散発性結腸直腸癌の遺伝子操作マウスモデル

分節型アデノクロス感染による結腸直腸癌の遺伝子操作されたマウスモデルの確立および高解像度大腸内視鏡によるその監視が提示されている。

この手順の全体的な目標は、遺伝子操作マウスモデルで結腸のセグメント化アデノクレ感染を達成することです。この方法は、CRCの生物学と治療を研究するための優れたモデルを提供するため、結腸直腸癌(CRC)の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、小規模なげっ歯類の手術経験を持つラボであれば、このモデルを使用して、再現性が高く、簡単にアクセスできる結腸限局腫瘍を作成できることです。

麻酔をかけたマウスを仰臥位に置くことから始め、動物の目に軟膏を塗ります。マウスを固定位置にテープで固定し、つま先をつまんで適切な鎮静レベルを確認します。下腹部の皮膚に約15ミリメートルの正中線切開を行います。

次に、鉗子を使って腹壁の筋肉組織をつかみ、ハサミで筋肉を慎重に切開して腹腔を開きます。遠位結腸を特定した後、肛門の近位に約15ミリメートルの繊細なクランプで組織を慎重にクリンチします。次に、柔軟なテフロンチューブを挿入します 経肛門的にチューブを慎重に進めます 管腔閉塞に達するまで

30ゲージのカニューレでチューブをカニューレします。標準の1ミリリットルの注射器をカニューレに接続し、すべての糞便が排出されるまで、数ミリリットルの通常の生理食塩水で結腸を洗い流します。遠位結腸が空になったら、生理食塩水チューブを新しいテフロンチューブと交換し、2番目のクランプを使用して、最初のクランプから約3ミリメートル離れた結腸を閉塞します。

30ゲージのカニューレを装備した2番目の1ミリリットルの注射器を使用して、50〜80マイクロリットルの0.25%トリプシンEDTAをクランプされた結腸セグメントに慎重に注入します。結腸は、固定された組織セグメントを穿孔することなく粘膜バリアを破壊するのに十分なほど膨らむ必要があります。10分後、遠位clを取り外しますamp。

次に、トリプシンチューブを取り外し、遠位結腸を500マイクロリットルの生理食塩水で洗い流します。新しいテフロンチューブを挿入した後、結腸を再度クランプし、50〜80マイクロリットルのアデノウイルス溶液で組織を膨らませます。30分後、クランプとチューブを取り外し、6-0の急速に吸収されるランニング縫合糸で腹壁を閉じます。

外科用創傷クリップで皮膚を閉じ、動物が完全に回復するまで加熱パッドで動物を監視します。大腸内視鏡検査で腫瘍の成長をモニタリングするには、麻酔をかけた担腫瘍動物を温熱パッドの仰臥位に置き、内視鏡を腸管に経肛門的に挿入します。視線制御下で空気を静かに膨らませ、結腸を膨張させます。

次に、遠位結腸に粘膜病変が特定されるまでスコープを慎重に前方に押し、後で評価するために取得される各内視鏡画像を保存します。すべての画像を取得したら、内視鏡をゆっくりと取り外し、完全に回復するまでマウスを摂氏38度の加熱パッドに置きます。腫瘍は、動物に大きなストレスを与えることなく、大腸内視鏡検査によって簡単かつ繰り返し監視できます。

この疾患の症状はヒトの結腸直腸癌と非常によく似ており、動物が最初に腺腫を発症し、次に最終的に遠位結腸で腺癌が発症します。動物の条件付き遺伝子型に応じて、腫瘍は腹膜と肝臓にも転移します。蛍光cre-レポーター対立遺伝子を使用する場合、腫瘍の発現は、レポーター対立遺伝子によっては、日光の下で視覚化できるほど明るい蛍光タンパク質の発現によって容易に特定できます。

組織学的には、発生している腫瘍の95%は、ヒトの結腸直腸癌によく似た腺癌であり、非浸潤性腺腫から周囲の構造に浸潤する腺癌までの腫瘍発生の全スペクトルを特徴としています。このテクニックを習得すると、適切に実行すれば50分で完了できます。この手順を試みるときは、常に結腸の脆弱性に特別な注意を払うことを忘れないでください。

穿孔は必然的に腹膜炎や敗血症を引き起こし、浣腸の終了が必要です。アデノウイルスを扱うには、ウイルスが危険である可能性があるため、バイオセーフティレベル2の安全対策が必要であることを忘れないでください。