マウスの膵臓の組織学的解析と代謝プロファイリングに対する郭清

このビデオ記事の主な目的は、マウス膵臓の解剖に関する詳細な視覚的手順を提供することです。これらの手順は、ヒト膵疾患のマウスモデルを研究し、組織学的解析や代謝プロファイリングのために解剖によってマウス膵臓を採取する必要がある研究者にとって有用です。また、本ビデオ記事では、心 punctures 手法を用いた終末血採取の実施に関する詳細な手順についても解説します。

必要な備品が揃った手術台が表示されています。これらには、蓋付きのガラス瓶1個、15 mLファルコンチューブ1本、手術用はさみ1本、70%エタノールが入った洗浄ボトル1本、フォームボード2枚、ピンセット2本、1 mL 21ゲージシリンジ2本、50 mLファルコンチューブ2本、遠心チューブ1本、クライオバイアル1本、手術用パッド4枚、ピン10本、滅菌ワイプのディスペンサー、および鋭利物回収容器が含まれます。また、必要な備品が揃った術後処置台が表示されています。

これらには、分析天秤1台、4Lの液体窒素用デュワー瓶1個、浅型広口デュワー瓶1個、フローティングマイクロチューブラック1個、外科用鋏1本、ピンセット2本、クライオバイアル5本、および滅菌ワイプのディスペンサーが含まれます。安楽死を行うには、まずマウスを、イソフルランを数滴浸したガーゼパッドが入ったガラス瓶に入れ、マウスが意識を失うまで蓋をします。これには通常、約1分かかります。その後、マウスをガラス瓶から取り出し、足指つまみテストを行い、マウスが不快感を感じない状態であることを確認します。

足つまみテストに不合格となった場合、足つまみテストに合格するまでマウスをガラス瓶に戻し、蓋を閉じておきます。マウスを仰向けに置き、肢を手術用フォームボードに固定し、マウスの腹側を70% ethanolで湿らせます。ピンセットで尿道口付近の被毛をつまみ、軽く上方に引き上げます。

尿道口から始まり、正中線を上がって顎で終わるように、腹腔に切開を加えます。最初の切開の開始点付近で、被毛の一方を掴み、後肢に向かって斜め下方に別の切開を加えます。反対側についても同様の手順で繰り返します。

最終的な心穿刺を行うために、心臓の位置を確認します。まず、鉗子で胸骨を掴み、横隔膜を切開します。素早く肋骨に沿って上方へ切開し、切除した部分を取り除いて、拍動している心臓を露出させます。

心臓の位置を確認したら、心膜を除去し、シリンジを用いて心臓穿刺を行います。効率的に採血するためには、針のプランジャーを使用して心臓のポンプ動作を模倣し、急いで吸引しすぎないようにしてください。採血した血液を遠心チューブに移し、使用済みのシリンジは鋭利物廃棄容器に廃棄します。

心穿刺の後、心臓をつなぐ付着部を取り除いて安楽死させます。マウスの左側にある胃を確認します。膵臓は、胃や十二指腸、および小腸と大腸に沿って付着しており、脾臓にも接している、拡散した淡色の組織として観察されます。

ピンセットを用いて、膵臓を胃および十二指腸から慎重に分離し始めます。空腸および回腸の部位から引き続き、膵臓を小腸から分離し、最終的に盲腸および大腸まで分離します。盲腸に達したら、ピンセットの位置を調整し、残りの結腸に沿って直腸に向かって膵臓の分離を続けます。

この時点で、胃から直前にある結腸領域までの区間を切除して取り出すのが便利です。膵臓とそれに付着している脾臓を確認してください。膵臓をマウスの右側へスライドさせます。

膵臓と胸腔の間の残りの結合部を切断し、膵臓とそれに隣接する脾臓を完全に切り離します。膵臓を取り出して広げ、観察します。必要に応じて、この時点で他の臓器を取り除いても構いません。

摘出後、サンプルを術後処置エリアへ移動します。各臓器を計量し、それぞれのクライオバイアルに入れます。観察された異常があればすべて記録してください。

臓器をクライオバイアルに入れたら、浮遊式マイクロチューブラックに入れ、液体窒素が入ったデュワー瓶に投入します。急速冷凍後、長期保存のために臓器を−80°Cで保存してください。使用したすべての解剖器具は、滅菌ワイプを用いて洗浄してください。

イソフルランを浸したサージカルパッドを入れたファルコンチューブに蓋をします。フォームボード上のサージカルパッドを新しいものに交換します。採取しなかったマウスの部位は、施設の動物廃棄方針に従って廃棄してください。

以下の項目は、適切に取り扱う必要があります。これらの項目を正しく保存することで、蛍光顕微鏡観察、ヘマトキシリン・エオシン染色による組織学、免疫組織化学、質量分析、核磁気共鳴分光法など、多岐にわたる実験を実施することが可能になります。膵臓は代謝活性およびインスリン産生の主要な臓器であるため、本手順によって生理学的特性を保存することができます。

膵臓を分離することで、そのサンプルを用いて今後の解析を行うことが可能になります。この手順により、同一個体内の同一時間枠において、他の組織との相互作用の比較および研究が行えます。