Name: シアノバクテリアにおけるグリコーゲン含有量の測定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: 学ぶシアノバクテリアのグリコーゲン定量法。酵素選択的水解とGOD-POD試薬を用いて、生理学的研究や代謝工学に応用可能な高感度アッセイです。野生型および遺伝子組み換え株に対応し、小規模実験に適した簡便な手法を解説します。

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著者らは、デンマークのInnovationfonden Denmark（Pant Power、プロジェクト番号12-131844）、Villum Fonden（プロジェクト番号13363）のNordic Energy Research（AquaFEED、プロジェクト番号24）

1.準備<ol><li> シアノバクテリア培養 <ol><li>成長するSynechocystis sp。 1％（v / v）CO 2を補充した一定量の空気を供給しながら、液体BG11培地8中、30℃でPCC 6803。 50μmol光子/ m 2 / sの光合成光子束密度で光で連続的に培養物を照明する。 </li><li>成長するSynechococcus sp。 1％（v / v）CO 2を補充した空気を一定にして、液体A +培地23 （BG11培地も使用することができる）中のPCC7002。温度は37℃でなければなりません。 150μmol光子/ m 2 / sの光合成光子束密度で光を用いて連続的に培養物を照明する。 </li><li> 1cmの光路を有するキュベットを用いて730nmで培養物の光学密度（OD）を測定する。 OD値が0.8より大きい場合、適切な希釈を行い、OD測定値を得る。e細胞濃度。 注記：以下に示すプロトコールは、OD 730nm値2以上に対応する細胞密度を有する液体培養に適している。指数関数的増殖期の培養物（典型的にはOD 730nm値が1未満である）が望ましい場合、OD 730nm値が2以上になるように緩衝液または培地中で遠心分離および再懸濁により細胞密度を濃縮する。 </li></ol></li><li> バッファーと試薬 <ol><li> pH 8で50mM Tris-HCl緩衝液を調製する。 </li><li> 50mM酢酸ナトリウム緩衝液をpH5にする。 </li><li> 50mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH5）中の8U / mLアミログルコシダーゼのストック溶液を調製する。 </li><li> 50mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH5）中に2U / mLのα-アミラーゼのストック溶液を調製する。 </li><li>蒸留水を使用して、0〜100μg/ mLの範囲の濃度でメイクグルコース標準溶液を調製する。 </li><li> D-グルコースアッセイキット（GODPODフォーマット）からGOD-POD試薬を調製し、fメーカーの指示に従ってください。 </li></ol></li></ol> 2.細胞乾燥重量の測定（オプション） <ol><li> 2 mLの培養液または細胞再懸濁液（ステップ1.1参照）を2.0 mLチューブに移し、6,000 xgおよび4 o Cで5分間遠心します。上清を捨てる。 </li><li>ペレットを1 mLの水に再懸濁し、6,000 xgで4℃で5分間遠心します。上清を捨て、細胞ペレットを0.5mLの水に再懸濁する。 </li><li>サスペンションを予め計量されたアルミニウムトレイに移す。一晩乾燥（約18時間）するために、トレーを105℃の乾燥オーブンに移す。 重要：トレイからの材料の移動を避けるために、鉗子でトレイを取り扱うことが重要です。同じ条件で空のあらかじめ計量されたアルミニウムトレイを乾燥させて、乾燥中のトレイからの重量損失を測定する。 </li><li>乾燥後、トレーをオーブンから取り出し、周囲温度で平衡させるそれを0.0001gの精度で計量する前に5分間保持する。 注記：この値は、細胞乾燥重量ベースでグリコーゲン含有量を標準化するために使用することができます。 </li></ol> 3.シアノバクテリア細胞の溶解<ol><li> 1mLの培養液または細胞再懸濁液（ステップ1.1を参照）を1.5mLチューブに移し、6,000×gおよび4℃で10分間遠心分離する。上清を捨てる。 </li><li>ペレットを1 mLの50 mM Tris-HCl（pH 8）に再懸濁し、6,000 xgで4℃で10分間遠心分離します。上清を捨て、細胞ペレットを1mLのTris-HCl緩衝液に再懸濁する。プロセスを繰り返します。 </li><li>ペレットを500μLの50mM Tris-HCl緩衝液（pH 8）に徹底的に再懸濁する。 重要：ペレットを効率よく細胞溶解するために再懸濁する。再懸濁液を氷に入れておきます。 </li><li> 再懸濁した細胞を4℃で30サイクルの超音波処理を行い、各サイクルは最大振幅の20kHzの周波数で30秒間行い、それに続く90秒が続く。 注：この方法は、 Synechococcus spを効率的に溶解することができます。 PCC7002。 <ol><li>あるいは、細胞再懸濁液をスクリューキャップチューブに移し、製造業者の指示に従って、酸化ジルコニウムビーズをチューブに添加する。組織ホモジナイザーにチューブをセットし、ビーティングの2サイクルを行うことにより4℃で細胞を溶解する。各サイクルは、周波数設定5で5分で構成される。 注：この方法は、 Synechocystis sp。を効率よく溶解することができる。 PCC 6803およびSynechococcus sp。 PCC7002。 </li></ol></li><li>ライセートを含むチューブを6,000 xgおよび4℃で10分間遠心します。 注：ペレットは、主に大きな細胞破片で構成されています。十分な数の破損していないセルがある場合は、手順3.4を繰り返します。上清を氷上に保つ。 </li><li>市販のBCA Proteinアッセイキットを使用してタンパク質濃度を測定する。 注：この値は、グリコーゲン含有量を標準化するために使用することができますタンパク質含有量ベースで測定した。 </li></ol> 4.グリコーゲン沈殿<ol><li> 96％（v / v）エタノール900μLとステップ3.5の上清100μLを1.5mLスクリューキャップチューブに混合することにより、細胞溶解物からクロロフィルaを除去する。キャップを閉めた後、標準の実験室用加熱ブロックを使用してチューブを90℃で10分間加熱します。 </li><li>チューブを氷上で30分間インキュベートする。 </li><li>チューブを20,000×gおよび4℃で30分間遠心分離し、上清を慎重に除去する。ペレットはグリコーゲンを含む。ペレットを軽く乾燥させて過剰のエタノールを除去する。 重要：ペレットの過度の乾燥は避けなければならない。さもなければ、ステップ5.1で可溶化することが困難になる。 </li><li>オプション：ステップ4.3で得られた上清の664nmでの吸光度を測定し、クロロフィルa含量を決定する。 84.6 L / g / cm 24の吸収係数を使用してください。 注：値をnormalizに使用することができますグリコーゲン含有量。 </li></ol> 5.酵素加水分解およびグリコーゲン測定<ol><li>ステップ4.3で得られたペレットを50mM酢酸ナトリウム（pH5）100μLに可溶化し、8U / mLのアミログルコシダーゼ50μLと2U / mLのα-アミラーゼ50μLを添加する。ボルテックスを用いてこれらの材料をよく混合する。 注：グリコーゲンペレットは粘性であるため、ピペッティングによる混合は推奨されません。 </li><li>混合物を60℃で加熱ブロック上で2時間インキュベートし、グリコーゲンがグルコース分子に消化されるようにする。 </li><li>サンプルを10,000 xgで5分間遠心分離し、上清を新しい1.5 mLチューブに移す。 </li></ol> GOD-POD試薬を用いた総グルコース含量の測定<ol><li>ステップ5.3で得られた上清中のグルコース濃度をGOD-POD試薬を用いて測定する。ステップ5.3の上清100μLを96ウェルプレートのウェルに移す。ネガティブコントロールとして、100μLの50 mM酢酸ナトリウム、pH 5を使用する。検量線を作成するには、グルコース標準溶液も測定する。 </li><li>各サンプルに150μLのGOD-POD試薬を加え、ピペッティングで迅速に混合します。 </li><li>プレートを静的に25℃で30分間インキュベートする。プレートリーダーを用いて吸光度値を510 nmで記録する。 </li><li>グルコース標準から得られた較正曲線を用いてグルコースの濃度を計算する。 注：細胞溶解液中のグリコーゲン濃度は、グルコースの濃度（μg/ mL）として表されます。 </li></ol>

