Name: 研究保護および腫瘍細胞の侵襲性をモデルとして脊髄海馬スライス培養 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: 学ぶ バイブロトームを用いた器官型海馬スライス培養法。神経保護効果や腫瘍細胞の侵襲性を評価するための高品質な脳スライス調製技術を習得できます。

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著者は、優れた技術的な援助のためのビデオ録画とハリッド Ghadban 彼女を扶養するクリスティン Auste を感謝したいです。ウルシュラ Grabiec は、ルーの Programm FKZ 29/18 によって支えられました。

によってヨーロッパ コミュニティ評議会指令 2010年/63/EU 欧州議会を承認済みとして倫理ポリシーおよび神経科学研究の動物の使用に関する方針に従って動物実験を行ったと科学的な目的に使用される動物の保護に関する欧州連合理事会の。
 1 器具文化メディア準備 <ol><li>の一部は、OHSC 準備のため楽器の次のセットを使用して、: 2 つの小さなはさみ、2 つピンセット、繊細なティップを持つ 1 つのピンセット (サイズ 11、15 のサイズの 1 つの 2 つ)、3 つのブレード。3 メス ホルダー、ラウンド フィルター ペーパー (直径: 35 mm)、寒天、1 つのかみそりの刃、パスツール ピペット、未変更の状態の 1 つであり、1 つ変更パスツール ピペット チップなし。( 図 1) 使用前にオートクレーブのすべての材料を滅菌します</li>。
	<li>寒天 5 g の重量を量るし、100 ml の蒸留水に溶かします。滅菌オートクレーブ 210.8 kPa 121.7 ° C で 20 分のためのソリューション。滅菌ガラス ピペットを使用して 60 mm ペトリ皿で 3 mL 液体寒天液を配布、5 h を固めるは、汚染を避けるため、さらに使用するまで 4 ° C で保存しプラスチック パラフィン フィルムでカバーすること。寒天ブロックがスライスのプロシージャの間に脳を安定させるために必要な</li>。
	<li>メディア <ol><li>準備中 (pH 7.35)、200 mL で 198 mL 最小必須培地 (MEM)、2 mL L グルタミン ソリューション (最終濃度 2 mM)。メディアの準備の日にソリューションを準備し、4 で保存 ° C</li>
		<li>準備 49 mL MEM、25 mL ・ ハンクスから成る培養液 100 mL &#39; バランスのとれた塩溶液 (HBSS)、25 mL (v/v) 通常の馬血清 (NHS)、L-グルタミンの解決の 1 mL (最終濃度 2 mM)、100 μ g インスリン、血糖値 120 mg 10 mg ストレプトマイシン、10,000 U ペニシリンと 800 μ g ビタミン C 既に報告されています。ミディアム (37 ° C) を暖かい、pH 7.4 で滅菌フィルター (0.2 μ m 孔サイズ) に pH 値を調整します。媒体を変更する前にすべての 2 日目 (ウォーミング アップ、pH 調整等) 手順を繰り返します。1 週間で最もメディアを使用 4 で保存する場合 ° C</li>
	</ol></li> <li>脳を格納する準備の中で 1 つの 35 mm のペトリ皿を埋めます。作業領域の冷却パックに組織を収集するため 2 空のシャーレを配置します</li>。
</ol> 2。準備と、Vibratome とスライス <ol><li>使用脳 7-9 日古いラットからまたは 4-5 日 Stoppini ら によると一部は、OHSC 準備のため古いマウスします 。4 動物の斬首後、は、はさみで、頭蓋骨から皮膚を削除する。</li>。
	<li>は後頭に導入して高級シザーの刃と尾側吻側 (奥) (フロント) 軸に沿って切断して頭蓋骨を開きます。2 つ作るは、それぞれ左と右耳に向かってハサミを指すので、最初の 1 つに垂直をカット (&#34; T 切開 &#34;).</li>
	<li>は、脳を傷つけないように注意を払って、高級ピンセットで慎重に頭蓋骨を開きます。前頭葉と小脳の最も吻側部をカットするメス (ブレード サイズ 11) を使用します</li>。
	<li>はヘラの手段で脳を削除し、準備中 ( 図 2) でいっぱいペトリ皿に慎重に配置します。試料ホルダーに脳を置き、医療シアノアクリ レート系接着剤で固定します。機械的な安定を確保するために、寒天の部分を使用します</li>。
	<li>350 μ m で水平方向に組織を解剖スライド式 vibratome を使用して厚い一部は、OHSC</li>。
	<li>は、光学双眼顕微鏡を使用してスライスを評価します。低品質の一部は、OHSC をすぐに破棄します。海馬の中央部から分離されたそのままの細胞構築とそれらのスライスのみを取ることが重要です (図 3 および図 4 を参照)、背側と腹側海馬と</li>。
