Name: 外ヴァーサ栄養血管の血流をブロックすることにより腹部の大動脈瘤の齧歯動物モデルの作成 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: 学ぶ 腹部大動脈瘤のラットモデル作成法。ポリウレタンカテーテル挿入と縫合結紮により低酸素誘導し、進行性大動脈拡張を再現します。組織学的変化と超音波モニタリングで人間の病態を模倣し、治療法開発に貢献します。

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この作業は、研究 (B) (20291958) N.U.; に補助金によって支えられました。若手にニュージーランド (、) (25713024)

動物のケアと実験動物のケアのための浜松大学学校の医学動物ケア委員会中心にガイドラインに従って行われた。
 1。 モデルを作成するため手術 注: 10 のビードの殺菌剤に手術器具を配置 s 術。術中滅菌手袋を使用します。
<ol><li>使用ラット 300-400 g. の重量を量るラットに食糧へのアクセスを許可および水の 自由</li>。
	<li>は、イソフルラン吸入 (2.0 3.0 mL/L) とラットを麻酔します。つま先のピンチによって適切な anesthetization を確認します</li>。
	<li>電気カミソリ、腹部の毛を剃るし、アルコールとポビドン ヨード液と腹部をスクラブします</li>。
	<li>は、仰臥位操作テーブルの上にネズミを配置します。ラット獣医軟膏を使用 &#39; 麻酔中の乾燥を防ぐため s 目</li>。
	<li>は、はさみを使用して腹側正中腹部切開で開腹したを実行します。明確な手術野を確保するため腹部の内容を腹腔内傷リトラクターを使用して滅菌ガーゼでパックします</li>。
	血管周囲組織から大動脈を切断する <li>が優しくをピックアップし、ピンセットで大動脈の壁を公開してから分岐する左腎静脈のレベルから後腹膜腔の上行大動脈の剥離する後腹膜を引き裂く、血管周囲組織 ( 図 1 a).</li>
	<li>ブロック血液 5-0 絹弦と腹部大動脈から分岐血管を大動脈の内腔を狭くしない大動脈から時点で供給 Ligate</li>。
	大動脈の血流をブロックする <li>血管クリップすぐ下腎動脈と大動脈の分岐のすぐ上に配置します 。
	注: クリップのサイズは、血流を完全にブロックする大動脈の直径よりも大きくなければなりません。一時的な 5-0 絹弦の合字もクリップではなく血流をブロックするため十分だ</li>。
	<li>ポリウレタン製カテーテルを挿入する遠位大動脈腎動脈の枝に隣接するクリップからマイクロはさみ 5 mm を使用して前の大動脈壁をカット、大動脈の壁の表面にドット出血を作成すると似ています</li>。
	<li>ポリウレタン製カテーテルを挿入 (0.55 mm、内径外径 0.37 mm) 水で大動脈の血を洗い流すため切開浅く針留置 24 ゲージを使用します。ポリウレタン製カテーテルに水で満たされた 1 mL の注射器の管理し、水で大動脈の血の残りを洗い流します。洗浄した後に、大動脈からカテーテルを削除します</li>。
	<li>ポリウレタン製カテーテルを挿入する前に (1.20 mm、内径外径 0.94 mm) 長さ 10 mm ( 図 1 b) をポリウレタン製のカテーテルをカット、18 g の留置針を使用しています。
	<ol><li>挿入カット ステップ 1.9 の切開から大動脈の内腔にポリウレタン製のカテーテルの作品。完全に大動脈の内腔に 10 mm のカテーテルを挿入し、切開の位置に合わせてカテーテルの中点の位置を変更 (すなわち カテーテルで切開をカバー).</li>
	</ol></li> <li>切開を縫合 8-0 モノフィラメント文字列 ( 図 1) を使用して修復します</li>。
	<li>結紮 5-0 絹弦とポリウレタン製のカテーテル ( 図 1) の組み合わせを用いた腹部大動脈 。
	注: 留置カテーテルによる大動脈の内腔を維持できます。カテーテルの位置を始まるようにしっかりと大動脈を縛る。外科医 &#39; 形成二重止め結びの結び目の最初のスローをつなぐとき、それは余分なねじれを追加します、追加ターンがより多くの摩擦を提供し、緩みを減らすことができますので、s の結び目をお勧めします</li>。
	<li>結紮後、大動脈分岐部の血管クリップを取り外し、順行血流を回復する腎動脈以下の血管クリップを取り外します。総大動脈の拍動を確認します</li>。
	<li>は、2 つの層、腹膜および 4-0 ポリプロピレン縫合糸で、他のレイヤーで腹部切開を閉じる。しっかりと突出した器官を防ぐために切開部を縫合します</li>。
	<li>は、腹部の切開に局所リドカインを適用します。意識が戻るまで、加熱パッドのラットを配置します。放置しないでください、ラットまでそれは胸骨の横臥を維持するために十分な意識を取り戻しました。それは完全に回復するまで他のラットの会社に操作を経たラットを返しません</li>。
	<li>は、操作後ラットを密接に監視します。ラットが苦痛や体の重量損失の兆候を示している場合、滅菌生理食塩水 (1.0 2.0 mL) のボーラスを皮下注入します</li>。
	<li>は術後、超音波エコーで拡大した大動脈の経時的発展を観察します。説明 5 として腹部大動脈の外側のエッジにエッジの内側から最大径測定</li>。
</ol> 2。収穫、修正、および弾性線維 (EVG) 染色 <ol><li>28 日術後管理ペントバルビ タール ナトリウム &#8805; 100 mg/kg 腹腔内にラットを安楽死させる</li>。
	<li>カット ラット &#39; s 腹部キャビティ腹。メスを使用して初期の切開を行います。はさみを使用して動脈瘤を収穫し、24-48 h. のための中立的バッファー 10% ホルマリンで収穫された大動脈を配置 
	注: 外科医は、大動脈やその他の臓器に損傷を防ぐため、動脈瘤を公開するときに注意しなければなりません。AAA の形成を示す、高架の腹部臓器を観察すべき。生体内の イメージと 前のヴィヴォ イメージ 図 2 を示していますAAAs のこの代表的なサンプルが破裂しない</li>。
	<li>EVG 染色 9 <ol><li><ol><li>準備その行動 に調製した溶液 の &#39; 特定の順序で、次を混合することによって s ヘマトキシリン: アルコール ヘマトキシリン 20 mL、10% 塩化第二鉄 8.0 mLルゴール &#39; s ヨウ素 8 mL。各添加の間ソリューションをミックスします。このソリューションは必要に応じて新鮮な準備することができます</li>。
			<li>準備バン維 &#39; 1% 酸フクシンを混合することによって s ソリューション 1 mL 及び飽和ピクリン酸 45 mL。一晩立つし、よく混ぜるようにします。このソリューションは、2 週間安定</li>。
			<li>10% した FeCl 3 40 mL に 10 mL を混合することによって差別化ソリューション (2% 塩化第二鉄) の準備蒸留水します。このソリューションは必要に応じて新鮮な準備があります</li>。
			<li>準備 5% ハイポ チオ硫酸ナトリウム 5.0 g 100 ml の蒸留水に溶解します。この解決策は、1 年間安定した</li>。
		</ol></li> <li>染色手順 注: 詳細に 9 を参照を参照してください。
		<ol><li>10 分が、その行動、大動脈の蒸留水で収穫された大動脈固定パラフィン切片を簡単に、メタンハイド レート &#39; s ヘマトキシリン 25 分洗浄水と 10-30 倍 (2% した FeCl 3) ソリューションの差別化でひと泳ぎ。水ですすいでください。5% ハイポ 1 分水で洗浄のために配置します。ヴァン維の場所 &#39; s 向け 5 分</li>
			<li>Dehydrate 以下のアルコールで順序: 30 の 75%、90%、95%、100%、100% のアルコールそれぞれ秒。その後、2 回、5 分間のキシレンのオフにします。樹脂製取付中 coverslip の場所 。
			注: 弾性線維は黒に青黒表示します。核: bla にブルーck。コラーゲン: 赤;およびその他の組織の要素: 黄色</li>。
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Wolinsky, H., Glagov, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+abdominal+and+thoracic+aortic+medial+structure+in+mammals.+Deviation+of+man+from+the+usual+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of abdominal and thoracic aortic medial structure in mammals. Deviation of man from the usual pattern.</a> Circ Res. 25 (6), 677-686 (1969).</li>