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</ol>

著者は何も開示することはない。

プロトコル内の重要なステップは、グリコーゲン沈殿および再懸濁である。エタノール沈殿後の遠心分離後、グリコーゲンは、微量遠心管の壁に緩く付着する半透明ペレットを形成する。したがって、上清を除去する際には、ペレットを除去しないように注意する必要があります。グリコーゲンペレットは粘着性があり、乾燥すると可溶化が困難になります。グリコーゲンペレットの完全な可溶化は重要である。なぜなら、不完全な可溶化は効率の悪い酵素消化を招き、したがって技術的複製間に大きな変動を生じさせるからである。ボルテックスによる可溶化前の超音波処理の適用は、プロセスを容易にすることができる。 正規化法の選択に関して、細胞乾燥重量は広く用いられている参考文献である。これは、タンパク質およびクロロフィルの測定よりも面倒であり、細胞バイオマスを多く必要とするa 。総タンパク質含量は、細胞バイオマスに対する別の言及を提供し、本プロトコールに記載されているように、小規模で決定することができる。正確な値は、成長条件25、28</s...

シアノバクテリアは、光合成により光に固定されたCO 2から炭素の主要な炭水化物貯蔵物としてグリコーゲンを蓄積する。グリコーゲンは、α-1,6-結合グルコシル結合によってつくられる分枝を有する線状α-1,4-結合グルカンからなるグリカンである。シアノバクテリアにおけるグリコーゲン生合成は、ホスホグルコムターゼおよびADP-グルコースピロホスホリラーゼの連続作用によるグルコース-6-リン酸のADP-グルコースへの変換から始まる。 ADP-グルコース中のグルコース部分は、1種以上のグリコーゲンシンターゼ（GlgA）によってグリコーゲンのα-1,4-グルカン主鎖の非還元末端に転移される。続いて、分枝酵素はα-1,6-結合グルコシル結合を導入し、これはさらに伸長してグリコーゲン粒子を生成する。暗所では、グリコーゲンは、グリコーゲンホスホリラーゼ、グリコーゲン脱分岐酵素、α-グルカノトランスフェラーゼ、およびマルトデキストリンホスホリラーゼによってリン酸化されたグルコースおよび遊離グルコースに分解される。これらのフィードintO酸化的ペントースリン酸経路、エムデン-マイヤーホフ-パルナス経路（解糖）、およびエントナー・ドゥドロフ経路1、2、3、4を含む異化経路、。 シアノバクテリアのグリコーゲン代謝は、シアノバクテリアが日光によって駆動される微生物細胞工場に発展して化学物質や燃料を生産する可能性があるため、近年注目を集めています。グリコーゲン代謝は、グリコーゲンがこれらの細菌における最大の柔軟な炭素プールであるため、生成物の収量を増加させるように改変することができる。一例はシアノバクテリウム・シネココッカス sp。マンニトールを生産するように遺伝子操作されたPCC7002;グリコーゲン合成の遺伝的破壊はマンニトール収率を3倍に増加させる5 。別の例は、グリコーゲン負荷野生動物からのバイオエタノールの生産であるSynechococcus sp。 PCC 7002 6 。野生型細胞のグリコーゲン含有量は、窒素飢餓6中の細胞の乾燥重量の60％までとすることができます。 グリコーゲンの代謝および調節に関する我々の理解も近年拡大している。グリコーゲンは、光の中に蓄積し、暗所で異化されることが知られているが、ディールサイクル中のグリコーゲン代謝の詳細な動態は、 Synechocystis sp。 PCC 6803 7 。さらに、グリコーゲンの蓄積に影響を及ぼすいくつかの遺伝子が同定されている。顕著な例は、推定ヒスチジンキナーゼPmgAおよび非コードRNA PmgR1が調節カスケードを形成し、グリコーゲンの蓄積を制御するという発見である。興味深いことに、 pmgAおよびpmgR1欠失突然変異体は、 シネコシスティス spの野生型株の2倍のグリコーゲンを蓄積する。 PCC 68038、9。他の調節エレメントは、代替シグマ因子Eおよび転写因子CyAbrB2 10、11を含め、グリコーゲンの蓄積に影響を与えることが知られています。 グリコーゲン調節および代謝に関心が高まるにつれて、グリコーゲン含量の決定を記述する詳細なプロトコルが正当化される。いくつかの方法が文献で使用されている。パルスアンペロメトリック検出器または酸とフェノールと処置後分析決意に結合された高圧陰イオン交換液体クロマトグラフィーを介して単糖類含有量の決意に続く酸加水分解が広くグリコーゲン含量9、10、12、13を近似する方法を使用しています。しかしながら、高圧アニオン交換液体クロマトグラフィーC機器は非常に高価であり、いくつかのシアノバクテリア種中に蓄積することが知られているようなスクロース14、グルコ15、及びセルロース16、17、18のような他のグルコース含有複合糖質、に由来するものからグリコーゲン由来のグルコースを区別しません。酸 - フェノール法は、標準的な実験装置を用いて行うことができる。しかし、毒性の高い試薬を使用し、異なる複合糖質由来のグルコースを区別しておらず、そのような糖脂質、リポ多糖、および外マトリックス12などの細胞材料を構成する他の単糖からグルコースを区別しません。特に、熱い酸 - フェノールアッセイは、グルコース含量の特定の決定12ではなく、総炭水化物含量の決定にしばしば用いられる。酵素的ハイα-アミログルコシダーゼによるグリコーゲンのグルコースへのグルコースの加水分解、その後の酵素結合アッセイによるグルコースの検出は、グリコーゲン由来のグルコースに対して非常に感受性が高く特異的な比色測定値を生成する。特異性は、エタノール5、8、19によって細胞溶解物からのグリコーゲンの優先析出をさらに向上させることができます。 ここでは、最も広く研究されている2つのシアノバクテリア種であるSynechocystis sp。のグリコーゲン含量の酵素ベースのアッセイの詳細なプロトコールについて説明します。 PCC 6803およびSynechococcus sp。 PCC7002を野生型株および変異株に導入した。効率的な加水分解を確実にするために、α-アミラーゼおよびα-アミログルコシダーゼのカクテルを使用する8 。エンド作用性α-アミラーゼは、種々のグルカン中のα-1,4-結合を加水分解してデキストリンとし、さらに加水分解しexo-actingα-アミログルコシダーゼ20によってグルコースを分解する。これらの酵素の相乗効果は周知であり、これらの酵素は、植物バイオマス21中のセルロースなどの他の糖質結合剤に影響を及ぼすことなく、α結合グルカン様グリコーゲンであるデンプンの選択的加水分解に日常的に使用されている。放出されたグルコースは、酸素の過酸化水素への還元およびグルコースのラクトンへの酸化を触媒するグルコースオキシダーゼおよび過酸化水素からピンク色のキノンイミン染料を生成するペルオキシダーゼからなる酵素結合アッセイに従って定量的に検出され、フェノール化合物、および4-アミノアンチピリン22 。

