Name: ラット大動脈または下大静脈内のパッチ血管形成術 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: 学ぶ ラット大動脈または下大静脈へのパッチ血管形成術。心膜パッチを用いて新内膜肥厚を動脈・静脈環境で比較する手法で、血管生物学研究に有用です。

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この作品は、国民健康補助金R56-HL095498、R01-HL-095498（AD）は、R01-HL128406、退役軍人生物医学研究所研究の米国部からメリットレビュー賞I01-BX002336の研究所とによって部分的にサポートされていました開発プログラム（AD）は、エール（AD）は手術大瀬賞の部門、（JMS）はサーノフ循環器財団フェローシップ、および資源を通って、退役軍人コネチカット医療システム（コネチカット州にある施設の利用）。ウシ心膜パッチは寛大ルメートル血管社（マサチューセッツ州バーリントン）から提供されました。

適切な制度的動物実験委員会の承認は、あなたのプロトコルがあなたの機関の動物実験倫理委員会のガイドラインに従っていることを示す、取得する必要があります。 1.麻酔と手術前の手順<ol><li>気化した3％のイソフルラン及びアクリル誘導チャンバ内に投与1リットル/分の酸素と、周りに200グラムの重量を量る、Wistar系雄性ラットを麻酔。 </li><li>つま先と尾のピンチに反応性の欠如を通じて十分な麻酔を確認してください。動物が麻酔下にある間乾燥を防ぐために、目に軟膏を置きます。位置プラスチック操作板上の各ラットの仰臥位および気化2配信するためにシリコーンマスクを配置 - 連続吸入により3％のイソフルランを。それは胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻したまで無人の動物を放置しないでください。 </li><li>滅菌手袋を身に着けている間、毛リムーバーを使用して、腹側腹部の毛を除去します。 Buprenorphine、皮下または腹腔内に、頻繁にこの時点で与えられています。 </li></ol> 2.手術の手順<ol><li> パッチvenoplasty <ol><li>手術前に、3ミリメートル×1.5ミリメートル×0.6ミリメートルサイズにmicroscissorを使用して、ウシの心膜パッチをトリミングします。細胞培養皿に5分間の滅菌生理食塩水10mlにパッチを浸します。 </li><li>あなたの制度的プロトコルに従って局所消毒して切開部位を準備し、外科用ドレープを適用します。手術を通して無菌技術を維持するために、滅菌手袋や楽器を使用してください。局所麻酔は、計画された皮膚切開の部位に注入することができます。 </li><li>メスを使用して、ちょうど恥骨上記に剣状突起のレベルから延びる腹部正中切開を行います。 </li><li>開創器を挿入し、右側に向かって腹腔からすべての腸を骨抜き。生理食塩水に浸したガーゼで腸ラップ。 </li><li>私を公開nfrarenal大静脈（IVC）。パッチ移植部位は、腎静脈の起源のレベルよりも約2ミリメートルです。このサイトでは無料のIVCを分析。 6-0ナイロン縫合糸を使用して、このレベルですべての腰椎と支流静脈を結紮し、分割します。 </li><li>近位および遠位infarenal IVCの両方を横切って2マイクロサークリップを配置します。 IVCの前壁を穿刺することにより、25 G針で静脈切開を行い、その後、ハサミ（ 図1A）を使用して3mm程度にそれを拡張します。 </li><li>実行中または中断10-0ナイロン縫合糸（ 図1B）を使用して、パッチで静脈切開を閉じます。 </li><li> venoplastyの閉鎖を完了します。パッチを通気した後、IVCへの血流を回復するために、近位のクランプを除去するために、第1の遠位のクランプを外します。 </li><li>圧縮せずに30秒間観察することにより止血を確認してください。彼らの自然な位置に腸を返します。承認された動物プロトコルに従って実行されている縫合糸で腹部を閉じます。 </li></ol></li><li> パッチ動脈形成術 <ol><li>手術前に、3ミリメートル×1.5ミリメートル×0.6ミリメートルサイズにmicroscissorを使用して、ウシの心膜パッチをトリミングします。滅菌生理食塩水でそれを浸します。 </li><li>局所消毒で切開部位を準備し、外科用ドレープを適用します。手術を通して無菌技術を維持するために、滅菌手袋や楽器を使用してください。 </li><li>メスを使用して、ちょうど恥骨上記に剣状突起のレベルから延びる腹部正中切開を行います。 </li><li>開創器を挿入し、右側に向かって腹腔からすべての腸を骨抜き。生理食塩水に浸したガーゼで腸ラップ。 </li><li>大動脈を公開します。パッチ移植部位は、腎動脈の起源のレベルよりも約2ミリメートルです。このサイトでは無料の大動脈を解剖。 6-0ナイロン縫合糸を使用して、このレベルでは、すべての腰動脈を結紮し、分割します。 </li><li>腎臓下の大動脈をクランプします。 puncturiによって動脈切開を行うために25 G針を使用します大動脈の前壁ngをしてから、はさみ（ 図1C）を使用して3mm程度にそれを拡張します。 </li><li> 10-0ナイロン縫合糸（ 図1D）を実行して使用してパッチに動脈切開を閉じます。動脈形成術の閉鎖を完了します。パッチをベントしてから大動脈への血流を回復するために、近位のクランプを除去するために、第1の遠位のクランプを外します。 </li><li>圧縮せずに30秒間観察することにより止血を確認してください。彼らの自然な位置に腸を返します。承認された動物プロトコルに従って実行されている縫合糸で腹部を閉じます。 </li></ol></li></ol> 3.術後の手順<ol><li>腹部の閉鎖後、麻酔を中止してください。施設内動物管理使用委員会が推奨する指示に従って、鎮痛および創傷ケアなどの術後ケアを適用します。 </li><li>鎮痛のために、0.1mgのでブプレノルフィンを使用/ kgの筋肉内に24時間毎に12時間以上では続きません外科手術る。周術期の期間から適切なリカバリ、および術後疼痛の適切な治療を確実に、動物室で毎日動物の状態を確認してください。それは完全に回復するまで他の動物の会社に手術を受けた動物を返さないでください。 </li></ol><style type="text/css">p.p1 {margin: 0.0px 0.0px 0.0px 0.0px; font: 12.0px Helvetica}
</style><style type="text/css">p.p1 {margin: 0.0px 0.0px 0.0px 0.0px; font: 12.0px Helvetic