	<li>別の海馬領域と (丸刃サイズ 15; メスによる嗅 図 3)。貫通経路と嗅皮質を保持する必要があります</li>。
	<li>一部は、OHSC 6 ~ 8 はそれぞれの脳から取得されます。2-3 スライスを 1 つのセルの文化挿入 (細孔サイズ 0.4 μ m) に転送し、ウェルあたり 1 mL の培養液を含む 6 ウェル培養皿の 1 つもです</li>。
	<li>5% (v/v) CO 2 と完全に加湿雰囲気で 35 ° C で 6 よく料理を孵化させなさい、細胞培養培地は 2 番目毎日変更します 。
	注: は、6 日 体外 (div) にあなたの実験を行います。6 日目でスライスのプロシージャに関連付けられている炎症反応が消えてしまいます。再びミクログリア細胞の表示区分された形態をこの段階で、シナプスが成熟している</li>。
</ol> 3。組織品質の評価 <ol><li>固定、ラベリングと可視化の一部は、OHSC 変性ニューロン <ol><li>実験を実行した後で 5 μ G/ml propidium ヨウ化 (PI)、固定する前に 2 時間、一部は、OHSC を孵化させなさい。変性神経細胞の核を染色する順序 。
		注意: PI は疑わしい発癌物質、常に手袋などの個人保護用具 (PPE) を着用します</li>。
		<li>0.1 M リン酸緩衝液 (7.4) と、一部は、OHSC を洗う、パラホルムアルデヒド (PFA) 24 時間のための 4% (v/v) 溶液で固定 
		注意: PFA は有害と疑われる発がん性物質です。ヒューム フードの下で動作し、PPE を着用します</li>。
		<li>1 ml の PBS の挿入で、一部は、OHSC を洗うし、リガー ブラシを使用して、スライスを細胞膜から分離します</li>。
		<li>染付 IB 4 24 ウェル プレート ( 図 5) で、一部は、OHSC のラベルします</li>。
	</ol></li> <li>蛍光を用いた腫瘍侵入実験の伝導標識単一細胞 <ol><li>の実験開始前に 24 h 蛍光色素 Carboxyfluorescein アセテート染色による腫瘍細胞にラベルを付けるエステル (CFDA SE).</li>
		<li>デタッチ ノイバウアー チャンバーを用いた腫瘍細胞を数えると</li>。
		<li>懸濁液の 10 μ L が目的のセル数 (通常 50,000 または 100,000 細胞) を含むような培地で細胞を再懸濁します</li>。
		<li>3 日間侵入する細胞ができ、スライス培養に細胞懸濁液の 10 μ L を適用します</li>。
		<li>実験の最後に、4% (v/v) PFA、24 時間を使用してスライス培養を修正し、細胞構築を可視化する別の 24 h の PI と共培養のラベルします 。
		注意: PFA は有害と疑われる発がん性物質です。ヒューム フードの下で動作し、PPE を着用します</li>。
		<li>メディアをマウントを使用してさらに分析のカバー スリップの上に共培養をマウントします</li>。
	</ol></li></ol> 4。一部は、OHSC 実験の評価 共焦点レーザー走査顕微鏡 (CLSM) で、一部は、OHSC を分析します。円周率の検出ラベル、ニューロンの変性または細胞構築をラベル PI 使用波長 λ の単色光 = 543 nm、発光帯の波長 λ のためのフィルターを渡す = 585 615 nm。腫瘍細胞または IB 4 ミクログリアというラベルの付いた、CFDA、励起波長 λ を使用して = 488 nm。両方の実験の種類は、2 μ m の光学的スライス厚と z スタックを記録し、評価に使用します。

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著者がある何も開示するには

この議定書では、一部は、OHSC の準備について説明します。このモデルは、組み込み機能と脳の反応の生理学的および病理学的刺激の適用後テストできます。ほかに電気生理学的パラメーターの解析では、一部は、OHSC は破壊することができます、あらゆる細胞に損傷の影響を決定できます。さまざまな物質と示したプロセスやマクロファージとリンパ球の不在で癒しの詳細な説明と治療が可能です。
The most 成功の準備と培養が重要なステップ: 1) 無菌条件下での作業、2) メディアの準備、正しく温度と pH を考慮した、3) の一部は、OHSC 処理中に必要な手先の器用さを開発します。
一部は、OHSC の特性
神経細胞の不変の形態のための体内の組織のようなスライス切片と呼びます。一部は、OHSC は錐体・ コルニュ ammonis (CA2、CA1、CA3) と DG 顆粒細胞から成る地層属三角骨と地層...

