Name: インフルエンザ特異抗体価を定量化する最適化された赤血球凝集抑制 (HI) 試験 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 34 s
Description: 学ぶインフルエンザ特異抗体価の定量化法。赤血球凝集抑制試験を用いてワクチン誘導免疫を評価し、血清サンプルから中和抗体を迅速かつ正確に検出する手法を解説します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Prevention and control of seasonal influenza with vaccines. Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices--United States, 2013-2014. MMWR Recomm Rep. 62, Centers for Disease, C. & Prevention. RR-07 1-43 (2013).</li>
<li>Dominguez-Cherit, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critically+Ill+patients+with+2009+influenza+A%28H1N1%29+in+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Critically Ill patients with 2009 influenza A(H1N1) in Mexico.</a> JAMA. 302 (17), 1880-1887 (2009).</li>
<li>Fox, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pandemic+influenza+%28H1N1%29%3A+impact+on+lung+transplant+recipients+and+candidates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Pandemic influenza (H1N1): impact on lung transplant recipients and candidates.</a> J Heart Lung Transplant. 29 (9), 1034-1038 (2010).</li>
<li>Piercy, J., Miles, A., Krankheiten, S. B. fG. S. V., Values, M. The Economic Impact of Influenza in Switzerland: Interpandemic Situation. , Swiss Federal Office of Public Health, Division of Epidemiology and Infectious Diseases, Section of Viral Diseases and Sentinel Systems. (2003).</li>
<li>Barclay, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+network+assortativity+of+influenza+vaccination+at+a+high+school%3A+implications+for+outbreak+risk+and+herd+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Positive network assortativity of influenza vaccination at a high school: implications for outbreak risk and herd immunity.</a> PLoS One. 9 (2), 87042(2014).</li>
<li>Baluch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Randomized+controlled+trial+of+high-dose+intradermal+versus+standard-dose+intramuscular+influenza+vaccine+in+organ+transplant+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Randomized controlled trial of high-dose intradermal versus standard-dose intramuscular influenza vaccine in organ transplant recipients.</a> Am J Transplant. 13 (4), 1026-1033 (2013).</li>
<li>Haralambieva, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Impact+of+Immunosenescence+on+Humoral+Immune+Response+Variation+after+Influenza+A%2FH1N1+Vaccination+in+Older+Subjects%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The Impact of Immunosenescence on Humoral Immune Response Variation after Influenza A/H1N1 Vaccination in Older Subjects.</a> PLoS One. 10 (3), 0122282(2015).</li>
<li>Egli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccine+adjuvants--understanding+molecular+mechanisms+to+improve+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Med+Wkly%22%5BJournal%5D)">Vaccine adjuvants--understanding molecular mechanisms to improve vaccines.</a> Swiss Med Wkly. 144, 13940(2014).</li>
<li>O'Shea, D., Widmer, L. A., Stelling, J., Egli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+face+of+vaccination+in+immunocompromised+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Infect+Dis+Rep%22%5BJournal%5D)">Changing face of vaccination in immunocompromised hosts.</a> Curr Infect Dis Rep. 16 (9), 420(2014).</li>
<li>Meulemans, G., Carlier, M. C., Gonze, M., Petit, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+hemagglutination-inhibition%2C+agar+gel+precipitin%2C+and+enzyme-linked+immunosorbent+assay+for+measuring+antibodies+against+influenza+viruses+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Dis%22%5BJournal%5D)">Comparison of hemagglutination-inhibition, agar gel precipitin, and enzyme-linked immunosorbent assay for measuring antibodies against influenza viruses in chickens.</a> Avian Dis. 31 (3), 560-563 (1987).</li>
<li>Martins, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+internal+controls+for+the+Luminex+instrument+as+part+of+a+multiplex+seven-analyte+viral+respiratory+antibody+profile%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development of internal controls for the Luminex instrument as part of a multiplex seven-analyte viral respiratory antibody profile.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 9 (1), 41-45 (2002).</li>
<li>Webster, R., Cox, N., Stöhr, K. WHO Animal Influenza Manual. WHO/CDS/CSR/NCS. 2002.5, 1-99 (2002).</li>
<li>Mittelholzer, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cell+lines+used+in+a+micro+neutralization+test+for+measuring+influenza-neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human cell lines used in a micro neutralization test for measuring influenza-neutralizing antibodies.</a> Scand J Immunol. 63 (4), 257-263 (2006).</li>
<li>Hamilton, R. S., Gravell, M., Major, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+antibody+titers+determined+by+hemagglutination+inhibition+and+enzyme+immunoassay+for+JC+virus+and+BK+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of antibody titers determined by hemagglutination inhibition and enzyme immunoassay for JC virus and BK virus.</a> J Clin Microbiol. 38 (1), 105-109 (2000).</li>
<li>Kumakura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+hemagglutination+inhibition+assay+and+enzyme+immunoassay+for+determination+of+mumps+and+rubella+immune+status+in+health+care+personnel%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Lab+Anal%22%5BJournal%5D)">Comparison of hemagglutination inhibition assay and enzyme immunoassay for determination of mumps and rubella immune status in health care personnel.</a> J Clin Lab Anal. 27 (5), 418-421 (2013).</li>
<li>Ogundiji, O. T., Okonko, I. O., Adu, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+measles+hemagglutination+inhibiting+antibody+levels+among+school+children+in+Ibadan%2C+Nigeria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunoassay+Immunochem%22%5BJournal%5D)">Determination of measles hemagglutination inhibiting antibody levels among school children in Ibadan, Nigeria.</a> J Immunoassay Immunochem. 34 (2), 208-217 (2013).</li>
<li>Cwach, K. T., Sandbulte, H. R., Klonoski, J. M., Huber, V. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21883963">Contribution of murine innate serum inhibitors toward interference within influenza virus immune assay.</a> Influenza Other Respir Viruses. 6 (2), 127-135 (2012).</li>
<li>Lee, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor+mimicry+by+antibody+F045-092+facilitates+universal+binding+to+the+H3+subtype+of+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Receptor mimicry by antibody F045-092 facilitates universal binding to the H3 subtype of influenza virus.</a> Nat Commun. 5, 3614(2014).</li>
<li>Blumel, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+prevalence+of+cross-reactive+antibodies+against+influenza+A%28H3N2%29+variant+virus%2C+Germany%2C+2003+to+2010%5BTitle%5D)+AND+%22Euro+Surveill%22%5BJournal%5D)">Age-related prevalence of cross-reactive antibodies against influenza A(H3N2) variant virus, Germany, 2003 to 2010.</a> Euro Surveill. 20 (32), 16-24 (2015).</li>
<li>Reber, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+Influenza+Vaccination+of+Children+Induces+Humoral+and+Cell-Mediated+Immunity+Beyond+the+Current+Season%3A+Cross-reactivity+with+Past+and+Future+Strains%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Seasonal Influenza Vaccination of Children Induces Humoral and Cell-Mediated Immunity Beyond the Current Season: Cross-reactivity with Past and Future Strains.</a> J Infect Dis. , (2016).</li>
</ol>

