Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Tom Shani; Moshe Levy; Adrian Israelson

doi:10.3791/55676

運動ニューロン様NSC-34細胞内のリアルタイムでの核細胞質輸送を測定するアッセイ

JoVE Journal
Neuroscience

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Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

運動ニューロン様NSC-34細胞内のリアルタイムでの核細胞質輸送を測定するアッセイ

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08:53 min

May 16, 2017

DOI: 10.3791/55676-v

Tom Shani¹, Moshe Levy¹, Adrian Israelson^1,2

¹Department of Physiology and Cell Biology, Faculty of Health Sciences,Ben-Gurion University of the Negev, ²The Zlotowski Center for Neuroscience,Ben-Gurion University of the Negev

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

このプロトコルは、NLS-NES-GFPタンパク質の核内取り込みにおけるリアルタイム変化を定量化することにより、運動ニューロン様NSC-34細胞内の核細胞質輸送速度を敏感に測定する方法を記載する。

このアッセイの全体的な目標は、輸送速度を抑制する可能性のある分子の存在下または存在下で、細胞の核細胞質輸送速度の微小な変化をリアルタイムで検出することです。この方法は、核細胞質輸送に悪影響を与えると提案されているALSなどの特定の神経遺伝性疾患に関する重要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の利点は、感度が高く定量的であること、および核細胞質輸送速度の微小な変化をリアルタイムで分析できることです。

その手順を実演するのは、私の研究室の大学院生であるトム・シャニです。まず、液体窒素貯蔵からマウス神経芽腫脊髄細胞の約10倍から6回目を摂氏37度の水浴で解凍します。細胞が完全に解凍されたら、遠心分離によって細胞を回収し、ペレットを1ミリリットルの新鮮な培地に再懸濁します。

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