一部は、OHSC 神経細胞、アストロ サイト、ミクログリア1の生理学的および病理学的性質の研究によ特徴付けられた生体外モデルであります。細胞外の環境をコントロールし、様々 な刺激の後細胞と形態学的変化を監視する簡単です。後準備2,3海馬ニューロンの組織とその接続がよく保存されています。いくつかの利点の一部は、OHSC は、動物の外科手術することがなく脳損傷およびがんの浸潤の監視を許可します。一部は、OHSC 6 〜 8 は、単一の齧歯動物の脳から入手できます。一部は、OHSC したがって大幅動物の数を減らすし、同じ動物では複数の薬物濃度、遺伝子操作または異なる病変モデルをテストできるようにするのに役立ちます。スライス ベースのアッセイでは、実験条件を正確に制御できます。また、二次被害のような病理学の条件の時間依存の開発はタイムラプス イメージングによる簡単に監視できます。
Stoppiniらによって最初に確立された特定のプロトコルに4、準備手順が記載されている、適切なスライスの選択の重要な形態学的なランドマークが強調表示されます。生後 7-9 ラットやマウス生後 4-5 の準備をお勧めします。これらの期間は、一部は、OHSC は、機械的外傷、神経回路の再編成の可能性が高い堅牢な抵抗性を示します。対照的に、萌芽期または成人ラットから準備急速に構造変更し栽培中の脊髄の形態を失う、したがって基礎研究5,6で長期的なプロセスを学ぶには適して,7,8,9,10,11. 一部は、OHSC の生存率のもう一つの重要なポイントは、拡散およびこうして栄養供給が限られた12,13,14スライス自体の厚さ。

<table><tbody><tr><td>6ウェル</td><td>Falcon</td><td>35-3046</td><td></td></tr><tr><td>寒天</td><td>Fluka</td><td>5040</td><td></td></tr><tr><td>Autoclav</td><td>Systec</td><td>DX-45</td><td></td></tr><tr><td>CFDA&</td><td>nbsp;サーモフィ</td><td>ッシャーV12883</td><td></td></tr><tr><td>共焦点レーザー走査型顕微鏡(CLSM)LSM700</td><td>カールツァイス</td><td></td><td></td></tr><tr><td>イーグル&急性;s ミニマル・エッセンシャル・メディウム&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>32360-034</td><td></td></tr><tr><td>フルオレセイン標識グリフォニア(バンデイレア) Simplicifolia レクチン I</td><td>ベクターラボ</td><td>FL-1101</td><td></td></tr><tr><td>グルコース</td><td>メルク</td><td>1083371000</td><td></td></tr><tr><td>グルタミン</td><td>Invitrogen</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>ハンク&急性;S Balanced Salt Solution (with Ca2+ and Mg2+)</td><td>Invitrogen</td><td>24020-133</td><td></td></tr><tr><td>Hank&acute;S Balanced Salt Solution (Without Ca2+&nbsp; and Mg2+)</td><td>Invitrogen</td><td>14170-138</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I5500</td><td></td></tr><tr><td>L-アスコルビン酸</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5960</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Invitrogen</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>LN229</td><td>Cell-Lines-Service</td><td>300363</td><td></td></tr><tr><td>医療用シアノアクリレート接着剤(ヒストアクリル接着剤)</td><td>B.Braun</td><td>1050052</td><td></td></tr><tr><td>Millicell Culture Inserts</td><td>Millipore</td><td>PICMORG50</td><td></td></tr><tr><td>NMDA N-methyl-D-aspartic acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M3262</td><td></td></tr><tr><td>Normal Horse Seum</td><td>Invitrogen</td><td>26050-088</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>ペトリ皿(すべてのサイズ)</td><td>Greiner</td><td>627160/664160/628160</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>Roth</td><td>0335.1</td><td>有毒</td></tr>な<tr><td>ヨウ化プロピジウム (PI)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>81845-25MG</td><td>有毒</td></tr>な <tr><td>U138</td><td>ATCC</td><td>HTB-14</td><td></td></tr><tr><td>ビブラートーム</td><td>ライ</td><td>カ ライカ VT 1200</td><td></td></tr></tbody></table>