測光に支えられ「SNSF Ambizione スコア」プログラム (PZ00P3_154709) から助成金研究「Forschungsfond、青少年 strategischer Projekte」Bangeter Rhyner 財団、Stiftungsinfektionskrankheiten バーゼル、バーゼルの大学。L.K. は、オーストリアのグラーツ大学の助成金によって支えられました。J. l. は、システム生物学プログラム (9thコール) で SystemsX.ch イニシアチブ iPhD 交わりによってサポートを確認します。

前と後のワクチン接種インフルエンザ ウイルス抗体価の定量化は、ワクチン研究に必要な重要なツールです。Seroprotection などのウイルス感染症に対する保護のサロゲートのメジャーに基づいて (> 1:40) またはセロコン バージョン (力価の 4 倍増)、予防接種戦略をすることができます最適化された9。指定されたプロトコルを使用して判断できます: (i) (ii) 興味のウイルス抗体価と特定のウイルスの赤血球凝集可能性。
変更とトラブルシューティング:
このプロトコルは、WHO 標準12に基づいています。(手順 5. を参照) 血清の準備のため PCR チューブ ストリップを使用して、プロトコルを変更しました。この変更は、作業負荷を大幅に削減し、アッセイのスループットを向上させる助けた。さらに、我々 は効果的なコスト超過が抗原の滴定手順で 4 分の 1 で抗原量を削減しました。サンプル量が限...