<li>Sano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphangiogenesis+and+angiogenesis+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lymphangiogenesis and angiogenesis in abdominal aortic aneurysm.</a> PLoS One. 9 (3), e89830(2014).</li>
<li>Vorp, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+intraluminal+thrombus+in+abdominal+aortic+aneurysm+with+local+hypoxia+and+wall+weakening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Association of intraluminal thrombus in abdominal aortic aneurysm with local hypoxia and wall weakening.</a> J Vasc Surg. 34 (2), 291-299 (2001).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adventitial+vasa+vasorum+arteriosclerosis+in+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Adventitial vasa vasorum arteriosclerosis in abdominal aortic aneurysm.</a> PLoS One. 8 (2), e57398(2013).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoperfusion+of+the+Adventitial+Vasa+Vasorum+Develops+an+Abdominal+Aortic+Aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hypoperfusion of the Adventitial Vasa Vasorum Develops an Abdominal Aortic Aneurysm.</a> PLoS One. 10 (8), e0134386(2015).</li>
<li>Tanaka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Mass+Spectrometry+Reveals+a+Unique+Distribution+of+Triglycerides+in+the+Abdominal+Aortic+Aneurysmal+Wall%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging Mass Spectrometry Reveals a Unique Distribution of Triglycerides in the Abdominal Aortic Aneurysmal Wall.</a> J Vasc Res. 52 (2), 127-135 (2015).</li>
<li>Kugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preventive+effect+of+fish+oil+on+abdominal+aortic+aneurysm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Biotechnol+Biochem%22%5BJournal%5D)">The preventive effect of fish oil on abdominal aortic aneurysm development.</a> Biosci Biotechnol Biochem. 80 (6), 1186-1191 (2016).</li>
<li>Kugo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+in+vascular+wall+can+induce+the+rupture+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Adipocyte in vascular wall can induce the rupture of abdominal aortic aneurysm.</a> Sci Rep. 6, 31268(2016).</li>
<li>Lichtenberg, A., Cebotari, S., Tudorache, I., Hilfiker, A., Haverich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+scaffolds+for+heart+valve+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Biological scaffolds for heart valve tissue engineering.</a> Methods Mol Med. 140, 309-317 (2007).</li>
<li>Heistad, D. D., Marcus, M. L., Larsen, G. E., Armstrong, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+vasa+vasorum+in+nourishment+of+the+aortic+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Role of vasa vasorum in nourishment of the aortic wall.</a> Am J Physiol. 240 (5), H781-H787 (1981).</li>
<li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+abdominal+aortic+aneurysm+by+inhibition+of+c-Jun+N-terminal+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Regression of abdominal aortic aneurysm by inhibition of c-Jun N-terminal kinase.</a> Nat Med. 11 (12), 1330-1338 (2005).</li>
<li>Azuma, J., Asagami, T., Dalman, R., Tsao, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+murine+experimental+abdominal+aortic+aneurysms+with+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Creation of murine experimental abdominal aortic aneurysms with elastase.</a> J Vis Exp. (29), (2009).</li>
<li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+Angiotensin+II+Infusion+using+Osmotic+Pumps+Induces+Aortic+Aneurysms+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice.</a> J Vis Exp. (103), (2015).</li>
<li>United Kingdom, E. T. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa0909305#t=article">Endovascular versus open repair of abdominal aortic aneurysm.</a> N Engl J Med. 362 (20), 1863-1871 (2010).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

