Name: 新生児低酸素性虚血性脳損傷のマウス モデルにおける神経行動学的評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-24T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: 学ぶ新生児低酸素性虚血性脳損傷のマウスモデル構築法。片側頸動脈結紮術と神経行動学的評価を用いて、運動・認知機能への影響を解析し、小児脳障害の前臨床研究に応用する。

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この研究は、国立研究財団 (NRF 2014R1A2A1A11052042; 2015M3A9B4067068)、科学省と技術、韓国、韓国健康技術 R & D プロジェクト (HI16C1012)、厚生労働省からの助成金によって支えられた &福祉・韓国・延世大学医学 (6-2016-0126) の「東和」学部研究支援プログラム。

すべての動物施設評価認定の研究所動物ケア (AAALAC) 協会の認定を受けて、食べ物を与えられる (27 × 22.5 × 14 cm3) 標準的な檻の中で収容され、水を交互に 12 h/暗下で自由サイクル。著者動物保護の規則に従い、実験手順が承認された機関動物ケアおよび使用委員会の延世大学医科大学 (IACUC 号 2010-0252; 2013-0220)。
1. こんにちは新生児の脳損傷マウスモデル
<ol><li>イソフルランと子犬を麻酔します。<ol>
<li>子犬 (5 未満) を麻酔ボックスに置き、ふたを閉じる。</li>
		<li>約 15 分間; 麻酔を入れますガスとイソフルラン テーブル トップ麻酔機を使用して調整します。1.5 L/分調整麻酔導入の 3-5% にイソフルラン気化器に酸素流量を調整します。</li>
		<li>15 分後に麻酔の維持のための 1-2% にイソフルラン気化器を調整します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>解剖顕微鏡 (研究者に直面して腹部) の下で完全に麻酔をかけられた子犬を置き、テープで固定します。</li>
	<li>滅菌はさみを使って首で ~0.7-mm 切開を行います。</li>
	<li>慎重に滅菌鉗子を使用して脂肪組織を除去し、一方的な右頸動脈を公開します。</li>
	<li>5-0 吸収性縫合糸で一方的な右頚動脈を結紮します。</li>
	<li>5-0 縫合糸で首の切開部を縫合します。</li>
	<li>回復の 1 h に 37 ° C の暖かい低酸素室の中には、それぞれの子犬を配置します。商工会議所のふたは閉じないでください。</li>
	<li>手術後 1 h 子犬が完全に目を覚まし、低酸素室蓋を閉じるし、(8% O2と 92% N2) 低酸素の条件を確立するガスのレベルを減少させます。</li>
	<li>低酸素の 90 分後、子犬をケージに戻ります。</li>
	<li>こんにちは脳損傷後 1 週間は、手順 1 を繰り返します。<ol>
<li>麻酔後滅菌ハサミ鉗子右半球の後外側領域に脳の病変を識別すると、頭皮の切開を行います。 注: この治療は仔ラットの低酸素症を誘発します。存在とすべてのマウスにおける脳損傷の程度は、半透明頭蓋骨を通して肉眼で視覚的に評価されます。サイズまたは変色 (すなわち、脳障害) のボリュームにより、子犬はグループに分類されます。表示される大脳皮質損傷がない場合マウスは「大脳皮質損傷なし」グループに分類されます。可視皮質障害 (すなわち、右半球の病変) がある場合、マウスは「大脳皮質損傷」グループに分類されます。脳サンプルの形態が犠牲1,2,3の時に明確に定義されている場合、グループを変更できるマウスのグループへの分類は、術後後 1 週間を行われる、ので 4。</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55838/55838fig1v3.jpg"> 図 1: マウスの新生児のこんにちは脳損傷のモデル化。 (A) 7 日齢マウスの子犬が手術し、片側右頚動脈を結紮します。(B) 子犬は 8% O2と 92% N2で 90 分に低酸素室の中に置かれました。(C、D、および E)新生児こんにちは外傷による脳損傷の様々 な重症度を示したし、損傷の程度に基づいて分類されました。14 日に脳を入手し、病変が, 可視化されました。(C)、「ない皮質損傷」に分類される脳のイメージ。両方 (D) および (E)「大脳皮質損傷」グループに分類されました。(F、G、および H)(C) の代表的な MRI (D) および (E) マウス、それぞれ。(F) 海馬での被害は、黄色の矢印で示され、右半球の病変も (G および H) の黄色の矢印で示されます。スケール バー 1 mm =<a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55838/55838fig1v3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
2. 新生児の行動テスト
注: ここでは、行動のテストは、6 週齢で行われました。
<ol><li>
受動的回避反応タスク。 注: 学習と嫌悪刺激の回避に基づくメモリ関数を評価するには、パット ステップ 2 コンパートメントは実施13,14,15,16をする必要があります。<ol>
<li>パット装置のプレキシ ガラス シャトル ボックス (41.5 × 21 × 35 cm3) の明るい区画にマウスを配置します。</li>
		<li>後 30 秒、ギロチン ドアを開き、暗い区画に移動するマウスの遅延時間を記録 (最大 300 s)。</li>
		<li>マウスのすべての 4 つの手足が完全に暗い室内は、ギロチンのドアを閉じます。</li>
		<li>電気フット ショックを管理 (0.5 mA) 2 s と檻に戻るマウス。</li>
		<li>電気フット ショック後明るい区画 24 h でマウスを交換してください。</li>
		<li>完全に明るい区画に配置した後マウス ギロチン ドア 10 s を開き、暗い区画に移動するマウスの遅延時間を記録 (最大 300 s)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
歩行テストをはしご。 注: はしごラング歩行タスクで質的な組み合わせることにより運動機能の微妙な障害および熟練した歩行17,18の定量分析とを区別できます。<ol>
<li>ビデオ カメラをオンにします。</li>
		<li>はしごのスタート パネルにマウスを置き、すぐに録音を開始します。</li>
		<li>マウスの肢に焦点を当て、映像を記録します。</li>
		<li>マウスに触れるはしごの最後のパネルの記録を停止します。行ったり来たりの旅を 4 回繰り返します。</li>
