Name: 高性能小型光音響トモグラフィーシステムインビボ小動物脳イメージング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 32 s
Description: 学ぶ パルスレーザーダイオードを用いた光音響トモグラフィー（PLD-PAT）によるラットの脳イメージング手法。コンパクトで低コストなシステムを用いて、リアルタイムで高コントラストな脳血管構造を可視化する神経科学研究への応用を紹介します。

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この研究は、シンガポール教育省（ARC2 / 15：M4020238）とシンガポール保健省国立医学研究評議会（NMRC / OFIRG / 0005/2016：M4062012）が資金を提供するTier 2助成金によって支えられています。作者は機械ショップの助けを借りてChow Wai Hoong Bobbyに感謝したいと思います。

すべての動物実験は、シンガポール南陽技術大学の動物実験および使用委員会（Animal Protocol Number ARF-SBS / NIE-A0263）によって承認されたガイドラインおよび規制に従って行われた。 1.システムの説明<ol><li> 図1aに示すように、PLDを円形スキャナの内部に取り付けます。 PLDをレーザードライバユニット（LDU）に接続します。 注記：PLDは〜803 nmの波長で〜136 nsのパルスを提供し、最大パルスエネルギーは約1.42 mJ、繰返し速度は最大7 kHzです。レーザ駆動部（LDU）は、温度コントローラと、可変電源と、電源（12V）と、ファンクションジェネレータとを備え、材料の表を参照してください。可変電源はレーザパワーを制御するために使用され、ファンクションジェネレータはPLDの繰り返しレートを変更するために使用されます。 </li><li> PLDレーザーのスイッチを入れます。 PLDの繰り返しレートを &quot;7,000&quot;に設定するHzをLDU内の関数ジェネレータを使用して実行します。可変電源の電圧を「3.1」Vに設定することにより、パルスエネルギーを1.42mJに増加させる。 </li><li> 図1aに示すように、PLD出射窓の前に光学ディフューザー（OD）を取り付けて、出力ビームを均一にします 。 注：細かいグリット（ すなわち、 1,500グリットの磨き）のディフューザーを使用してください。 </li><li> 図1aに示すように、USTホルダーに焦点を合わせたUSTをスキャン領域の中央に向けて取り付けます 。 注：USTの中心周波数は2.25 MHzで、焦点距離は1.9インチです。 </li><li> 図1aに示すように、超音波検出器をアクリルタンクの中に置きます 。 USTが完全に浸水するようにタンクを水で満たしてください。 注：水媒体は、脳（サンプル）から光音響信号をUSTに結合するために使用されます。アクリル水タンク（WT;材料表参照）はカスタム小動物イメージング用に設計されています。水タンクの設計図は図1bに示されています 。 </li><li>パルサー/レシーバーユニット（PRU; 材料表を参照）を使用して、サンプルからのPAシグナルを確認します。 注：これらの信号は、100 MS / sのサンプリングレートで12ビットのDAQカード（ 表の表を参照）でデジタル化され、コンピュータに保存されました。 </li></ol>ラット脳画像化のための動物の準備注記：上記のPLD-PATシステムは、小型動物の脳を画像化するために実証された。これらの実験では、健康な雌ラット（ 表の表を参照）を使用した。 <ol><li> 2mLのケタミン、1mLのキシラジン、および1mLの生理食塩水（0.2mL / 100gの用量）のカクテルを腹腔内注射することによって動物を麻酔する。 </li><li>ヘアクリッパーを使って動物の頭皮の毛皮を除去する。優しく剃毛した毛髪に脱毛クリームを塗る毛皮のさらなる枯渇のための領域。 <ol><li>綿棒で4〜5分後に塗布したクリームを除去する。 </li><li>動物の目に人工涙軟膏を塗布し、麻酔およびレーザー照射による乾燥を防ぐ。 </li></ol></li><li>ラボジャック上の呼吸用マスク（ 表の表を参照）が装備されたカスタムメイドの動物ホルダー（ 表の表を参照）を取り付けます。 </li><li>動物をホルダー上で倒れやすい場所に置きます。イメージング中に動物の動きを避けるために、外科用テープを使用してホルダーに固定します。 </li><li>呼吸マスクがラットの鼻と口を覆って、吸入麻酔薬を送達するようにしてください。 </li></ol> 3. インビボラット脳画像化<ol><li> 呼吸マスクを麻酔機に接続します。麻酔装置のスイッチを入れ、0.75％イソフルランで酸素を1.0L /分供給するように設定します。 <ol><li>パルスオキシメータをクランプしてください動物の生理学的状態を監視するために使用される。 </li></ol></li><li> ラットの頭皮に無色の超音波ゲルの層を塗布する。ラボジャックの位置をスキャナの中心に合わせます。呼吸マスクは、イメージングウィンドウに合わせてカスタマイズされています。市販のノーズコーンの10％を切断し、手袋に接続する。 <ol><li>ラボジャックの高さを手動で調整して、イメージング面がUSTの焦点にくるようにします。 </li></ol></li><li>必要に応じて、データ収集ソフトウェアのパラメータを設定します（材料表を参照）。データ収集ソフトウェアプログラムを実行して、収集（ すなわち、画像化）を開始する。 注：このプログラムは、USTを回転させてAラインPA信号を収集するために使用されます。収集されたAラインはコンピュータに保存されます。 </li><li>撮影期間全体で動物を観察し、撮影が完了した後にPAT再構成に進む。 </li><li>データ取得が終了したら、再構成ソフトウェアプログラムを使用して、A線から断面脳画像を再構成する。 </li><li>麻酔システムをオフにして、ステージから動物を取り出し、ケージに戻し、意識が回復するまでモニターします。 注：たとえば、USTを5秒間回転させると、PLDは35,000（= 5 x 7,000）パルスを出力し、USTは35,000のAラインを収集します。 70,000を超える信号を平均化することによって（Aライン= 35,000 / 70 = 500の平均化後）、35,000のAラインが500に低減される。 図1cは、レーザパルスおよびAライン収集の照明を示す。遅延和和逆投影アルゴリズムに基づく再構成プログラムを使用すべきである。 </li></ol><img alt="図1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55811/55811fig1.jpg" /> 図1： PLD-PATシステムの回路 図 （ a ）PLD-PATの略図。 PLD：パルスレーザダイオード、CSP：サークルAM：麻酔機、M：モータ、MPU：モータプーリユニット、LDU：レーザドライバユニット、PRU：パルサ/レシーバユニット、UST：超音波トランスデューサ、WT：水タンク、PF：ポリマーフィルム、DAQ：データ取得カード。 （ b ） インビボ小動物脳画像化のための水槽の概略図、上面図（1）および断面図（2）。 A：メトリックネジ、B：アクリル環状プレート、C：シリコーンOリング、D：厚さ100μmの透明ポリエチレンカバー。このタンクはその底部に直径9cmの穴を有し、超音波で光学的に透明な100μm厚のポリエチレン膜で封止された。 （ c ）PLDおよびAラインからのレーザパルスの照射の概略図であり、5秒の連続走査時間で収集される。 <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55811/55811fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。</a>

