Name: ネッタイシマカ蚊ボルバキアに感染維持 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: 学ぶ Wolbachia感染Aedes aegyptiの飼育管理プロトコル。デング熱などのウイルス伝播抑制に向けた研究と病媒制御プログラムに活用可能。適切な温度・湿度管理と栄養条件で安定した集団維持を実現する方法を解説。

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我々 は、恒林 Yeap、クリス ペイトン、Petrina ジョンソンと我々 の植民地のメンテナンス方法の開発への貢献のクレア ・ ドイグ、原稿を改善するを助けた彼らの提案の 3 つの匿名レビューを認めます。私たちの研究は国民の健康からアーッにプログラム助成と交わりによってサポートされ、Wellcome の信頼からの医学研究評議会と翻訳を与えます。PAR は、オーストラリア政府研究研修プログラム奨学の受信者です。

メルボルン人間倫理委員会の大学によって承認されたヒトに蚊の吸血 (承認 #: 0723847)。提供すべてのボランティアは、書面による同意を通知しました。
1. 仔魚飼育
注: 蚊は、26 ± 0.5 ° C、50-70% 相対湿度、このコロニーの管理用プロトコルの 12:12 h (明暗): 日長で開催されます。これらの条件は、 Ae。 ネッタイシマカ生存の開発44,45,46平均気候条件でケアンズ、オーストラリアと最適な熱設計レンジ内に似ています。高温ボルバキア感染蚊の植民地の損失につながるし、回避47をする必要があります。近親交配; を最小限に抑えるため人口あたりの少なくとも 500 の個人を維持します。小さいサイズの植民地を維持するフィットネス結果 [ロスら未発表] を持つことができます。[これらの条件と仮定して十分な栄養、平均世代時間は 28 日 (表 1参照) です。
<ol><li>魚料理の ~ 300 mg 基板上 3 L の水 (逆浸透膜水または高齢者の水道水、24 h 使用前のトレイで水道水を残すことによって生成された) を含んでいる (図 1 a) 皿に卵が水没 (押しつぶさ 1 タブレット、材料表を参照してください)、孵化48を誘導するためにアクティブな乾燥酵母のいくつかの穀物。</li>
	<li>孵化後 1 日約 500 幼虫を 4 リットルの水 (図 1 b) を含んでいる皿に転送、クリッカーのカウンターを使用してカウントするガラス ピペットを使用します。各トレイに 2 つの砕いた魚食品錠剤を追加します。必要な場合、飼育幼虫 (図 1 a)、異なるサイズのコンテナーを使用してが、混雑を避けるため 0.5 幼虫/mL 以下の幼虫の密度を保ちます。</li>
	<li>十分な食べ物がある幼虫を毎日トレイを確認します。約 2 つの食品の錠剤カセット 2 日毎に追加します。食品広告の自由を提供するが、0.5 mg/幼虫/日は開発は同期し、本体サイズを確保するためこの期間中に利用可能な一貫性のあるは、実験の結果が混同されることがありますそれ以外の場合 (代表の結果を参照してください)。</li>
	<li>幼虫の過食を避けるために世話をする、特に小型飼育容器少ない表面積および体積の水します。水に見える曇りまたは有意な幼虫の死亡率がある場合は、新鮮な水と交換します。死亡率は幼虫が最適に供給される場合は無視する必要があります。</li>
</ol>2. 羽化
注: は、よく供給される場合、孵化後 5 日目から蛹になる幼虫が開始され、大半が孵化後 7 日で蛹。大人は 26 ° C に最適維持した場合蛹化後約 2 日を新たな開始されます (代表の結果を参照してください)。十分な食べ物が23,,3949を提供されるとき、幼虫の発育は通常ボルバキア感染によって影響を受ける。
<ol><li>孵化後 7 日間は細かいメッシュを通してトレイの内容全体を注ぐ (細孔サイズ 0.4 mm)。Ovicups で後で使用できるフィルター処理された幼虫水を保つ (「血の摂食と産卵」セクションを参照).メッシュを反転し、蛹を転送するための水の 200 mL のプラスチック製の容器にそれをつけます。任意の幼虫が残っている場合は、追加の食糧を提供します。</li>
	<li>10% ショ糖液 (図 1 階) の 2 つのカップと乾燥 (図 1E) を防ぐために湿ったコットン ウールの 2 つのカップを提供することで羽化ケージ (図 1) を準備します。</li>