		<li>ビデオの記録を分析し、手動で次のように各前肢の伝票の数をカウントします。<ol>
<li>低速のコンピューター上のビデオの録画 (0.1 x) と手動での手順をカウントします。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
グリップ強度テスト。 メモ: グリップ強度テストはプッシュプル ゲージを含むグリップ強度メーターを使用して実行されます。<ol>
<li>アクリル パネルにグリップ力装置を修正します。</li>
		<li>アクリル パネルにマウスを置き、しっぽを保持します。<ol>
<li>マウスがアクセスできるように、尾を持っている手とグリップ装置の金属の線を移動します。</li>
		</ol>
</li>
		<li>マウス グリップ金属ワイヤ (直径 2 mm); 三角形部分まで、複数の試験を許可します。ピーク力はグラムに装置によって自動的に登録されます。 注: 分析19,20,21の 3 つの試験の平均ピーク力を使用します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Yager, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+newborn%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Pediatr+Neurol%22%5BJournal%5D)">Animal models of hypoxic-ischemic brain damage in the newborn.</a> Semin Pediatr Neurol. 11 (1), 31-46 (2004).</li>
<li>Vannucci, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+perinatal+hypoxic-ischemic+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Rat model of perinatal hypoxic-ischemic brain damage.</a> J Neurosci Res. 55 (2), 158-163 (1999).</li>
<li>Im, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+striatal+neurogenesis+enhances+functional+recovery+in+an+adult+animal+model+of+neonatal+hypoxic-ischemic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Induction of striatal neurogenesis enhances functional recovery in an adult animal model of neonatal hypoxic-ischemic brain injury.</a> Neuroscience. 169 (1), 259-268 (2010).</li>
<li>Clowry, G. J., Basuodan, R., Chan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+are+the+Best+Animal+Models+for+Testing+Early+Intervention+in+Cerebral+Palsy%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">What are the Best Animal Models for Testing Early Intervention in Cerebral Palsy?</a> Front Neurol. 5 (258), 1-17 (2014).</li>
<li>Colver, A., Fairhurst, C., Pharoah, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+palsy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Cerebral palsy.</a> Lancet. 383 (9924), 1240-1249 (2014).</li>
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<li>Rice 3rd, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Ann Neurol. 9 (2), 131-141 (1981).</li>
<li>Lafemina, M. J., Sheldon, R. A., Ferriero, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+hypoxia-ischemia+results+in+hydrogen+peroxide+accumulation+in+neonatal+but+not+adult+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Acute hypoxia-ischemia results in hydrogen peroxide accumulation in neonatal but not adult mouse brain.</a> Pediatr Res. 59 (5), 680-683 (2006).</li>
<li>Brazel, C. Y., Rosti 3rd, R. T., Boyce, S., Rothstein, R. P., Levison, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perinatal+hypoxia%2Fischemia+damages+and+depletes+progenitors+from+the+mouse+subventricular+zone%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Perinatal hypoxia/ischemia damages and depletes progenitors from the mouse subventricular zone.</a> Dev Neurosci. 26 (2-4), 266-274 (2004).</li>
