Name: ペプチドマイクロアレイによるヒストン抗体特異性の解析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: 学ぶペプチドマイクロアレイを用いたヒストン抗体特異性プロファイリングの統合パイプライン。Array Ninjaソフトウェアを活用し、クロマチン生化学研究における抗体の品質管理とエピジェネティクス実験の信頼性向上に貢献する。

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この研究は、部分的には、Van Andel Research Instituteによって支援され、国立衛生研究所（CA181343）からSBR

著者は何も開示することはない。

生物医学研究用途における抗体の信頼性が最優先事項46、47です。これは、ヒストンPTMの存在量および分布を特徴付けるために開発された技術の大部分のための重要なツールとしての抗体の位置を考慮すると、クロマチン生化学において特に当てはまります。ここに示されたプロトコルは、ヒストンPTM抗体特異性を分析するためのペプチドマイクロアレイの設計、製作、および使用のための最適化されたパイプラインを詳述している。このパイプラインは、市販されている広く普及しているヒストンPTM抗体をスクリーニングするために使用されており、これらの実験から生成されたデータは、オンラインおよび拡大Histone Antibody Specificity Database（www.histoneantibodies.com） 17を通じて自由に入手できます。 我々および他者の研究から明らかなように、ヒストンPTM抗体の不都合な行動の頻繁な例があり、これは解...

