TNT%29+formation+inhibits+intercellular+organelle+transfer+between+PC12+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Selective block of tunneling nanotube (TNT) formation inhibits intercellular organelle transfer between PC12 cells.</a> FEBS Lett. 583 (9), 1481-1488 (2009).</li>
<li>Gurke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunneling+nanotube+%28TNT%29-like+structures+facilitate+a+constitutive%2C+actomyosin-dependent+exchange+of+endocytic+organelles+between+normal+rat+kidney+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Tunneling nanotube (TNT)-like structures facilitate a constitutive, actomyosin-dependent exchange of endocytic organelles between normal rat kidney cells.</a> Exp Cell Res. 314 (20), 3669-3683 (2008).</li>
<li>Vallabhaneni, K. C., Haller, H., Dumler, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+cells+initiate+proliferation+of+mesenchymal+stem+cells+by+mitochondrial+transfer+via+tunneling+nanotubes%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle cells initiate proliferation of mesenchymal stem cells by mitochondrial transfer via tunneling nanotubes.</a> Stem Cells Dev. 21 (17), 3104-3113 (2012).</li>
<li>Wang, X., Gerdes, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+mitochondria+via+tunneling+nanotubes+rescues+apoptotic+PC12+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Transfer of mitochondria via tunneling nanotubes rescues apoptotic PC12 cells.</a> Cell Death Differ. 22 (7), 1181-1191 (2015).</li>
<li>Plotnikov, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-to-cell+cross-talk+between+mesenchymal+stem+cells+and+cardiomyocytes+in+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Cell-to-cell cross-talk between mesenchymal stem cells and cardiomyocytes in co-culture.</a> J Cell Mol Med. 12 (5A), 1622-1631 (2008).</li>
<li>Acquistapace, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+reprogram+adult+cardiomyocytes+toward+a+progenitor-like+state+through+partial+cell+fusion+and+mitochondria+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells reprogram adult cardiomyocytes toward a progenitor-like state through partial cell fusion and mitochondria transfer.</a> Stem Cells. 29 (5), 812-824 (2011).</li>
<li>Hase, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M-Sec+promotes+membrane+nanotube+formation+by+interacting+with+Ral+and+the+exocyst+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">M-Sec promotes membrane nanotube formation by interacting with Ral and the exocyst complex.</a> Nat Cell Biol. 11 (12), 1427-1432 (2009).</li>
<li>Phinney, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+use+extracellular+vesicles+to+outsource+mitophagy+and+shuttle+microRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells use extracellular vesicles to outsource mitophagy and shuttle microRNAs.</a> Nat Commun. 6, 8472(2015).</li>
<li>Ahmad, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miro1+regulates+intercellular+mitochondrial+transport+%26+enhances+mesenchymal+stem+cell+rescue+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">Miro1 regulates intercellular mitochondrial transport & enhances mesenchymal stem cell rescue efficacy.</a> Embo J. 33 (9), 994-1010 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27641650">iPSC-MSCs with High Intrinsic MIRO1 and Sensitivity to TNF-a Yield Efficacious Mitochondrial Transfer to Rescue Anthracycline-Induced Cardiomyopathy.</a> Stem Cell Reports. 7 (4), 749-763 (2016).</li>
<li>Takeda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+intergeneric%2Finterspecies+mitochondrial+injection%3B+parthenogenetic+development+of+bovine+oocytes+after+injection+of+mitochondria+derived+from+somatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Influence of intergeneric/interspecies mitochondrial injection; parthenogenetic development of bovine oocytes after injection of mitochondria derived from somatic cells.</a> J Reprod Dev. 58 (3), 323-329 (2012).</li>
<li>Takeda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+of+cytoplasm+or+mitochondria+derived+from+somatic+cells+affects+parthenogenetic+development+of+murine+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Microinjection of cytoplasm or mitochondria derived from somatic cells affects parthenogenetic development of murine oocytes.</a> Biol Reprod. 72 (6), 1397-1404 (2005).</li>
<li>Van Blerkom, J., Sinclair, J., Davis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+transfer+between+oocytes%3A+potential+applications+of+mitochondrial+donation+and+the+issue+of+heteroplasmy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial transfer between oocytes: potential applications of mitochondrial donation and the issue of heteroplasmy.</a> Hum Reprod. 13 (10), 2857-2868 (1998).</li>
