Name: 新生児カプサイシン処置によるアトピー性皮膚炎のモデルラットにホルムアルデヒドの暴露の影響 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-27T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: 学ぶ新生児カプサイシン処置によるアトピー性皮膚炎モデルラットの作製法とホルムアルデヒド暴露システムの構築。この手法は皮膚科学における病態生理メカニズムの解明に貢献し、環境要因の影響評価に活用できる。

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本研究は、公共の福祉によって支えられた &#38; 安全研究プログラムを通じて、国立研究財団の韓国 (NRF) 文部省、科学および技術 (NRF 2014M3C8A5030612)、によって資金を供給、鄭陽、チャチャ ヤングによってサポートされて太陽、MD やチャンこんにちはチュ ユー Sa 記念基金します。

ここで説明したすべてのメソッドが出生後 6 週間国際動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) の韓国大学大学の医学によって承認されている、実験者ができる enthansasia を誘導すると収集。皮膚、ラットの血清など様々 な試料。
 1 新生児カプサイシン処置によって広告の誘導 <ol><li>カプサイシン ソリューション 5 mg/mL を準備するには、トゥイーン 80、15 mL の円錐管の 100% エタノール 1 mL に 1 mL に 50 mg のカプサイシンを追加します。</li>。
	<li>は、円錐管に生理食塩水入りの 8 mL を追加します。表示しているレイヤー分離がなくなったまで精力的にチューブを振る</li> <li>正中線と新生児 Sprague-dawley ラットの首の裏側に、皮下組織にカプサイシン溶液 (10 μ L/g) を注入します。
	<ol><li>配信 (重大) 生後後 48 時間 12 h 間カプサイシン 。
		メモ: 注入がより数日遅れた場合皮膚炎は開発しません、それは数週間のためにのみ保持されます。注入が早すぎる場合、呼吸が激しい痛みのため発生する可能性が</li>。
		カプサイシン投与による呼吸停止から新生児ラットを防ぐために <li>を押して呼吸を助長するまたは呼吸になるノーマル。 以来、カプサイシン誘発の痛みすることができますまで酸素室おいて、新生児に新生児の胸部呼吸の阻止、おそらく呼吸困難を悪化させる全身麻酔を追加します。実験者がラットの生存を増加する anesthesics を使用しないでくださいしたがって、.</li>
	</ol></li></ol> 2。掻痒症と広告のモデルラットにおける皮膚炎の評価 <ol><li><ol><li>準備プラスチックの 自発の掻破行動を数えることによってそう痒症の測定 室 (20 cm × 30 cm × 20 cm) 完全なカバレッジを許可するミラーを装備閲覧と呼吸するラットを許可するように穴にします</li>。
		<li>設定して正しくミラー ビューおよびラットのフロント ビューを同時に記録するデジタル ビデオ カメラを調整します</li>。
		<li>商工会議所や開口部を防ぐために重いオブジェクトの部屋の天井をカバー プラスチック場所ラット</li>。
		<li>1 h のラットの自発行動を記録、ビデオ クリップを再生および動作の傷の数をカウントします</li>。
	</ol></li> <li>得点システムを使用して皮膚病変の評価 <ol><li>誘導室でラットを配置します</li>。
		<li>2 L/分の酸素流量計をオンに流量し、麻酔の 3% にイソフルラン気化器を調整します</li>。
		<li>程度とラットの他の部分と耳の皮膚炎の重症度を識別します</li>。
		<li>0.25 cm 2 と次 の表 1 による皮膚病変の重症度として皮膚病変の範囲の単位を定義する: 重症度; 度程度と重症度を乗じて皮膚炎スコア (皮膚炎のスコアを参照してください <強いクラス ="xfig"> 図 1B).</li>
	</ol></li></ol> 3。ガス FA の動物への暴露 <ol><li>吸入室の準備 <ol><li>アクリル ガラス ボックスを準備 (55 cm × 40 cm × 35 cm) 反対側に 2 つのアウトレットがある</li>。
		<li>注意。FA ガスの循環、入口より出口を配置し、入口よりも出口のサイズを大ききます</li>。
		<li>注意。、店舗別の側面の内部のガス濃度測定の閉じることができます 3 つの小さな通路をドリルします。</li>
		両方の店に <li>接続チューブ。循環フードまたはガスの放出のために建物の外排水チューブを置き、他のアウトレット チューブを医療用酸素レギュレータに接続します</li>。
		<li>アクリル ガラス ボックス内に従来のラットのおりを配置します</li>。
		<li>(2 時間/日、5 日/週) 5 週間出産後 1 週間からネズミをケージに入れています</li>。
		<li>シール アクリル ガラス ボックス ガス漏れを防ぐために可能な限り緊密 。
		注: タイトなシールの室蓋はゴムを含める必要があります。密封のために部屋をラップするラップを適用します</li>。
	</ol></li> <li>医療用酸素レギュレータを用いた気体 FA の世代 <ol><li>FA の 5 g を 1 L の水に溶解する</li>。
		<li>医療用酸素レギュレータの加湿器ボトルに入れ、0.5 %fa ソリューションです</li>。
		<li>レギュレータにインレット チューブを接続した後、レギュレータをオンにし 5 L/分の流量を設定</li>
		<li>溶液濃度とチャンバー内のガスの濃度を決定するための流量を調整します</li>。
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Geha, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergy+and+hypersensitivity.+Nature+versus+nurture+in+allergy+and+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Allergy and hypersensitivity. Nature versus nurture in allergy and hypersensitivity.</a> Curr Opin Immunol. 15 (6), 603-608 (2003).</li>
<li>Novak, N., Bieber, T., Leung, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+mechanisms+leading+to+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immune mechanisms leading to atopic dermatitis.</a> The J Allergy Clin Immunol. 112 (Suppl 6), S128-S139 (2003).</li>