	<li>蛹は、セックスでソートする必要はありません、ケージに蛹の蓋付きの容器を配置し、蓋を少しケージに出現する大人を許可するように半開き。また、逆漏斗を溺死を最小限に抑えるためコンテナーにかぶせます。すべての大人が遅い開発者に対して選択を防ぐためにケージからコンテナーを削除する前に浮上しているを確認します。</li>
</ol>3. 蛹アウトブ リードを雌雄鑑別
<ol><li>蛹はセックス (例えば、アウトブ リードの) でソートする場合、トレイの幼虫から蛹のピペット、男女 (図 2) に分割プラスチック容器 (図 1 a) 200 mL の水ですべての 24 h 各性の必要な数まで達しています。容器に蓋を配置して閉じておきます。</li>
	<li>大人は、容器に出てくるケージ (図 2) に解放する前に性別を確認します。性欲を刺激しない正しく出現の 24 h 内吸引で性的に成熟に達する前に大人を削除します。男女が確認した後は、すべての 24 h の檻に大人をリリースします。</li>
	<li>
ボルバキアを取得する-自然な人口に類似した遺伝的背景の感染したコロニー outcrossボルバキアを追加することによって-の人件によって収集された卵から感染していない男性のケージに植民地研究室から女性を感染フィールド39、人口あたりの 500 の個人の所定の密度を維持します。
	<ol>
<li>少なくとも 87.5% フィールド人口39遺伝的に類似のコロニーを生成する少なくとも 3 つの連続した世代の交雑を繰り返します。重要: この段階では、男女が正しいことことを確認 (手順 3.1 参照)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>女性Ae。 ネッタイシマカは、さらに受精交尾50時間以内に通常耐火物。コロニーをアウトブ リードとは、すべての男性に、平等な機会を提供する 2 日間別のケージの中で成熟し、オスのケージにメスを吸引の女性と男性を許可します。</li>
</ol>4. 吸血と産卵
<ol><li>
最後の女性は成熟する十分な時間を許可するように吸血の前に出現した後少なくとも 3 日間待ちます。血液は、過剰死亡率、特に悪影響を及ぼす長寿22,24,49ボルバキア感染症と蚊を防ぐために出現の 2 週間以内、女性をフィードしました。砂糖カップ供給率を改善するために供給する前に日を削除します。
	<ol>
<li>フィードにメスの蚊を許可するようにケージに前腕を挿入するボランティアを頼みなさい。ほとんどの女性が 5 分以内で腹いっぱいフィードしますが、遅いフィーダーに対して選択範囲を減らすために、15 分間またはすべての女性は充血目に見えて; までケージで前腕を残す刺されてから手を保護するためにラテックス手袋はオプションですが推奨されます。</li>
		<li>吸血後、2 日間は、卵を産むための女性のためケージに幼虫飼育水を含むとサンドペーパー (図 1) (またはろ紙 (図 1 H)) のストリップと並ぶ 2 つのプラスチック カップを配置します。部分的にそれを湿った保つ水サンドペーパー ストリップが水没します。その他女性が産卵カップ外卵を産むを防ぐために水の源を削除します。 注: は、カップで水道水を使用することがありますが、仔魚飼育水が産卵51,52を奨励し、女性はより同期的に彼らの卵を産みます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 卵のコレクションとコンディショニング
<ol><li>女性はサンドペーパー、水行のすぐ上に卵を産む収集し、ないより多くの卵を置いたまで紙やすりのストリップを毎日交換します。産卵したが 1 週間続けることがありますに注意してください。</li>
	<li>軽く 30 のペーパー タオルの上それらをしみが付くことによって部分的に乾燥サンドペーパー ストリップ s、卵が外れないように世話します。乾燥したペーパー タオルのシートでストリップをラップし、密閉式のビニール袋 (図 1I) に配置します。</li>
	<li>解剖顕微鏡 (図 3) の下で卵の状態を確認します。場合はサンドペーパーのストリップが余りにぬれて、水 (図 3 b)、水没する前に卵がありますが、卵も厳しく、乾燥した場合 (図 3) 崩壊するかもしれない。</li>
	<li>卵は 3 日後コレクションを超えていつでも孵化することができます。個人の大きなランダム プールから次世代をサンプリングするように水の同じコンテナーにすべての日にわたって収集、各コロニーからのすべての卵を孵化します。</li>
