新しい方法を用いた自由に動く新生児ラットの脳波記録

この方法の全体的な目標は、1週間以上安定している新しい電極セットアップを使用して、自由に動く新生児ラットの子犬からの脳波を記録することです。この方法は、神経科学の分野における主要な質問に答え、新生児てんかんの研究に有益です。この手法を使用すると、高品質で安定した脳波信号を長期間記録できます。

これは、さまざまな神経病理学的障害の診断に役立ちます。一般に、この方法に不慣れな個人はp8からp15の新生児ラットを扱うのが非常に難しく、細心の注意を必要とするため苦労するでしょう。電極は、通信デバイスとの信号インターフェースとして機能するために、突起接点を必要とします。

コンピュータのピン・ロ・サイがこの役割を果たします。ペンチを使用して、オスピンとメスピンをコンピューターのピンから慎重に分離します。次に、オスピンとメスピンを接続して電極を形成し、シアノアクリレートで接続を固定します。

そのような電極をいくつか作ります。結合が固まったら、蒸留水で満たされたビーカーに電極を10分間入れます。次に、それらを超音波洗浄機に入れて電極を洗浄します。

次に、ビーカーを摂氏45度に設定されたオーブンに移し、30分間加熱します。最後に、電極を30分間のUV曝露で滅菌します。バイオセーフティフードには、まず滅菌した手術器具と手術用の滅菌した定位固定装置を設置します。

次に、新生児ラットの子犬に2点5パーセントイソフルランを使用して麻酔をかけます。子犬が深く麻酔されたら、イソフルランを1パーセントに減らします。続行する前に、つま先をつまんでマウスに十分な麻酔がかけられていることを確認してください。

次に、子犬の頭を脳定位固定装置に固定します。イヤーバーを外耳道に配置し、バーをそっと締めます。注意してください:新生児の頭蓋骨は非常に柔らかいです。

次に、頭蓋骨に15ミリメートルの正中線を切開します。次に、鉗子で頭皮をそっと引き離し、切開部を広げます。切開部を開いたままにするには、生理食塩水を染み込ませた綿を使用します。

次に、ブレグマとラムダを見つけて、鉛筆で印を付けます。次の電極注入手順は重要であり、正確に実行する必要があります。まず、26ゲージの針を使用して、前頭前野に、ブレグマの2ミリメートル前、正中線から5ミリメートルのゼロポイント内にバリ穴を開けます。

次に、正中線のブレグマの8ミリメートル後方とゼロポイント5ミリメートルの1つの点で海馬にバリ穴を開けます。針は、脳の損傷を最小限に抑えるために、皮質表面から2ミリメートル以上貫通してはなりません。次に、鉗子を使用して、参照電極を皮質の穴に挿入し、記録電極を海馬の穴に挿入します。

次に、電極の周囲にエリスロマイシン軟膏を塗布し、電極をシアノアクリレートで所定の位置に固定します。接着剤が結合している間、接着剤と粘性のある粘稠度で歯科用セメントを準備します。歯科用セメントの粘度は重要です。

歯科用セメントが薄すぎると、電極の下に望ましくない絶縁層が蓄積する可能性があります。セメントの密度が高すぎると、質量が過剰になるため、電極が外れやすくなります。セメントを塗布する前に、頭蓋骨と電極を完全に乾かしてください。

次に、電極を歯科用セメントで頭蓋骨に固定します。これに続いて、電極にピクリン酸を塗布して、電極に別の保護層を追加します。次に、動物を定位固定装置フレームから取り外し、300マイクロリットルの10パーセントグルコース溶液を皮下に注入します。

次に、動物を加熱した毛布に移して、歩行できるようになるまで摂氏37度に保ちます。歩行可能になったら、ブプレノルフィンを投与して術後の痛みを緩和し、子犬をダムのあるホームケージに移します。インプラントを使用する前に、子犬が回復するまで少なくとも2日間待ちます。

回復期間の後、子犬が環境に慣れるように、子犬を一人で収容して約10分間録音します。電極をアンプに接続し、アンプをコンピュータに取り付けられたADコンバータに接続します。これらの接続が絡まらないように注意してください。

次に、データ収集ユニットで、記録用に少なくとも10, 000ヘルツのサンプリングレートを選択し、適切なデータ伝送を確認します。ベースライン記録を収集します。ベースライン記録を取った後、子犬にカイニン酸を腹腔内に注射しててんかん発作を誘発します。

注射の15分後、てんかんの分泌物を観察して記録します。デジタル化したデータを保存し、信号処理ソフトウェアで解析します。パワースペクトル解析を使用して、新生児EEGのさまざまな周波数成分のパワーレベルを明らかにします。

EEGバンドである1〜100ヘルツの二乗平均平方根の振幅を見つけることにより、1分間の時間枠からパワーを計算します。カイニン酸注射の 10 分後、再発性発作間欠期および発作期の脳波放電パターンが記録されました。記録された最も一般的な発作は強直間代性タイプでした。

発作性強壮剤の持続時間は約15秒続きました。また、強直性放電の後に間代性バーストが続くことも観察されました。このビデオを見た後、電極を埋め込む方法と、p8からp15の新生児ラットの子犬から高品質のEEG記録を取得する方法についてよく理解できるはずです。

一度召集されると、頸椎移植は手術の複雑さにもよりますが、10分以内に行うことができます。