Name: 少量循環、血流 - と水没型チャンバー システムで管理急性海馬スライスにおけるシナプス可塑性を記録 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 51 s
Description: 学ぶ 小容量循環バッファーで酸素レベルを安定化し、蛍光顕微鏡搭載の記録チャンバーで海馬スライスのシナプス可塑性を長時間記録する方法。コスト効率を高めながら神経可塑性の機構を解明できます。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

大戦実施、分析し実験を設計し、原稿を書いていた。D.X. と C.P. 図の準備を支援し、実験を行なった。この作品は、NSFC (31320103906) によって支えられたおよび結核 111 プロジェクト (B16013)

動物は、動物のケアの確立された標準と脳科学研究所と状態キー研究所の医療神経生物学の復旦大学、上海、中国の手順に従って維持されました。
1. ソリューションの準備
注: は、材料の表を参照してください。
<ol>
	<li>(変更された Gey ソリューション) のスライスのバッファーを準備: 92 mM の NaCl、KCl、1.25 mM NaH2PO4、30 mM NaHCO3、2.5 mM 25 mM グルコース、20 mM HEPES、3 mM Na+-ピルビン酸、10 mM MgSO4、および 0.5 mM CaCl2。</li>
	<li>7.6 carbogenation なし 1 M NaOH を使用してに pH を調整します。</li>
	<li>4 ° C でバッファーを保存します。 注: 滴定濁った液体を明らかにします。浸透圧は、305 310 mOsm です。カーボゲン ・21には、5% の二酸化炭素と 95% の酸素が含まれています。</li>
	<li>希釈原液重炭酸、ブドウ糖が含まれていないアプライドの x 10 の最終組成物を与えることで、アプライドの準備: 124 mM の NaCl、2.5 mM KCl、2.5 mM CaCl2、2 mM MgCl2、および 1.25 mM KH2PO4。</li>
	<li>重炭酸塩と 10 mM グルコースと 26 mM NaHCO3に到達するためにグルコースを追加します。</li>
	<li>Carbogenate NaHCO3を追加した直後にブロックされた端と穴あきシリコン チューブを通してアプライド。</li>
	<li>Carbogenating (pH 7.3 7.4) しながら pH を測定します。 注意: バッファー容量は、NaHCO3の量を変えることによって少し調整できます。結果 pH は温度に依存するので動作温度 (例えば、 30 ° C) で carbogenating しながら結果の pH をチェックする必要は。</li>
</ol>
2. 急性海馬スライスの準備
注: は、材料の表を参照してください。
<ol>
	<li>急性脳スライスのインキュベーション室にスライスを保持メッシュを配置、アプライド、28-30 ° C で少なくとも 30 分22 carbogenate (4-6 L/h) とチャンバー</li>
	<li>2-4 ° c. の下に手術器具をクールします。</li>
	<li>寒さとバッファー (2-4 ° C)、vibratome の近くの氷/水混合物の維持をスライス carbogenated ガラス ビーカーを置きます。</li>
	<li>ラットやマウスの麻酔まで角膜反射が消える (30-50 s) 500 μ L を勘案し 2 L ガラス瓶または 50 mL のチューブに 12.5 μ L イソフルランを使用します。</li>
	<li>説明し、マティスらの著書・論文で詳細に可視化法を用いた脳を分離します。(2011 年)23 日宗門ら(2014)24。</li>
	<li>小脳の解剖と半球を分ける前に (少なくとも 2 分) の冷たいスライス バッファーに 2-4 ° C まで脳を冷やします。</li>
	<li>図 1Cに示すように腹と海馬の中間部分から横スライスを取得するのに各半球の25の背側縁に沿って 70 ° の角度で背側皮質の部分を解剖するのに冷たい外科ブレードを使用します。E。</li>
	<li>冷たい歯科用セメントへらで、フィルター ペーパーで簡潔に作成された表面 (1 〜 2 秒) を乾燥する部分に半球を転送します。</li>
	<li>速効性の接着剤; を使用して冷たいスライス プラットフォームで新鮮なカット面をもつ 2 つの半球をマウントします。半球顔かみそりの刃 (図 1D) の尾の端を持っています。</li>
	<li>スライスのプラットフォームを vibratome の冷却室に置き、スライスのバッファー (2-4 ° C) とその部屋を埋めます。Carbogenate 穴あきシリコン チューブを使用しています。</li>
	<li>適切な vibratome 設定を使用して 350 μ m のスライス カット (例えば、ブレード前方速度: 1.2 mm/s、ブレード振幅: 1 mm)。</li>
	<li>Subiculum と 2 つの注入カニューレを使用して嗅皮質から海馬を分離 (&#62; 28 G) はさみとして。</li>
	<li>パスツール ピペットを使用して事前に準備された培養室のスライスを保持メッシュから泡を削除します。</li>
	<li>スライス スライスのプラットフォームから地層属三角骨にいくつかの透明性は、インキュベーション室のメッシュに転送します。任意の折りたたみ、ストレッチ、重複、および大きな口パスツール ピペットにアプライドとスライスを吸引によって浮動を回避します。 メモ: 全体の手順 (手順 2.5 2.14) がかかる 5-10 分。したがって、4 ° C で維持するために時間をかけて緩衝液の温度をチェックすることが重要です。</li>
	<li>インキュベーション室に少なくとも 1.5-2 時間 30 ° C でスライスをインキュベートし、4-6 L/h でカーボゲン ・を提供します。 注: は、インキュベーター内のバッファーを循環するが、浮遊からのスライスを防ぐカーボゲン ・流量を調整します。</li>
</ol>
3. 変更、アプライドの Carbogenation の小さな貯水池のリサイクル
<ol>
	<li>リサイクル システム (図 2B) の流出に 3 ウェイ チューブ コネクタを追加します。</li>
	<li>カーボゲン ・供給管と 3 ウェイ チューブ コネクタの中間の腕を接続し、エアフロー メーター (図 2Dと図 4C3-4 L/h) と流量を調節します。</li>
	<li>リサイクル システムの流入に 2 番目の 3 ウェイ チューブ コネクタを追加します。中間の腕を貯水池 (低域通過フィルターから流入管インライン ヒーター、薄いシリコン チューブ (10 cm) にアッパー アームとロアアームに直面する管に接続します。図 4C)。</li>
	<li>薄いシリコン チューブにチューブ絞りを配置 (OD: 2 mm) 蠕動ポンプによって生成されたスライス チャンバーでアプライドの脈動が、最低は管に沿って位置に。 注: 流出-carbogenation (流出-炭水化物) 変更はアプライド貯水池、リサイクル率、アプライドのボリュームに carbogenation レベルの感受性を減らすと小さなアプライド貯水池内に相対的なチューブを配置 (&#60; 50 mL。図 3)。低域通過フィルターに関する薄膜シリコン チューブで空気量削減アプライドの流れの脈動したがって、空気とほとんどチューブを満たす必要があります。</li>