	<li>長期保存用は、20 ° c. のまわりで、(> 80%) 高湿度で密封された容器で卵をしてください。これらの条件の下で高いハッチ率53,54を維持しながら数ヶ月間卵ボルバキアなくを格納できます。</li>
	<li>いくつかのボルバキア感染年齢49,55卵の生存率を大幅に削減とボルバキアから卵を孵化-線関連の余分な死亡率を防ぐためにコレクションの 1 週間以内に感染しています。系統。血は 1 週間後に再度女性をフィード以上の卵が必要な場合。</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>日</td>
			<td colspan="3">ステップ</td>
		</tr>
<tr>
<td>0</td>
			<td colspan="3">ハッチ卵</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td colspan="3">トレイに数幼虫</td>
		</tr>
<tr>
<td>7</td>
			<td colspan="3">コロニーのケージに幼虫や蛹を転送します。</td>
		</tr>
<tr>
<td>17</td>
			<td colspan="3">血を養う雌成虫</td>
		</tr>
<tr>
<td>21</td>
			<td colspan="3">卵の収集を開始します。</td>
		</tr>
<tr>
<td>25</td>
			<td colspan="3">卵を収集完了します。</td>
		</tr>
<tr>
<td>28</td>
			<td colspan="3">ハッチ卵</td>
		</tr>
</tbody></table>表 1:26 でAe ネッタイシマカコロニー メンテナンス スケジュールの概要 ° c 。女性吸血、卵の孵化のタイミングは柔軟性が高く、しかし、ボルバキア、死亡率を最小限に抑えるため感染蚊のために特に、これらの段階での長い期間を避ける必要があります。このスケジュールは以下の幼虫が最適に供給されることは、高速または開発またはすべてのライフ ステージで成熟するが遅い蚊に対する選択を最小限にします。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig1.jpg"> 図 1: 機器Ae ネッタイシマカ研究室での飼育に使用します。 。(A) プラスチック容器、卵を孵化または 500 のボリュームで幼虫を飼育 (左から右へ) 750 と 5,000 mL。(B) トレイ 4 L の水に通常 500 幼虫管理密度で幼虫の飼育に使用します。(C) 19.7 L や 3 L (D) ケージ住宅大人に使われます。25 大人の密度またはリットル以下は十分なスペースを提供するために維持されるべき。(E) 35 mL カップに湿った脱脂綿大人への水の源として提供します。砂糖の原料としてコードまたは歯科芯を通じて提供されるショ糖 (F) 35 mL カップ。(G-H)カップ幼虫飼育水で満たされた、サンドペーパーまたはフィルター ペーパーの産卵基質が並ぶ (G H、それぞれ)。(私) Zip ロック袋サンドペーパー ストリップまたはろ紙のストレージに使用されます。サンドペーパーに黒い斑点が、蚊の卵です。<a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig2.jpg"> 図 2: 横 (A) と背 (B) ビューの蛹と (C) の性の二形性を示す大人ネッタイシマカ Ae 。 。男性は、左右の各パネルの右上の女性に配置されます。オスとメスの蛹がサイズによって区別される最適供給されるとき女性男性 (A) よりも大きく、比較的球根の頭胸部平坦な側面 (B) のある男性と比較しています。成人男性は、環状アンテナと長い palps によって主にすべての飼育条件下での女性と簡単に区別されます。<a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig3.jpg"> 図 3。異なる条件下で 4 日間の古いAe。 ネッタイシマカの卵。(A) そのまま卵サンドペーパー ストリップ、可視可能な湿気ではなく (> 80%) 高湿度を維持します。正しく維持される場合ハッチ率は野生型Ae。 ネッタイシマカの 90% を超えるはずです。(早熟な孵化) 水に浸漬されている前にハッチ (B) 卵は、戸建の卵の帽子と目に見える幼虫によって区別されます。これはサンドペーパー ストリップだったあまりにも湿った保たれることを示します。厳しく乾燥 (C) 卵に崩壊するかもしれないと凹面外見で明確に表示されます。サンドペーパーは堅くなる場合は、卵が乾燥しすぎてかもしれないことをこれを示します。<a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