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<li>Hagberg, H., Peebles, D., Mallard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+white+matter+injury%3A+comparison+of+infectious%2C+hypoxic-ischemic%2C+and+excitotoxic+insults%5BTitle%5D)+AND+%22Ment+Retard+Dev+Disabil+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Models of white matter injury: comparison of infectious, hypoxic-ischemic, and excitotoxic insults.</a> Ment Retard Dev Disabil Res Rev. 8 (1), 30-38 (2002).</li>
<li>Wi, S., Yu, J. H., Kim, M., Cho, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Expression+of+Reprogramming+Factors+Increases+Hippocampal+Neurogenesis+and+Synaptic+Plasticity+in+Chronic+Hypoxic-Ischemic+Brain+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plast%22%5BJournal%5D)">In Vivo Expression of Reprogramming Factors Increases Hippocampal Neurogenesis and Synaptic Plasticity in Chronic Hypoxic-Ischemic Brain Injury.</a> Neural Plast. 2016 (2580837), 1-11 (2016).</li>
<li>Lu, Y., Christian, K., Lu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BDNF%3A+a+key+regulator+for+protein+synthesis-dependent+LTP+and+long-term+memory%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">BDNF: a key regulator for protein synthesis-dependent LTP and long-term memory?</a> Neurobiol Learn Mem. 89 (3), 312-323 (2008).</li>
<li>Manabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facilitation+of+long-term+potentiation+and+memory+in+mice+lacking+nociceptin+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Facilitation of long-term potentiation and memory in mice lacking nociceptin receptors.</a> Nature. 394 (6693), 577-581 (1998).</li>
<li>Alonso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BDNF-triggered+events+in+the+rat+hippocampus+are+required+for+both+short-+and+long-term+memory+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">BDNF-triggered events in the rat hippocampus are required for both short- and long-term memory formation.</a> Hippocampus. 12 (4), 551-560 (2002).</li>
<li>Seo, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Situ+Pluripotency+Factor+Expression+Promotes+Functional+Recovery+From+Cerebral+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">In Situ Pluripotency Factor Expression Promotes Functional Recovery From Cerebral Ischemia.</a> Mol Ther. 24 (9), 1538-1549 (2016).</li>
<li>Kim, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+enrichment+enhances+synaptic+plasticity+by+internalization+of+striatal+dopamine+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Environmental enrichment enhances synaptic plasticity by internalization of striatal dopamine transporters.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 36 (12), 2122-2133 (2015).</li>
<li>Lee, M. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+synaptic+activity-regulating+genes+underlying+functional+improvement+by+long-term+exposure+to+an+enriched+environment+in+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neurorehabil+Neural+Repair%22%5BJournal%5D)">Alteration of synaptic activity-regulating genes underlying functional improvement by long-term exposure to an enriched environment in the adult brain.</a> Neurorehabil Neural Repair. 27 (6), 561-574 (2013).</li>