</ol>
4。水没スライス チャンバー内シナプス応答の記録
注: は、材料の表を参照してください。
<ol>
	<li>あらかじめ約 28-30 ° c に (これは、気泡の録音室を防止) 水浴のアプライド解決を暖めます。</li>
	<li>リサイクル システム (4-5 mL/分) を開始し、少なくとも 1 時間のためのシステムを平衡にインライン ヒーターをアクティブにします。</li>
	<li>レンズ クリーニング ペーパーと数分 (図 4) 水没スライス チャンバーで U 字白金線に固定ナイロン メッシュの小片を presoak します。</li>
	<li>U 字白金線を削除します。</li>
	<li>リサイクル電源、レンズ クリーニング ペーパーのスライスを配置します。</li>
	<li>すぐにスライスの上にスライスを保持メッシュを配置し、ポンプのスイッチ、目的をくずさず、アプライドに 30 分間平衡スライス。</li>
	<li>アプライドとホウケイ酸塩のマイクロ ピペット (すなわち、記録電極) を記入 (先端抵抗: 1 2 MΩ いっぱいアプライドで 1/3)、ピペット ホルダーにマウントします。</li>
	<li>NaHCO3ソリューションにそれを置くことによって金属刺激電極の絶縁体をチェック (&#62; 40 mM)。DC 電圧のマイナス極に、電極を接続 (1-2 V、肯定的な棒: 銀やプラチナ ワイヤ)、解剖顕微鏡の下で先端に泡の形成を観察して (&#62; 60 倍の倍率)。</li>
	<li>マニピュレーター ホルダー内テスト エポキシ絶縁タングステン刺激電極を置き、スライス チャンバーでワイヤを参照。</li>
	<li>室に 2 番目参照電極を追加し、記録電極 (図 4A) のパッチアンプ用アダプターの参照のソケットに接続します。</li>
	<li>アンプ コントロール ソフトウェアの「ゼロ ・ クランプ」ボックスをクリックし、「出力ゲイン一覧」ボックスをダブルクリックして進みます。ゲインを選択「100」の"ハイパス フィルター リスト ボックスのダブルクリック (ベッセル)」「0.1 Hz"を選択し、"ローパス フィルター リスト ボックスをダブルクリック (AC)」「3 kHz」を選択するには</li>
	<li>レコーディング ソフトウェアでクリックしてで「取得 |プロトコルを開きます。"エピソードの録音の開始後 10 ms を刺激アイソレータ トリガー設定が自動的に間欠的刺激と 50-100 ms の 10-20 kHz で増幅された電位のデジタル化を可能にするプロトコルを選択します。</li>
	<li>ラインと属地層三角骨、たとえば (図 4および図 5) に平行に刺激と記録電極を配置します。</li>
	<li>クリックして"取得 |プロトコルを編集"し (ポップアップ ウィンドウ) の「トリガー」タブを選択します。トリガ ・ ソースとして「トリガ ・ ソース」ボックスと「スペースバー」を選択をクリックします。「OK」ボタンををクリックしてします。集録を開始し、トリガー ボタンでポップアップ ウィンドウを注意してください「レコード」ボタンをクリックします。</li>
	<li>刺激アイソレータ ソフトウェアで「電圧制御」ボックスをクリックし、、"0"を入力してください。「ダウンロード」ボタンををクリックしてします。「ソフトウェアを記録」ウィンドウをクリックし、スペース バーを押します。「電圧制御」ボックスの 1 mV ステップには 1 から 8、たとえば、値を入力順にしてこのサイクルを繰り返します。</li>
	<li>FEPSP 勾配値と刺激強度の相関、fEPSP 斜面の 40% の最大値を得るために必要な刺激の強度を決定します。「電圧制御ボックス」をクリックし、、確定値を入力します。「ダウンロード」ボタンををクリックしてします。 メモ: 刺激アイソレータは、脳組織に簡単な電圧または電流パルスを適用する使用されます。二相パルスは、フェーズごとに 100 μ 秒を持つことができます。</li>
	<li>レコーディング ソフトウェアで停止ボタンをクリックし、「獲得」メニューをクリックしてします。「プロトコルを編集」をクリックし、ポップアップ ウィンドウに"トリガー"タブを選択します。トリガ ・ ソースとしてトリガー ソース ボックスと「内部タイマー」を選択をクリックします。「OK」ボタンををクリックしてします。すべて 30 フィールド電位の自動記録を開始レコード ボタンをクリックしてたとえば s。30-60 分後に、"stop"ボタンをクリックします。</li>
	<li>「取得」メニューをクリックし、「オープンなプロトコル、」をクリックして、シナプス可塑性の誘導が必要なプロトコルを選択し、"OK"ボタンをクリックしますします。高頻度刺激と記録を自動的にアクティブに「レコード」ボタンをクリックします。「停止」ボタンををクリックしてします。 注: シナプス可塑性に関連する調査、場合長期増強や長期ベースライン録音後の長期不況の標準誘導パラダイムの一つを適用します。図 7と図 8にシナプス伝達の変調の代表例を示します。</li>
	<li>レコーディング ソフトウェアでクリックして"取得 |プロトコルを開き」、ステップ 4.12 のように同じプロトコルを選択します。"OK"ボタンをクリックし、「記録」をクリックたとえば、2-4 時間フィールドの潜在的な録音を自動的に実行してください。録音を終了する"stop"ボタンをクリックします。</li>
	<li>化合物を適用医薬品研究の場合直接、アプライドに貯水池恒久的な化合物の管理がある場合希望 (図 6)。</li>
</ol>
5. セットアップとヒントをクリーニング
メモ: 以下の一般的なヒントをください。
<ol>
	<li>毎週 10% H2O2脱イオン H2o. 洗浄後 20 分以上をリサイクルしてシステムをきれい 注: エタノールはクリーニングのため推奨されません。同様に、参照線と H2O2で目的を浸すことは推奨していません。</li>
	<li>対物レンズまたは 0.1 N HCl、水とチャンバ周囲の表面に沈殿した塩を削除します。</li>
	<li>蒸留水または 0.1 N HCl でカーボゲン ・ バブラーを洗います。</li>
	<li>10% H2O2 5 分でスライス培養室に週に一度を浸すし、脱イオン H2o ・ インキュベーション室を徹底的にリンス</li>
	<li>金属刺激電極の場合各実験後脱イオン水で刺激電極先端部を洗うし、残留組織を除去し、エタノールに浸した綿球で刺激電極先端部を軽く拭きます。</li>
	<li>サンドペーパーで慎重な強打を先端の断熱材を削除することによって商業金属刺激電極の抵抗を減らします。</li>
	<li>ポリテトラフルオロ エチレン チューブとシリコン チューブを取り付け、チューブをリサイクルしながら、アプライドからカーボゲン ・の損失を減らします。</li>
	<li>線材表面に塩化銀のフォームに漂白剤で数日間記録電極と参照電極の銀線を維持します。</li>
</ol>