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<ol><li>Muto, A., Nishibe, T., Dardik, H., Dardik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patches+for+carotid+artery+endarterectomy%3A+current+materials+and+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Patches for carotid artery endarterectomy: current materials and prospects.</a> J Vasc Surg. 50 (1), 206-213 (2009).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+usage+and+future+directions+for+the+bovine+pericardial+patch%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Current usage and future directions for the bovine pericardial patch.</a> Ann Vasc Surg. 25 (4), 561-568 (2011).</li>
<li>Biasi, G. M., Sternjakob, S., Mingazzini, P. M., Ferrari, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nine-year+experience+of+bovine+pericardium+patch+angioplasty+during+carotid+endarterectomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Nine-year experience of bovine pericardium patch angioplasty during carotid endarterectomy.</a> J Vasc Surg. 36 (2), 271-277 (2002).</li>
<li>Papakostas, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+vascu-guard+bovine+pericardium+patch+for+arteriotomy+closure+in+carotid+endarterectomy.+Early+and+long-term+results%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Use of the vascu-guard bovine pericardium patch for arteriotomy closure in carotid endarterectomy. Early and long-term results.</a> Ann Vasc Surg. 28 (5), 1213-1218 (2014).</li>
<li>Ohwada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutaraldehyde-fixed+heterologous+pericardium+for+vena+cava+grafting+following+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatogastroenterology%22%5BJournal%5D)">Glutaraldehyde-fixed heterologous pericardium for vena cava grafting following hepatectomy.</a> Hepatogastroenterology. 46 (26), 855-858 (1999).</li>
<li>Mori, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+hepatic+vein+reconstruction+with+patch+plasty+using+the+native+portal+vein+in+adult+living+donor+liver+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Transpl%22%5BJournal%5D)">Standard hepatic vein reconstruction with patch plasty using the native portal vein in adult living donor liver transplantation.</a> Liver Transpl. 18 (5), 602-607 (2012).</li>
<li>Bai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericardial+patch+venoplasty+heals+via+attraction+of+venous+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">Pericardial patch venoplasty heals via attraction of venous progenitor cells.</a> Physiological Reports. 4 (12), (2016).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericardial+patch+angioplasty+heals+via+an+Ephrin-B2+and+CD34+positive+cell+mediated+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pericardial patch angioplasty heals via an Ephrin-B2 and CD34 positive cell mediated mechanism.</a> PLoS One. 7 (6), 38844(2012).</li>
<li>Bai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+pericardial+patches+with+antibiotics+does+not+alter+patch+healing+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of pericardial patches with antibiotics does not alter patch healing in vivo.</a> J Vasc Surg. 63 (4), 1063-1073 (2016).</li>
<li>Muto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eph-B4+prevents+venous+adaptive+remodeling+in+the+adult+arterial+environment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Eph-B4 prevents venous adaptive remodeling in the adult arterial environment.</a> J Exp Med. 208 (3), 561-575 (2011).</li>
</ol>