インフルエンザ ウイルスによる感染症は、かなりの罹患率、死亡率と高い医療費1,2,3,4に関連付けられます。特に、高齢者、新生児、妊婦、慢性疾患患者より重篤な臨床転帰のリスクです。したがって、循環のインフルエンザ ウイルスに対するワクチン接種ハイリスク集団のこれらの疾患の負担を減少する主な尺度であります。予防接種、例えば、保護しきい値を超えるインフルエンザ特異的抗体の後個々 の免疫応答の増加人口内のウイルスの伝達の可能性感染症と一般的に個々 のリスクが軽減されます。5. ワクチン誘発される体液性免疫応答の別の集団と様々 な年齢グループ間で詳細な理解は重要な臨床質問6,7、8に答えるための重要な要素,9、よう: 一部の高齢患者はなぜ感染症前のワクチン接種にもかかわらずを持って?「良い」と「十分な」ワクチン誘発される保護とは何ですか。どのくらいの頻度ワクチンは保護抗体に到達する免疫抑制患者に適用されるべきですか。最も効果的な投与量とは何ですか。ワクチン接種後の抗体価と新規アジュバントの影響は?ワクチンの抗体産生の測定は、これらの重要な質問に答えるし、予防接種の成果を向上させるに役立つことがあります。
ウイルス特異抗体価の定量は、様々 な免疫学的方法で実行できます。これには、固相10や中和の試金13ビーズに基づく ELISA11試金こんにちは試金12が含まれます。ELISA 法は、様々 な抗原に対する血清の比較的大量のスクリーニングを許可します。また、病原体特定免疫グロブリン (Ig) M および IgG 個別に検討します。抗原、例えば、直線のアミノ酸シーケンスまたはウイルスのような粒子の特性は、抗体の結合に影響を与える可能性があります潜在的なエピトープのスペクトラムは非常に広いと抗体かどうかに関する情報を提供しませんレスポンスは、機能的関連性です。
対照的に、中和法は、機能的細胞の感染を阻害する抗体の可能性を決定し、したがって潜在的な中和が反映されます。ただし、このメソッドは非常に労働集約的、特定の培養細胞し、ウイルスをライブとしたがって、それは時間のかかる、高価なと特別な装置を必要とする必要があります。
この資料は、特定のインフルエンザ抗体価を定量化するこんにちは世界保健機構 WHO ベース プロトコル12ステップバイ ステップの説明します。赤血球凝集は赤血球の凝集につながるいくつかのウイルスの特徴的な効果です。患者血清をこの効果の抑制には、中和効果を反映する抑制性抗体濃度測定が可能します。
同時に複数のサンプルのより効率的な処理と必要な時間を短縮できるように WHO プロトコルのワークフローを変更しました。最初のプロトコルでは、特定のインフルエンザ抗原の凝集反応電位の決定について説明します。そうすることで、正しいインフルエンザ抗原濃度は 2 番目のプロトコルの決定されます。この部分は、血液の各バッチと同様、すべての新しいウイルスの抗原で繰り返す必要があります。
2 番目のプロトコルでは、特定のインフルエンザ抗体価の定量について説明します。示されたプロトコルはしかしインフルエンザ ウイルスとひと血清サンプルの調査用に最適化された、それはも刺激免疫細胞、例えば、ウイルス特異 B 細胞からマウス血清や細胞培養上清中の適用することができます。結果は、絶対測定抗体として算定できます。多くのワクチン研究の幾何平均抗体価と 95% 信頼区間はそれぞれの特定の人口のため表示されます。解釈、seroprotection またはセロコン バージョンは、特定のウイルス集団の感受性を記述するよく使用されます。Seroprotection は、4 倍以上の抗体価を高める 2 つの時間ポイント (ほとんどの一般的予防接種前および 30 日後予防接種を使用) の間の seroprotective 抗体の達成と、≥1:40、および陽転の力価として定義されます。
両方のプロトコルが使いやすいし、彼らの研究の質問の広い範囲に適応することができます。特に、確実かつ迅速を決定する使用できます赤血球凝集反応、麻疹や polyomaviruses、流行性耳下腺炎、風疹14,15,16 などの容量を持つ他の各種のウイルスに対する抗体価.