<ol><li>McIlwain, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+response+in+vitro+to+electrical+stimulation+of+sections+of+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain.</a> Biochem J. 48 (4), (1951).</li>
<li>McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+in+vitro+from+the+piriform+cortex+of+the+rat%2C+and+their+susceptibility+to+centrally-acting+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Responses in vitro from the piriform cortex of the rat, and their susceptibility to centrally-acting drugs.</a> J Neurochem. 14 (9), 937-938 (1967).</li>
<li>Yamamoto, C., McIlwain, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+activities+in+thin+sections+from+the+mammalian+brain+maintained+in+chemically-defined+media+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Electrical activities in thin sections from the mammalian brain maintained in chemically-defined media in vitro.</a> J Neurochem. 13 (12), 1333-1343 (1966).</li>
<li>Andersen, P., Bliss, T. V., Lomo, T., Olsen, L. I., Skrede, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lamellar+organization+of+hippocampal+excitatory+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Scand%22%5BJournal%5D)">Lamellar organization of hippocampal excitatory pathways.</a> Acta Physiol Scand. 76 (1), 4-5 (1969).</li>
<li>Skrede, K. K., Westgaard, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transverse+hippocampal+slice%3A+a+well-defined+cortical+structure+maintained+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The transverse hippocampal slice: a well-defined cortical structure maintained in vitro.</a> Brain Res. 35 (2), 589-593 (1971).</li>
<li>Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slices+have+more+synapses+than+perfusion-fixed+hippocampus+from+both+young+and+mature+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Slices have more synapses than perfusion-fixed hippocampus from both young and mature rats.</a> J Neurosci. 19 (8), 2876-2886 (1999).</li>
<li>Schwartzkroin, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+CA1+neurons+recorded+intracellularly+in+the+hippocampal+in+vitro+slice+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Characteristics of CA1 neurons recorded intracellularly in the hippocampal in vitro slice preparation.</a> Brain Res. 85 (3), 423-436 (1975).</li>
<li>Schwartzkroin, P. A., Wester, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting+facilitation+of+a+synaptic+potential+following+tetanization+in+the+in+vitro+hippocampal+slice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Long-lasting facilitation of a synaptic potential following tetanization in the in vitro hippocampal slice.</a> Brain Res. 89 (1), 107-119 (1975).</li>
<li>Reymann, K. G., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+late+maintenance+of+hippocampal+LTP%3A+requirements%2C+phases%2C+%27synaptic+tagging%27%2C+%27late-associativity%27+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharm%22%5BJournal%5D)">The late maintenance of hippocampal LTP: requirements, phases, 'synaptic tagging', 'late-associativity' and implications.</a> Neuropharm. 52 (1), 24-40 (2007).</li>
<li>Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+in+health+and+disease%3A+introduction+and+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity in health and disease: introduction and overview.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 369 (1633), 20130129(2014).</li>
<li>Bliss, T. V., Gardner-Medwin, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting+potentiation+of+synaptic+transmission+in+the+dentate+area+of+the+unanaestetized+rabbit+following+stimulation+of+the+perforant+path%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the unanaestetized rabbit following stimulation of the perforant path.</a> J Physiol. 232 (2), 357-374 (1973).</li>
<li>Reid, K. H., Edmonds, H. L., Schurr, A., Tseng, M. T., West, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pitfalls+in+the+Use+of+Brain-Slices%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Pitfalls in the Use of Brain-Slices.</a> Prog Neurobiol. 31 (1), 1-18 (1988).</li>
<li>Rambani, K., Vukasinovic, J., Glezer, A., Potter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+thick+brain+slices%3A+an+interstitial+3D+microperfusion+system+for+enhanced+viability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Culturing thick brain slices: an interstitial 3D microperfusion system for enhanced viability.</a> J Neurosci Methods. 180 (2), 243-254 (2009).</li>
<li>Hajos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintaining+network+activity+in+submerged+hippocampal+slices%3A+importance+of+oxygen+supply%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Maintaining network activity in submerged hippocampal slices: importance of oxygen supply.</a> Eur J Neurosci. 29 (2), 319-327 (2009).</li>
<li>Redondo, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+tagging+and+capture%3A+differential+role+of+distinct+calcium%2Fcalmodulin+kinases+in+protein+synthesis-dependent+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic tagging and capture: differential role of distinct calcium/calmodulin kinases in protein synthesis-dependent long-term potentiation.</a> J Neurosci. 30 (14), 4981-4989 (2010).</li>
<li>Stopps, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+application+of+a+novel+brain+slice+system+that+permits+independent+electrophysiological+recordings+from+multiple+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Design and application of a novel brain slice system that permits independent electrophysiological recordings from multiple slices.</a> J Neurosci Methods. 132 (2), 137-148 (2004).</li>