研究保護および腫瘍細胞の侵襲性をモデルとして脊髄海馬スライス培養

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

切片海馬スライスの文化 (一部は、OHSC) でニューロンとグリア細胞の形態学的および機能的な特性がよく保存されています。このモデルは、神経保護に関する研究、神経細胞、神経回路、または浸潤に関する電気生理学的実験を伴う研究問い合わせへの対応に適しています。海馬のアーキテクチャと海馬回路における神経細胞の活動がよく保存されている一部は、OHSC、にもかかわらずスライス手順自体初期病変とグリア瘢痕の形成につながる。など、小さな分子の拡散挙動と機械的性質、瘢痕形成はおそらく変更します。スライスは、動物の外科手術、各種脳由来細胞、アストロ サイト、ミクログリア、神経生理学的および病理学的下すなわち間相互作用の脳損傷後の時間依存プロセスの監視を許可します。条件。このモデルの相反する側面血流および血液の免疫細胞の不在であります。神経障害の進行、中に血液が重要な役割を果たすから免疫細胞の移行。それらの細胞はスライスで行方不明、文化の本質的なプロセスが外部に干渉しないで観察可能性があります。また、一部は、OHSC 媒体外部環境の組成物は、正確に制御されます。このメソッドのさらなる利点は、標準製剤と比較して犠牲にされた動物の数が少ないです。いくつか一部は、OHSC は 1 頭の動物に複数の治療法を同時研究を可能 1 つの動物から入手できます。これらの理由の一部は、OHSC は組織の損傷後や腫瘍の侵入の間に新しい保護治療の効果を分析する適しています。
提示プロトコルの一部は、OHSC 再現性の高い生成することができます準備方法を記述するここで、神経保護や腫瘍浸潤の研究のような実験的研究のさまざまな使用することができますスライスをよく保存します。

神経保護の研究:神経損傷、PI 肯定的な核と IB4 (DG) 歯状回の顆粒細胞層 (GCL) のすべての 3 番目の光学セクションにおけるミクログリアに数えられた正の数を確認します。腫瘍の侵入実験のためスタックの最大強度 z 投影は侵略と異なる侵入パターン (図 6) を視覚化する手段として腫瘍細胞によって覆われる領域を計算するため使用されました。
未処理のコントロールの一部は、OHSC (CTL) ニューロンに色濃く残った。DG の GCL のほとんどない PI 肯定的な神経核 (図 5 a) が観察された.分子層におけるミクログリア細胞の大半が分岐しました。DG、のみの GCL の非常に少数の IB4陽性ミクログリア細胞 (<strong class=...

切片海馬スライス培養 (一部は、OHSC) は、体内の状況を非常によくシミュレートする生体外モデルを表します。ここで述べる vibratome ベース新規物質の神経電位または腫瘍細胞の生物学的挙動の評価で使用するための高品質のスライスを取得するためのプロトコルをスライスを改善します。