著者らは開示するものは何もない。

私たちは、それぞれ、パッチvenoplastyまたはパッチの動脈形成を作成し、静脈または動脈のいずれかで使用することができたラットにおけるパッチ血管形成術のモデルを記述します。この心膜パッチモデルを用いて、我々は大動脈動脈形成術（ 図2）7、8に比べてラットのIVC venoplastyに積極的かつ安定した新生内膜過形成を示しました。 いくつかの技術的な側面が注目されます。大動脈動脈形成術では、縫合糸は、動脈環境のより高い圧力での血液の漏れを防ぐためにしっかりと数および/または間隔が適切であることが重要です。 IVCのvenoplastyでは、IVCの壁は非常に薄く、壊れやすいように、特定のケアと優しさと作動演習のすべてを実行することが重要です。また、移植部位の周囲に腰椎と小さな支流静脈は慎重に切開し、出血を防ぐためにライゲートされなければなりません。両方のアルテでリアルと静脈手順は、遠位クランプは、任意の管腔の空気を排出すると肺の...

心膜パッチ、ウシまたはブタのいずれかで一般に近い血管の血管外科医は、再狭窄1,2の危険性を低減します。動脈手術では、心膜パッチ血管形成術は、一次閉鎖3、4に比べて再狭窄率を低下させます。パッチvenoplastyも同様に、動脈手順5、6にそれほど頻繁に比較した場合にも、静脈を閉鎖するために行われます。パッチは、典型的には、その腔面上の新生内膜過形成を開発します。しかし、新生内膜形成のメカニズムは、特に、動脈と静脈の環境間で新生内膜形成の違いを比較して、不明なままです。我々は以前心膜パッチは、動脈と静脈の両方の環境で前駆細胞を誘引することが示されたと静脈パッチ血管形成術は、より多くのAを示しています動脈パッチ7,8に比べてggressive新生内膜形成。 本研究では、静脈および動脈の両方を閉じることに共通の心膜パッチ血管形成のラットモデルを記述し、その新生内膜形成を研究するために使用されてもよいです。この方法は、一般的にヒト患者において使用される手術技術の小動物モデルです。ラットモデルは、手術の技術的側面を容易にし、モデルの学習曲線を改善する、マウスモデルよりも大きな直径を有しています。

<table><tbody><tr><td>ウシ心膜パッチ</td><td>LeMaitre Vascular</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vascular clamp</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5424</td><td></td></tr><tr><td>クランプ、鉗子の適用</td>、<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>、<td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>10-0、Prolene suture</td>、<td>Arosurgical Co.</td><td>T05A10N10-13</td><td></td></tr></tbody></table>

ラット大動脈または下大静脈内のパッチ血管形成術

Patch Angioplasty in the Rat Aorta or Inferior Vena Cava

心膜パッチは、一般的に血管を閉じるために血管手術に使用されています。パッチの形成、新生内膜過形成の研究を容易にするために、我々は、それぞれ、パッチvenoplastyまたはパッチ動脈形成の作成、静脈または動脈のいずれかで使用することができるパッチ血管形成のラットモデルを開発しました。このモデルの技術的な側面が議論されています。赤外線腎IVCまたは大動脈を切開した後、近位および遠位クランプされます。 3ミリメートルの静脈切開または動脈切開は、6〜8週齢のWistarラットの腎臓下の下大静脈または大動脈で行われます。ウシ心膜パッチ（×1.5ミリメートル×0.6ミリメートル3ミリメートル）を10-0ナイロン縫合糸を使用してサイトを閉鎖するために使用されます。動脈パッチに比べて、静脈パッチは、術後7日目に、新生内膜の厚さ増加を示す心膜パッチ血管形成術のこの新規なモデルは、血管の生体材料の新生内膜過形成を調べるために、ならびに、動脈と静脈の間の違いを比較するために使用することができます環境。