ゲノムDNAは、ヒストンタンパク質を含む真核細胞の核内にエレガントにパッケージングされ、クロマチンを形成する。クロマチンの反復サブユニットはヌクレオソームであり、これはヒストンタンパク質の八量体コア（H2A、H2B、H3、およびH4 1）のまわりに包まれた147塩基対のDNAからなる。クロマチンは、ゆるやかに詰まったユークロマチンおよび密に詰まったヘテロクロマチンドメインに広く組織されている。クロマチン圧縮の程度は、複製、転写、および修復のような基本的なDNA鋳型プロセスを実行するために、タンパク質機械が根底にあるDNAにアクセスできる程度を調節する。 クロマチンの文脈におけるゲノムアクセシビリティの重要な調節因子は、ヒストンタンパク質2、3の構造化されていない尾とコアドメイン上のPTMです。ヒストンPTMは、クロマチン4の構造に直接的に作用し、間接的に作用する染色体リモデリング、酵素的および足場活性を有するリーダータンパク質および関連する巨大分子複合体の動員5 。過去20年にわたるヒストンPTM機能の研究は、これらのマークが細胞運命、生物発達、および疾患の開始/進行の調節において重要な役割を果たすことを圧倒的に示唆している。質量分析に基づくプロテオーム技術の進歩により、80以上の異なるヒストン残基に20以上のユニークなヒストンPTMが発見されました6 。注目すべきことに、これらの修飾は、しばしば組み合わせで発生し、「ヒストンコード」仮説と一致して、多くの研究は、リーダタンパク質がヒストンのPTM 7、8、9の特定の組み合わせの認識を介してクロマチンの別個の領域を標的とすることを示唆しています。重要な課題は、関数をgrに割り当てることですヒストンPTMの特定の組み合わせがどのようにしてクロマチンに関連する動的機能を調整するかを決定することができる。 抗体は、ヒストンPTMの検出のためのリンチピン試薬である。このように、クロマチン生化学研究に使用するために、1,000を超えるヒストンPTM特異的抗体が商業的に開発されている。ハイスループットDNA配列決定技術の急速な発展に伴い、これらの試薬は、チップ配列の個々の研究者および大規模エピゲノミクス「ロードマップ」の取り組み（ 例えば 、ENCODEおよび青写真）によって広く使用されている（次世代シークエンシングと結合クロマチン免疫沈降）パイプラインヒストンPTM分布ゲノムワイド10、11の高解像度空間マップを生成します。しかし、最近の研究により、ヒストンPTM抗体の特異性は非常に可変であり得、これらの試薬は非<html>特定の残基に変更順序を識別ようなオフターゲットエピトープ認識、隣接のPTMによる強い正および負の影響、及び困難としてavorable特性（ 例えば 、モノ- 、ジ- 、またはトリ-メチルリジン）12、13、14、15 、16、17、18。したがって、これらの貴重な試薬で生成されたデータを正確に解釈するには、ヒストンPTM特異的抗体試薬の厳密な品質管理が必要です。 マイクロアレイ技術は、ハイスループットで、再現性があり、かつ小型化されたフォーマットで、何千もの高分子相互作用の同時検査を可能にする。このため、マイクロアレイプラットフォームの様々なタンパク質-DNA 19を分析するために作成されています、「&gt; 20、タンパク質-タンパク質21、及びタンパク質-ペプチド相互作用22。実際、ヒストンペプチドマイクロアレイは消しゴム、作家のハイスループットプロファイリングを可能にする、クロマチン生化学研究のための有益な発見プラットフォームとして浮上し、そしてヒストンのPTM 15の読者ました、23、24、またヒストン抗体特異性17、25の分析のため。クロマチンとエピジェネティクス研究におけるそれらの用途を超えて、ヒストンペプチド配列は、抗全身性エリテマトーデスおよび他の自己免疫疾患の診断/予後診断検査としての潜在的有用性を有しますクロマチン自己抗体は26、27を生成しています。 ここでは、設計、製造、および開発のために開発した統合パイプラインについて説明しますヒストンおよびそれらのPTMを認識する抗体の特異性プロファイルを生成するためにヒストンペプチドマイクロアレイをライニングする。このパイプラインは、我々が最近開発したオープンソースのインタラクティブなソフトウェアアプリケーションであるArrayNinjaによって容易にされ、マイクロアレイ実験の設計と解析段階を統合している28 。 ArrayNinjaはGoogle Chromeで最適に動作します。簡単に述べると、ロボット接触マイクロアレイプリンターを用いて、ストレプトアビジン被覆ガラス顕微鏡スライド上の規定された位置にビオチン結合ヒストンペプチドのライブラリーを沈着させる。次いで、抗体 - エピトープ相互作用を調べるために、競合的および並行アッセイ形式でアレイを使用することができる（ 図1 ）。ペプチドライブラリーは、PTM（リジンアセチル化、リシン/アルギニンメチル化、およびセリン/スレオニンリン酸化）を単独で、プロテオミクスデータセットに主に由来する関連する組み合わせを有する何百ものユニークな合成ペプチドからなる。ペプチド合成および検証のための方法<html>他の場所で詳述されている23 。このアレイプラットフォームを利用した、現在行われているヒストンPTM抗体スクリーニングの取り組みから得られたデータは、公開されているWebリソース、Histone Antibody Specificity Database（www.histoneantibodies.com）に保存されています。注目すべきことに、このプロトコルのバリエーションで製造ヒストンペプチドマイクロアレイはまた、ヒストンPTMリーダードメイン8、29、30、31、32、33、34、35、36、37の活性を特徴づけるために広く使用されており、より最近ヒストンをプロファイルしますPTMライターと消しゴムの活動24 。 /files/ftp_upload/55912/55912fig1.jpg &quot;/&gt; 図1：ヒストンペプチドマイクロアレイ上の抗体スクリーニングのための段階的手順の漫画の描写。定義された翻訳後修飾（赤色および青色の円）を有するビオチン化ヒストンペプチドを、ストレプトアビジン被覆ガラス上のビオチン - フルオレセインと同時プリントする。陽性の相互作用は、赤色蛍光として視覚化される。 <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55912/55912fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。</a>