<li>Behnisch, T., Matsushita, S., Knopfel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+gene+expression+during+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Imaging of gene expression during long-term potentiation.</a> Neuroreport. 15 (13), 2039-2043 (2004).</li>
<li>Karpova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encoding+and+transducing+the+synaptic+or+extrasynaptic+origin+of+NMDA+receptor+signals+to+the+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Encoding and transducing the synaptic or extrasynaptic origin of NMDA receptor signals to the nucleus.</a> Cell. 152 (5), 1119-1133 (2013).</li>
<li>Karpova, A., Mikhaylova, M., Thomas, U., Knopfel, T., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+protein+synthesis+and+degradation+in+long-term+potentiation+of+Schaffer+collateral+CA1+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Involvement of protein synthesis and degradation in long-term potentiation of Schaffer collateral CA1 synapses.</a> J Neurosci. 26 (18), 4949-4955 (2006).</li>
<li>Weng, W., Chen, Y., Wang, M., Zhuang, Y., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentiation+of+Schaffer-Collateral+CA1+Synaptic+Transmission+by+eEF2K+and+p38+MAPK+Mediated+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Potentiation of Schaffer-Collateral CA1 Synaptic Transmission by eEF2K and p38 MAPK Mediated Mechanisms.</a> Front Cell Neurosci. 10 (247), (2016).</li>
<li>Meduna, L. J., Jackman, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+dioxide+inhalation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Publ+Assoc+Res+Nerv+Ment+Dis%22%5BJournal%5D)">Carbon dioxide inhalation therapy.</a> Res Publ Assoc Res Nerv Ment Dis. 31, 280-286 (1953).</li>
<li>Edwards, F. A., Konnerth, A., Sakmann, B., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thin+slice+preparation+for+patch+clamp+recordings+from+neurones+of+the+mammalian+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">A thin slice preparation for patch clamp recordings from neurones of the mammalian central nervous system.</a> Pflugers Arch. 414 (5), 600-612 (1989).</li>
<li>Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+acute+hippocampal+slices+from+rats+and+transgenic+mice+for+the+study+of+synaptic+alterations+during+aging+and+amyloid+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li>
<li>Yuanxiang, P., Bera, S., Karpova, A., Kreutz, M. R., Mikhaylova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+CA1+nuclear+enriched+fractions+from+hippocampal+slices+to+study+activity-dependent+nuclear+import+of+synapto-nuclear+messenger+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of CA1 nuclear enriched fractions from hippocampal slices to study activity-dependent nuclear import of synapto-nuclear messenger proteins.</a> J Vis Exp. (90), e51310(2014).</li>
<li>Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LTP+in+cultured+hippocampal-entorhinal+cortex+slices+from+young+adult+%28P25-30%29+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Meth%22%5BJournal%5D)">LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats.</a> J Neurosci Meth. 130 (1), 19-32 (2003).</li>
<li>Kloosterman, F., Peloquin, P., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apical+and+basal+orthodromic+population+spikes+in+hippocampal+CA1+in+vivo+show+different+origins+and+patterns+of+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Apical and basal orthodromic population spikes in hippocampal CA1 in vivo show different origins and patterns of propagation.</a> J Neurophysiol. 86 (5), 2435-2444 (2001).</li>
<li>Thiemann, W., Malisch, R., Reymann, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+microcirculation+chamber+for+inexpensive+long-term+investigations+of+nervous+tissue+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">A new microcirculation chamber for inexpensive long-term investigations of nervous tissue in vitro.</a> Brain Res Bull. 17 (1), 1-4 (1986).</li>
<li>Shetty, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+Synaptic+Tagging%2FCapture+and+Cross-capture+using+Acute+Hippocampal+Slices+from+Rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents.</a> J Vis Exp. (103), (2015).</li>
<li>Du, H., Lin, J., Zuercher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Higher+efficiency+of+CO2+injection+into+seawater+by+a+venturi+than+a+conventional+diffuser+system%5BTitle%5D)+AND+%22Bioresour+Technol%22%5BJournal%5D)">Higher efficiency of CO2 injection into seawater by a venturi than a conventional diffuser system.</a> Bioresour Technol. 107, 131-134 (2012).</li>
<li>Weinman, J., Mahler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Analysis+of+Electrical+Properties+of+Metal+Electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Electron+Biol+Eng%22%5BJournal%5D)">An Analysis of Electrical Properties of Metal Electrodes.</a> Med Electron Biol Eng. 2, 299-310 (1964).</li>
<li>Fanselow, M. S., Dong, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Are+the+dorsal+and+ventral+hippocampus+functionally+distinct+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures.</a> Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).</li>
<li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translation+of+BDNF-gene+transcripts+with+short+3%27+UTR+in+hippocampal+CA1+neurons+improves+memory+formation+and+enhances+synaptic+plasticity-relevant+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Translation of BDNF-gene transcripts with short 3' UTR in hippocampal CA1 neurons improves memory formation and enhances synaptic plasticity-relevant signaling pathways.</a> Neurobiol Learn Mem. , (2016).</li>
</ol>