<table><tbody><tr><td>25 mlの使い捨て可能な多チャンネルのピペットの貯蔵所</td><td>Integra</td><td>4312</td><td></td></tr><tr><td>8穴のPCRの管</td><td>ブランドGMBH</td><td>の781332</td><td>血清のアリコートのための</td></tr><tr><td>96の井戸のマイクロタイターの版、U字型の</td><td>TPP</td><td>92097</td><td>哺乳類のRBCsを使用する</td></tr><tr><td>96の井戸のマイクロタイターの版、V字型の</td><td>Corning Costar</td><td>3897</td><td>鳥類のRBCs</td></tr><tr><td>を使用するときHIの試金術のためアクア・アド・イニクト。Steril</td><td>Bichsel AG</td><td>1000004</td><td>インフルエンザ抗原およびコレラ濾液の調製用</td></tr><tr><td>チキン RBC (10%)</td> <td>シダーラン</td><td>CLC8800</td><td>アルセバーの溶液中のニワトリ赤血球の 10% 懸濁液</td></tr><tr><td>コレラ濾液</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8772</td><td>受容体破壊酵素 (RDE) として使用</td></tr> <tr><td>ダルベッコの PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td>血清サンプル、RBCおよび抗原の希釈用</td></tr><tr><td>Eppendorf マルチチャンネルピペット、12チャンネル、10-100 & マイクロ;l</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z683949</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf マルチチャンネルピペット、8チャンネル、10-100 &micro;l</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z683930</td><td></td></tr><tr><td>モルモット RBC (10%)</td><td>シダーラン</td><td>CLC1800</td><td>Alsever's solution</td></tr><tr><td>Influenza Anti-A/California/7/09 HA serum&nbsp;</td><td>NIBSC</td><td>14/134&nbsp;</td><td>HIアッセイでポジティブコントロールとして使用</td></tr><tr><td>インフルエンザ抗A/スイス/9715293/2013年様HA血清&nbsp;</td><td>NIBSC</td><td>14/272</td><td>HI アッセイ</td></tr><tr><td>Influenza Anti-A/Texas/50/2012-Like HA Serum&nbsp;</td><td>NIBSC</td><td>13/178</td><td>HI アッセイ</td></tr><tr><td>Influenza Anti-B/Brisbane/60/2008-HA serum&nbsp;</td><td>NIBSC</td><td>13/254&nbsp;</td><td>HIアッセイでポジティブコントロールとして使用</td></tr><tr><td>インフルエンザ抗B/マサチューセッツ州/2012年2月HA血清&nbsp;</td><td>NIBSC</td><td>13/182</td><td>HIアッセイで陽性対照として使用</td></tr><tr><td>インフルエンザ抗原A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181)&nbsp;</td><td>NIBSC</td><td>12/168</td>不<td>活化、部分的に精製されたA/California/7/09(H1N1)(NYMC-X181)&nbsp;ウイルス(約46&micro;gHA/ml)</td></tr><tr><td>インフルエンザ抗原 A/スイス/2013年9715293日 (NIB88)</td><td>NIBSC</td><td>14/254</td><td>不活化、部分的に精製された A/スイス/2013年9715293月 日 (NIB88) ウイルス (ca. 55&micro;gHA/ml)</td></tr><tr><td>インフルエンザ抗原 A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223)</td><td>NIBSC</td><td>13/112</td><td>不活化、部分的に精製された A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) ウイルス (ca. 74&micro;gHA/ml)</td></tr><tr><td>インフルエンザ抗原 B/Brisbane/60/2008</td><td>NIBSC</td><td>13/234</td><td>不活化、部分精製 B/Brisbane/60/2008 ウイルス (ca. 42&micro;gHA/ml)</td></tr><tr><td>インフルエンザ抗原 B/Massachusetts/02/2012</td><td>NIBSC</td><td>13/134</td><td>不活化、部分的に精製された B/Massachusetts/02/2012 ウイルス (ca. 35&micro;gHA/ml)</td></tr><tr><td>Serum-Tubes</td><td>S-Monovette, Sardstedt</td><td>01.1601.100</td><td>凝固活性剤による血清抽出用</td></tr><tr><td>シングルドナーヒトRBC, Type 0</td><td>Innovative Research</td><td>IPLA-WB3&nbsp;</td><td>Alsever溶液中の単一ドナーヒト赤血球の懸濁液(約26%)</td></tr><tr><td>トルコ RBC (10%)</td><td>、シダーラン</td><td>CLC1180</td><td>アルセバーの溶液中の七面鳥の赤血球の 10% 懸濁液</td></tr> リン酸<tr><td>緩衝生理食塩水 (PBS)</td><td>Gibco</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