<table><tbody><tr><td>印刷</td><td>バッファーArrayIt</td><td>PPB</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Omnipure</td><td>2390</td><td></td></tr>スト<tr><td>レプトアビジンコーティングガラス顕微鏡スライド</td><td>Greiner Bio-one</td><td>439003-25</td><td></td></tr>ポリプロピレン<tr><td>384ウェルプレート</td><td>Greiner Bio-one</td><td>784201</td><td></td></tr><tr><td>Biotin-fluorescein</td><td>Sigma</td><td>53608</td><td></td></tr><tr><td>接触マイクロアレイプリンター</td><td>Aushon</td><td>2470</td><td>Aushon 2470 マイクロアレイプリンター</td></tr><tr><td>接触マイクロアレイプリンター</td><td>遺伝子マシン</td><td>OmniGrid 100</td><td>OmniGridマイクロアレイプリンター</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>ブロッキングバッファー</td><td>ArrayIt</td><td>SBB</td><td></td></tr><tr><td>疎水性ワックスペン</td><td>ベクターラボ</td><td>H-4000</td><td>ImmEdge 疎水性バリア PAPペン</td></tr><tr><td>シリコンガスケット</td><td>Grace Bio-labs</td><td>622511</td><td></td></tr><tr><td>Hybridization Vessel</td><td>Thermo Scientific</td><td>267061</td><td>or similar vessel</td></tr><tr><td>Fluorescent-dye conjugated secondary antibody</td><td>Life Technologies</td><td>A-21244</td><td>Alexa Fluor 647 (anti-rabbit)</td></tr><tr><td>蛍光色素標識二次抗体</td><td>Life Technologies</td><td>A-21235</td><td>Alexa Fluor 647 (anti-mouse)</td></tr><tr><td>ワックスインプリンタ</td><td>ArrayIt</td><td>MSI48</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Omnipure</td><td>9490</td><td></td></tr><tr><td>マイクロアレイ スキャナー</td><td>Innopsys</td><td>InnoScan 1100AL</td><td>または同等のマイクロアレイ</td></tr><tr><td>スキャナー EipTitan ヒストン ペプチド マイクロアレイ</td><td>エピサイファー</td><td>112001</td><td></td></tr><tr><td>AbSurance Pro ヒストン ペプチド マイクロアレイ</td><td>ミリポア</td><td>16668</td><td></td></tr><tr><td>MODified ヒストンペプチドアレイ</td><td>アクティブモチーフ</td><td>13001</td><td></td></tr><tr><td>ヒストンコード ペプチドマイクロアレイ</td><td>JPT</td><td>His_MA_01</td><td></td></tr><tr><td>ワックス</td><td>ロイヤルオーク</td><td>ガルフワックス</td> イン<td>プリンター用</td>ワックス</tr><tr><td>加湿マイクロアレイ スライド ハイブリダイゼーション チャンバー</td><td>VWR</td><td>97000-284</td><td></td></tr><tr><td>ハイスループット顕微鏡 スライド洗浄チャンバー</td><td>ArrayIt</td><td>HTW</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡スライド遠心分離機</td><td>VWR</td><td>93000-204</td><td></td></tr><tr><td>抗体 1</td><td>Abcam</td><td>8898</td><td></td></tr><tr><td>抗体 2</td><td>Millipore</td><td>07-473</td><td></td></tr><tr><td>ビオチン化ヒストンペプチド</td><td>EpiCypher</td><td>12-0001</td><td>ペプチドの例。さまざまな修飾を付与した類似のペプチドは、いくつかの市販の供給源から入手可能です。</td></tr><tr><td>ImageMagick</td><td></td><td></td><td>https://www.imagemagick.org/script/index.php</td></tr><tr><td>ArrayNinja</td><td></td><td></td><td>https://rothbartlab.vai.org/tools/</td></tr></tbody></table>

ペプチドマイクロアレイによるヒストン抗体特異性の解析

Analysis of Histone Antibody Specificity with Peptide Microarrays

ヒストンタンパク質の翻訳後修飾（PTM）は、クロマチン構造および遺伝子発現の調節におけるそれらの役割について広く研究されている。ヒストンPTMに特異的な抗体の大量生産および分布は、これらのマークの研究を非常に容易にした。ヒストンPTM抗体は多くのクロマチン生化学アプリケーションにとって重要な試薬であるため、正確なデータ解釈と現場での継続的な進歩には抗体特異性の厳密な解析が必要です。このプロトコルは、ヒストン抗体の特異性をプロファイリングするためのペプチドマイクロアレイの設計、製作および使用のための統合されたパイプラインを記載している。この手順の設計と分析の側面は、マイクロアレイ印刷フォーマットのカスタマイズを合理化するために最近開発したオープンソースのインタラクティブなソフトウェアパッケージであるArrayNinjaによって容易になります。このパイプラインは、市販されて広く使用されている多数のヒストンPTM抗体のスクリーニングに使用されているこれらの実験から生成されたデータは、オンラインおよび拡大Histone Antibody Specificity Databaseを通じて自由に入手できます。ヒストンを越えて、本明細書に記載の一般的な方法論は、PTM特異的抗体の分析に広く適用することができる。

このプロトコルは、ヒストンPTM抗体特異性の分析のためのペプチドマイクロアレイプラットフォームを設計し、製造するために使用されてきた。このアレイは、コアおよびバリアントヒストンタンパク質38に見られるPTMの既知の組み合わせの多くを表す、300を超える独自のペプチド機能（長さ20〜40残基）のライブラリを照会します38 。このパイプラインは、広く使用され、市販されているヒストンPTM抗体のスクリーニングに役立ち、Histone Antibody Specificity Database（www.histoneantibodies.com）で完全なデータセットが入手可能です。 17 当社のパイプラインのバックボーンは、マイクロアレイ作品28の計画と分析段階を統合しA...