パッチ血管形成術の後、静脈た（n = 42）または動脈（N = 24）パッチ群のいずれかには血栓はありませんでした。 7日目での生存率は、静脈または動脈パッチのいずれかで両群で100％でした。 パッチは、7日目に採取し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色し、そして以前に7に記載されているように新内膜の厚さを比較しました。そのため、パッチと新生内膜の間に明確な形態学的な違いのために、新生内膜を区別することは非常に簡単です。静脈パッチでは、パッチの腔側に厚い新生内膜の明確な層は、新生内膜に蓄積された複数のセル（ 図2A、2C）と、そこにありました。動脈パッチに、はるかに薄い新生内膜層は、パッチの腔側に取り付けただけ少数の細胞（ 図2B、2D）と、ありました。...

私たちは、小径静脈または動脈のいずれかで使用できる心膜パッチ血管形成術のモデルを確立しました。このモデルは、静脈と動脈の新内膜過形成形成を比較するために使用できます。

Pericardial patches are commonly used in vascular surgery to close vessels. To facilitate studies of the neointimal hyperplasia that forms on the patch, ...

本手順の全般的な目的は、動脈または静脈の環境に血管バイオマテリアルを留置することです。この手法は、動脈または静脈の環境に留置されたバイオマテリアルに形成される新生内膜増殖の相違に関する重要な疑問を解決するのに役立ちます。この技術の主な利点は、習得が容易であり、実施に要する時間が短いことです。足趾つまみ刺激への反応がないことを確認した後、先制鎮痛としてブプレノルフィンを腹腔内投与（IP）します。動物の腹側腹部の毛を除去します。次に、マイクロシザーを用いて牛心膜パッチを3 x 1.5 x 0.6 mmのサイズに切り取り、そのパッチを細胞培養ディッシュに入れた10 mLの滅菌生理食塩水に5分間浸します。パッチを浸している間に、切開部位を局所消毒剤で消毒し、動物を外科用ドレープで覆います。解剖顕微鏡下で、メスを用いて剣状突起から恥骨の直上まで腹正中切開を行い、切開部にリトラクターを挿入します。腹腔を開いた後、腸管を腹腔内から動物の右側へ取り出し、生理食塩水で湿らせたガーゼで組織を包みます。滅菌綿棒を用いて、腎下大静脈（IVC）を露出させます。次に、鉗子を用いて、腎静脈の起始部から約2 mm下の位置でIVCを剥離し、6-0ナイロン縫合糸を用いてすべての腰静脈および枝静脈を結紮・切断します。続いて、腎下IVCの近位側と遠位側の両方にマイクロサージェリークリップを装着し、25ゲージの針でIVCの前壁を穿刺した後、鋏を用いて穿刺孔を約3 mmまで拡大します。次に、パッチと10-0ナイロン縫合糸を用いて静脈切開部を完全に閉鎖します。遠位側のクランプを外してパッチ内の空気を抜き、続いて近位側のクランプを外して下大静脈（IVC）への血流を再開させます。その後、圧迫せずに30秒間パッチを観察して止血を確認し、腸管を腹腔内に戻し、承認済みの動物実験プロトコルに従って連続縫合で腹部を閉鎖します。施設動物ケアおよび使用委員会（IACUC）の推奨に従い、鎮痛処置や創傷ケアなどの術後ケアを行い、動物が完全に胸立位（sternal recumbency）になるまで観察します。パッチ血管形成術（patch arterioplasty）を行う場合は、先ほど示したように、切り出したパッチを滅菌生理食塩水に浸します。静脈形成術と同様に腸管を抽出した後、滅菌綿棒を用いて大動脈を露出させます。次に、腎動脈の起始部から約2mm下の部位で大動脈を剥離し、6-0ナイロン縫合糸を用いてすべての腰動脈を結紮および切断します。続いて、腎下大動脈をクランプし、25ゲージの針を用いて大動脈の前壁を穿刺します。そこからハサミを使用して、穿刺孔を約3mmまで拡大します。次に、パッチと10-0ナイロン縫合糸の連続縫合を用いて、動脈切開部を完全に閉鎖します。まず遠位側のクランプを取り外してパッチ内の空気を抜き、続いて近位側のクラ

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