<li>Ishikawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ROS-generating+mitochondrial+DNA+mutations+can+regulate+tumor+cell+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">ROS-generating mitochondrial DNA mutations can regulate tumor cell metastasis.</a> Science. 320 (5876), 661-664 (2008).</li>
<li>Kaipparettu, B. A., Ma, Y., Wong, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+effects+of+cancer+mitochondria+on+energy+metabolism+and+tumorigenesis%3A+utility+of+transmitochondrial+cybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Functional effects of cancer mitochondria on energy metabolism and tumorigenesis: utility of transmitochondrial cybrids.</a> Ann N Y Acad Sci. 1201, 137-146 (2010).</li>
<li>Wu, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+Transfer+by+Photothermal+Nanoblade+Restores+Metabolite+Profile+in+Mammalian+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial Transfer by Photothermal Nanoblade Restores Metabolite Profile in Mammalian Cells.</a> Cell Metab. 23 (5), 921-929 (2016).</li>
<li>Masuzawa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+autologously+derived+mitochondria+protects+the+heart+from+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transplantation of autologously derived mitochondria protects the heart from ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 304 (7), H966-H982 (2013).</li>
<li>Kitani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+human+mitochondrial+transfer%3A+a+novel+concept+based+on+the+endosymbiotic+theory%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Direct human mitochondrial transfer: a novel concept based on the endosymbiotic theory.</a> Transplant Proc. 46 (4), 1233-1236 (2014).</li>
<li>Caicedo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MitoCeption+as+a+new+tool+to+assess+the+effects+of+mesenchymal+stem%2Fstromal+cell+mitochondria+on+cancer+cell+metabolism+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">MitoCeption as a new tool to assess the effects of mesenchymal stem/stromal cell mitochondria on cancer cell metabolism and function.</a> Sci Rep. 5, 9073(2015).</li>
<li>Kesner, E. E., Saada-Reich, A., Lorberboum-Galski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+Mitochondrial+Transformation+into+Human+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Characteristics of Mitochondrial Transformation into Human Cells.</a> Sci Rep. 6, 26057(2016).</li>
<li>Lathia, J. D., Mack, S. C., Mulkearns-Hubert, E. E., Valentim, C. L., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+in+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells in glioblastoma.</a> Genes Dev. 29 (12), 1203-1217 (2015).</li>
<li>Osswald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+tumour+cells+interconnect+to+a+functional+and+resistant+network%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Brain tumour cells interconnect to a functional and resistant network.</a> Nature. 528 (7580), 93-98 (2015).</li>
<li>Shinojima, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta+mediates+homing+of+bone+marrow-derived+human+mesenchymal+stem+cells+to+glioma+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">TGF-beta mediates homing of bone marrow-derived human mesenchymal stem cells to glioma stem cells.</a> Cancer Res. 73 (7), 2333-2344 (2013).</li>
<li>Velpula, K. K., Dasari, V. R., Rao, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+homing+of+human+cord+blood+stem+cells+to+sites+of+inflammation%3A+unfolding+mysteries+of+a+novel+therapeutic+paradigm+for+glioblastoma+multiforme%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">The homing of human cord blood stem cells to sites of inflammation: unfolding mysteries of a novel therapeutic paradigm for glioblastoma multiforme.</a> Cell Cycle. 11 (12), 2303-2313 (2012).</li>
<li>Guichet, P. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+death+and+neuronal+differentiation+of+glioblastoma+stem-like+cells+induced+by+neurogenic+transcription+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Cell death and neuronal differentiation of glioblastoma stem-like cells induced by neurogenic transcription factors.</a> Glia. 61 (2), 225-239 (2013).</li>
<li>Lyons, E. A., Scheible, M. K., Sturk-Andreaggi, K., Irwin, J. A., Just, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+Sanger+strategy+for+human+mitochondrial+genome+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">A high-throughput Sanger strategy for human mitochondrial genome sequencing.</a> BMC Genomics. 14, 881(2013).</li>
</ol>