<ol><li>Upputuri, P. K., Pramanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+toward+preclinical+and+clinical+translation+of+photoacoustic+tomography%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Recent advances toward preclinical and clinical translation of photoacoustic tomography: a review.</a> J Biomed Opt. 22 (4), 041006(2017).</li>
<li>Strohm, E. M., Moore, M. J., Kolios, M. C. <a target="_blank" href="http://ieeexplore.ieee.org/document/7317491/">Single Cell Photoacoustic Microscopy: A Review.</a> IEEE Sel Top Quantum Electron. 22 (3), 6801215(2016).</li>
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<li>Yao, J., Wang, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoacoustic+Brain+Imaging%3A+from+Microscopic+to+Macroscopic+Scales%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Photoacoustic Brain Imaging: from Microscopic to Macroscopic Scales.</a> Neurophotonics. 1 (1), 011003(2014).</li>
<li>Kalva, S. K., Pramanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+validation+of+tangential+resolution+improvement+in+photoacoustic+tomography+using+a+modified+delay-and-sum+reconstruction+algorithm%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Experimental validation of tangential resolution improvement in photoacoustic tomography using a modified delay-and-sum reconstruction algorithm.</a> J Biomed Opt. 21 (8), 086011(2016).</li>
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<li>Upputuri, P. K., Wen, Z. -B., Wu, Z., Pramanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+photoacoustic+microscopy+using+photonic+nanojets%3A+a+simulation+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Super-resolution photoacoustic microscopy using photonic nanojets: a simulation study.</a> J Biomed Opt. 19 (11), 116003(2014).</li>
<li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Phosphorus+Phthalocyanine+Formulation+with+Intense+Absorbance+at+1000+nm+for+Deep+Optical+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">A Phosphorus Phthalocyanine Formulation with Intense Absorbance at 1000 nm for Deep Optical Imaging.</a> Theranostics. 6 (5), 688-697 (2016).</li>
<li>Upputuri, P. K., Wu, Z., Gong, L., Ong, C. K., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+microscopy+with+photonic+nanojets%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Super-resolution coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy with photonic nanojets.</a> Opt Express. 22 (11), 12890-12899 (2014).</li>
<li>Raghunathan, R., Singh, M., Dickinson, M. E., Larin, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+coherence+tomography+for+embryonic+imaging%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Optical coherence tomography for embryonic imaging: a review.</a> J Biomed Opt. 21 (5), 050902(2016).</li>
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<li>Huang, S., Upputuri, P. K., Liu, H., Pramanik, M., Wang, M. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/Content/ArticleLanding/2016/TB/C5TB02367J#!divAbstract">A dual-functional benzobisthiadiazole derivative as an effective theranostic agent for near-infrared photoacoustic imaging and photothermal therapy.</a> J Mat Chem B. 4 (9), 1696-1703 (2016).</li>
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<li>Hu, S., Maslov, K., Tsytsarev, V., Wang, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+transcranial+brain+imaging+by+optical-resolution+photoacoustic+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Functional transcranial brain imaging by optical-resolution photoacoustic microscopy.</a> J Biomed Opt. 14 (4), 040503(2009).</li>
<li>Yao, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+photoacoustic+computed+tomography+of+mouse+brain+metabolism+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">Noninvasive photoacoustic computed tomography of mouse brain metabolism in vivo.</a> Neuroimage. 64 (1), 257-266 (2013).</li>
<li>Hu, S., Wang, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurovascular+photoacoustic+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neuroenergetics%22%5BJournal%5D)">Neurovascular photoacoustic tomography.</a> Front Neuroenergetics. 2, 10(2010).</li>
<li>Upputuri, P. K., Pramanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+characterization+of+low-cost%2C+high-speed%2C+portable+pulsed+laser+diode+photoacoustic+tomography+%28PLD-PAT%29+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Performance characterization of low-cost, high-speed, portable pulsed laser diode photoacoustic tomography (PLD-PAT) system.</a> Biomed Opt Express. 6 (10), 4118-4129 (2015).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoacoustic+tomography+of+small+animal+brain+with+a+curved+array+transducer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Photoacoustic tomography of small animal brain with a curved array transducer.</a> J Biomed Opt. 14 (5), 054007(2009).</li>
<li>Sivasubramanian, K., Pramanik, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+frame+rate+photoacoustic+imaging+at+7000+frames+per+second+using+clinical+ultrasound+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">High frame rate photoacoustic imaging at 7000 frames per second using clinical ultrasound system.</a> Biomed Opt Express. 7 (2), 312-323 (2016).</li>
<li>Allen, J. S., Beard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+near-infrared+laser+diode+excitation+system+for+biomedical+photoacoustic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Lett%22%5BJournal%5D)">Pulsed near-infrared laser diode excitation system for biomedical photoacoustic imaging.</a> Opt Lett. 31 (23), 3462-3464 (2006).</li>
<li>Kolkman, R. G. M., Steenbergen, W., van Leeuwen, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+photoacoustic+imaging+of+blood+vessels+with+a+pulsed+laser+diode%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">In vivo photoacoustic imaging of blood vessels with a pulsed laser diode.</a> Lasers Med Sci. 21 (3), 134-139 (2006).</li>
<li>Daoudi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Handheld+probe+integrating+laser+diode+and+ultrasound+transducer+array+for+ultrasound%2Fphotoacoustic+dual+modality+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Handheld probe integrating laser diode and ultrasound transducer array for ultrasound/photoacoustic dual modality imaging.</a> Opt Express. 22 (21), 26365-26374 (2014).</li>
<li>Upputuri, P. K., Pramanik, M. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/2057-1976/1/4/045010/pdf">Pulsed laser diode based optoacoustic imaging of biological tissues.</a> Biomed Phys Eng Express. 1 (4), 045010-045017 (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="https://www.amazon.com/American-National-Standard-Safe-Lasers/dp/091203565X">American National Standard for Safe Use of Lasers ANSI Z136.1-2000</a>. , American National Standards Institute, Inc. New York, NY. (2000).</li>
</ol>