インフルエンザ特異抗体価を定量化する最適化された赤血球凝集抑制 (hi) 試験

An Optimized Hemagglutination Inhibition (HI) Assay to Quantify Influenza-specific Antibody Titers

抗体は、インフルエンザや他の病原体に対する血清学的保護のサロゲート マーカーとして使用されます。ワクチンによる免疫を理解する前と後のワクチン接種の抗体の生産の詳細な知識が必要です。この資料では、特定のインフルエンザ抗体価を決定するための信頼性の高いポイントによってプロトコルについて説明します。最初のプロトコルでは、赤血球凝集は、2 番目のプロトコル (赤血球凝集アッセイ、HA アッセイ) その後の使用のための集中を標準化するのに必要な抗原量を指定する方法について説明します。2 番目のプロトコルでは、ひと血清・細胞培養上清 (赤血球凝集抑制法、HI 試験) のシリアル希薄を使用して異なるウイルス株インフルエンザ特異抗体価の定量について説明します。
応用例として 3 価不活化インフルエンザ ワクチンを受けた健康コホートの抗体応答を示す.また、インフルエンザ ウイルスと交差反応を示す、さまざまな種類の動物の赤い血球 (赤血球) を使用して、交差反応を最小限に抑える方法を説明しました。議論は、長所と短所提示法の特定のインフルエンザ抗体価の定量免疫のワクチン関連の理解を改善する方法を強調表示します。

前と後のワクチン接種による抗体応答をインフルエンザ A 型 H3N2 ワクチンによる抗体は 2014 年前インフルエンザ A/H1N1/カリフォルニア/2009、A/H3N2/テキサス/2012 B/マサチューセッツ/02/2012 を含む三価サブユニットの不活化インフルエンザ ワクチンを受けた 26 の健康なボランティアで評価された/2015 年のインフルエンザ シーズン。2 ワクチン接種者の代表例を図 6に示します。興味深いことに、その特定のインフルエンザ シーズン中にテキサス/2012 A/h3n2 型循環されなかったとシーズンが多少異なるウイルス株に含まれて代わりに: A、h3n2 型、スイス連邦共和国、2013。A、H3N2、テキサス州、2012 と 2013 年 A 月 H3N2/スイス連邦共和国のウイルスのヘマグルチニン 97% 順序のアイデンティティを示すし、は異なる唯一の 11 アミノ酸 (表 4参照)、その位置は<str...

示されたプロトコルでは、インフルエンザ ワクチン接種者の血清サンプルからインフルエンザ特異抗体価を定量化する赤血球凝集抑制法を実行する方法について説明します。最初のアッセイは、凝集によって最適なウイルス抗原濃度を決定します。2 番目の分析は, 血球凝集抑制によるインフルエンザ特異抗体価を定量化します。

インフルエンザ特異抗体価を定量化する最適化された赤血球凝集抑制 (HI) 試験

Antibody titers are commonly used as surrogate markers for serological protection against influenza and other pathogens. Detailed knowledge of antibody ...