INSERM（研究所国立・デ・ラ・サンテらデラRECHERCHEMédicale）、これでCJとML.V.提携している、MitoCeption技術（EP14306154.7）に特許出願しました。

研究の増加は、細胞がミトコンドリアを交換することができること、およびこれらのミトコンドリアは、標的細胞の代謝および機能に重大な影響を有することを示しています。したがって、定量的に、それらの生物学的効果の正確な研究を可能にするために、これらの標的細胞へのドナー細胞からのミトコンドリアを転送するためのツールを習得することが不可欠です。 ここで説明するプロトコルは、もともと付着癌細胞株MDA-MB-231 33にヒト間葉系幹細胞から単離されたミトコンドリアを転送するために働きました。ここに示されるように、 インビトロでのニューロスフェアとして増殖、がん幹細胞に適合させることができます。ミトコンドリア転送MSCミトコンドリアは、GSCのニューロスフェアに添加されたときに発生したが、本プロトコールに記載のように、それは、単一細胞GSCsでより効率的であることが見出されました。このプロトコルも必要で、T細胞のような、他の非接着性細胞に推定することができMitoCeption工程のためのシードされた細胞濃度をDAPT。 <...

ミトコンドリアは、彼らが栄養摂取ならびにエネルギーおよび代謝物の生産において中心的な役割を果たし、真核細胞に見られる細胞小器官です。これらの細胞小器官は、電子輸送鎖複合体、tRNA及びrRNAの1のタンパク質をコードして16.6キロバイトの長円形のミトコンドリアDNA（mtDNAのを）、含まれています。これらの細胞小器官の機能は、ミトコンドリア機能不全1、2、3で細胞ホメオスタシスおよびいくつかの病態のための重要な関連しているされています。ミトコンドリアの状態は、例えば、治療4、5、6、7への転移及び抵抗性の結果この後者の場合には、炎症、感染症および癌に関連しています。 ミトコンドリアはの驚くべき能力を表示します<html> 「ドナー」と「ターゲット」セル間転勤。最近になって、15の異なる研究室8、9、10、11、12、13、14によって示されるように、これは、例えば、組織修復および化学療法剤に対する耐性のような他の機能の改変と同様に、標的細胞のエネルギー代謝の変化をもたらします、16。ヒト間葉系幹細胞（MSC）は、これらの細胞の機能的特性の改変をもたらす、心筋細胞、内皮細胞、肺の肺胞上皮細胞、腎尿細管細胞と癌細胞を含む標的細胞の多種多様なミトコンドリアを転送するこの能力を示します8、&gt; 9、10、12、17、18。 ミトコンドリア交換は、現在の異なる細胞型の数が互いに通信し、それらの生物学的特性を変更することができ、広く使用されるメカニズムとして現れます。このミトコンドリア交換は19複雑なコネキシン43を含むギャップジャンクション8またはM-秒/ TNFaip2とエクソシストを含む、トンネルナノチューブ（TNT）の形成を介して発生する可能性があります。代替的に、ミトコンドリアの転送は、ドメイン含有タンパク質1媒介性微小胞（ARMMs）20アレスチンによって媒介されることが示されました。興味深いことに、ミトコンドリアの転送の有効性は、RhoのGTPアーゼ1 MIRO1 21、iPSC-間のミトコンドリア転送効能の違いを説明するための重要な因子の発現率にリンクされましたMSCおよび成人BM-MSCの22。 細胞と細胞のミトコンドリア交換に関するデータのこの富のにもかかわらず、比較的少ないが、このミトコンドリア転送の代謝性および生物学的結果について知られています。したがって、それは完全に完全にこの転送の生物学的効果を評価するための適切なツールをセットアップ保証します。長年にわたり、受容細胞へのドナーからミトコンドリアを転送するためのいくつかの技術的なアプローチが提案されています。これは27、transmitochondrialサイブリッド26を生成するために、卵母細胞23、24、25、細胞融合にミトコンドリアの直接注入を含みます そして、最近では、光熱nanoblades 28を用いて、単離されたミトコンドリアの転送。 我々と他の人は以前に分離されたmitochondの能力を実証しましたインビトロおよびインビボの両方で観察されたようにRIAは、生細胞によって内在化されます メカニズムを通して29、30、31は 、マクロピノサイトーシス32が関与することを提案しました。我々はさらに、定量的（付着）で例示されるように、標的細胞にMDA-MB-231乳癌細胞株31（MSCS）から単離されたミトコンドリアを転送するために、MitoCeptionと呼ばれる方法を開発しました。このプロトコルは、神経膠芽腫幹細胞（GSCs）の単離されたヒトMSCのミトコンドリアの転送のためにここに適合させました。 神経膠芽腫は急速に主に起因する腫瘍33内に存在する神経膠芽腫幹細胞（GSC）に、治療に耐性となる脳の積極的な悪性腫瘍です。これらのGSCsは、in vitroでのニューロスフェアとして成長し、異種移植モデルにおいて腫瘍を発生させます。神経膠芽腫内癌細胞は持っています放射線治療抵抗性星細胞腫のネットワーク34で、その結果、移行することができるミトコンドリア（ならびにカルシウムおよび細胞核）まで延長マイクロチューブを介して、その相互接続アストロサイトの脳腫瘍細胞のために最近示されるように、細胞から細胞への接続を行うための能力。神経膠芽腫は、MSC 35、36を含む、腫瘍微小環境内の多くの異なる細胞を動員することができます。我々は、GSC機能的特性を変更すると予想される（データは示さず）MSCは共培養でGSCsと細胞間接続を行い、それらのミトコンドリアを転送することができることを示しました。現在のプロトコルはMitoCeption技術はそれらの機能の生物学的結果を決定する目的でヒトGSCsに、ヒトMSCからのミトコンドリア、孤立事前を転送するために使用する方法について説明します。多能性の高い腫瘍形成GB4 GSC線37は、この研究において使用しました。