著者は、原稿に関連する金銭的関心はなく、開示する可能性のある他の利益相反はない。

この研究は、PLD-PATシステムを用いてラットのインビボ脳イメージングを行うためのプロトコールを提示する。このプロトコルには、イメージングシステムとそのアラインメントの詳細な説明と、ラットの脳イメージングのイラストが含まれています。既存のOPOベースのPATシステムは高価で大型であり、5〜10分で1つの断面画像を提供することができる。 PLD-PATシステムは、コンパクトで携帯性があり、低コストであり、3秒で良好な画像を提供することができる。システムの性能は、以前にファントムで研究され、従来のPATシステム25と比較された。ここでは、同じPLD-PATが、速いインビボ脳画像化について実証された。結果は、システムが5秒以内でさえ高品質のインビボ画像を提供できることを実証する。 いくつかの利点があるが、PLD-PATシステムにはいくつかの欠点がある。この研究で使用されたPLDは、単一の波長でパルスを提供するので、機能を提供することはできません多波長照明を必要とする多焦点撮像が可能にな...

<html>光音響トモグラフィ（PAT）は、臨床および前臨床試験1,2,3,4,5の両方において多くの用途を有するハイブリッド撮像モダリティである。 PATでは、ナノ秒のレーザーパルスが生体組織を照射します。組織発色団による入射光の吸収は、局部的な温度上昇をもたらし、次に音波が音波の形態で放出される。超音波検出器は、試料周辺の様々な位置で光音響信号を収集する。光音響（PA）信号は、光音響画像を生成するために様々なアルゴリズム（遅延 - 和アルゴリズムなど） 6を使用して再構成される。 このハイブリッドイメージングモダリティは、高解像度、深部組織イメージングおよび高い光吸収コントラスト7を提供し 、class = &quot;xref&quot;&gt; 8。最近では、より長い波長（約1,064nm）およびリン系フタロシアニンと呼ばれる外因性造影剤の助けを借りて、鶏の乳房組織において約12cmの画像深度9が達成された。この深度感度は、共焦点蛍光顕微鏡法、2光子蛍光顕微鏡法、 10光干渉断層法、 11 等の他の光学法の深度感度よりもはるかに高い.PATは、2つ以上の波長を使用して、器官における構造的および機能的変化。多くの人間の病気について、小動物のモデルは十分に確立されている12,13,14,15。小動物の画像化のために、いくつかの様式が実証されている。これらのアプローチのうち、PAイメージングは​​、上記の利点のためにかなり迅速に注目を集めています。 PATは、小動物4,16,17,18の組織および器官（ すなわち、心臓、肺、肝臓、眼、脾臓、脳、皮膚、脊髄、腎臓など ）における血管造影の可能性を示している。 PATは、小動物脳画像の確立されたモダリティである。 PA波は発色団による光吸収のために生成されるので、多重波長PATは総ヘモグロビン濃度（HbT）と酸素飽和度（SO 2 ）のマッピングを可能にする19,20,21,22。脳神経血管造影は、外因性造影剤12,23,24の助けを借りて達成された。 PAモダリティは脳の健康をよりよく理解するのに役立ちます分子レベルおよび遺伝子レベルで情報を提供する。 小動物イメージングのために、Nd：YAG / OPOレーザーがPAT励起源として広く使用されている。