この赤血球凝集抑制試験の全体的な目的は、標的とする特定のウイルスに対する抗体価を測定することです。この手法は、ワクチン学の分野において、異なる集団や様々な年齢層および患者グループにおけるワクチン介在性免疫と保護に関する重要な疑問を解決するのに役立ちます。本手法の主な利点は、精度が高く、中和抗体の存在による抗体価を迅速に決定できることです。この方法はヒトの抗体価に関する知見を得るのに有用ですが、マウス血清や培養上清などの他の系における抗体価の測定にも適用可能です。まず、96ウェルマイクロタイタープレートに適切な実験情報を記入します。次に、プレートを垂直方向に向け、マルチチャンネルピペットを使用して、最下段後方のタイトレーション行の最初のウェルを除くすべてのウェルに25 µLのPBSを加えます。調製したばかりの目的抗原溶液 50 µL を逆滴定列の最初のウェルに加え、続いて RDE 処理した血清サンプル 25 µL を上から 10 列の最初のウェルにそれぞれ加えます。陽性コントロールとして、適切な抗血清 25 µL を 11 列目の最初のウェルに加えます。その後、各列の最初のウェルから次のウェルへ 25 µL ずつ移し、2倍段階希釈を行います。希釈の各段階で10回から15回ピペッティングし、最後のウェルから25 µLを廃棄します。次に、1行目から11行目の各ウェルに抗原溶液を25 µL加え、バックタイトレーション行の各ウェルにはPBSのみを25 µL加えます。プレートの四辺を慎重に10回ずつタッピングして混合します。その後、プレートに蓋をして室温で30分間静置します。インキュベーション終了後、各ウェルに赤血球溶液を50 µL加え、再び軽くタッピングしてプレートを混ぜ合わせます。次に、もう一度プレートに蓋をし、表に記載されている使用種に応じた条件で赤血球をインキュベートします。プレートに赤血球を添加した後、アッセイに使用した血液の種類に応じた適切なインキュベーション時間を遵守してください。インキュベーション時間が短すぎても長すぎても、結果の誤った解釈につながります。インキュベーション終了後、プレートを90度傾けて25秒間保持し、凝集反応を評価します。プレートを傾けたまま、96ウェルプレートの印刷された図に各ウェルの結果を記入してください。本実験では、2015-2016年インフルエンザシーズン前に、インフルエンザA/H1N1/California/2009、A/H3N2/Texas/2012、およびB/Massachusetts/O2/2012を含む不活化3価インフルエンザワクチンを接種した健康成人ボランティア26名を対象に、ワクチン誘導抗体反応を評価した。A/H3N2/Switzerland/2013株およびA/H3N2/Texas/2012株に対する交差反応性免疫反応が観察され、インフルエンザA/H3N2/Switzerland/2013に対する幾何平均赤血球凝集抑制力価および誘導された血清保護能は、インフルエンザA/H3N2/Texas/2012と比較して有意に低かった。ワクチン接種後、A/H3N2/Switzerland/2013株はワクチンに含まれていなかったにもかかわらず、両株に対する抗体価は上昇した。ウイルスのヘマグルチニンは、種によって赤血球凝集能に差があることが示されています。注目すべき点として、モルモットの血液はインフルエンザB型で適切に凝集せず、七面鳥の血液は高タイターでの凝集能を持ち、交差反応性が低いという特性があります。この手法を習得し、適切に実施すれば、3時間以内に完了させることができます。この手順を行う際は、ウイルスの血球凝集における非特異的な阻害物質および非特異的な結合を不活性化するために、RDEを用いて血清処理することを忘れないでください。この手順に続いて、個々の病原体特異的免疫グロブリンの役割に関するさらなる疑問を解決するために、ELISAなどの他の手法を実施することができます。この技術の開発により、ウイルス免疫学分野の研究者が、異なる年齢層の健康な患者および免疫不全患者におけるワクチン関連免疫の理解をさらに深める道が開かれました。このビデオを視聴することで、インフルエンザ株特異的な抗体価を大規模に定量するための、赤血球凝集抑制試験の実施方法について深く理解できるはずです。ウイルス抗原、動物血液、およびヒト血清サンプルを取り扱うことは極めて危険であるため、この手順を実施する際は、常にBSL2ラボで作業を行うなどの予防策を講じることを忘れないでください。

an-optimized-hemagglutination-inhibition-hi-assay-to-quantify

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

シンプルなスロットブロット法は、バイオインフォマティクス解析によって同定された彼らの最も保存された配列を標的とする普遍的な抗体を用いてインフルエンザウイルスのヘマグルチニンとノイラミニダーゼの定量化のために開発されました。この革新的なアプローチは、すべてのウイルスのヘマグルチニンとノイラミニダーゼの定量に有用な代替手段を提供することがあります。...

すべてのインフルエンザA型の定量的な分析シンプルなスロットブロットアッセイでユニバーサル抗体を用いたウイルスHemagglutininsとノイラミニダーゼ

この方法は、高感度で感染マウスの気管支肺胞洗浄（BAL）液中のH1N1を検出するための赤外線染料ベースのイメージングシステムの使用方法について説明します。試験材料の&lt;10μlの体積を必要とし、複数の病原体の同時スクリーニングのための可能性を秘めている、または384ウェルプレート -...