生理学的な条件の下で外側と中間層によって養われています VV、外膜から内側 VV1に浸透するのに対し、大動脈壁の内層が腔血流からの拡散によって栄養します。腹部の大動脈の壁に VV 血流が次の 3 つの方向/領域に属します: (1) 近位大動脈、大動脈壁と (3) 血管周囲組織10(2) 遠位方向方向。以前は、有意な狭窄や閉塞腹部大動脈の壁に VV 血流が低下4をすることができますを示唆している AAA の壁に VV の人間のティッシュの組織学的分析が識別されます。AAA、高齢者がポリウレタン製カテーテル挿入と高齢者の腹部大動脈の縫合結紮の組み合わせによって引き起こされたこのプロトコルでは非常に重要なポイントです。慎重に組織の層を剥離するには、外科医はスムーズにポリウレタン製カテーテルを大動脈に挿入する必要があり、外 VV と動脈瘤形成の血流の低下による慢性的な低酸素症を引き起こす大動脈をしっかりと縛る。これらのテクニックを使用して、大動脈壁内の血流が減少しその結果、ローカル低酸素環境が誘発されます。血流低下と低酸素状態における動脈瘤形成は、腹部の大動脈の壁に VV 血流が AAA 形成の病因の役割を果たしていることを示します。
具体的には、大動脈瘤モデルは次の条件を満たす必要があります: ベースライン、チュニカ メディアの変性、大動脈壁の炎症と比較して血管径の 1.5 倍の増加。最も人気のある動物モデルは、CaCl211、エラスターゼ12、アンジオテンシン II13などの物質を使用して炎症反応を誘導することによって構築されています。これらのモデルは再現性の高い、明らかに病理学的変化を引き起こすことができ、調査研究でよく使用されます。私たちのモデルの手順を手順 (図 3) 後 28 日目まで行った前に超音波検査から 7 日ごと大動脈径を検討しました。その結果、大動脈の径がやや増加する 28 日間この直径の変更が以前の齧歯動物モデルと同様であることを示します。血管のフォームの肉眼観察では、滑らかな紡錘形 (図 2) が示されます。28 日に我々 はラットを犠牲にし、回収された大動脈組織の病理組織学的分析を行った。涙と判ったと外膜の弾性およびコラーゲン線維の消失 (図 4) を認めた.さらに、マクロファージなどの炎症細胞外膜からチュニカ メディアに存在していた。
現在、AAAs の利用可能な治療法の選択肢は、手術と血管内ステント術、AAA 破裂14患者の 30-50% の死亡率とに限定されます。しかし、AAAs の治療に医療用医薬品が認められています。人間と AAA の研究で使用される確立された動物モデルの病理学的所見に矛盾があること議論があります。人間の AAA と AAA モデル動物の病態の類似性は、薬理学的治療法の開発に不可欠です。齧歯動物モデルの有効性に関する我々 のラットのモデルは腔内血栓5と脂肪細胞形成8面で人間に類似した形態。さらに、本研究ではラットの約 20% は AAA 破裂をいたし、術後後 28 日以内に死亡しました。腹部大動脈瘤破裂はこの病気の最も重要なイベントが、破裂は、確立された実験の AAA モデルと共通、メカニズムは解明されていません。したがって、このモデルは大動脈径の拡張や動脈瘤の破裂のメカニズムを理解するために役立ちます。
このモデルの作成は、いくつかの手術に必要です。したがって、研究者は、このモデルの制限は、このモデルの作成を練習しなければなりません。将来的に、我々 できる血流が低下徐々 に VV 壁を厚くことにより自発的な大動脈瘤の齧歯動物モデルを作成したいと思います。