これらのレーザーは〜10 nsの繰返し率で約5 nsの近赤外パルスをエネルギー（OPO出力ウィンドウで約100 mJ）で照射します。このようなレーザを備えたPAシステムは、高価でかさばり、レーザ光源の繰り返し率が低いため、単一素子超音波トランスデューサ（UST）を用いた低速イメージングを可能にする。そのようなPAシステムにおける典型的なA線獲得時間は、断面25当たり約5分である。このような長い測定時間を有するイメージングシステムは、全身イメージング、時間分解能イメージングなどのための生理学的パラメータを制御することが困難であるため、小動物イメージングには理想的ではない。複数の単一素子USTを採用することによって、アレイベースのUST、または高繰返し率のレーザーを使用すると、PAのイメージング速度を高めることができますシステム。サンプルの周りのすべてのPA信号を収集するために1つの単一素子USTのみを使用することにより、システムのイメージング速度が制限される。高速または高感度のイメージング技術のために、円形または半円形の幾何学配置で配置された複数の単一素子USTが実証されています。線形、半円形、円形、および容積配列などのアレイベースのUST26は、リアルタイムイメージングにうまく使用されています1 。これらのアレイベースのUSTはイメージングスピードを増加させ、測定感度を低下させるが、高価である。しかし、アレイベースのUSTを使用するPAシステムのイメージング速度は、依然としてレーザの繰り返し速度によって制限されています。 パルスレーザ技術は、高繰返し率のパルスレーザダイオード（PLD）を製造するために進歩した。 7,000フレーム/秒臨床超音波プラットフォーム27を使用してPLDでBスキャン光音響イメージングが実証された。このようなPLDは、単一要素のUST円形走査形状であっても、PATシステムである。単一要素のUSTは、アレイベースのUSTとは異なり、安価で高感度です。過去10年間で、PAイメージングの励起源として高繰返し率PLDの使用に関する研究はほとんど報告されていませんでした。ファントム28の PAイメージングのためにファイバベースの近赤外PLDが実証された。低エネルギーPLDを使用して、人間の皮膚より1mm低い深さの血管のインビボイメージングが実証された29 。 PLDベースの光学解像度光音響顕微鏡（ORPAM）が報告された。 PLDを使用して、0.43Hzのフレームレートで〜1.5cmの深さのイメージングが実証されました30 。非常に最近、PLD-PATシステムが報告され、生物組織25,31において〜3秒程度の短時間および〜2cmの画像深度で画像が提供された。この研究は、このような低コストでコンパクトなシステムが高クオ高速でも画像を表示できます。 PLD-PATシステムは、高フレームレート（7,000fps）光音響イメージング、表面血管イメージング、指関節イメージング、2cm深部組織イメージング、小動物脳イメージングなどに使用することができる。 PLDからの低パルスエネルギーパルスは、その適用をマルチスペクトルおよび深部組織イメージングに限定する。実験は、前臨床応用に使用されたのと同じPLD-PATシステムを用いて小動物に対して行われている。この研究の目的は、小型動物のインビボ 2D断面脳画像化のためのPLD-PATシステムの視覚化実験デモを提供することである。