<li>Back, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronically+relapsing+pruritic+dermatitis+in+the+rats+treated+as+neonate+with+capsaicin%3B+a+potential+rat+model+of+human+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dermatol+Sci%22%5BJournal%5D)">Chronically relapsing pruritic dermatitis in the rats treated as neonate with capsaicin; a potential rat model of human atopic dermatitis.</a> J Dermatol Sci. 67 (2), 111-119 (2012).</li>
<li>Jin, H., He, R., Oyoshi, M., Geha, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Animal models of atopic dermatitis.</a> J Invest Dermatol. 129 (1), 31-40 (2009).</li>
<li>Han, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde-Induced+Aggravation+of+Pruritus+and+Dermatitis+Is+Associated+with+the+Elevated+Expression+of+Th1+Cytokines+in+a+Rat+Model+of+Atopic+Dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde-Induced Aggravation of Pruritus and Dermatitis Is Associated with the Elevated Expression of Th1 Cytokines in a Rat Model of Atopic Dermatitis.</a> PLOS ONE. 11 (12), e0168466(2016).</li>
<li>Xu, B., Aoyama, K., Takeuchi, M., Matsushita, T., Takeuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+cytokine+mRNAs+in+mice+cutaneously+exposed+to+formaldehyde%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Lett%22%5BJournal%5D)">Expression of cytokine mRNAs in mice cutaneously exposed to formaldehyde.</a> Immunol Lett. 84 (1), 49-55 (2002).</li>
<li>Kim, J. Y., Jeong, M. S., Park, K. Y., Seo, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggravation+of+atopic+dermatitis-like+symptoms+by+consecutive+low+concentration+of+formaldehyde+exposure+in+NC%2FNga+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Aggravation of atopic dermatitis-like symptoms by consecutive low concentration of formaldehyde exposure in NC/Nga mice.</a> Exp Dermatol. 22 (3), 219-221 (2013).</li>
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<li>Fujii, Y., Takeuchi, H., Sakuma, S., Sengoku, T., Takakura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+2%2C4-dinitrochlorobenzene-induced+chronic+dermatitis+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Skin+Pharmacol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of a 2,4-dinitrochlorobenzene-induced chronic dermatitis model in rats.</a> Skin Pharmacol Physiol. 22 (5), 240-247 (2009).</li>
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<li>Saito, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+skin+inflammation+induced+by+repeated+exposure+of+toluene%2C+xylene%2C+and+formaldehyde+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Characterization of skin inflammation induced by repeated exposure of toluene, xylene, and formaldehyde in mice.</a> Environ Toxicol. 26 (3), 224-232 (2011).</li>
<li>Jung, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde+exposure+induces+airway+inflammation+by+increasing+eosinophil+infiltrations+through+the+regulation+of+reactive+oxygen+species+production%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toixcol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde exposure induces airway inflammation by increasing eosinophil infiltrations through the regulation of reactive oxygen species production.</a> Environ Toixcol Pharmacol. 24 (2), 174-182 (2007).</li>
</ol>