腹部大動脈は次の 3 つの層から成る: 血管の内壁 (内膜)、内側層 (メディア)、および外側の血管壁 (膜) と、これらの外膜がユニークな血液供給システム (VV) 栄養血管、として知られています。大動脈組織は外 VV 灌流と大動脈血流1から簡単な酸素の拡散によって酸素が供給されます。ただし、地理的に、腹部大動脈、大動脈の他の部分に比べると VVs の少なくとも分布です。2
人間の腹部大動脈瘤の組織の低酸素 (AAA) 壁厚管腔内血栓 (ILT)3の以前の研究報告。また、動脈瘤の壁の外の VV は AAA 壁4組織低酸素症に関連付けられて大幅に高い率で動脈硬化性変化と閉塞が示されています。これらの調査結果に基づいて、AAA の小説齧歯動物モデルは外 VV 低灌流5を誘導することによって作成されました。このモデルでは、VV 低灌流は組織低酸素症と形態学的および病理学的特性人間の AAA6のそれらに類似していた上、AAA の開発を引き起こした。首相の例では、クラスルーム ・の存在過脂肪細胞6、および破裂7、8を引き起こす可能性の蓄積をご利用され。これらの調査結果は、ほとんど以前の齧歯動物モデルで観察されています。したがって、このモデルが AAA 開発と破壊のメカニズムのより深い理解に大きく貢献します。紹介を通じて外 VV 低灌流、AAAs を誘導するために使用する標準プロトコルを記述し、手術手技を用いた大動脈壁に低酸素血症を誘発する方法を説明します。