<li>Rha, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+constraint-induced+movement+therapy+on+neurogenesis+and+functional+recovery+after+early+hypoxic-ischemic+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Med+Child+Neurol%22%5BJournal%5D)">Effects of constraint-induced movement therapy on neurogenesis and functional recovery after early hypoxic-ischemic injury in mice.</a> Dev Med Child Neurol. 53 (4), 327-333 (2011).</li>
<li>Chong, H. J., Cho, S. R., Jeong, E., Kim, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Finger+exercise+with+keyboard+playing+in+adults+with+cerebral+palsy%3A+A+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exerc+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Finger exercise with keyboard playing in adults with cerebral palsy: A preliminary study.</a> J Exerc Rehabil. 9 (4), 420-425 (2013).</li>
<li>Chong, H. J., Cho, S. R., Kim, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hand+rehabilitation+using+MIDI+keyboard+playing+in+adolescents+with+brain+damage%3A+a+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRehabilitation%22%5BJournal%5D)">Hand rehabilitation using MIDI keyboard playing in adolescents with brain damage: a preliminary study.</a> NeuroRehabilitation. 34 (1), 147-155 (2014).</li>
<li>Seo, J. H., Yu, J. H., Suh, H., Kim, M. S., Cho, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor-2+induced+by+enriched+environment+enhances+angiogenesis+and+motor+function+in+chronic+hypoxic-ischemic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor-2 induced by enriched environment enhances angiogenesis and motor function in chronic hypoxic-ischemic brain injury.</a> PLoS One. 8 (9), e74405(2013).</li>
<li>Washington, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+injury+severity+on+behavior%3A+a+phenotypic+study+of+cognitive+and+emotional+deficits+after+mild%2C+moderate%2C+and+severe+controlled+cortical+impact+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">The effect of injury severity on behavior: a phenotypic study of cognitive and emotional deficits after mild, moderate, and severe controlled cortical impact injury in mice.</a> J Neurotrauma. 29 (13), 2283-2296 (2012).</li>
<li>Cho, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astroglial+Activation+by+an+Enriched+Environment+after+Transplantation+of+Mesenchymal+Stem+Cells+Enhances+Angiogenesis+after+Hypoxic-Ischemic+Brain+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Astroglial Activation by an Enriched Environment after Transplantation of Mesenchymal Stem Cells Enhances Angiogenesis after Hypoxic-Ischemic Brain Injury.</a> Int J Mol Sci. 17 (9), 1-15 (2016).</li>
<li>Tsuji, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+reproducible+model+of+neonatal+stroke+in+mice%3A+comparison+with+a+hypoxia-ischemia+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">A novel reproducible model of neonatal stroke in mice: comparison with a hypoxia-ischemia model.</a> Exp Neurol. 247, 218-225 (2013).</li>
</ol>