<table><tbody><tr><td>組織用ミトコンドリア単離キット&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td></td><td></td>10579663</tr><tr><td>N-2 Supplement (100x)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11520536</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Supplement w/o VIT A (50x)</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>11500446</tr><tr><td>HBSS w/o Ca2+ w/o Mg2+</sup</td><td>>&nbsp;シグマ</td><td>H4385</td><td></td></tr><tr><td>ポリヘム&nbsp;</td><td>シグマ&nbsp;</td><td>P3932</td><td></td></tr><tr><td>aMEM グルタミンなし</td><td>オザイム</td><td>BE12-169F</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12 グルタミン無し</td><td>フィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td></td><td></td>11540566</tr><tr><td>L-グルタミン&nbsp;</td><td>インビトロジェン&nbsp;</td><td>25030-024&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>グルコース&nbsp;</td><td>シグマ&nbsp;</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>インスリン&nbsp;</td><td>シグマ&nbsp;</td><td>私は1882年&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>人間&nbsp;bFGF&nbsp;</td><td>R&Dシステム</td><td>ズ233-FB-025</td><td></td></tr><tr><td>ヒトEGF&nbsp;</td><td>ペプロテック&nbsp;</td><td>AF-100-15&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td>シグマ</td><td>H3149&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>MERCK</td><td>2382</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン阻害剤</td><td>シグマ&nbsp;</td><td>T9003</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>SIGMA&nbsp;</td><td></td><td></td>10104159001</tr><tr><td>トリプシン0.25%/ EDTA 1&nbsp;mM</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td></td><td></td>25200056</tr><tr><td>トリプシン</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>15090-046</td><td></td></tr><tr><td>プロテアーゼ阻害剤EDTAフリー</td><td>シグマ</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>シプロフロキサシン&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>17850-5G-F</td><td></td></tr><tr><td>ファンジン&nbsp;</td><td>Invivogen</td><td>ant-fn-1</td><td></td></tr><tr><td>Fungizone&nbsp;</td><td>サーモフィッシャー</td><td>15290018</td><td></td></tr><tr><td>ゲンタマイシン</td><td>ユーロメデックス</td><td>EU0410</td><td></td></tr><tr><td>MitoTracker グリーン FM</td><td>分子プローブ</td><td>M7514</td><td></td></tr><tr><td>MitoTracker レッド CMXRos</td><td>分子プローブ&</td><td>nbsp;M7512</td><td></td></tr><tr><td>MitoTracker 深赤色FM</td><td>分子プローブ</td><td>&nbsp;M22426&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CellTracker Green CMFDA</td><td>Molecular Probes</td><td>C7025</td><td></td></tr><tr><td>CellTracker Blue CMF2HC</td><td>Molecular Probes</td><td>C12881</td><td></td></tr><tr><td>RIPA</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-24948</td><td></td></tr><tr><td>FluoroDish Sterile Culture Dish</td><td>World Precision Instruments</td><td>FD35-100</td><td></td></tr><tr><td>Hemacytometer</td><td>Fisher Scientific</td><td>267110</td><td></td></tr><tr><td>FACSチューブ</td><td>ベックマン・コールター</td><td>2,523,749</td><td></td></tr><tr><td>FACS装置</td><td>ガリオス&nbsp;</td><td>&nbsp;3L 10C</td><td></td></tr><tr><td>LC FAST START DNA MASTER PLUS&nbsp;</td><td>ロシュ</td><td>3515885001</td><td></td></tr></tbody></table>

