2017年4月24日
行動試験は、脳損傷後の転帰を決定するためのゴールドスタンダードであり、幼児や子供の発達障害の存在を同定することができます。神経発達反射神経は、これらの異常の早期指標です。新生児げっ歯類で容易に達成発達反射試験のホストが開発され、ここで説明しました。
この新生児ラット反射法の全体的な目標は、これらのタスクを迅速、正確、かつ同等に実行する方法を学ぶことです。この方法は、脳性麻痺などの神経発達障害の分野における重要な質問に答えることができます。この技術の主な利点は、新生児ラットの子犬の初期の発達反射をテストする方法を提供することです。
人間と同様に、生まれたばかりのげっ歯類は初期の発達反射を持っており、それが後の発達への窓を提供します。この方法に不慣れな人は、反射神経がすぐに発生し、得点するのが難しい場合があるため、苦労します。できるだけ一貫性を保つことが重要です。
この技術の意味は、脳性麻痺および発達障害の治療と診断にまで及びます。反射行動の決定は、治療的介入の確認と有効性のゴールドスタンダードです。この方法は、文字で書かれた言葉で手順を学ぶのが難しいため、視覚的にデモンストレーションすることが重要です。
まず、ラットを環境と、付属のテキストプロトコルで説明されているように人間の取り扱いに順応させます。順応したら、ラットを交配させて、テスト用の子犬を産みます。生後3日目から、子犬を毎日一定の時間に静かな部屋に移します。
一連の神経発達反射テストを実行する前に、最低1時間順応させます。部屋には、子犬の体温を摂氏36.5度に保つために、暖房ランプまたはヒートパッドを設置します。また、毎日子犬の体重を記録します。
次に、シャッタースピードが1/1000秒以上のビデオカメラを設置して、反射テストをフレームごとに分析します。各テスト中に、カメラがラットの子犬とテスト材料の真上または横になるようにカメラを配置します。次の各テストについて、子犬が2日連続でタスクを実行できるまで、毎日テストを実行します。
最初の発生日は、データの定量化のために記録する必要がある日付です。生後3日目から、前肢把持反射テストを実施します。このテストでは、子犬の各前足の手のひらに鈍い棒を一度に1つずつ置き、手動で軽い圧力を加えます。
圧力は、接触が行われ、子犬がロッドを感じることができるように、前足をわずかに変位させる必要があります。把持は、ロッドの周りのすべての指の屈曲として表示されます。この反射の獲得が成功するのは、両方の前足が2日間連続してロッドを握ったときに起こります。
次に、各後足のソールに鈍いロッドを置き、手動で軽い圧力を加えて後肢把持反射テストを行います。軽い圧力で後足をわずかにずらして、接触し、子犬がロッドを感じることができるようにする必要があります。ロッドをうまくつかむと、ロッドの周りの指が屈曲します。
この反射の獲得は、両方の後足が2日間連続してロッドを握ったときに発生します。また、生後3日目から、直立反射テストを実施します。このテストでは、子犬を仰臥位にしっかりと保持し、4本の足すべてが直立するようにします。
子犬を放し、すぐにタイマーを開始します。直立は、子犬が4本の足すべてにひっくり返ったり寝返りを打ったりすることができ、各足が体に対して垂直である場合に達成されます。この目標を達成するために、各子犬に最大15秒を与えてください。
生後4日目から、後肢配置反射テストを実施します。このテストでは、子犬を胴体で空中に垂直に保持します。後足の背側を、テーブルの端などの鈍い表面で優しく撫でます。
正しい配置反射は、ラットの子犬が刺激された後肢を引っ込め、続いて後肢をその表面に配置することです。また、生後4日目から、崖回避テストを実施します。このテストでは、ラットの子犬を平らな面の端に置き、子犬の前足と鼻が端にくるようにします。