著者は競合する興味を持ってないです。

本研究では、HI P7 10 CD-1 マウスの新生児脳障害し、関連する認知およびモーター欠損で脳障害を識別しました。この中に、片側の右頚動脈の閉塞は重要でした。この手順で動脈を破損し、破れたでした。動脈涙を経験したほとんどの子犬が死亡しました。逆に、研究者は、一方的な右頚動脈ではなく別の血液静脈を結紮、子犬の脳は少しだけ破損しているし、重要な表現が認められなかった24。
マウスと性病変の容積、脳の変化のため、本研究ではいくつかのグループ (図 1 C H) に分類されました。軽度の負傷した頭脳を持ついくつかのマウスは、海馬と皮質領域 (図 1 f)13のない被害を受けた。逆に、右半球と皮質のほとんどを失ったが厳しくひどく傷つけられた頭脳を持ついくつかのマウスには、(図 1 と H) が破損しています。したがって、研究する必要があります手順19</su...

幼い頃 (約 1,000 人の子供あたりの 2 人の患者)1,2,3,4,5中に新生児のこんにちは脳損傷が発生します。新生児こんにちは脳損傷に関する研究が重要であり、確立された新生児こんにちは脳損傷マウス モデルを用いた体内こんにちは脳損傷の臨床研究を促進できます。
ラット6従来の HI モデルが使用されます。新生児モデルの米ヴァンヌッチ メソッドは P7 ラット7,8よく使用されます。ただし、ラットおよびマウスなのでわずかに異なる9,10、にもかかわらず両方の齧歯動物を行った修正米ヴァンヌッチ法 P7-10 P7 10 ある期間であることを示した前の研究を基に CD 1 子犬の特徴未熟なオリゴデンドロ サイト、人間用語 P011,12に対応します。新生児のこんにちのマウスモデルは P7 10 子犬の両方一側内頚動脈の結紮とマウスの 8% の酸素と低酸素への露出によって確立されます。
マウス右半球の後外側領域にさまざまな脳の病変の程度を示したプロシージャに服従します。認知およびモーター欠損、PAT に基づく神経行動学的評価を識別し、はしごの歩行テスト、およびグリップ強度テストを行った。非運営 (すなわち、通常) とこんにちはマウスとの違いを分析しました。この作品は、HI マウス モデルに関する基本的な情報を示します。MRI 画像は、運動と認知機能テストを使用して脳の損傷の重症度に応じて、分離、異なった表現型を示しています。

<table><tbody><tr><td>低酸素</td><td>チャンバーJeung Do Bio &Plant Co</td><td>Experimental Builder</td><td></td></tr><tr><td>PAT装置</td><td>Jeung Do Bio &Plant Co</td><td>Experimental Builder</td><td></td></tr><tr><td>はしごの横木を歩く</td><td>Jeung Do Bio &Plant Co</td><td>Experimental Builder</td><td></td></tr><tr><td>SDIグリップ強度システム</td><td>San Diego Instruments Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>握力計</td><td>Ugo Basile</td><td>47200</td><td></td></tr><tr><td>Harvard Apparatus Fluovac 麻酔システム&nbsp;</td><td>ハーバード大学 装置</td><td></td><td></td></tr>用<tr><td>麻酔ボックス</td><td></td><td></td><td>アクリルボックス</td></tr><tr><td>I-フランリキッド(イソフルオラン)</td><td>ハナファーマ株式会社</td><td></td><td>全身麻酔薬(イソフルラン100ml)</td></tr><tr><td>CD-1マウス</td><td>オリエント株式会社</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ブルーナイロンモノ非吸収性縫合糸5-0 50cm</td><td>Ailee Co., Ltd.</td><td>NB 521</td><td></td></tr><tr><td>IBM SPSS Statistics</td><td>IBM</td><td>Ver. 23</td><td></td></tr></tbody></table>