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

ビブラトームを用いた準備および切断。切断操作中に脳を固定するため、3つのアガロースブロックが必要です。コンタミネーションを避けるため、オートクレーブ滅菌済みの器具セットを使用してください。アガーを除去します。フィルターペーパー上で乾燥させた後、医療用シアノアクリレート接着剤を用いて金属プレートに接着してください。スパチュラを使用して脳を取り出し、調製液を満たしたペトリ皿に慎重に配置します。次に、ろ紙で脳を軽く乾燥させます。金属プレートを医療用シアノアクリレート接着剤で覆います。ピンセットとスパチュラを使用して、脳を標本ホルダー上の適切な位置に配置します。事前に準備した2枚のアガーを使用して、両側から機械的に固定します。この時点で、脳をアガーブロックの横に配置し、さらに2つのブロックで固定して、スライス中の損傷を防ぎます。メタルプレートをビブラトームにセットし、組織を冷たい作製用培地で覆います。その後、スライディングバイブラトームを用いて、組織を350 µm厚のOHSCで水平に切片化します。切断した切片は、壊れたパステールピペットの背面を用いて回収し、ペトリ皿に移します。脳切片は冷たい調製培地中に保持してください。双眼顕微鏡を用いてスライスを光学的に評価します。15番のラウンドブレードを備えたメスを用いて、海馬領域を分離し、内皮質へと進入します。背側海馬と腹側海馬の間の海馬中央部から、細胞構築が維持されているスライスのみを採取することが重要です。品質の低いOHSCは直ちに廃棄してください。得られたスライスを2〜3枚、孔径 0.4 µm の細胞培養インサートに移します。パスツールピペットを用いて、細胞培養インサートの上部から調製培地を吸引してください。1ウェルあたり1mLの培地を入れた6ウェル培養プレートにインサートを設置します。6ウェルプレートを、5%CO2を含む完全加湿状態で35°Cでインキュベートし、2日ごとに細胞培養培地を交換します。ラット組織の場合は培養後6日、マウス組織の場合は14日後に、スライス工程自体に伴う炎症反応が消失します。実験を開始できます。神経保護研究の代表的な結果を示します。画像Aは、いかなる処理も行わず、in vitroで9日間培養液中に保持した、対照切片として用いる非損傷のOHSCを示しています。共焦点レーザー走査顕微鏡で確認したところ、対照群のOHSCでは良好な神経保存が認められました。Isolectin B4陽性のミクログリア細胞は主に分子層と網状層に局在し、分枝状の表現型を示していました。歯状回の顆粒細胞層では、Isolectin B4陽性のミクログリア細胞はごくわずかしか見られず、Propidium Iodide陽性の核は実質的に認められませんでした。画像Bに示されているもう一組のOHSCを、培養液中で6日間維持した後、50 µMのNMDAを用いて4時間的に病変を誘導しました。その後、さらに3日間、培養液中で維持しました。NMDAによる病変誘導後、活性化したIsolectin B4陽性のミクログリア細胞が大量に蓄積し、歯状回の全層にわたって神経損傷部位に付着しました。定量分析の結果、歯状回の顆粒細胞層において、病変を誘導したOHSCでは対照条件と比較してIsolectin B4陽性のミクログリア細胞数が多いことが明らかになりました。同様に、NMDAで病変を誘導したスライスでは、顆粒細胞層におけるPropidium Iodide陽性の変性ニューロン数が著しく増加していました。腫瘍浸潤研究のサンプル結果です。すべての画像は、共焦点レーザー走査顕微鏡を用いて撮影した、OHSCを用いた腫瘍浸潤SSの結果を示している。赤色はOHSCの細胞構築を、緑色は腫瘍細胞を示している。画像Aは、4日間の浸潤を許容したU138グリオーマ細胞の典型的な浸潤パターンを示している。明確で球状の独立した腫瘍が観察され、OHSCの構造は維持されており、歯状回とアンモン角がはっきりと確認できます。画像Bは、LN229神経膠腫細胞によって4日後に形成された異なる浸潤パターンを示しています。この場合、OHSCの大部分を覆うネットワークが形成されているため、個々の腫瘍を明確に区別することはできませんが、歯状回とアンモン角に形態的な変化はなく、細胞構築は維持されています。さらに、LN229細胞はU138細胞よりも浸潤性が高いと結論付けることができます。画像CおよびDは、浸潤から4日後のLN229細胞における同様の腫瘍浸潤の結果を示しています。左側では、腫瘍塊が視野のほぼ全体を覆っていることが観察されます。画像Dは、対応するプロピジウムヨード染色を示しています。このスライドでは、Cornu Ammonisが見られなくなり、歯状回も歪んでいるため、細胞構築はもはや維持されていません。このような結果となった原因としては、実験開始時にOHSCが完全に無傷ではなかったこと、適用した腫瘍細胞数が多すぎたこと、あるいは浸潤時間が長すぎたために、観察された構造の消失を招いたことが考えられます。したがって、このような浸潤結果は破棄すべきです。器官培養海馬スライス培養は、神経接続が維持されており、脳の生理学的特性を反映した非常に優れたin vitroモデルとなります。一つのモデルから複数のスライス培養を得ることができるため、一匹の動物の組織で複数の条件を検証することが可能であり、結果の再現性も非常に高いです。高いアクセシビリティを持つため、臓器培養海馬スライスは、多種多様な実験タイプに非常に適しています。これには、電気生理学的研究や神経発生の研究だけでなく、神経保護、腫瘍浸潤、および腫瘍細胞と健全な脳組織との相互作用に関する実験も含まれます。

organotypic-hippocampal-slice-cultures-as-model-to-study

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

organoptypic海馬スライス培養モデルは、...