著者は、彼らは競合する金銭的な利益があることを宣言します。

ボルバキアのメンテナンスはここで説明したプロトコルに従う-感染したAe。 ネッタイシマカするように一貫した品質の健康的な蚊実験に対して生成されますフィールド リリースを開きます。(参照57を参照) 蚊の大量の生産を優先する他のプロトコルとは対照的メソッド、フィットネス、リラックスの飼育条件を実装することによって、全体の世代の両方を最大化に焦点を当てています。近親交配、選択および研究所の適応を最小限に抑えることによって世代。このプロトコルはボルバキア感染症ネッタイシマカ Ae。具体的に設計されても、 Ae。 ネッタイシマカの任意のタイプに適してする必要があります。しかし、人口抑制57,58を達成するために高い数字を必要とする滅菌または互換性のない昆虫のリリースに必要なすることができます (の順に 1 週間あたり数百万)、大量の飼育に適したはありません。
<p class="jov...

ネッタイシマカ蚊はデング熱、ジカ、チクングニア1を含む世界で最も重要なアルボ ウイルスの一部を送信するために責任があります。これらのウイルスは、熱帯地方でAe。 ネッタイシマカの広範な分布は2,3、4を展開し続けている地球規模の健康にさらなる脅威になっています。女性Ae。 ネッタイシマカ優先的に人間の血液5フィードし、従って人間、特に人口が最も密な都会の近くに住んでいる傾向にあります。この人間と密接な関係を彼らはまたタイヤやポット、溝、水タンク6,7を含む人工生息地で繁殖を適応しています。ネッタイシマカ Ae。は、どこ彼らはヤブカ属8、いくつかの他の種とは異なり、フィールドから直接収集される後要件を特別なことがなく維持することができます研究室環境にも容易に適応します。 9,10。メンテナンスの容易さは幅広い分野の研究所で広く研究それらを見ている、送信可能性があります最終的に病気蚊を制御することを目指しています。
伝統的に、arboviral コントロールは、蚊の個体数を減らすために殺虫剤の使用に大きく依存しています。ただし、組み換え蚊の飼育し、自然集団にそれから解放されるどこのアプローチに関心が高まっています。遺伝子11,12,13, 生物学的14,15、照射まで16、化学治療17,18, リリースされた蚊を変更することがあります。または結合テクニック19蚊の個体数を抑制または arboviral 伝送20に難治性蚊でそれらを置換します。
ボルバキアは現在.アルボ ウイルスの生物防除剤として使用されている細菌です。いくつかの系統のボルバキア最近Ae。 ネッタイシマカ胚マイクロインジェクション21,22,23,24を用いて実験導入されました。これらの系統はアルボ ウイルスを発信し、その伝送潜在的な23,25,26,27,28 を減少、蚊で複製の容量を減らす.しかし、感染した男性は、感染していない女性22と交尾するとき特定の菌株が不妊を誘発するボルバキア感染症は母からの子孫に送信されます。ボルバキア-自然な蚊の個体数、最近他ヤブカ属種15,29で実証を抑える大量に感染した男性を解放できます。ただし、ボルバキアはまたAe。 ネッタイシマカにおける arboviral 伝送を阻害する、ので、蚊は貧しいベクトル ネイティブ集団に置き換えるにも解放します。Ae。 ネッタイシマカボルバキアに感染は、この後者のアプローチ14,30,31を使用していくつかの国のフィールドに今リリースされています。
ボルバキア-arboviral コントロール ベースのアプローチがボルバキア蚊と環境間の相互作用の正しい理解に依存します。ボルバキアは昆虫の広い範囲で自然発生して蚊に導入された系統の効果32に多様であります。新しいボルバキア感染型がAe。 ネッタイシマカ24に導入し、各蚊フィットネス、複製および条件の範囲の下で arboviral の干渉に及ぼすひずみの特性評価に必要です。実験室での厳密な実験は、ボルバキア系統分野で成功するための潜在性を評価するため必要です。
オープン フィールド リリースAe。 ネッタイシマカのボルバキア感染症はしばしば数千から数万するリリース ゾーンごとの蚊の飼育各週14,30,31を要求できます。初期リリースの成功は、多産33と交尾成功34,35最大限に大型の蚊を解放することによって改善できます。蚊は、動作とフィールド性能36,37に影響を与えることができる生理学の変更を引き起こす可能性があります。 ただし長期研究所子育てにおいて必要となる条件に合わせる必要があります。 38。