この原稿では、ヒストンとその翻訳後修飾を認識する抗体の特異性プロファイリングにペプチドマイクロアレイ技術を適用する方法が記載されています。

Post-translational modifications (PTMs) on histone proteins are widely studied for their roles in regulating chromatin structure and gene expression. The ...

このビデオの目標は、ヒストン抗体の特異性をプロファイリングするためのペプチドマイクロアレイの設計、製造、および使用のための統合パイプラインについて説明することです。ヒストンとその多様な翻訳後修飾を認識する抗体は、クロマチン生化学研究における重要な試薬です。これらのツールを頼りに、ヒストン修飾機能についての理解を深めています。最近の研究では、ヒストン抗体の挙動に一貫性がないことが明らかになっています。エピジェネティクス実験では抗体の選択が最も重要な要素であるため、これらの試薬には精力的で包括的な品質管理対策が求められています。ここでは、ヒストンとその翻訳後修飾を認識する抗体の特異性プロファイルを生成するためのペプチドマイクロアレイの設計、製造、分析のために開発した統合パイプラインを実演します。このパイプラインは、当社が開発したオープンソースのインタラクティブソフトウェアアプリケーションであるArray Ninjaによって促進され、マイクロアレイ実験の設計段階と解析段階を統合します。アレイスライドの設計を開始するには、「スライドレイアウトの計画」見出しの下で、使用するマイクロアレイプリンターを選択します。次に、ロードプレートフィールドにemptyと入力し、Enterキーを押します。スポット径を 275 マイクロメートルに、スポット間隔を 100 マイクロメートルに設定します。残りのパラメータを実験に適切に入力し、レイアウトで十分な反復が可能になるようにします。表示されるレイアウトプレビューで、スライド上の各固有のペプチドフィーチャーにマウスを合わせ、ポップアップテキストボックスにフィーチャー識別子を入力します。各一意のフィーチャにラベルが付けられたら、[入力] をクリックします。スライド レイアウトに名前を付け、[プレートのコミット] をクリックしてレイアウトを保存し、ソース プレートの各フィーチャの物理的な位置にマップを生成します。ソースプレートマップに導かれて、各ペプチドフィーチャーの1〜2マイクロリットルを1つ以上の384ウェルの指定されたウェル、小容量プレートにロードし、各フィーチャーを1xタンパク質マイクロアレイ印刷バッファーで10倍に希釈し、1%ウシ血清アルブミンと1マイクロリットルあたり5マイクログラムのフルオレシン標識ビオチンを添加します。次に、プレートを室温で500 x Gで2分間遠心分離します。次に、マイクロアレイプリンターで廃棄物容器を空にします。洗浄した溶液を加湿器容器に滅菌蒸留水を入れます。マイクロアレイプリンターソフトウェアにアレイスライドパラメータを入力します。洗浄手順を1回の浸漬で1秒の洗浄に設定し、ポスト洗浄してピンを5回再浸し、湿度を60%にした後、コーティングされたスライドガラスを基板の白金に挿入します。プラチナをプラチナエレベーターに積み込みます。ソースプレートをプレートホルダーに挿入し、ホルダーをソースプレートエレベータにロードします。印刷プロセスを実行してから、基板のプラチナを機器から取り外します。1x protein microarray blocking bufferで30分間、振とうしながらプリントしたスライドをブロッキングします。次いで、スライドを室温で洗浄し、pH 7.6リン酸緩衝生理食塩水で10分間洗浄する。新しいPBSのバッチで洗浄を繰り返します。スライドを室温で30秒間遠心分離して乾燥させます。次に、マイクロアレイワックスインプリンターを摂氏85度で30分間、またはワックスが溶けるまで予熱します。次に、スライド印刷面を下にしてホルダーに挿入し、ホルダーをインプリンター金型に合わせます。金型をスライドに接触させて2秒間保持した後、スライドをホルダーからすばやく取り外し、ワックスの境界を検査して、アレイが適切に密閉されていることを確認します。仕切られたスライドは、摂氏4度で乾燥した暗い場所に保管します。