<table><tbody><tr><td>ラット</td><td>ジャパンSLC。Inc</td><td>SLC:SDラット</td><td>Sprague&ndash;Dawley ratTM</td></tr><tr><td>ポビドンヨード溶液</td><td>Libatape Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>4987335 111457</tr><tr><td>5-0 絹紐</td><td>秋山メディカル(株</td>) <td>JIS No.1</td><td></td></tr><tr><td>vascular clips</td><td>(株)夏目製作所</td><td>C-42-S-2</td><td></td></tr><tr><td>ポリウレタンカテーテル(24ゲージ留置針)</td><td>メディキット</td><td>24G</td><td>スーパーカテーテル Z4VTM、24ゲージ留置針</td></tr><tr><td>ポリウレタンカテーテル(18ゲージ留置針)</td><td>メディキット</td><td>18G</td><td>スーパーカテーテル Z3VTM、18ゲージ留置針</td></tr><tr><td>8-0モノフィラメント紐</td><td>エチコン縫合糸</td><td>c-42-S-2</td><td>プロレンポリプロピレン縫合糸、縫合糸で切開部を修復</td></tr></tbody></table>

外ヴァーサ栄養血管の血流をブロックすることにより腹部の大動脈瘤の齧歯動物モデルの作成

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

ヴァーサ号外管の脈管 (VV) は、酸素、大動脈壁の栄養を提供します。大動脈壁における低酸素には、拡大された腹部大動脈瘤 (AAAs) 可能性があります。この記事で紹介し、大動脈内腔と上腹部大動脈の縫合結紮にポリウレタン製カテーテル挿入の組み合わせで作成された外 VV 低灌流を AAAs を誘導するために使用される標準プロトコルです。
プロトコルは、食糧および水の自由が提供される 300 から 400 グラムの重量を量る雄ラットの使用を含みます。腹側正中腹部切開で開腹、大動脈の剥離が実行されますと、血管周囲組織からの血流をブロックします。大動脈腎動脈の枝に隣接して小さな切開を含むを実行し、18 g 留置針を用いたポリウレタン製カテーテルが挿入されます。切開部を修復した後、カテーテルを大動脈のタイトな結紮は大動脈の血流を乱すことがなく大動脈壁から近位方向から VV 血流をブロックします。この手法は、進行性の大動脈拡張と AAA を引き起こすことができます。
このモデルの最大の利点は、VV 低灌流が組織低酸素症および形態学的および病理学的特性を人間の AAA のものに似ている上、AAA の開発を引き起こすことです。