<table><tbody><tr><td>QSonica Sonicators Q700</td><td>Qsonica, LLC</td><td>NA</td><td>QSonica</td></tr><tr><td>SpectraMax 190 マイクロプレートリーダー&nbsp;</td><td>モレキュラーデバイス</td><td>NA</td><td>エリザ プレートリーダー</td></tr><tr><td>ブレットブレンダー ストー</td>ム <td>ネクストアドバンス</td><td>BBY24M-CE</td><td>ビーズビーター</td></tr><tr><td>ウルトロスペック 3100 プロ UV/可視分光光度計</td><td>アマシャムバイオサイエンス</td><td>NA</td><td>分光光度計</td></tr><tr><td>トリス&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td>バッファー</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Merck</td><td>1-00317</td><td>pH adjutment</td></tr><tr><td>酢酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>32319</td><td>バッファー</td></tr><tr><td>アミログリコシダーゼ (Rhizopus sp.)</td><td>Megazyme</td><td>E-AMGPU</td><td>グリコーゲン解重合酵素</td></tr><tr><td>&α;-アミラーゼ、耐熱性 (Bacillus licheniformis)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3176</td><td>グリコーゲン解重合酵素</td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Merch</td><td>8337</td><td>グルコースアッセイ用スタンダード</td></tr><tr><td>Pierce BCA Protein assay kit&nbsp;</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>23225</td><td>タンパク質濃度の測定用</td></tr><tr><td>アルミニウム乾燥トレイ、使い捨て</td><td>VWR</td><td>611-1362</td><td>細胞乾燥重量の測定用</td></tr><tr><td>D-グルコースアッセイキット(GODPODフォーマット)</td><td>メガザイム</td><td>K-GLUC</td><td>グルコース濃度の測定用</td></tr><tr><td>酸化ジルコニウムパン、0.15 mm</td><td>ネクストアドバンス</td><td>ZrOB015</td><td>細胞溶解用ビーズBullet Blendar Storm</td></tr><tr><td>RINOチューブ</td><td>Next Advance</td><td>NA</td><td>チューブ Bullet Blendar Stormでの細胞溶解用</td></tr></tbody></table>