基本的な機器を使用して実験室でAe。 ネッタイシマカを飼育用簡易プロトコルについて述べる。このプロトコルに適して両方の野生型とボルバキアの後者では、いくつかの系統のボルバキア蚊生活史形質39,に対する相当な効果を持っていると、特に注意が必要ことができます蚊を感染40飼育状況を過密とベクトル能力およびフィットネス実験に不可欠です、蚊がフィールド リリース41 健康確保されます一貫性のあるサイズの蚊を生成する食糧のための競争を避ける。.また選択的な圧力を減らすことによって研究所適応と近親交配を最小限に抑えるための予防策をとるし、大きなランダム プールからサンプリングは次の世代を確保すること。ただし、研究室環境は明らかに異なる圃場条件、リラックスした条件の下での長期的な保守は、フィールド37,42,43 にリリース時に蚊のフィットネスを減らすことができます。.我々 はこのため、フィールド収集の男性で、定期的に検査ラインから実験的比較のため遺伝的に類似しているし、ターゲット フィールド人口39に適応しており、植民地の女性を越えます。メソッドは、特別な機器を必要としないし、フィールド リリース週個人の何千もの数十奥にスケール アップすることができます。プロトコルはまた蚊内および世代間のフィットネス、自然集団の設立宛ての昆虫のための重要な考慮事項を優先します。プロトコルは、特に蚊やフィールドに relatability の一貫した品質が重要な実験的比較のためのAe。 ネッタイシマカメンテナンスが必要なほとんどの所に適しています。

<table><tbody><tr><td>野生型 Aedes aegypti</td><td></td><td></td>オーストラリア<td>、クイーンズランド州の野外所から採集、詳細は Yeap 他を参照39</td></tr> <tr><td>詳細についてはw メル感染 Aedes aegypti</td><td></td><td></td> <td>モナッシュ大学提供。</td></tr><tr>モナッシュ大学が提供する<td>wAlbB感染菌株Aedes aegypti</td><td></td><td></td>については、ウォーカー他23を参照してください<td>。</td></tr><tr>モナッシュ大学が提供する<td>wMelPop感染菌Aedes aegypti</td><td></td><td></td>については、習近平他21を参照してください<td>。Instant dry yeast Lowan Stimulates egg hatching<株については、McMeniman and otherssup class="xref">22</td></tr>を参照してください<tr><td></td><td></td>。<td></td><td>一般の食料品店で見かけます。他のブランドは、</td></tr><tr><td>5 Lプラスチック浴槽</td>象<td>限</td><td>Q110950</td>幼<td>虫の孵化と飼育に使用されます。他の製品は、</td></tr><tr><td>魚介類(テトラミントロピカルタブレット)</td><td>テトラ</td><td>16152</td>食品<td>の供給源として幼虫に提供されることがあります。Webアドレス:https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td></tr><tr><td>プラスチック容器</td><td></td><td></td>幼<td>虫の飼育に使用されます。500mLを超えるプラスチック容器は、容器</td></tr><tr>間で幼虫と蛹を移動させるために使用される<td>ガラスピペット</td><td></td><td></td><td>に適しています。ウェブアドレス:https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td></tr><tr><td>クリッカーカウンター</td><td>RS Pro</td><td>710-5212</td><td>幼虫、蛹、卵の数え方を補助するために使用されます。ウェブアドレス:http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td></tr><tr><td>飼育トレイグラ</td><td>トネル幼</td><td></td><td>虫の飼育に使用されます。