mitoception：神経膠芽腫幹細胞に単離されたヒトmscミトコンドリアの転送

MitoCeption: Transferring Isolated Human MSC Mitochondria to Glioblastoma Stem Cells

ミトコンドリアは、細胞代謝、エネルギー産生およびアポトーシスの制御に中心的な役割を果たす。不十分なミトコンドリア機能は、神経病変から癌に至るまで、非常に多様な疾患の原因が分かっています。興味深いことに、ミトコンドリアは最近容量を表示することが示されており、さらに現在の関心を高め、ミトコンドリアのレシピエント細胞を代謝および機能的結果と、共培養条件下で癌細胞にヒト間葉系幹細胞（MSC）からのとりわけ、細胞タイプとの間で転送されますこれらの細胞小器官の生物学的特性のために。 標的細胞における転写MSCミトコンドリアの効果を評価することは、細胞 - 細胞相互作用の生物学的結果を理解するために最も重要です。ここで説明MitoCeptionプロトコルは、MSCのミトコンドリアを用いて、標的細胞へのドナー細胞から予め単離されたミトコンドリアの移動を可能にしますモデル系としておよび神経膠芽腫幹細胞（GSC）。このプロトコルは、以前にMDA-MB-231癌細胞を接着するために、MSCをから単離されたミトコンドリアを転送するために使用されてきました。このミトコンドリア転送プロトコルは、in vitroでのニューロスフェアとして成長の具体的な特殊性を提示GSCsのためにここに適合されています。単離ミトコンドリアの転写は、ミトコンドリア生体染色色素を用いた蛍光活性化細胞選別（FACS）および共焦点イメージングによって追跡することができます。異なるハプロタイプ（のSNP）を有するミトコンドリアのドナーおよび標的細胞の使用は、標的細胞におけるそれらの円形のミトコンドリアDNA（ミトコンドリアDNA）の濃度に基づいて、転送ミトコンドリアの検出を可能にします。プロトコルは、これらの条件で検証された後、転送ミトコンドリアを有する細胞はさらに、細胞代謝、可塑性、増殖、および治療に対する応答としての生物学的特性に外因性のミトコンドリアの効果を決定するために分析することができます。