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ラットの広告のような症状の誘発のためここで説明されたプロトコルは、AD の病態を研究するために適応し、薬物検査のスクリーニング ツールとして使用できます。ガス FA のカプサイシン投与ラットへの暴露の楽器は、多様な動物モデルに及ぼす各種ガスへの暴露の評価に適用できます。
新生児カプサイシン処理広告モデル、DNCB 治療モデル9と皮膚感作モデルなど4他のアトピーのモデルよりもより簡単なプロシージャに依存している、Nc/nga マウス4よりもより手頃な価格です。広告モデルの広告のような症状の発現は一貫性のあります。さらに、いくつかのケースでは、このプロトコルは、任意の追加治療3なし影響を受けたラットの自発的再発性広告のような皮膚病変を引き出します。過剰摂取カプサイシン投与誘発神経細胞死と来たす炎症10とラットで激しい痛みを引き起こした。それらのいくつ...

ホルムアルデヒド (FA) アトピー性皮膚炎 (AD) の進行の効果を調査するには、広告誘導プロトコルを設立し、FA の慢性露出のための従来の循環室を開発しました。
広告は、遺伝的素因と環境トリガー1,2間の複雑な相互作用に起因する慢性の炎症性皮膚疾患です。適切な動物モデルは臨床状態で広告を勉強する必要があります。これは、環境要因の影響の下で AD の病因を解明するとき最も重要です。また、広告進行に及ぼす環境的誘因をよく調べるためには、それは個々 の環境要因を分離し、暴露の程度を定量化することが欠かせません。
我々 は新生児カプサイシン処置による広告の新規ラットモデルを実証しました。この広告モデル3皮膚感作性, 遺伝子組み換え広告モデルおよび広告4の自発的なマウス ・ モデルによる広告モデルなど他の広告モデルにいくつかのメリットがあります。まず、このモデルは幼児広告に対応し、Nc/nga マウスなど広告の他の自発的なマウス モデルより前は 3 週間の時代に広告のような症状を開発しています。遺伝子組み換えの広告モデルとは異なり、いくつかのケースで広告モデルの症状は治まるし、自発的に 20 週間にわたって再発します。また、モデルの広告のような症状の誘導プロセスはより誘導プロセスの観点からアレルギー性の接触皮膚炎に似ている皮膚感作モデルより簡単です。
小児および思春期の期間に広告の開発の FA 吸入の効果を研究するアクリル ガラス室と従来の医療用酸素レギュレータ5を使用して FA 曝露動物モデルにおける新しいプロトコルを紹介しています。レギュレータを一定濃度ガス流量を調整することによって、溶液濃度に動物を公開できました。以前の研究は、動物モデルへの FA の暴露のいくつかの方法を報告しています。徐らは、どの FA ソリューション皮膚6へ適用した直接露光法を説明します。別の最近の研究は対処モデル 49127特殊揮発性溶剤の発電機を用いた FA ガス曝露プロトコルです。従来の方法と比較して、新しい方法がより簡単に装備されてし、FA に加えて他のソリューションの適用することができます。