<table><tbody><tr><td>パルスレーザーダイオード</td><td>Quantel、フランス</td><td>QD-Q1910-SA-TEC</td><td>それは仕様803 nm、パルスあたり1.4 mJ、136 nsパルス、最大7 kHz、寸法:11.0 x 6.0 x 3.6 cm、重量:~150 gm</td></tr><tr><td>ギアボックス付きステッピングモーター</td><td>LINエンジニアリング(サーボダイナミクス)</td><td>モーター:CO-5718-01P、ギアボックス:DPL64/1、I = 10 NEMA 23用、電源PW100-48</td><td>検出器ホルダーを円形のジオメトリで移動します。トルク:2.08N-m、ローター慣性:2.6kg-cm2</td></tr><tr><td>超音波パルサー/レシーバー</td><td>オリンパス</td><td>5072PR</td><td>USTからのPA信号を受信し、フィルタリングし、増幅します。帯域幅は 35MHz で、ゲインは &plusmn です。59デシベル。</td></tr><tr><td>超音波トランスデューサ</td><td>オリンパス</td><td>V306-SU-NK-CF1.9IN/Q4200069</td><td>光音響検出に使用される超音波センサー。セントラル周波数 2.25 MHz、0.5 インチ、円筒形フォーカス 1.9 インチ</td></tr><tr><td>PCIe DAQ (データ収集) カード</td><td>GaGe</td><td>CSE4227/ A6000610/B0E00610</td><td>12 ビット、100 Ms/秒、2 チャネル、1 Gs オンボードメモリ、PCIe x16 インターフェース</td></tr><tr><td>Rats</td><td>In Vivos Pte Ltd、シンガポール</td><td>NTac:SD、Sprague Dawley / SD</td><td>メス、重量 100 &plusmn;</td></tr><tr><td>アクリル水タンク 10g&nbsp;</td><td>NTUワークショップ</td><td>カスタムメイド</td><td>脳と検出器の間の音響結合媒体として機能する水が含まれています</td></tr><tr><td>サーキュラースキャナー&nbsp;</td><td>NTUワークショップ</td><td>カスタムメイド</td><td>スキャナーはアルミ製です&nbsp;</td></tr><tr><td>麻酔器</td><td>医療プラスpte ltd</td><td>酸素濃縮器付き非再呼吸麻酔器</td>。<td>動物に酸素とイソフルランを供給します</td></tr><tr><td>パルスオキシメータポータブル</td><td>Medtronic</td><td>PM10N(獣医用センサー付き</td><td>) 動物のパルスオキシメトリーを監視</td></tr><tr><td>超音波ゲル</td><td>プログレス/パーカーアクアソニックゲル</td><td>PA-GEL-CLEA-5000</td><td>クリア超音波ゲル</td></tr><tr><td>データ取得ソフトウェア</td><td>National Instruments Corporation,Austin,TX,USA)</td><td>NI LabVIEW 2015 SP1</td><td>LabVIEWベースのプログラムは、ステッピングモーターを制御し、検出器からPAシングルを取得するために私たちの研究室で開発されました</td></tr><tr><td>データ処理ソフトウェア</td><td>Matlab(Mathworks、Natick、MA、USA)</td><td>Matlab R2012b</td><td>PA画像の再構築のためのMatlabコードは、私たちの研究室で</td></tr><tr><td>開発されました 温度コントローラー&nbsp;</td><td>LaridTech、MO、USA</td><td>MTTC1410</td><td>PLDの温度を常に制御します&nbsp;</td></tr><tr><td>12V電源&nbsp;</td><td>ボルトクラフト&nbsp;</td><td>PPS-11810</td><td>PLD可変電源用動作電圧の供給</td></tr><tr><td>へ&nbsp;</td><td>BASETech</td><td>BT-153</td><td>レーザー出力電力を変更する</td></tr><tr><td>Funtion発電機&nbsp;</td><td>Funktionsgenerator</td><td>FG250D</td><td>PLDの繰り返し率を変更します。DAQをレーザー励起と同期するためのTTL信号を提供します。</td></tr><tr><td>動物販売業者</td><td>In Vivos Pte Ltd, シンガポール</td><td></td><td>研究目的で小動物を供給する動物販売業者。</td></tr><tr><td>アニマルホルダー</td><td>NTUワークショップ</td><td>カスタムメイド</td><td>腹部に動物を保持するために使用されます</td></tr><tr><td>呼吸マスク</td><td>NTUワークショップ</td><td>カスタムメイド</td><td>動物ホルダーと一緒に使用して、動物に麻酔混合物を供給します</td></tr><tr><td>ペントバルビタールナトリウム</td><td>バラバーブ</td><td></td><td>実験後の動物を安楽死させるために使用されます。</td></tr><tr><td>光学ディフュー</td><td>ザーThorlabs</td><td>DG10-1500</td>レーザー<td>ビームを均質にするために使用されます</td></tr></tbody></table>

高性能小型光音響トモグラフィーシステム<em&gt;インビボ</em&gt;小動物脳イメージング

A High-performance Compact Photoacoustic Tomography System for In Vivo Small-animal Brain Imaging

インビボ小動物イメージングは​​、前臨床研究において重要な役割を果たす。光音響トモグラフィー（PAT）は、前臨床および臨床の両方の用途に大きな可能性を示す新興ハイブリッドイメージングモダリティです。従来の光パラメトリック発振器ベースのPAT（OPO-PAT）システムは、かさばって高価であり、高速イメージングを提供することができない。近年、PATの代替励起源として、パルスレーザダイオード（PLD）が成功裏に実証されている。パルスレーザダイオードPAT（PLD-PAT）は、光音響ファントムや生体組織の高速イメージングにも成功しています。この研究は、PLD-PATを用いたインビボ脳イメージングのための視覚化された実験プロトコルを提供する。このプロトコルには、コンパクトなPLD-PATシステム構成とその説明、脳イメージングのための動物の準備、および2D断面ラット脳画像の典型的な実験手順が含まれる。 PLD-PATシステムはコンパクトでコスト効率が良い高速で高品質な画像を提供することができます。 インビボで様々なスキャン速度で収集された脳画像が提示される。

