マウスにおける低侵襲横大動脈狭窄

この手順の全体的な目標は、人工換気を必要としない簡単な外科的処置で横行大動脈弓を収縮させることにより、左心室肥大を誘発することです。この方法は、心筋リモデリング、心肥大、アポトーシスと線維症、左心室圧過負荷状態に関する心臓病学分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、人工呼吸器や気管挿管の必要性を排除しながら、定期的な横行大動脈収縮の本質を保存できることです。

手順を開始する前に、ニードルホルダーを使用して2〜4本の30ゲージ針の先端を湾曲させ、針を個々の綿アプリケーターに取り付けます。次に、27ゲージの針を鈍くし、ニードルホルダーを使用して先端を90度曲げます。次に、硬い表面の先端を滑らかにして、0.4ミリメートルのスペーサーを作ります。

つま先をつまむことに反応しないことで適切な鎮静レベルを確認した後、動物の目に軟膏を塗布し、マウスを37°Cの温めた温熱パッドの上に仰臥位に置きます。手足をサージカルテープで加熱パッドに固定します。次に、3回連続したアルコールとポビドンヨード溶液のワイプで皮膚を消毒し、手術野を露出させた滅菌ドレープを動物にかぶせます。

結紮手順を開始するには、滅菌メスを使用して、首と胸の正中線位置で皮膚を開きます。次に、解剖顕微鏡下で、鈍いハサミを使用して結合組織を優しく分離し、甲状腺を頭に向かって引きます。湾曲した針を使用して、正中線で気管の筋肉層を動物の両側に向けて分離し、鈍いハサミを使用して胸骨を2番目の肋骨まで約5ミリメートル

湾曲した鉗子で切開を開き、湾曲した針を使用して胸腺葉と胸壁下部を分離します。この時点で、横行大動脈弓と2つの頸動脈がはっきりと見えます。湾曲した針をアーチの下に置き、先端を使用して血管壁と反対側の結合組織との間に穿孔を行います。

針を使用して6-0モノフィラメント縫合糸を大動脈弓の下に配置し、事前に準備したスペーサーをループに配置します。縫合糸をダブルノットで固定し、スペーサーをそっと取り外します。結び目の収縮が成功したことを確認した後、縫合糸の端を切断し、6-0シルク縫合糸を使用して単純な中断縫合パターンで胸壁を閉じ、続いて6-0モノフィラメント縫合糸で皮膚を連続縫合パターンで閉じます。

次に、ポビドンヨード溶液を縫合部位に塗布し、回復と術後のモニタリングのために動物を事前に温めたケージに入れます。1週間後、実験動物の足に電極ジェルを塗布し、電極付きの摂氏37度温めた加熱パッドにテープで貼り付けます。次に、マウスの胸部に超音波ジェルを塗布し、高周波超音波装置でBモードを選択します。

40メガヘルツのMS550Dプローブを使用して、左心室の位置を特定します。次に、Mモードで、収縮期および拡張期の壁の厚さを測定します。Bモードに戻って分岐点の前の左総頸動脈の位置を特定し、パルス波とカラードップラーを使用して流れを評価し、必要に応じて後で分析するために画像を保存します。

マウスが左の褥瘡の位置にあるように動物取り扱いプラットフォームを左端に傾け、プローブを胸骨傍位置の頭に平行な位置から30度のオフセットに置きます。XトルクとYトルクを操作して大動脈弓を見つけ、カラードップラーモードを使用して狭窄の位置を特定し、狭窄の部位をより見やすくします。パルス波とカラードップラーを使用して、大動脈弓から分岐する2つの頸動脈間を血液が流れている点でのピーク流速を測定します。

次に、動物が完全に回復するまで監視しながら、うつ伏せの状態で加熱パッドで回復させます。低侵襲横行大動脈狭窄術(MTAC)は、結紮マウスにおいて、横大動脈がはっきりと見え、狭窄部位を通るピーク流速度が増加しているマウスにおいて、左心室圧過負荷を確実に引き起こします。それに比べて、偽手術を受けた動物は、通常のピーク流速では明らかな収縮を示さない。

結紮の結果として、右頸動脈の流速は大幅に増加し、上行大動脈と心臓で圧力が上昇して左心室肥大を引き起こし、左総頸動脈の流れが大幅に減少する可能性があります。しかし、偽マウスの右頸動脈と左頸動脈では、ほぼ同一の血流が観察されます。結果として生じる肥大関連のパラメータは、MTAC結紮マウスの有意に拡大および変形した心臓、およびそれらの全生存期間の短縮において容易に観察されます。

これらの変化は、非結紮動物と比較して、MTACマウスにおける心筋細胞サイズの増加および線維化を含む、細胞レベルでさらに観察されます。このテクニックを習得すると、適切に実行すれば、5分から10分で完了することができます。この手順を試みるときは、船舶を傷つけないように注意することを覚えておくことが重要です。

このビデオを見た後、人工換気を必要としない簡単な外科的処置を使用して、横行大動脈弓狭窄を介して左心室肥大を誘発する方法を十分に理解しているはずです。