著者らは、調査した潜在的な利益相反として解釈される可能性が商業や金融関係の不在を宣言します。

インターフェイス スライス室より堅牢なシナプス応答25,26,27,28の展示物、水没室提供パッチ ・ クランプ記録および蛍光追加の利便性イメージング。したがって、我々 はフィールド ニューロン17,18、蛍光プローブのイメージングに簡単に拡張することができます商業水没スライス チャンバーを用いた急性海馬スライスにおける潜在的な録音のいくつかの側面を説明しました。 19。スライスの準備25以外にも多くの時間後録音室で一定カーボゲン ・ レベルのメンテナンス、障害の 1 つを表します。カーボゲン ・ レベルはアプライド貯水池の初期の飽和によって制御可能な...

1951 年に初めて報告した急性期脳スライス実験は実施1.梨状皮質2,3海馬ニューロンが海馬の4、1 つの septotemporal 軸に沿って横相互接続されて検出から成功体外録音後の 1971 年に、海馬神経活動の最初の in vitroの録音は達成5だった生体内および生体外での条件の下でニューロンの神経生理学的または neurostructural パラメーターの類似性はまだいくつかの討論の6件名が、1975 年に Schwartzkroin7ことが示された基底神経細胞の特性は体外で維持され、その高周波刺激 (すなわちtetanization) 海馬における求心性神経のシナプス電位8の長期的な円滑化を誘導します。記録神経活動の電気生理学的体外大幅拡大活動依存的シナプス可塑性9,10至福によって 1973 年に発見されていた細胞のメカニズムの研究ら11 生体内で実験ウサギ。
神経細胞の活動やシグナル伝達経路脳スライスで、特に急性海馬スライスの研究は今標準的なツールです。しかし、驚いたことに、体外実験があるまだ標準化される準備や急性海馬スライスのメンテナンスのために存在する複数のアプローチによっても明らかなようリードら(1988 年)12は、急性脳スライス スライス チャンバーの種類と入浴中、pH、温度、酸素のレベルの選択肢でのメンテナンスの方法論的課題を検討しました。これらのパラメーターは、まだスライス記録のセットアップの in vitroのカスタムメイドの要素のための記録室の制御が困難です。可能性があります問題の克服にいくつかの方法論的課題と説明水没スライス チェンバース、間質性の 3 D microperfusion システム13、強化された層流と酸素室などの新しいタイプの出版物を見つけることができます。14、コンピューター化された温度コントロール15システム、マルチチャンバ記録システム16を供給します。これらの部屋は簡単に構築できないので、ほとんどの科学者は市販のスライスの部屋に依存します。これらの部屋は、こうして電気生理学および蛍光イメージングの17,18,19の組み合わせを可能にする顕微鏡システムにマウントできます。以来、これらの部屋は、人工髄液 (アプライド) に沈んで脳スライスを維持、新薬承認申請の費用を増加緩衝液の流量を維持する必要があります。このため、流出 carbogenation 比較的小さいアプライド ボリュームを使用して浸漬スライス チャンバー内電位長時間記録の十分な安定性を提供するリサイクル灌流システムを組み込みました。さらに、我々 は活動依存的シナプス可塑性10の結果に影響を与えるこの実験的 carbogenation/灌流システムを使用し、どの真核伸長因子 2 キナーゼ (eEF2K) の抑制を調節するシナプスを要約伝送20。