<table><tbody><tr><td>医療用酸素レギュレータ</td><td>ーYuyao Jiahua</td><td></td>医療<td>メーカーは結果に影響を与えません</td></tr><tr><td>チューブ</td><td></td><td></td><td>メーカーは結果に影響を与えません</td></tr><tr><td>アクリル</td><td>チャンバーTaejin Acryl</td><td></td><td>メーカーは結果に影響を与えません</td></tr><tr><td>プラスチック</td><td>チャンバーTaejin Acryl</td><td></td><td>メーカーは結果に影響を与えません</td></tr>パラ<tr><td>ホルムアルデヒド、粉末</td><td>シグマ</td><td>158127</td><td>メーカーは結果に影響を与えません</td></tr><tr><td>ラップフィルムユニ</td><td>ラップ</td><td></td><td>メーカーは結果に影響を与えません</td></tr><tr><td>カプサイシン</td><td>シグマ</td><td>M2028</td><td>メーカーは結果に影響を与えません</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma</td><td>P4780</td><td>メーカーは結果に影響を与えません</td></tr><tr><td>デジタルビデオカメラ</td><td></td><td>ソニーHDR-CX380y</td><td>メーカーは影響しません結果に影響を与える</td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>JW製薬</td><td></td><td>会社は結果に影響を与えません</td></tr></tbody></table>

新生児カプサイシン処置によるアトピー性皮膚炎のモデルラットにホルムアルデヒドの暴露の影響

Effects of Exposure of Formaldehyde to a Rat Model of Atopic Dermatitis Induced by Neonatal Capsaicin Treatment

アトピー性皮膚炎掻痒湿疹を慢性的な再発は、先進国を中心に世界中で勝ちます。遺伝・環境要因間の複雑な相互作用は、アトピー性皮膚炎の病態に重要な役割を再生する知られています。しかし、我々 はまだこの病気の病因の詳細な画像を欠いています。したがって、アトピー性皮膚炎の進行を解明するための適切な動物モデルの開発に重要なのです。また、アトピー性皮膚炎に及ぼす大気汚染物質などの環境要因を調査して病気の理解を広げます。ここでは、新生児カプサイシン処置ラットにおけるアトピー性皮膚炎とアトピー性皮膚炎小児と思春期の発達に及ぼす影響を明らかにするラットへの一定ホルムアルデヒド濃度の暴露のためのプロトコルを誘導する方法を述べる期間。これらのプロトコルはいくつかの実験に正常に適用されているし、他の物質に使用することができます。

7 週齢でカプサイシン処理広告ラット モデルの広告のような皮膚の炎症は、図 1 aに提示されます。広告ラットのカプサイシン処理モデルの堅牢な掻破行動をビデオ 1に示します。新生児カプサイシン処置が皮膚炎を誘発 3 週齢ラットの行動を傷を悪化し、広告のような症状が数週間 (図 1 bC) の永続化します。程度はそれほど深刻でしたが、16 週齢の初期の広告のような症状 (図 1) の解決の後で再発性の皮膚炎に苦しんでいくつかのラット。さらに、血清 ige、AD 重症度8の生物学的マーカーである (図 1E) 広告のラットのカプサイシン処理モデルに昇格。Il-4, IL 13 の mRNA 発現はまた広告のカプサイシン投与ラット...

新生児カプサイシン処置ラットとアトピー性皮膚炎に対するホルムアルデヒド吸入の影響を調査するため気化したホルムアルデヒドの露出でアトピー性皮膚炎を誘発する方法をご紹介します。

Atopic dermatitis is chronically relapsing pruritic eczema and prevails around the world especially in developed countries. Complex interactions between ...