記載されたPLD-PATシステムの能力を実証するインビボ脳イメージング結果がこのセクションに示されている。 PLD-PATシステムの高速イメージング能力を実証するために、2つの異なる健康なラットのインビボ脳イメージングを行った。 図2は、様々なスキャン速度での雌ラット（93g）の脳画像を示す。 図2aおよびbは、脳領域上の頭皮を除去する前後のラット脳の写真を示す。 PATイメージングは​​、非侵襲的に（ すなわち、皮膚および頭蓋骨を無傷で）行った。脳の断面からのPA信号を、USTを5秒、10秒、20秒、および30秒間循環回転させることによって収集した。 図2c〜fは、5秒、10秒、20秒、および30秒のスキャン時間で得られたラット脳のPAT再構成断面像を示す。これらの脳の画像すべてにおいて、<html>横洞（TS）、上矢状洞（SS）、および脳...

小型動物での高速インビボ脳イメージングのためのコンパクトパルスレーザダイオード光音響トモグラフィ（PLD-PAT）システムが実証されています。

In vivo small-animal imaging has an important role to play in preclinical studies. Photoacoustic tomography (PAT) is an emerging hybrid imaging modality ...

本手順の全体的な目的は、小動物の生体内脳イメージングに向けた、低コストでコンパクトな光音響システムの性能を実証することです。光音響断層撮影（PAT）は、光と音を組み合わせたハイブリッドイメージング手法です。PATは、非常に高い光学コントラストを用いて、臓器から細胞小器官まで、生体深部組織のイメージングを可能にします。本研究では、ラットの生体内脳断層画像診断のための、コンパクトで高速なパルスレーザーダイオードベースの光音響断層撮影システムを提示します。手順のデモンストレーションは、当研究室のリサーチフェローであるDr.Paul Kumar Upputuri、博士課程学生のSandeep Kumar Kalva、およびプロジェクトオフィサーのVijitha Periyasamyが行います。まずシステムの準備として、円形スキャナーアセンブリに搭載されたパルスレーザーダイオードの電源を入れます。レーザードライバユニットを使用して、繰り返し周波数を7,000 Hertzに設定します。パルスエネルギーを1.42 millijoulesにするため、レーザー電源を3.1 voltsに設定します。次に、集束超音波浸水型トランスデューサをパルサーレシーバーユニットに接続します。トランスデューサーをホルダーに固定し、円形スキャンプレートの下に設置します。このとき、トランスデューサーをプレートの中心に向けて配置してください。スキャンアセンブリを、底面にポリエチレン製イメージングウィンドウを備えたアクリルタンクに入れます。トランスデューサーが完全に浸るまで、タンクに水を加えます。イメージングに進む前に、パルサーレシーバーユニットで光音響信号が検出されていることを確認します。イメージング手順を開始するために、健康な雌のラットを用意します。麻酔後、ヘアクリッパーで頭皮の被毛を刈り取ります。トリミングした部位に除毛クリームを優しく塗布します。4〜5分後、綿棒でクリームを取り除きます。乾燥を防ぎ、散乱したレーザー光を遮断するため、ラットの眼に滅菌眼軟膏を塗布します。呼吸マスクを備えたカスタムメイドのイメージングベッドを、サージカルテープでラボジャックに固定します。動物をイメージングベッドの上に腹臥位で配置し、鼻と口をマスクに入れます。サージカルテープを使用して、動物をイメージングベッドに固定します。イメージングベッドアセンブリを光学定盤上に配置します。呼吸マスクを麻酔機に接続し、吸入麻酔の投与を開始します。処置の間、動物の生理的状態をモニターするため、パルスオキシメーターを動物の尾または後肢に装着します。動物の頭皮に無色の超音波ジェルの塗布します。イメージングベッドアセンブリがスキャナーの下にしっかりと配置され、動物の頭皮がイメージングウィンドウの中央に来ていることを確認してください。動物の頭部への圧迫を最小限に抑えるよう注意しながら、超音波ジェルがイメージングウィンドウに接触するまで、慎重にイメージングベッドを上昇させます。テスト画像を取得し、脳のイメージング断面が超音波トランスデューサの焦点位置にくるようにベッドの垂直方向の位置を調整します。次に、実験パラメータを設定してスキャンを開始します。イメージング期間中は動物の状態を監視してください。再構成ソフトウェアを用いて、脳の断面画像を取得します。イメージングが完了したら、麻酔を中止し、観察下で動物を完全に回復させます。非侵襲的なPLD PATイメージングにより、健康な雌ラット脳の断面画像が得られました。スキャン時間は5秒から20秒の範囲でした。テストしたすべてのスキャン速度において、横静脈洞、上矢状静脈洞、および大脳静脈が確認できました。2匹目の健康な雌ラットで同様の手順を繰り返した際にも、同じ性能が観察されました。この小型光音響システムは、脳血管系の光音響画像を取得するために使用されます。その結果、本システムはわずか5秒という短いスキャン時間で、高品質な個別の脳画像を提供できることが期待されます。開発されたPATシステムの今後の応用例としては、脳腫瘍のイメージング、小動物の臓器イメージング、体内に出入りする造影剤のイメージング、およびその他の治療への応用が挙げられます。