記載された手術方法は、ラットのポリウレタン製カテーテル挿入と高齢者の腹部大動脈の縫合結紮の組み合わせを使用して、慢性的な低酸素状態における動脈瘤の新たな動物モデルを作成します。プロトコルのセクションで説明したラットは、プロシージャの後の 28 日の安楽死だった。大動脈は、収穫され、動脈瘤形成を可視化するイメージングします。図 2は、紡錘状の AAA の開発を示しています。前のヴィヴォの大動脈の上下の端は、拡張なし通常直径を持っています。大動脈の直径は、経腹超音波検査 (図 3) を使用して測定しました。直径一般にプロシージャの後約 14 日で最大サイズに達したその後、そのまま残るか、またはわずかに増加します。図 4は、EVG 染色後、最大直径で動脈瘤の病理組織学的イメージを示します。28 日目の組織像 (動脈瘤) 0 日目と比較して弾性線維の顕著な低下を示した。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig1.jpg"> 
図 1: 腹部大動脈瘤 (AAA) を誘導する手術。 (A) 上大動脈周囲の組織から剥離されます。(10 mm 長いカット B) ポリウレタン製カテーテルが大動脈の小さな切開を通して挿入されます。(C) 切開が 8-0 モノフィラメント縫合糸で修復され、血流が復活しました。(D) 大動脈は、挿入されたカテーテルの上 5-0 シルク縫合糸で結紮は。スケール バー = 5 mm.<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig2.jpg"> 
図 2: 代表的な予後。 紡錘状の腹部大動脈瘤の術後 28 日目表示開発に関する肉眼。後腹膜の高マージンは、(破線; 左) 動脈瘤の外側のエッジに対応します。前のヴィヴォの大動脈の上部と下部の端 (右) 正常です。スケール バー = 3 mm.<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig3.jpg"> 
図 3: 最大大動脈径経腹超音波断層法を用いて測定します。 大動脈径は、このラットのモデルで着実に増加しました。大動脈の直径は平均 ± 標準偏差として表示されます (n = 12)。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55763/55763fig4.jpg"> 
図 4: エラスティカ ・ ヴァン ・維染色と動脈瘤の組織の代表的なイメージ。 EVG 染色を示す変性弾性板腔内血栓の形成とメディアのプロシージャの後の 28 日 (右) の組織学的評価。大動脈の弾性繊維の断片化と大動脈外膜スパース コラーゲン線維は、28 日に観察されます。0 日目 (左) 施術前に、です。スケール バー = 500 μ m.<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55763/55763fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

大動脈内腔と大動脈の縫合結紮にポリウレタン製カテーテル挿入、外栄養血管の血流の低下による慢性的な低酸素症を誘発します。この記事では、人間の AAA のものと同様の特性を持つ腹部大動脈瘤 (AAA) の新たな動物モデルについて説明します。