<table><tbody><tr><td>試薬が必要</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sinopharm化学試薬、中国</td><td>10019318</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sinopharm化学試薬、中国</td><td>10016318</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sinopharm化学試薬、中国</td><td>10017618</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&ミッドドット;6H2O</td><td>Sinopharm Chemical Reagent、中国</td><td>10012818</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sinopharm Chemical Reagent、中国</td><td>10005861</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sinopharm Chemical Reagent、中国</td><td>10018960</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sinopharm Chemical Reagent、中国</td><td>10010518</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sinopharm化学試薬、中国</td><td>20040718</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>ピルビン酸ナトリウム</td><td>ΣA4043</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sinopharm Chemical Reagent、中国</td><td>20025118</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sinopharm Chemical Reagent、中国</td><td>10019718</td><td></td></tr><tr><td>解剖のためのTools and materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Decapitators</td> ラット<td>の斬首</td>のための<td>ハーバードの装置</td><td>55-0012</td></tr><tr><td>包帯はさみ</td> マウス<td>の斬首</td>のための<td>SCHREIBER</td><td>12-4227</td> 両</tr><tr><td>刃</td><td>刃 フライングイーグル、中国</td><td>74-C</td><td></td></tr><tr><td>IRISはさみ</td><td>RWD、中国</td><td>S12003-09</td><td></td></tr><tr><td>ボーンロンガーズ</td><td>RWD、中国</td><td>S22002-14</td><td></td></tr><tr><td>スプーン</td><td>ハンマッハー&nbsp;</td><td>HSN 152-13</td><td></td></tr><tr><td>歯科用セメントスパチュラ</td><td>ハンマッハー&nbsp;</td><td>HSN 016-15</td><td></td></tr><tr><td>歯科用ダブルエンドショベル</td>鍛<td>冶屋外科、米国</td><td>BS-415-017</td><td></td></tr>振動<tr><td>ミクロトーム</td><td>ライカ、ドイツ</td><td>VT1200S</td><td></td></tr><tr><td>外科用ブレード&nbsp;</td><td>RWD、中国</td><td>S31023-02</td><td></td></tr><tr><td>外科用</td><td>ホルダーRWD、中国</td><td>S32007-14</td><td></td></tr><tr><td>電気生理学機器および材料</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>縦型ピペットプーラー</td><td>成茂、日本</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>防振テーブル</td><td>メイリッツ、日本</td><td>ADZ-A0806</td><td></td></tr><tr><td>水中タイプ録音チャンバー</td><td>ワーナーインスツルメンツ</td><td>RC-26GLP</td><td></td></tr><tr><td>4軸マイクロマニピュレーター</td><td>サッター アメリカ</td><td>MP-285, MP-225</td><td></td></tr><tr><td>プラチナワイヤー</td><td>ワールドプレシジョンズ</td><td>PTP406</td><td></td></tr><tr><td>アンプ</td><td>モレキュラーデバイス アメリカ</td><td>マルチクランプ 700B</td><td></td></tr><tr><td>データ収集システム</td><td>モレキュラーデバイス アメリカ</td><td>Digidata 1440A</td><td></td></tr><tr><td>Anaysisソフトウェア</td><td>Molecular Devices, USA</td><td>Clampex 10.2</td><td></td></tr><tr><td>蛍光顕微鏡</td><td>ニコン, 日本</td><td>FN1</td><td></td></tr><tr><td>LED光源</td><td>Lumen Dynamics Group, Canada</td><td>X-cite 120LED</td><td></td></tr><tr><td>マイクロピペット</td><td>ハーバード大学製装置</td><td>GC150TF</td><td>細胞外記録</td></tr><tr><td>ホウケイ酸マイクロピペット</td><td>サッター, アメリカ</td><td>BF150-86</td><td>パッチクランプ</td></tr><tr><td>タングステン電極</td><td>AMシステム、米国</td><td>575500</td><td></td></tr><tr><td>蠕動ポンプ</td><td>長、中国</td><td>BT00-300T</td><td></td></tr><tr><td>チューブ蠕動ポンプ</td><td>ISMATEC、ヴェルトハイム、ドイツ</td><td>SC0309</td><td>1x流入、ID:蠕動ポンプ用1.02 mm</td></tr><tr><td>チューブ</td><td>ISMATEC、ヴェルトハイム、ドイツ</td><td>SC0319</td>流出<td>用2xチューブ、ID:2.79 mm</td></tr><tr><td>CCDカメラ</td><td>PCO、ドイツ</td><td>pco.edge sCMOS</td><td></td></tr><tr><td>レンズクリーニングペーパー</td><td>コダック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50mL 円錐形遠心分離管</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>プレチャンバー</td><td>ワーナーインスツルメンツ</td><td>BSC-PC</td><td></td></tr><tr><td>インラインヒーター</td><td>ワーナーインスツルメンツ</td><td>SF-28</td><td></td></tr><tr><td>温度コントローラー</td><td>ワーナーインスツルメンツ</td><td>TC-324B</td><td></td></tr></tbody></table>

少量循環、血流 - と水没型チャンバー システムで管理急性海馬スライスにおけるシナプス可塑性を記録

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

脳スライスの実験は 1951 年以来使用されている、にもかかわらず、フィールドや潜在的な細胞内の録音を実行するとき、シナプス伝達の変調の安定した、成功した分析を達成するための確率を低減問題が残っています。この原稿は、急性脳スライスの維持のため、市販の水没商工会議所における興奮性シナプス後電位を記録するための実験条件の改善に役立つ可能性のある方法論的側面をについて説明します流出 carbogenation 付け。流出 carbogenation は、薬物実験のコスト効率を高めるために小さなバッファー貯留層の循環依存の実験で酸素レベルを安定させるのに役立ちます。さらに、原稿はシナプス伝達の活動依存的シナプス可塑性に及ぼす異なる carbogenation モードと刺激パラダイムを調べる代表的な実験を紹介します。

プロトコル セクションの男性 c57bl/6 マウスとラット (5-8 週間) の海馬 (図 1) の腹側と中間部分から急性海馬スライスの作製について述べる。スライサー プラットフォーム上半球の位置は、安定を保つのに役立ち、寒天やアガロースと安定化の必要性を削除します。灌流システム自体は液体の必要流量を与えるため高回転で作動、ペリスタルティック ポンプに基づいています。したがって、標準的なチューブ ポンプ内の急速な高齢化は非シリコン系チューブを使用して、乗り越え、相当な問題を作成 (ID: 1.02 mm)。流出の負圧も 2.79 mm の内部の直径を持っている 2 つの並列接続管によって作成されます。これらの 2 つのチューブは、液体 (図 4A) の吸引を許可する録音室でカニューレに接続されます。貯水池のアプライドの carbogenation 率は、小さな細孔を有する換気石やチューブを使用して達成することは困難する...