新生児低酸素性虚血性脳損傷のマウス モデルにおける神経行動学的評価

Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury

CD-1 マウス新生児低酸素性虚血性 (HI) モデルを作成するに一側内頚動脈閉塞を実施し、に比べて非操作 (つまり、これらのマウスの神経行動学的機能を研究することによって新生児こんにちは脳損傷の効果を調査通常の) マウス。調査中, 米ヴァンヌッチ メソッドは生後 7-10 (P7-10) マウスの新生児のこんにちは脳の損傷を誘導するために使用されました。こんにちは操作は、一方的な頚動脈結紮と低酸素症 (8% O2と 90 分の 92% N2 ) への露出によって、子犬に実行されました。術後、1 週間破損した脳半透明頭蓋骨を通して肉眼で評価され、不在 (「大脳皮質損傷なし」グループ) や大脳皮質損傷の存在 (「大脳皮質損傷」グループ) に基づくサブグループに分類されました。など右半球の病変。週 6、認知・運動機能を評価する以下の神経行動学的検査を行った: 受動的回避反応タスク (PAT)、はしご歩行テスト、およびグリップ強度テスト。これらの行動テスト新生児こんにちは脳損傷の影響を決定する上で有用ですが、その他の神経変性疾患のマウス ・ モデルで使用されます。本研究では、新生児こんにちは脳損傷マウスは右半球損傷に対応したモーターの赤字を示した。行動テスト結果、脳性麻痺または新生児脳梗塞など、人間の新生児こんにちは患者にみられる欠損に関連します。この研究では、新生児のこんにちは脳損傷のマウス モデルは運動障害と非操作マウスに比べて認知障害の程度が異なるを示したおよび設立されました。この作品は、こんにちマウス モデルの基本情報を説明します。MRI 画像は、運動と認知機能テストで脳の損傷の重症度に応じて区切られた異なる表現型を示しています。

すべてのデータは、平均値 (SEM) の平均 ± 標準誤差として表されます。独立した、またはtを使用して 2 つのグループ間の変数の比較を行った-SPSS の統計ソフトウェアのテストします。P-値 < 0.05 は、統計的に有意と考えられていた。
新生児こんにちは外傷による脳損傷の別の重要度を示したし、それに応じて分類された (図 1E)。脳が、14 週で得られたし、病変が, 可視化されました。図 1は、脳の「大脳皮質損傷ない」脳、図 1のように分類、軽症に分類される脳、図 1E損傷脳を示していますを示しています。軽度の (D) と (<stron...

生後に一側内頚動脈閉塞を行った 7 10 CD-1 マウス新生児低酸素性虚血性 (HI) モデルを作成する子犬とこんにちは脳損傷の効果を検討しました。非運営正常なマウスと比較してこれらのマウスの神経行動学的機能を検討した.

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI ...