間葉系幹細胞（MSC）とMitoCeptionによって標的神経膠芽腫幹細胞（GSC）への転写からミトコンドリアの単離を概説する処理手順は、 図1に示されています。 GSCsは、それらの幹細胞の特性を保持するニューロスフェアとして増殖させたがん幹細胞です。プロトコルの場合、GSCsは時間のカップル（FACSデータ図3B参照）、より高いミトコンドリアの転送効率を可能にするために、ミトコンドリア（ステップ3）の転送の前に単一細胞として播種します。セクション5（3日目）に続いて、これらの細胞は、ニューロスフェア（図1）を形成するように再び観察されます。 GB4 GSCsのイメージングは、蛍光標識されたMSCのミトコンドリアとMitoCeption 72時間後には、共焦点画像から得られた直交ビューによって示されるように、MSC...

ここでは、プロトコル（MitoCeption）はGSCの代謝および機能に対するそれらの生物学的効果を研究する目的で、神経膠芽腫幹細胞（GSC）を、ヒト間葉系幹細胞（MSC）から単離されたミトコンドリアを転送するために提示されています。同様のプロトコルは、他の細胞型との間のミトコンドリアを転送するように適合させることができます。

MitoCeption：神経膠芽腫幹細胞に単離されたヒトMSCミトコンドリアの転送

Mitochondria play a central role for cell metabolism, energy production and control of apoptosis. Inadequate mitochondrial function has been found ...

この手順の全体的な目的は、間葉系幹細胞などのドナー細胞からあらかじめ単離したミトコンドリアを、膠芽腫幹細胞などのターゲット細胞へと転移させることです。この手順は、トンネルナノチューブやマイクロベシクルなどのプロセスによって細胞間に自発的に転移するミトコンドリアの代謝的および生物学的影響など、代謝分野における重要な疑問を解決するのに役立ちます。この手法の主な利点は、サイトカインや代謝物などの微小環境に存在する他の要因や、トンネルナノチューブ内で輸送される可能性のある他の化合物とは独立して、ミトコンドリアの影響を評価できることです。イメージングのため、MitoCeptionによるミトコンドリア転移前に、MSCミトコンドリアおよびGSCを生存染色剤で標識することができます。まず、テキストプロトコルに従ってGSCを生存染色剤で事前標識した後、20 °Cで270 ×g、5分間の遠心分離により、50 mLチューブにGSCニューロスフィアを回収します。5 mLのHBSSを用いて細胞を洗浄し、再度チューブを遠心分離します。上清を吸引し、100 µLの0.25% Trypsin-EDTAを用いてGSCペレットを穏やかに再懸濁します。次に、細胞を37 °Cで3分間インキュベートします。その後、10 µMの塩化カルシウム10 µLと、10 mg/mLのDNase Iを2 µL、チューブに加えます。P200ピペットを用いて、気泡が混入しないように注意しながら30～50回ゆっくりとピペッティングし、ニューロスフィアを解離させます。10 mLのHBSSに調製した5% Trypsin inhibitorを10 µL細胞に添加し、GSCを7分間遠心分離します。その後、上清を捨て、10 mLのGSC Basal Mediumをサンプルに加えます。次に、トーマ血球計数器を用いて、再度遠心分離を行う前に細胞数をカウントします。GSC増殖培地を適切な量加え、細胞濃度を10⁶ GSCs/mLに調整してください。その後、96ウェルプレートの各ウェルに10⁵ GSCsを播種します。プレートを遠心分離し、GSCをウェルの底に沈降させます。顕微鏡下で細胞を確認します。その後、プレートを37°Cでインキュベートします。MSCミトコンドリアの単離を行うには、まずマイクロセントリフュージの温度を4°Cに調整します。ミトコンドリア抽出用の試薬を入れた、AおよびCとラベル付けした1.5 mLチューブを2本用意します。さらに、MSCおよびMiToとラベル付けしたチューブを2本用意します。チューブを氷上で保持します。また、ミトコンドリア調製液と共に準備するミトコンドリア連続希釈用のチューブを用意します。37°Cに予熱した10 mLのPBSを使用して、MSCを洗浄します。次に、2 mLのEDTAフリーTrypsinで細胞を

mitoception-transferring-isolated-human-msc-mitochondria-to

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このプロトコルは、分離、濃縮、および異所性ソニックヘッジホッグ経路の活性をもつ変異マウス由来の髄芽腫の腫瘍幹細胞の維持を説明します。...