このプロトコルでは、再生バッファーの量が少ないと水中急性海馬スライスにおける活性依存性シナプス可塑性を記録の方法論的側面の酸素レベルの安定化について説明します。

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

本手順の全体的な目的は、少量の再循環ACSFを簡便にカルボゲン化する方法を提供し、蛍光顕微鏡に搭載した記録チャンバーを用いて、電位変動の長期記録を実現することです。この手法は、細胞レベルの学習と記憶におけるシナプス伝達および記憶形成を制御するリグニン経路の基礎に関連し、神経可塑性分野における重要な問いに答える一助となります。本技術の主な利点は、小型バイオリザーバーの酸素レベルを安定させることができ、特定のアンタゴニストやアゴニストを用いた実験のコスト効率を向上させられる点にあります。急性海馬スライスの作製手順を、当研究室の博士課程学生であるXiaとWeiguangが実演します。まず、冷やした手術用メスを使用し、各半球の背側縁に沿って70度の角度で背側皮質の一部を切り出します。次に、冷やした歯科用セメント用スパチュラを用いて、各半球をフィルターペーパー上に移し、表面を軽く乾燥させます。新鮮な切断面を持つ2つの半球を、速乾性接着剤を用いて氷冷したスライスプラットフォームに固定し、半球の尾側端がカミソリ刃に向くようにします。次に、スライスプラットフォームをビブラトームの冷却チャンバーに設置します。チャンバーに2〜4 °Cのスライスバッファーを満たし、カルボゲン処理を行います。その後、適切なバイブロトームの設定を用いて350 µmの切片を作成します。2本の注入用カニューレをハサミのように使用して、海馬形成を下脚および嗅内皮質から分離します。あらかじめ準備したインキュベーションチャンバーの切片保持メッシュから、パストゥールピペットを用いて気泡を取り除きます。次に、錐状層にある程度の透明度が見られる切片を、広口パストゥールピペットを用いて切片作成プラットフォームから培養チャンバーのメッシュ上へ移します。このステップで、リサイクルシステムの流出口に3方チューブコネクタを追加します。3方チューブコネクタの中間アームをカーボゲン供給チューブに接続し、エアフローメーターで流量を調節します。その後、リサイクリングシステムの流入側に2つ目の3方チューブコネクターを追加します。中央のアームをインラインヒーターに向いたチューブに、上部のアームを細いシリコンチューブに、そして下部のアームをリザーバーからの流入チューブに接続します。次に、ペリスタルティックポンプによって生じるスライスチャンバー内のACSFの拍動が最小になる位置の細いシリコンチューブに、チューブスクイーザーを設置します。次に、浸漬スライスチャンバー内で、少量のレンズクリーニングペーパーとU字型白金線に固定されたナイロンメッシュを数分間浸漬させます。その後、U字型白金線を取り出します。還流を停止し、レンズクリーニングペーパーの上にスライスを載せます。次に、直ちにスライス保持用メッシュをスライスの上に載せます。ポンプのスイッチを入れ、対物レンズをACSFに浸さない状態で、スライスを30分間平衡化させます。その間に、記録電極にACSFを満たし、ピペットホルダーに取り付けます。金属刺激電極を炭酸水素ナトリウム溶液に入れ、絶縁状態を確認します。電極を直流電圧発生器の負極に接続し、解剖顕微鏡下で先端に気泡が発生することを確認します。次に、テスト済みのエポキシ絶縁タングステン刺激電極をマニピュレーターホルダーに、参照電極をスライスチャンバーに設置します。2本目の参照電極をチャンバーに追加し、記録電極のヘッドステージの参照ソケットに接続します。アンプ制御ソフトウェアで、zero clamp modeのボックスをクリックし、次にoutput gainのリストボックスをダブルクリックします。ゲインに100を選択し、high pass filterのボックスをダブルクリックして3 kHzを選択し、low pass filterのリストボックスACをダブルクリックして0.1 Hzを選択します。録画ソフトウェアで「acquire」をクリックし、「open protocol」を開きます。エピソード的な刺激および、増幅された電位を10～20 kHzで50～100 msの間デジタル化することを可能にする設定を持ち、エピソード記録の開始から10 ms後に刺激アイソレーターを自動的にトリガーするプロトコルを選択してください。刺激電極と記録電極を、錐体層（stratum pyramidal）に対して直線状かつ平行に配置します。続いて、[acquire]をクリックし、[edit protocol]を選択して、ポップアップウィンドウで[trigger]タブを選択します。[trigger source]ボックスをクリックし、トリガーソースとして[space bar]を選択します。その後、[okay]ボタンをクリックし、[record]ボタンをクリックして取得を開始します。刺激アイソレータのソフトウェアで、電圧制御ボックスをクリックして0を入力します。ダウンロードボタンをクリックしてください。その後、記録ソフトウェアのウィンドウをクリックし、スペースキーを押します。1000から8000まで値を順に入力し、このサイクルを繰り返します。刺激強度とFEPSPスロープ値を相関させ、FEPSPスロープ最大値の40%を得るために必要な刺激強度を決定します。電圧コントロールボックスをクリックし、決定した値を入力してください。次に、ダウンロードボタンをクリックします。レコーディングソフトウェアで停止ボタンをクリックし、次に取得メニューをクリックします。「プロトコルの編集」をクリックし、ポップアップウィンドウでトリガータブを選択します。その後、トリガーソースのボックスをクリックし、トリガーソースとして内部タイマーを選択します。OKボタンをクリックし、続いて、60秒ごとにフィールドポテンシャルを自動的に記録する記録ボタンをクリックします。30〜60分後に停止ボタンをクリックします。録画ソフトウェアで「acquire」をクリックし、「open protocol」を開いて、ベースライン記録と同じプロトコルを選択します。「okay」ボタンをクリックし、次に「record」をクリックします。電位記録を2〜4時間、自動的に継続して実行してください。完了したら、停止ボタンをクリックして記録を終了します。この図は、流出カルボゲン飽和法および小型ACSFリザーバーをリサイクルするリザーバーカルボゲン飽和法を用いた、シナプス伝達の活動依存性増強の代表的な記録を示しています。増強は、時点ゼロの後、100 hertz per secondのトレインを3回刺激することで誘導されました。この図は、少量のACSFリザーバーをリサイクルさせる流出カーボゲン化により、リザーバーのみをカーボゲン化した実験と比較してLTD誘導が改善されたことを示しています。習得すれば、スライス標本作製は5分から10分で完了でき、適切に行えば安定した電位記録を数時間にわたって維持することが可能です。この手順を行う際は、使用する装置に合わせてカーボゲン化レベル、灌流速度、電極の位置、および刺激強度を調整することが重要です。この手順に続き、活動依存的なシナプス可塑性の誘導に応答したravinプローブの細胞内局在の可視化など、追加の疑問を解決するために、パッチクランプ法やフォレンジック顕微鏡法などの他の手法を実施することができます。本手法の開発により、神経可塑性の分野の研究者が、野生型および遺伝子改変マウスのin vitro海馬スライスを用いて、学習と記憶の細胞様式としての活動依存的なシナプス可塑性を探索する道が開かれました。このビデオを視聴することで、側頭海馬からの急性スライス標本の作製方法と、少量の再循環ACSFを用いてシナプス伝達の長期記録のための安定した条件を得る方法について、十分に理解することができます。動物や化学物質を取り扱う際は危険が伴う可能性があるため、本手順を実施する際は、常に手袋の着用や適切な消毒などの予防措置を講じてください。