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

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ディープティシュ人間血管造影および機能前臨床研究のためのユニバーサルハンドヘルド三次元光音響イメージングプローブリアルタイムで

本研究は、ラットの脳に対して非侵襲的な高周波超音波および光音響ベースのイメージングを行うための新しいプロトコルを説明しています。これにより、動物の頭蓋骨に自然に存在する頭蓋骨孔に信号を向けることにより、深部皮質下領域とその血管パターンを効率的に視覚化します。...

非侵襲的実質細胞、血管および代謝高周波超音波および光音響ラット脳深部イメージング

ここでは、インビボで同じ試料上の浅い深度での高分解能画像化と低分解能深部組織画像化の両方が可能な切り替え可能な音響分解能（AR）および光学分解能（OR）光音響顕微鏡法（AR-OR-PAM）...

切り替え可能な音響光学分解能光音響顕微鏡<em&gt;インビボ</em&gt;小動物の血管系イメージング

小動物の非侵襲的な実時間イメージングの臨床ハンドヘルド光音響イメージング...

手持ちの臨床音響小動物の非侵襲的な実時間イメージングによる画像計測

密集した脈打ったレーザーのダイオード・ベースの卓上の光音響の断層撮影 (PLD-PAT)...

ラット皮質脈管構造での洗浄・インおよび染料の洗浄を監視するためのパルスレーザーダイオードベースのデスクトップ光音響断層撮影

広視野イメージングとリアルタイムイメージングを統合したデュアルラスタースキャン光音響イメージャーが設計されました。...

血管可視化のための二重ラスター走査光音響小動物イメージャー

ここでは、小動物を対象とした高解像度陽電子放射断層撮影/コンピュータ断層撮影法を用いて心機能と形態を定量化するための実験的イメージングプロトコルを紹介します。マウスとラットの両方を検討し、2つの種に対するコンピューター断層撮影造影剤の異なる要件について議論します。...

小動物用高分解能心臓陽電子放出断層撮影/コンピュータ断層撮影

この研究は、虚血性脳卒中の非侵襲的イメージングのためのマルチモーダル超音波ベースのイメージングプラットフォームの使用を示しています。このシステムは、光音響イメージングによる血液酸素化の定量化と、音響血管造影による脳内の灌流障害の定量化を可能にします。...

虚血性脳卒中の非侵襲的全脳イメージングのための統合光音響、超音波、および血管造影断層撮影(PAUSAT)

学ぶ パルスレーザーダイオードを用いた光音響トモグラフィー（PLD-PAT）によるラットの脳イメージング手法。コンパクトで低コストなシステムを用いて、リアルタイムで高コントラストな脳血管構造を可視化する神経科学研究への応用を紹介します。

高性能小型光音響トモグラフィーシステム

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