神経損傷を調べるための器官型海馬スライス培養モデル

我々は簡単に他の脳領域に適合させることができる器官型海馬切片を調製する方法を説明します。脳スライスは、インタフェースを形成するために許可されている多孔質膜と培地上に置かれている。このメソッドは、最大の文化の2週間までの海馬の総アーキテクチャを保持します。...

器官型海馬切片培養

このビデオは、3D共培養システムの開発を示しています。マウスの脳切片を膜上に置き、蛍光標識したヒト脳腫瘍細胞をその上で増殖させます。システムの準備ができたら、イメージングのために染色します。...

器官型スライス共培養モデルにおける脳腫瘍の確立

このビデオは、膠芽腫組織からの器官型スライス培養の生成と維持を示しています。単離された組織をアガロースマトリックスに包埋し、ビブラトームを用いて薄い切片を得る。次に、これらの切片をマイクロプレート内の透過性メンブレンインサートに配置し、スライス培養維持培地で培養して長期維持します。...

ヒト膠芽腫組織からのスライス培養物の生成と維持

癌細胞との器官型脳切片の共培養は、脳組織の癌細胞浸潤の過程で蛍光だけでなく、明視野（ビデオ）顕微鏡によって形態学的変化を可視化することができます。このモデル系は、細胞の交換や補充的なアプローチを可能にし、操作及び分析を幅広く提供しています。...

器官型脳スライスと癌細胞の3Dスフェロイドとの共培養システム

虚血性脳損傷の多くの局面を再現することができentorhino海馬器官型切片培養のためのプロトコルは、提示される。神経細胞の変化に加えて、神経脈管構造の変化を研究することによって、このプロトコルは、損傷後の神経組織内のプラスチック製の変化を研究するための汎用性の高いツールです。...

Entorhino海馬器官型スライス培養における神経血管リモデリングの解析

ここでは、器官型スライス培養技術を用いて海馬の出生後の神経新生を研究するための技術が記載されている。この方法では、成人の神経新生のin vitro操作を可能にし、培養海馬への薬理学的薬剤の直接適用することができます。...

生後神経発生の研究のための器官型スライス培養

多くの種類のヒト脳腫瘍は、脳内の特定の領域に局在しており、培養で成長するのが困難です。このプロトコルは、腫瘍微小環境の役割に対処し、器官型マウス脳スライスで増殖する蛍光初代脳腫瘍細胞を分析することにより、新しい薬物治療を調査します。...

腫瘍微小環境と標的薬物療法研究のための脳の腫瘍/器官スライス共培養系

神経膠芽腫（GBM）の現在のex vivoモデルは、ヒト腫瘍浸潤の生理学的に関連する研究のために最適化されていない。ここでは、我々は、新鮮なヒトGBM組織からの器官型スライス培養物の生成および維持のためのプロトコールを提示する。経時顕微鏡法および定量的細胞移動分析技術の説明が提供される。...

腫瘍細胞移動の研究および抗浸潤性薬物の患者特異的効果の研究のためのヒト神経膠芽腫の器官型スライス培養モデル

ここでは、鼻皮質海馬の組織性スライスの調製について述べています。徐々に制御された血清の剥奪の下で、これらのスライスは進化するてんかんのような出来事を描写し、てんかん発生の元vivoモデルと考えることができる。このシステムは、自発的な活動のダイナミクスを監視するだけでなく、てんかん発生の過程を通じて神経炎症性の進行を評価するための優れたツールを表します。...

リナル皮質-海馬の組織性スライス培養におけるてんかん発生のモデル

乳がん脳転移細胞の薬物および放射線応答を器官型脳スライスモデルでリアルタイムに測定するためのプロトコルを紹介します。本方法は、脳微小環境界面内での乳癌からの脳転移に対する様々な治療の治療効果を ex vivo 方式で調査するための定量的アッセイを提供する。...

乳がん脳転移性腫瘍増殖を研究し、標的とする Ex Vivo 脳スライスモデル

学ぶ バイブロトームを用いた器官型海馬スライス培養法。神経保護効果や腫瘍細胞の侵襲性を評価するための高品質な脳スライス調製技術を習得できます。

研究保護および腫瘍細胞の侵襲性をモデルとして脊髄海馬スライス培養

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