新生児低酸素虚血性脳損傷手術およびそれに続く認知・運動機能テストの全体的な目的は、このような損傷および関連する脳損傷を研究するためのマウスモデルを構築することです。この手法により、新生児低酸素虚血性脳損傷が運動機能や認知機能にどのような影響を与えるかといった、重要な疑問に対する答えを得ることができます。この技術の主な利点は、広く知られており、一般的に用いられていることです。これは、脳性麻痺および新生児脳卒中の前臨床モデルでもあります。一般的に、この手法に慣れていない方は、右側の単一頸動脈の特定が困難であるため、苦労することがあります。私とともに、当研究室の大学院生であるYoon-Kyum Shinがこの手順を実演します。少なくとも5匹のP7マウス幼仔を麻酔にかけた後、幼仔を解剖顕微鏡の下に腹側を上にして配置します。次に、頸部をアルコールで清浄します。手術を開始するために、はさみを使用して頸部に0.7 mmの切開を加えます。次に、ピンセットを用いて脂肪組織を慎重に除去し、右総頸動脈を露出させます。続いて、5-0 縫合糸を用いて右総頸動脈を結紮します。その後、頸部の切開部を 5-0 ナイロンで縫合し、切開部を滅菌します。その後、蓋を開けた状態で37°Cの低酸素チャンバー内に幼マウスを入れ、約1時間回復させます。手術操作を行った別のマウスを低酸素チャンバーに入れて回復させます。すべての幼マウスが完全に覚醒したら、チャンバーの蓋を閉め、ガス濃度を下げて低酸素状態を確立します。90分間の低酸素状態の後、脳損傷させた仔マウスをケージに戻します。1週間後、以前と同様に仔マウスの手術準備を行い、損傷の根拠を確認します。頭皮を切開し、右半球の後外側領域にある脳病変を特定します。半透明の頭蓋骨を通して、皮質損傷および海馬損傷の証拠があるかを確認します。これにより、仔鼠を損傷群または非損傷対照群に分類します。確認後、縫合糸で頭皮を閉じ、切開部を滅菌します。マウスが6週齢になったとき、嫌悪刺激の学習と回避に基づいた記憶力の評価を行います。このタスクには、市販の2室式ステップスルー受動回避装置を使用します。まず、マウスをボックスの明室に30秒間入れます。次に、コンパートメント間の扉を開き、動物が暗いコンパートメントに入るまでの潜時を記録します。タスクの遂行には最大300秒まで時間を設けてください。マウスの4肢すべてが完全に暗いコンパートメントに入ったら、扉を閉めます。次に、1/2 mAの電気足ショックを2秒間与え、マウスをケージに戻します。24時間後、テストを繰り返します。今回は、マウスが暗室に移動するまで300秒間十分に時間を設け、ショックは与えないでください。6週齢のマウスに対してラダーウォーキングテストを行い、定性的および定量的な分析の両方を用いて、運動機能のわずかな障害を識別します。まず、ラダー装置を設置し、次に装置上のマウスの肢の動きを記録するためのビデオカメラを設置します。次に、マウスをスタートパネルに置き、ビデオカメラで録画を開始します。ビデオで脚部がはっきりとフォーカスされていることを確認してください。マウスがラダー装置の最後のパネルに到達したら、録画を停止します。その後、マウスをスタートパネルまで戻し、装置を横切る様子を再度録画してください。各試験日に、マウス1匹につき合計4回ずつこれを行います。後でビデオを解析する際、ビデオを1/10の速度で再生しながら、各肢で発生したスリップの回数を手動でカウントします。肢が棒の間で滑った場合をスリップと定義します。マウスが6週齢になったら、握力を測定します。パネルに固定された直径2 mmの三角ワイヤーに、プッシュ/プル型ストレインゲージを取り付けて使用します。マウスの尾を保持してパネル上に配置してください。次に、マウスの前肢が金属ワイヤーに届くようにします。マウスがワイヤーを掴んだらすぐに、手を離すまで尾をそっと引っ張ります。装置は、ワイヤーに加わった最大筋力をグラム単位で記録します。マウスを休ませる前に、この試験を5回繰り返します。握力試験中には、正確な動作が顕著に現れます。マウスを少なくとも1分間休ませて筋疲労を軽減させる前に、5回の試行を通じてそれらの動作を確認してください。マウスを少なくとも1分間休ませた後、5回の一連の試行を再度繰り返します。次に、さらにマウスを休ませ、その試験日の最後の一連の試行を行います。得られたデータから、片方の前肢または両方の前肢のいずれかについて、上位3つのスコアの平均を分析に使用します。14週齢の低酸素虚血損傷動物から脳を採取した後、形態学的に評価し、皮質損傷なし、軽度損傷、または重度損傷に分類しました。同じ動物を1週間前にMRIでスキャンしており、そこでも非常に顕著な結果が得られていました。形態学的に正常であった脳でさえ、海馬に軽度の損傷が認められました。生後6週（受傷後5週）において、マウスを用いてさまざまな行動課題による評価を行いました。低酸素虚血性脳損傷を受けたマウスは、24時間受動回避課題において認知機能の低下を示しました。また、右半球のみが損傷していたため、マウスには片麻痺的な運動機能障害が見られました。これは、各前肢における梯子の横桟での滑り発生率の差によって明らかになりました。さらに、握力は脳の運動皮質が関与するため、正常群と皮質損傷群の間で握力に差が見られました。正常対照群とカテゴリー的に非損傷のマウスとの間には差は認められませんでしたが、損傷マウスでは明らかに機能低下が認められました。このビデオを視聴することで、新生子マウスの低酸素虚血モデルを作成するための右総頸動脈の一側結紮法と、その後の行動解析の手順について十分に理解できるはずです。重要な点として、損傷から7日後に皮質脳に目に見える損傷が認められない場合でも、MRIでは海馬の損傷が検出される可能性があることに注意してください。また、幼若マウスを慎重に扱い、手術を可能な限り迅速に完了させることが重要です。幼獣の皮膚は非常に弱く薄いため、細心の注意を払ってください。

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低酸素性虚血性脳損傷のための出生後のラットのモデルは、ヒト新生児低酸素性虚血性脳症（HIE）の十分に確立されたモデルです。この記事では、出生後の仔ラットのHIEのモデルについて説明します。...