この手順の全体的な目的は、新生児へのカプサイシン投与により、アトピー性皮膚炎様症状を誘発することです。そして、アトピー性皮膚炎様症状に対するホルムアルデヒドの効果を測定します。この手法は、皮膚科学分野におけるアトピー性皮膚炎の病態生理に関する重要な疑問を解決するのに役立ちます。この手法の主な利点は、アトピー性皮膚炎様症状の誘導と、増分を用いた重要な曝露系の構築が可能であることです。5 mg/mLのカプサイシン溶液を調製するには、15 mLコニカルチューブにTween 80を1 mL、100%エタノールを1 mL、およびカプサイシンを50 mg加えます。その後、コニカルチューブに生理食塩水を8 mL加えます。分離層が見えなくなるまで、チューブに蓋をして激しく振ります。カプサイシンは出生後12時間から48時間以内に投与することが極めて重要です。新生児のSprague Dawley Ratの首の後ろの中央線上の皮下組織に、カプサイシン溶液を注入します。カプサイシン注入による呼吸停止を防ぐため、呼吸が正常に戻るまで新生子ラットを酸素チャンバー内に安置します。必要に応じて、胸部を圧迫して呼吸を促してください。まず、全視野を観察できるように鏡を備え、ラットが呼吸できるよう穴を開けたプラスチックチャンバーを準備します。ラットをプラスチック製チャンバーに入れ、蓋が開かないように、チャンバーの天井部分に重い物を置いて固定します。次に、デジタルビデオカメラを設置し、ラットの鏡越しでの様子と正面からの様子の両方を同時に記録します。その後、ラットの自発的な行動を1時間にわたって記録します。ビデオクリップを再生し、右側のラットや中央のラットが見せているような掻破行動の回数をカウントします。病変をスコア化するには、麻酔下にあるラットの耳およびその他の部位における皮膚炎の範囲と重症度を判定します。皮膚病変の範囲の単位面積を0.25平方センチメートルと定義します。また、皮膚病変の重症度はこの表を用いて判定します。反対側に2つのコネクタを備えたアクリルガラス製ボックスを用意します。ホルムアルデヒドガスの循環させるため、排気 outletをガス吸気 outletよりも高い位置に設置してください。両方のコネクタにチューブを接続します。排気 outletチューブを、ガスの排出のために循環フードまたは建物外まで伸ばしてください。そして、もう一方の入口チューブを医療用酸素レギュレーターに接続します。アクリルガラスボックスの中に、一般的なラット用ケージを設置します。生後1週間のラットをケージに入れ、ガス漏れを防ぐためにアクリルガラスボックスをできるだけしっかりと密閉します。チャンバーにラップを巻き付け、ゴム製の蓋で密閉します。医療用酸素レギュレーターに接続された加湿ボトルに0.5%ホルムアルデヒド溶液を加えます。ホルムアルデヒドを取り扱う際は非常に危険であることに注意してください。本手順を実施する際は、マスクや手袋などの予防策を常に講じてください。次に、レギュレーターをオンにし、流量を5 L/minに設定します。ラットを2時間、ホルムアルデヒドガスに曝露させます。ここでは、カプサイシン投与ラットにおける皮膚炎症の代表的な写真を示します。カプサイシン投与ラットにおける皮膚炎の経時的な経過をここに示します。この画像は、カプサイシン投与ラットにおける掻破行動の経時的な変化を示しています。これは16週齢のカプサイシン投与ラットにおける再発性皮膚病変の代表的な画像です。カプサイシン投与動物では、血清IgEレベルが有意に上昇しています。また、カプサイシン投与動物においてIL-4 mRNA発現の有意な上昇も観察されます。カプサイシン投与動物において、IL-13 mRNA発現が著しく上昇していることがここで示されています。これらの代表的な写真は、1.2 ppmおよび0.8 ppmのホルムアルデヒドを用いて5週間の処置を行った後のアトピー性皮膚炎を、空気による対照処置と比較して示したものです。1.2 ppmのホルムアルデヒドへの曝露は、0.8 ppmの曝露とは異なり、カプサイシン処置したアトピー性皮膚炎モデルにおいて掻痒感を著しく増悪させました。皮膚炎の測定においても同様の結果が観察されました。また、1.2 ppmのホルムアルデヒド曝露を施したカプサイシン処置ADラットモデルでは、血清IgEレベルの上昇が認められました。この手順に従い、グリコール溶液などの他の材料を使用して、特定の物質がアトピー性皮膚炎に及ぼす影響に関するさらなる疑問を解消することができます。これらの展開を経て、本手法は皮膚科学分野の研究者が、アトピー性皮膚炎の病態生理における環境因子の役割を探索するための道を開きました。

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