正しい結果は、ラットの子犬が崖の端から背を向ける防御反応です。生後6日目に歩行の評価を開始します。このテストでは、直径15センチメートルの円の中心に子犬を置き、子犬が円から30秒離れるのを待ちます。
ラットの子犬が30秒未満で両方の前足を円の外側に移動できる場合、歩行が成功します。生後10日目に聴覚驚愕の分析を開始します。ここでは、ベルのように大きな音を出すことができるものが必要です。
ベルを子犬の真上に配置します。ベルを鳴らしてから、驚愕反応があるかどうかを評価します。子犬が音から離れてけいれんする動きを示すと、正の驚愕反応が観察されます。
生後12日目から、子犬を滑りにくい開いた面に置き、子犬が動くときの姿勢を観察します。未熟な姿勢は、移動時に腹部を引きずり、前足と後足の両方を体に対して垂直に向けることによって反映されます。成熟した姿勢は、子犬が腹部を表面から持ち上げることができ、前足と後足の両方が動くときに体に対してまっすぐまたは平行に向けられているときに獲得されます。
また、生後12日目から、子犬のまぶたの観察を開始します。両まぶたが開いた日を記録します。生後14日目に、加速矯正テストを開始します。
このテストでは、子犬をフォームランディングパッドから30.48センチメートル上の仰臥位に置きます。子犬を落とし、その能力を観察します。適切な立ち直りとは、子犬が腹臥位に寝返りを打って前足に着地できるときを指します。
子宮内炎症に曝露された新生児の子犬は、対照群よりもかなり小さく生まれました。ブロッコリースプラウトの栄養補助食品は、これらの子犬の出生時体重を増やすことができました。出生時体重とともに、神経発達反射検査は異常な皮質の発達と成熟の予測尺度であり、明白な神経病理が明らかでない状況下では重要になる可能性があります。
出生後、これらのグループに配置された新生児反射後肢の検査では、対照と比較して、子宮内炎症に曝露された子犬のこの反射の獲得に有意な遅延が示されました。ブロッコリースプラウトの栄養補助食品が遅延を防ぎました。新生児反射崖回避試験の結果から、子宮内炎症に曝露された子犬は、防御反応の獲得が著しく遅れることが明らかになった。
繰り返しになりますが、ブロッコリースプラウトの消費は大幅な遅延を防ぎました。これと同じ結果は、新生児反射歩行の検査後に見られました。この手順では、毎日の成長率、キャッチアップ成長、怪我の重症度、成長制限の影響などの追加の質問に答えるために、毎日の体重記録などの他の方法を実行できます。
その開発後、この技術は、神経科学の分野の研究者が新生児げっ歯類の発達反射検査を探求する道を開きました。このビデオを見た後、新生仔ラットの子犬で早期の発達反射検査を行う方法についてよく理解しているはずです。さらに、早期の行動反射は、損傷の早期バイオマーカーと治療的介入の効果を提供するため、その重要性を理解する必要があります。
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本記事では、新生仔ラットにおける早期発達反射を評価するための手法を紹介します。これにより、潜在的な発達障害に関する知見を得ることが可能です。本手法は、神経発達上の問題を理解する上で極めて重要なこれらの反射について、正確かつ一貫した検査を容易にすることを目的としています。
新生率ラットにおける神経発達反射検査は、脳損傷の検出および前臨床モデルにおける治療介入の評価のための早期バイオマーカーとなります。このアプローチは、行動表現型を神経発達の結果に関連付けることでメカニズム的なリスク低減を支援し、中枢神経系(CNS)疾患のターゲット検証における予測的な信頼性を可能にします。この手法は、定量可能で再現性のある反射指標を提供することで、創薬から前臨床段階に至るトランスレーショナルな連続性を向上させます。
この手法は、初期生物学からリード化合物特定に至る創薬の連続的なプロセスに組み込まれ、CNS(中枢神経系)薬剤開発における分子レベルおよび組織学的評価を補完する行動表現型解析を提供します。