ハイブリダイゼーション手順を開始するには、分割されたアレイスライドをプラスチック皿に置き、スライドをハイブリダイゼーションバッファーで覆います。スライドを摂氏4度で30分間平衡化し、低速で振とうします。室温でマイクロアレイスライド遠心分離機で回転させてスライドを乾燥させます。次に、各ヒストンPTM抗体溶液5マイクロリットルをアレイの少なくとも2つのウェルに加え、摂氏4度で1時間インキュベートします。インキュベーション後、抗体溶液を取り出し、アレイを冷PBSで4°Cで5分間ずつ3回洗浄します。次に、蛍光色素標識二次抗体溶液でアレイをインキュベートします。光が当たらない状態で、摂氏4度で30分間。前と同じように、スライドを冷たいPBSで3回洗います。アレイを室温の0.1x PBSに浸して余分な塩分を取り除き、室温で短時間の遠心分離によりスライドを乾燥させます。マイクロアレイスキャナーで、少なくとも25ミクロンの解像度でスライドを画像化します。解析を開始するには、画像処理ソフトウェアを使用して、マイクロアレイスキャナーからのシングルチャンネルファイルをマージします。次に、Array Ninjaを開き、画像ヘッダーを定量化するために、下にある適切なマイクロアレイプリンターを選択します。[ロード プレート]ダイアログ ボックスに同じスライド レイアウトの名前を入力し、[Enter]を押します。マージされた画像ファイルをロードし、必要に応じてコントラスト、明るさ、中間点を調整します。アレイスキャナーの解像度を入力し、上余白と余白を調整して、スライドレイアウトグリッドを画像に合わせます。ウェルのセットを反復として解析したり、その他の選択的解析を実行したりするには、iPin、jPin、および subA フィールドにウェル座標を入力し、Enter キーを押します。クリックするとズームが切り替わり、カーソルの下の領域の拡大画像が表示されます。次に、[スポット シーク] をクリックして、プロセスが終了するのを待ちます。必要に応じてシーク関数を繰り返して、グリッド円を配列スポットの中央に配置します。参照スポットはRキーを押すことで選択でき、スポットにカーソルを合わせた状態でAキーを押すと、破片や広くベアリングの形態を示すスポットを非アクティブ化できます。バックグラウンドリファレンススポットを選択し、細孔形態または汚染のあるスポットを非アクティブ化したら、[Populate]をクリックし、続いて[submit]をクリックして定量化を実行します。棒グラフと表が新しいページに表示されます。2つのヒストンPTM抗体の結合特異性をこの方法を用いて評価しました。ヒストンH3上のトリメチル化リジン9を標的とするように設計されたヒストンPTM抗体も、他の3つのトリメチル化リジン基に結合することがわかりました。隣接するリジン残基のシリル化は、H3に対するリジン9の標的化にプラスの影響を与えることが観察されました。ヒストンH3上のトリメチル化リジン4を標的とするヒストンPTM抗体は、H3上の単一メチル化およびジメチル化リジン4とも相互作用することがわかった。隣接する3つのアニン6のリン酸化関係は、このアッセイでリジン4での結合に悪影響を与えることが観察されました。このパイプラインは、最も広く使用されている市販のヒストン抗体の多くをスクリーニングするために使用されており、これらの実験から生成されたデータは、ヒストン抗体特異性データベースを通じて無料で入手できます。このパイプラインのバリエーションは、ヒストンリーダー、ライター、イレイサーの分析について以前に説明されており、エピジェネティクス研究を超えた有用性が関心のある印刷可能なライブラリにとって簡単に利用できるようになる前に、このプラットフォームを変更しました。ペプチドの合成やアレイの作製に必要な特殊な装置にアクセスできないユーザーのために、いくつかのヒストンペプチドマイクロアレイプラットフォームが市販されています。

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Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

本研究では、特定のタンパク質のグリコシル化プロファイリングに使用することができるレクチン検出法による多重化、ハイスループット抗体マイクロアレイのための改良プロトコルを記述します。このプロトコルは、新しい信頼性の高い試薬を備えており、前の手順に比べて大幅に時間、コスト、およびラボ機器の要件を軽減します。...