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

本手順の全体的な目的は、ラットにおいて大動脈組織の低酸素状態を誘発し、進行性の大動脈拡張を伴う腹部大動脈瘤（AAA）を発症させることです。この手法は、腹部大動脈瘤の発症および破裂に関与するメカニズムに関する、大動脈瘤研究における重要な疑問を解決するのに役立ちます。本手法の主な利点は、ラットモデルにおける形態学的および病理学的特徴が、ヒトの腹部大動脈瘤に見られる特徴と類似していることです。この手法のアイデアは、ヒト腹部大動脈瘤（AAA）の別の可能性について研究していた際に、最初に得られたものです。低酸素誘導手術は、テキストベースの指示だけでは習得することが困難であるため、この手法を視覚的に提示することが極めて重要です。手技の実演は、当研究室の血管外科医である八田辰郎と、元研究員の久郷弘奈が担当します。足指へのピンチ刺激により適切な鎮静レベルを確認した後、電気シェーバーを用いて300～400 mgのラットの腹部被毛を剃毛し、続いて露出した皮膚をアルコールおよびポビドンヨード溶液で順次消毒します。ラットを手術台の上に仰臥位で固定し、動物の眼に眼軟膏を塗布します。次に、鋏を用いて腹部正中切開を行い、滅菌ガーゼと創傷開創器を用いて、腹腔内の腹腔内容物をパッキングします。大動脈を血管周囲組織から剥離させるため、ピンセットを用いて後腹膜を慎重に持ち上げて裂き、大動脈壁を露出させます。次に、後腹膜腔内において、左腎静脈から分叉部にかけての腎下大動脈を血管周囲組織から剥離します。腹大動脈から分枝する血管を5-0シルク縫合糸で結紮し、大動脈腔を狭窄させないよう、大動脈から離れた位置で血流を遮断します。大動脈の血流を遮断するため、腎動脈の直下および大動脈分岐部の直上に血管クリップを装着します。大動脈壁の表面に点状出血を作成させる際と同様に、腎動脈分枝に隣接する大動脈クリップから遠位に5 mmの位置にマイクロシザーを挿入して大動脈前壁を切開し、24ゲージの留置針を用いてポリウレタンカテーテルを切開口から浅く挿入します。ポリウレタンカテーテルに水を満たした1 mLシリンジを取り付け、大動脈内の残存血液をフラッシュして除去します。次に、新しいポリウレタンカテーテルを10 mmの長さに切り、このカテーテルを大動脈腔の切開部位に完全に挿入します。カテーテルの中点を切開部位の位置に合わせ、8-0モノフィラメント縫合糸を用いて、結節縫合で切開部を閉鎖します。5-0シルク縫合糸とポリウレタンカテーテルを用い、外科結びで腹大動脈を結紮します。カテーテルが固定されたら、大動脈分岐部および腎動脈下の血管クリップを取り除いて順行性血流を回復させ、大動脈に明らかな拍動があることを確認します。ガーゼを取り除いた後、4-0 ポリプロピレン縫合糸を用いて腹部切開創を2層にわたって強固に閉鎖し、臓器の脱出を防ぎます。次に、腹部切開創にリドカインを局所塗布し、完全に回復するまでモニタリングを行いながら、ラットをヒーティングパッドの上に安置します。術後、超音波エコー図を用いて拡大した大動脈の時間経過に伴う変化を観察し、標準プロトコルに従って腹部大動脈の内壁から外壁までの最大径を測定する。手術から28日後、メスで腹部に新たに腹側切開を加えて腹腔を開き、はさみを用いて動脈瘤を採取する。採取した大動脈を10%中性緩衝ホルマリンに24〜48時間浸漬させる。大動脈をパラフィンに包埋し、標準的なプロトコルに従って大動脈組織の切片を作成した後、固定済みのパラフィン切片を蒸留水で10分間親水化させ、続いてVerhoeffヘマトキシリンでインキュベートします。Rustingおよびcorrosionは、Verhoeffヘマトキシリンおよびvan Gieson液を用いたラボアクティビティで同定可能です。したがって、これらの組織染色の新鮮さとインキュベーション時間は、アーカイブおよびオプション染色において重要となります。25分後、切片を水で1分間ずつ3回洗浄し、続いて分化液に10〜30回浸します。切片を再び水で3回洗浄し、サンプルを5%チオ硫酸ナトリウム溶液に1分間浸します。さらに水洗した後、サンプルをvan Gieson溶液に5分間浸します。次に、エタノールを用いて30秒ごとの昇順浸漬で組織を脱水し、続いてキシレンで5分間ずつ2回封入剤置換を行います。その後、レゾナンス封入剤を使用して、適切なサイズのカバーガラスで切片を封入します。これらの画像では、カテーテル挿入後28日目の代表的な腹部大動脈瘤を示しています。経腹部超音波検査により大動脈の上端および下端を測定すると、カテーテル留置直後には拡張のない正常な直径が認められますが、留置後約14日で最大サイズまで増加し、実験期間終了まで不変またはわずかに増加し続けます。28日目の動脈瘤の組織病理学的解析では、0日目に観察されたものと比較して、弾性繊維の顕著な分解が認められます。この手法を習得し、適切に実施すれば、約1時間で完了させることができます。本手順に続き、個々の連続的な機能に関するさらなる疑問を解決するために、in vitro解析などの他の手法を実施することが可能です。本技術の開発により、腹部大動脈瘤分野の研究者が、特定の患者層における疾患の探索を行う道が開かれました。このビデオを視聴することで、ラットにおいて、進行性の大動脈拡張を伴う腹部大動脈瘤を誘発するための大動脈組織低酸素状態の導入方法について、十分に理解できるはずです。手術器具の取り扱いは非常に危険であるため、本手順の実施中は常に負傷および感染に対する予防策を講じてください。

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Medicine

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エラスチン感作および血管周囲エラスターゼを用いたマウス腹部大動脈瘤モデルの信頼性の高い作成

学ぶ 腹部大動脈瘤のラットモデル作成法。ポリウレタンカテーテル挿入と縫合結紮により低酸素誘導し、進行性大動脈拡張を再現します。組織学的変化と超音波モニタリングで人間の病態を模倣し、治療法開発に貢献します。

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