髄芽腫の幹細胞の単離、濃縮、およびメンテナンス

このビデオでは、蛍光標識されたミトコンドリアを遠心分離によって膠芽腫幹細胞(GSC)に移す方法が示されています。ドナーミトコンドリアの良好な取り込みと機能的統合は、共焦点顕微鏡を使用して蛍光を検出することによって確認されます。...

遠心分離支援による神経膠芽腫幹細胞へのミトコンドリア移植

腫瘍を求めて治療間葉系幹細胞 (MSCs) 侵襲神経膠芽腫のための処置として約束を示します。最適な移植には、足場に腫瘍切除キャビティへの MSCs の配信が含まれます。ここでは、神経膠芽腫の MSC 治療を研究する臨床技術を含んで提供される: 画像ガイド下腫瘍切除;MSC シード足場;...

膠芽腫の治療の幹細胞シード足場の頭蓋内注入画像誘導切除

ヒト誘導多能性幹細胞由来の脳オルガノイドの生成とミトコンドリア病のモデル化におけるその使用に関する詳細なプロトコルについて述べています。...

ミトコンドリア病モデルのためのヒト脳オルガノイドの生成

この研究では、フローサイトメトリーと2つの蛍光レポーターまたは抗体による二重染色に基づいて複数のミトコンドリア機能パラメーターを測定し、ミトコンドリア体積、ミトコンドリア膜電位、活性酸素種レベル、ミトコンドリア呼吸鎖組成、およびミトコンドリアDNAの変化を検出する新しいアプローチを報告しています。...

ヒト人工多能性幹細胞における複数のミトコンドリアパラメータとその神経およびグリア誘導体のフローサイトメトリー解析

このプロトコルは、腫瘍形成プロセスにおけるミトコンドリアの役割を研究するためのツールとして、浮遊増殖癌細胞からサイブリッドを生成するための技術について説明しています。...

がん細胞株を用いた伝達性サイブリッドの作製

ここでは、ミトコンドリアのトレーシング、間葉系幹細胞(MSC)と網膜色素上皮細胞(ARPE19)の直接共培養手順、トンネルナノチューブ(TNT)形成とミトコンドリア移動の観察と統計解析の方法を含むプロトコールを提示し、MSCとARPE19細胞間のTNTを介したミトコンドリア交換を特徴付けます。...

In vitroでの間葉系幹細胞と網膜色素上皮との間のトンネルナノチューブを介したミトコンドリア転写

脳オルガノイドは、ミトコンドリア脳筋症、乳酸アシドーシス、脳卒中様エピソード (MELAS)...

脳オルガノイドを用いたミトコンドリア疾患のモデル化:ミトコンドリア脳筋症、乳酸アシドーシス、および脳卒中様エピソードに焦点を当てる

ヒトおよびマウス起源の外因性ミトコンドリアは、前脂肪細胞の分化によって内部化され、画像診断や遺伝学的手法を用いて脂肪形成分化全体を追跡できます。これらのミトコンドリアは内因性ミトコンドリアネットワークと物理的に相互作用しますが、成熟した茶色脂肪細胞に関連するマーカーの発現を増加させることはありません。...

褐色脂肪細胞およびAGPAT2欠損プレディポサイトの分化における外因性ミトコンドリア移動

ヒト胚性幹（ES）細胞の増殖

学ぶMitoCeptionプロトコルで、ヒトMSCから神経膠芽腫幹細胞へミトコンドリアを転送する方法。単離されたミトコンドリアの代謝効果を独立して評価し、がん生物学の理解を深める技術です。

MitoCeption：神経膠芽腫幹細胞に単離されたヒトMSCミトコンドリアの転送

さらに動画を探す