周産期虚血低酸素虚血性脳症モデル

我々は、脳室周囲白質軟化症（PVL）、脳室周囲白質病変を特徴と未熟児で優勢な脳損傷のマウスモデルを確立した。全身感染症有/無低酸素/虚血は、PVLの主な原因です。リポ多糖注入なし/付き片側頸動脈結紮及び低酸素曝露がP6マウスのPVL様病変を作成します。...

脳室周囲白質軟化症のマウスモデル

このビデオは、新生児の低酸素虚血性脳損傷を研究するためのマウスモデルを作成する手順を示しています。これは、虚血を外科的に誘発し、動物を低酸素症にさらして脳の損傷を悪化させるための手順を概説しています。最後に、結果として生じる脳病変を評価し、マウスモデルがさらなる科学的研究のために準備されていることを確認する方法を示します。...

新生児低酸素性虚血性脳損傷のマウスモデルの確立

出典:Ouyang, Y., et al. マウス脳低酸素虚血中のPET/MRI同時イメージング。J. Vis. Exp.

脳低酸素虚血による脳損傷のマウスモデルにおけるイメージング

周産期の窒息後の低酸素性虚血性脳症は、動物モデルを使用して研究することができます。新生児低酸素性虚血性脳症の子豚モデルを確立するために必要な手順を示します。...

新生児低酸素性虚血性脳症の子豚モデル

Presentedは、マウスの新生児運動テストの簡潔なバッテリーです。これらの検査を使用すると、新生児の運動障害をさまざまな新生児の運動障害で実証できます。標準化された一連のテストを持つことで、異なる研究の結果を比較することができ、グループ間でより適切で正確なレポートを作成することができます。...

脳性麻痺の新生児マウスモデルにおける運動テストのバッテリー

私たちは、シリコーンコーティング縫合糸を使用して、中大脳動脈の閉塞によって誘発される脳卒中のマウスモデルを記述します。このプロトコルは、永久的な閉塞または一時的な虚血を誘発し、続いて再灌流を誘発するために適用することができます。...

梗塞エリアの中央動脈閉塞技術と可視化を使用したマウスにおける虚血性脳卒中および虚血 - 再灌流の誘導

本稿では、低酸素虚血を起こす新生児マウスにおける複数の深度電極を用いた連続的なビデオEEG記録の方法を説明する。...

新生児マウスにおける低酸素虚血期における連続映像脳波

小児脳震盪は、生理学的および心理的な摂動を伴う長期的な後遺症を引き起こす可能性があります。この小児脳震盪マウスモデルは、長期的な神経炎症、白質の変化、および行動機能障害を伴うニューロンの変化をもたらします。このモデルは、影響の異なる場所や脳震盪の繰り返しに適合させて、寿命の変化を評価できます。...

マウスの小児脳震盪モデル:長期障害を伴う閉鎖性頭部外傷(CHILD) 

ここでは、新生児マウスをさまざまな酸素濃度の制御された環境で送達することにより、低酸素症を誘発するプロトコルを紹介します。出生時に酸素変動を受けたマウスモデルは、自閉症などの行動表現型変化の誘導に関与するmiRNAの発現を永続的に変化させています。...

低酸素症は、マウスの自閉症スペクトラム障害の非メンデル遺伝に関与するmiRNAレベルを変化させます

学ぶ新生児低酸素性虚血性脳損傷のマウスモデル構築法。片側頸動脈結紮術と神経行動学的評価を用いて、運動・認知機能への影響を解析し、小児脳障害の前臨床研究に応用する。

新生児低酸素性虚血性脳損傷のマウスモデルにおける神経行動学的評価

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