インフルエンザウイルスのためのハイスループット検出方法

このビデオは、特定の抗原に対する血清抗体を検出するための赤血球凝集阻害アッセイを示しています。テストウェルでの赤血球凝集阻害とコントロールウェルでの赤血球凝集の確認は、明確な視覚パターンによって達成されます。このアッセイは、免疫応答、ワクチンの有効性を評価し、ウイルス学および免疫学におけるウイルス感染の研究において重要な役割を果たします。...

標的抗原に対する血清抗体を検出するためのヘマググルチン化阻害アッセイ

このビデオは、中和型インフルエンザウイルスモノクローナル抗体のエスケープバリアントを生成する手法を示しています。抗体中和ウイルス懸濁液を胚のニワトリ卵に注入し、エスケープバリアントを選択的に増殖させます。これにより、ウイルス集団は主にエスケープ変異体となり、ヘマグルチン化アッセイによって確認されました。...

中和抗体に対するインフルエンザウイルスエスケープバリアントの作製

このビデオは、血清サンプル中のインフルエンザノイラミニダーゼ(NA)阻害抗体価を測定するアッセイを示しています。NAに対する抗体を含む血清サンプルをフェチュイン被覆マイクロウェルプレートに加えます。ウイルスを添加すると、抗体はウイルスNAがフェチュインを切断してガラクトース部分を露出するのを防ぎます。次に、ペルオキシダーゼ結合レクチンを添加し、露出したガラクトースに結合します。NA阻害抗体価は、ペルオキシダーゼ基質が固定化されたレクチン結合ペルオキシダーゼによって切断されて発色する比色試験を用いて決定されます。...

インフルエンザノイラミニダーゼ阻害抗体価測定法

印刷された糖鎖マイクロアレイ戦略を使用して、従来の96ウェルプレートアッセイを小型化し、インフルエンザAウイルスのヘマグルチニンの結合性とシアル酸含有受容体の特異性を分析しました。...

インフルエンザA型ウイルスのヘマグルチニンの結合力および特異性を評価するための小型糖鎖マイクロアレイアッセイ

血清中のインフルエンザノイラミニダーゼ(NA)阻害抗体価を測定するための酵素結合レクチンアッセイ(ELLA)について説明します。このアッセイでは、ピーナッツ凝集素を使用して、フェチュインコーティングされた96ウェルプレートからNAがシアル酸を除去したときにアクセス可能になるガラクトース残基を定量します。...

酵素結合レクチンアッセイによってインフルエンザノイラミニダーゼ阻害抗体価を測定します

エスケープ中和抗体でインフルエンザ ウイルスの亜種の世代

インフルエンザ ウイルスのヘマグルチニンを対象とする抗体による Fc を介したエフェクターの機能の活性化を測定する手法を提案します。この試金は、Fc...

インフルエンザ血球凝集素抗体による Fc を介したエフェクター機能を評価する方法

インフルエンザ中和抗体は、インフルエンザ感染症の保護と関連付けてください。中和血清中和抗体価の測定し、インフルエンザのひと血清にしばしば使用します。次のインフルエンザの予防接種や感染症現代 3C.2a 3C.3a a (h3n2) ウイルス中和抗体価を測定する SIAT1 MDCK...

試金を使用して SIAT1 MDCK 細胞のインフルエンザ a (h3n2) ウイルス中和によるひと血清中の抗体を中和することを測定

この記事では、ニューカッスル病ウイルス血清学的検査のために4つの赤血球凝集ユニット抗原を調製するための簡略化された方法を紹介します。抗原の赤血球凝集力価を正確に決定し、より厳密なバック滴定法と明確に定義された調整プロセスを組み合わせることで、検査効率を高め、偽陽性を減らし、家禽の疾患監視を改善します。...

ニューカッスル病ウイルス血清学の血球凝集阻害アッセイのための抗原調製物の最適化

学ぶインフルエンザ特異抗体価の定量化法。赤血球凝集抑制試験を用いてワクチン誘導免疫を評価し、血清サンプルから中和抗体を迅速かつ正確に検出する手法を解説します。

インフルエンザ特異抗体価を定量化する最適化された赤血球凝集抑制 (HI) 試験

さらに動画を探す