recording-synaptic-plasticity-acute-hippocampal-slices-maintained

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

この記事では、ラットと脳の老化とアルツハイマー病などの加齢に伴う神経変性疾患、関連付けられているシナプスの変化の研究のためのトランスジェニックマウスから海馬切片を調製するための手順の概要を説明します。...

老化とアミロイド病理の間にシナプス変化の研究のためのラットおよびトランスジェニックマウスからの急性海馬スライスの準備

隔離された海馬から急性脳スライスだけでなく、アストロサイトとニューロンの同時電気生理学的記録の準備...

急性海馬スライスにおけるシナプス誘発アストログリアとニューロン活動の二重の電気生理学的記録

このビデオでは、シナプスの活動を記録するために、水没室に脳スライスを設置する手順を示しています。このプロセスには、レンズ紙上にスライスを固定し、人工脳脊髄液(aCSF)の連続的な流れを維持してニューロンの生存率を確保し、刺激と記録電極を特定の脳の関心領域に対して正確に配置することが含まれます。この設定により、ベースラインのシナプス活動と電気刺激の影響を正確にモニタリングできます。...

急性海馬切片における神経野興奮性シナプス後電位の記録

このビデオでは、ラットの海馬スライスでCA3-CA1シナプス応答を記録する方法を示します。海馬切片に刺激電極と記録電極を配置し、シナプス応答強度を評価するための電場興奮性シナプス後電位(fEPSP)を測定する手順を概説します。...

CA3-CA1シナプス応答のラット海馬スライスへの記録

このビデオは、孤立した海馬におけるリズミカルなニューロンネットワーク活動、別名シータ振動の記録を示しています。電極は、シータ振動を検出および分析するために、さまざまな層と空間位置に挿入されます。これは、海馬の異なる層にわたるニューロンネットワークのユニークなニューロン組成と接続性を示しています。...

マウス海馬におけるシータ振動のin vitro記録

本論文では、準備し、維持するために、完全な方法論を提示...

長期増強の非常に安定しており、再現性録音のための改良された準備と海馬マウススライスの保全

このビデオ記事は、げっ歯類の急性海馬切片を使用したCA1錐体ニューロンのシナプスタグ付け、捕捉、交差タグ付けなど、長期的な可塑性とそれに関連するプロセスを研究するための実験的手順について説明しています。...

げっ歯類からの急性海馬スライスを用いて、シナプスタグ付け/キャプチャとクロス捕獲調査

我々は、長手方向海馬脳スライスの記録と刺激電極を使用し、生体内の背中海馬における縦方向に位置決めされた記録および刺激電極を用いて、細胞外のポストシナプスの可能性を呼び起こし、実証した。縦方向の中間ラメラCA1に沿った長期シナプス可塑性。...

電気生理学的フィールド記録によるインターラメラ海馬CA1における長期シナプス可塑性の調査

提示されたプロトコルは、潜在的な抗てんかん物質の前臨床評価ツールとして重要な脳スライスを使用するという究極の目標を持つ切除されたヒト海馬組織の輸送および調製について説明する。...

電気生理学的記録のための急性ヒト海馬スライスの調製

このプロトコルは、自発的な鋭波波リップル活性を示すマウスからの水平海馬内皮質(HEC)スライスの調製を記述する。スライスは、簡略化されたインターフェース保持室でインキュベートされ、記録は、組織の酸素化とネットワークレベルの活動の自発的な出現を促進するために、流れの速い人工脳脊髄液と水没条件下で行われます。...

急性マウス脳スライスによる、海馬ネットワーク活動の調査

学ぶ 小容量循環バッファーで酸素レベルを安定化し、蛍光顕微鏡搭載の記録チャンバーで海馬スライスのシナプス可塑性を長時間記録する方法。コスト効率を高めながら神経可塑性の機構を解明できます。

少量循環、血流 - と水没型チャンバーシステムで管理急性海馬スライスにおけるシナプス可塑性を記録

さらに動画を探す

少量循環、血流 - と水没型チャンバー システムで管理急性海馬スライスにおけるシナプス可塑性を記録

さらに動画を探す

少量循環、血流 - と水没型チャンバーシステムで管理急性海馬スライスにおけるシナプス可塑性を記録