シアノバクテリアにおけるグリコーゲン含有量の測定

Determination of the Glycogen Content in Cyanobacteria

シアノバクテリアは、光合成の間に主要な細胞内炭素およびエネルギー貯蔵としてグリコーゲンを蓄積する。最近の研究の進展により、生合成と異化のディールサイクル、レドックス調節、非コードRNAの関与を含む、グリコーゲン代謝の複雑なメカニズムが明らかになった。同時に、産物収量を増強するために、遺伝子操作されたシアノバクテリア中のグリコーゲンから望ましい産物に炭素をリダイレクトする努力がなされている。さまざまな精度と技術的な複雑さを伴い、シアノバクテリアのグリコーゲン含量を決定するためにいくつかの方法が使用されています。ここでは、標準的なライフサイエンス研究室で行うことができるシアノバクテリアのグリコーゲン含量の信頼できる測定のための詳細なプロトコールを提供します。プロトコールは、細胞溶解物からのグリコーゲンの選択的沈殿およびグリコーゲンの酵素的解重合によってグルコース単量体を生成し、これはグルコースオキシidase-peroxidase（GOD-POD）酵素結合アッセイを用いて測定した。この方法は、 Synechocystis sp。 PCC 6803およびSynechococcus sp。代謝工学で広く使用されている2つのモデルのシアノバクテリア種、PCC 7002。さらに、該方法は、野生型と調節エレメントまたはグリコーゲン生合成遺伝子に欠損を有する変異体との間のグリコーゲン含量の差異を首尾よく示した。

10mLの野生型シネコシスティス種。 PCC 6803を、OD 730nm値が約0.8に達するまで、光合成独立栄養条件下で増殖させた。細胞を回収し、pH8の50mM Tris-HClに再懸濁した.OD 730nm値を2-3に調整した。グリコーゲン含量は、上記のプロトコルに従って分析した。 OD 730nmあたりのグリコーゲン含量は、13± 1.8μg / mL / OD 730nm （ N = 12）であった。タンパク質含量のグリコーゲン含量相対0.24±0.03μgの/μgの（N = 12）、およびクロロフィルのグリコーゲン含量相対含有量は5.7±0.6μgの/μgの（N = 12）でした。利用可能な材料の量が少ないため、細胞乾燥重量の測定は省略された。同等の条件下で培養シアノバクテリアにおけるタンパク質含量は細胞乾燥重量の25 &lt;の約...

ここでは、シアノバクテリア細胞のグリコーゲン含有量を測定するための信頼性の高い簡単なアッセイを提示します。この手順は、沈殿、選択可能な解重合、およびグルコース残渣の検出を必要とする。この方法は、野生型および遺伝子操作された株の両方に適しており、シアノバクテリアの代謝工学を促進することができる。

Cyanobacteria accumulate glycogen as a major intracellular carbon and energy storage&#160;during photosynthesis. Recent developments in research have ...