複雑なサンプル中の特定のタンパク質のグリコシル化の多重化ハイスループットプロファイリングのための化学的にブロックされた抗体マイクロアレイ

このビデオでは、ペプチドマイクロアレイ技術を適用して、ヒストンペプチド上の翻訳後修飾(PTM)を認識する抗体の特異性をプロファイリングする技術を示しています。既知のPTMの組み合わせを持つ固定化された蛍光色素標識ヒストンペプチドを含むマイクロアレイスライドを、標的PTM特異的抗体で処理します。このプロセスは、標的に対する抗体の特異性と、非標的PTMとの潜在的な交差反応性を特定するのに役立ちます。...

抗体の特異性プロファイリングのためのペプチドマイクロアレイ技術

ネイティブ組み合わせると高解像度質量分析とクロマチン免疫沈降を架橋することにより、ChroPアプローチはヒストン修飾、変異体及び機能的に異なるクロマチンドメインで相乗非histonicタンパク質の複合プロテオミクスアーキテクチャを分析することができます。...

ChroPアプローチは、クロマチンの遺伝子座特異的プロテオームの風景を分析するために、チップと質量分析を組み合わせ

組換えヒトMHC II分子と生化学的アッセイは、免疫​​原性エピトープ同定、削除、または設計に迅速かつ定量的な洞察を提供することができます。ここで、384ウェルプレートにスケーリングペプチド-MHC II結合アッセイが記載されている。この費用対効果の高い形式は、タンパク質の脱免疫やワクチンの設計と開発の分野で有用であることを証明する必要があります。...

ペプチドエピトープの定量分析のための高スループット、MHC II結合アッセイ

Peptideアレイスクリーニングは、タンパク質間相互作用部位を同定するためのハイスループットアッセイです。これにより、標的タンパク質の複数の相互作用をマッピングすることができ、タンパク質を標的とする阻害剤の部位を同定する方法として役立つことができます。ここでは、ペプチドアレイのスクリーニングと解析のためのプロトコールについて説明します。...

ペプチド配列の使用タンパク質間相互作用部位を同定

&gt;jove_contentvivoタンパク質-DNA相互作用をマッピングする方法は、ゲノム研究のあらゆる側面において重要になりつつありますが、それらは手間がかかり、費用がかかり、時間がかかります。ここでは、限られた量の細胞とin...

万HeLa細胞でエピジェネティックプロファイルを生成するためのChIP-seqの実験の自動化

SPOT法で合成されたPeptideアレイは、Protein lysine...

SPOTペプチド配列を用いてタンパク質リジンメチルトランスフェラーゼの特異性の解析

ここでは、著者らは、精製されたモノクローナル抗体とドットブロットハイブリダイゼーションによるペプチドスキャンを使用して、線状抗原エピトープを定義するためのシンプルで効率的なプロトコルを提示します。同定されたエピトープは、その後、治療および診断アプリケーションに使用できます。...

モノクローナル抗体認識リニアB細胞エピトープのペプチドスキャンアシスト識別

ひと白血球抗原 (HLA) シーケンス臓器提供者と受信者のペア間の不一致は、臓器移植での拒絶反応の抗体の主要な原因です。レシピエントの抗ドナー HLA 同種抗体をプローブする個々 のドナーの HLA...

臓器移植における HLA 同種抗体の検出のためのペプチド配列をお好み

ここでは、高品質な免疫ペプチド化データを提供するマウスおよびヒト細胞株からのMHCクラスIおよびクラスIIペプチド複合体の精製プロトコルを提示する。プロトコルは、市販の抗体を使用したサンプル調製に焦点を当てています。...

免疫ペプチドミクス:マウスとヒトMHCクラスI-およびII関連ペプチドの分離による質量分析

ヒトのスピンドリンファミリーメンバー4(SPIN4)における遺伝的変異が最近、骨の過剰増殖という新しい発達障害の患者で確認されました。ヌクレオソームの文脈における修飾ヒストンの生化学的同定をSPIN4結合基質として記述するプロトコルと新しい結果が提示されています。...

ペプチドアレイおよびネイティブヌクレオソームプルダウンによるヒトスピンドリンファミリーメンバー4(SPIN4)の結合基質としての修飾ヒストンの同定

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ペプチドマイクロアレイによるヒストン抗体特異性の解析

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