この手順の全体的な目的は、酵素による選択的加水分解およびアッセイを用いて、シアノバクテリア中のグリコーゲン含有量を測定することです。この手法は、調査対象であるさまざまなシアノバクテリア株の生理学、分子遺伝学、バイオエンジニアリングなど、シアノバクテリア研究における重要な課題の解決に寄与します。本手法の主な利点は、小スケールに適応しており、実施が容易であること、そしてグリコーゲンに対して高い感度と特異性を持つことです。この手法はシアノバクテリアに関する知見を得るために有効ですが、E.Coli、酵母、微細藻類、および様々な従属栄養的または光合成的な微生物など、グリコーゲンやデンプンを蓄積する他の微生物にも適用可能です。まず、テキストプロトコルに記載されている通りにシアノバクテリアの培養液を準備してください。次に、1 mLのシアノバクテリア培養液または細胞懸濁液を1.5 mLチューブに移します。次に、6,000 ×g、4 °Cで10分間遠心分離します。上清を捨て、ペレットを1 mLの50 mM Tris-HCL (pH 8)に再懸濁します。再懸濁したペレットを、前述と同様に遠心分離します。上清を捨て、細胞ペレットを再度 Tris-HCL バッファーで再懸濁します。前と同様にチューブを遠心分離し、上清を捨てます。その後、ペレットを 500 µL の 50 mM Tris-HCL バッファー (pH 8) で完全に再懸濁します。効率的な溶解のためには、ペレットを十分に懸濁させることが極めて重要です。再懸濁液は氷上に保持してください。再懸濁した細胞を4 °Cで超音波破砕機を用いて溶解させます。破砕条件は、最大振幅、周波数20 kHzで、30秒間の照射と90秒間の休止を1サイクルとし、計30サイクル行います。ライセートを含むチューブを6,000 ×g、4 °Cで10分間遠心分離します。遠心分離後、ペレットは主に大きな細胞残渣となり、上清をさらなる分析に使用します。この時点で、タンパク質定量キットを用いてタンパク質濃度を決定します。1.5 mLスクリューキャップチューブに900 µLのエタノールと得られた上清100 µLを混ぜ合わせ、細胞溶解液からクロロフィルaを除去します。キャップを閉めた後、標準的なラボ用ヒーティングブロックを使用して、チューブを90 °Cで10分間加熱します。その後、チューブを氷上で30分間インキュベートします。次に、チューブを20,000 ×g、4 °Cで30分間遠心分離します。遠心分離後、上清を慎重に取り除きます。ペレットにグリコーゲンが含まれています。余分なエタノールを取り除くため、ペレットを軽く風乾させます。溶解が困難になるのを避けるため、ペレットを乾燥させすぎないようにしてください。得られた上清の666ナノメートルにおける吸光度を測定し、クロ

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Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

このビデオでは、グリコーゲン合成酵素活性を推定するための分光光度法について説明しています。この方法は、NADHの吸光度が時間とともに減少することに依存しており、グリコーゲン合成酵素活性を示します。...

グリコーゲン合成酵素活性を測定するための分光光度法アッセイ

このビデオでは、特性が未定の構造を持つグリコーゲンサンプルの分岐の程度を決定するための定性的な分光光度法アッセイについて説明します。未評価のサンプルの最大吸光度を、分岐構造が既知の多糖類の吸光度最大と比較すると、未評価のサンプルに分岐が存在することがわかります。...

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グリコーゲンの生化学的滴定<em&gt;インビトロ</em

ここでは、定量的阻害吸光光度法によるシアノ バクテリアのフィコビリタンパク質の内容を決定するためのプロトコルを提案する.抽出手順でした; 他のシアノ...

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ここで、シアノバクテリア放出炭水化物ポリマーの単離およびエキソプロテオームの単離に関するプロトコルが記載されている。両方の手順は、さらなる分析または用途に使用できる高純度のポリマーまたはタンパク質を得るための重要なステップを具体化します。それらはまた特定のユーザーの必要性に従って容易に合わせることができる。...

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真核生物グリコーゲン代謝研究のための吸光光度法

スクロース密度勾配遠心分離を用いた肝グリコーゲンの抽出に最適なスクロース濃度を決定しました。グリコーゲン分解酵素を阻害するために10分間の煮沸ステップを加えると、有益であることが証明されました。...

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シアノバクテリアにおけるインタクトフィコビリソームの分離と特徴付け

本プロトコールでは、フルオロフォアアシスト炭水化物電気泳動(FACE)技術を用いて、グリコーゲンの鎖長分布(CLD)および平均鎖長(ACL)を決定しています。...

フルオロフォアアシスト炭水化物電気泳動(FACE)法を用いたグリコーゲンのグルカン鎖長分布の決定

従来のチップベースの段階希釈中にプラスチック製品へのペプチド吸着は、効力の決定に大きな影響を与え、創薬のリード同定およびリード最適化フェーズに使用される構造活性相関の理解を混乱させる可能性があります。ここでは、ペプチドサンプルの自動音響非接触段階希釈の方法について説明します。...

効力決意アッセイにおけるペプチドアゴニストの連続希釈のために調剤自動アコースティック

学ぶシアノバクテリアのグリコーゲン定量法。酵素選択的水解とGOD-POD試薬を用いて、生理学的研究や代謝工学に応用可能な高感度アッセイです。野生型および遺伝子組み換え株に対応し、小規模実験に適した簡便な手法を解説します。

シアノバクテリアにおけるグリコーゲン含有量の測定

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