ウェブアドレス:http://www.gratnells.com</td></tr><tr><td>ナイロンメッシュ</td><td></td><td></td>幼<td>虫と蛹を淡水の容器に移すために使用されます。他のブランドを使用することもできます。ウェブアドレス:https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td></tr><tr><td>ケージ</td><td>BugDorm</td><td>DP1000</td><td>は大人の蚊を収容します。代替製品を使用することもできます。ウェブアドレス:http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td></tr><tr><td>35mLプラスチックカップ</td><td>フタマキ</td><td>AA272225</td><td>成虫の蚊に水やショ糖を供給するために使用されます。他のブランドは、</td></tr><tr><td>35 mLのプラスチックカップの蓋</td><td>フタマキ</td><td>GB030005</td><td>成虫の蚊にスクロースを提供するために使用されます。他のブランドが使用できます</td></tr><tr><td>脱脂綿</td><td>Cutisoft</td><td>71841-13</td><td>しっとりとした脱脂綿は、大人の水源として提供されます。他のブランドは、</td></tr><tr>成虫の蚊に砂糖の供給源として提供される<td>白砂糖</td><td></td><td></td>を使用することができます<td>。一般的な食料品店で見つけた</td></tr><tr><td>ロープ</td><td>Mレヒト</td><td>アクセサリーC323C / W</td>大人<td>にスクロース溶液を提供するために使用されます。他のブランドを使用することもできます。Webアドレス:https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td></tr> <tr><td>プラスチックカップ(大)</td><td></td><td></td><td>産卵容器として使用します。100 mLの水を保持するプラスチックカップは、</td></tr><tr>産卵基材として提供される<td></td><td>適切なサンド</td><td>ペーパーNorton Master Painters</td> CE015962である必要があります<td>。代替商品を使うこともありますが、比較的無臭なのでこのブランドを使っています。卵とのコントラストのために明るい色が使用されています。ウェブアドレス:https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td></tr><tr><td>ろ紙</td><td>Whatman</td><td>1001-150</td>代替<td>産卵基材として使用されます。他のブランドは、</td></tr><tr><td>ラテックス手袋</td><td>SemperGuard</td><td>Z560979</td><td>血液供給時に手に蚊に刺されるのを防ぎます。他のブランドを使用することもできます。ウェブアドレス:http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td></tr></tbody></table>

ネッタイシマカ蚊ボルバキアに感染維持

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

ボルバキア感染ネッタイシマカ蚊はデング熱、チクングニア、ジカなどアルボ ウイルスの広がりを制御するためのプログラムで利用されています。ボルバキア-互換性のない交配による人口サイズを減らすか、またはウイルスの伝播に難治性蚊個体群に変換するフィールドに感染した蚊を解放ことができます。成功するためにこれらの戦略は、実験室からフィールドに蚊がネイティブ蚊と競争力のある必要があります。ただし、実験室で蚊を維持、近親交配や遺伝的浮動フィールドに自分の体力を減らすことができるし、実験の結果を混同するかもしれない研究所適応誤る。フィールドの配置のための別のボルバキア感染症の適合性をテストするため複数世代にわたって管理されたラボ環境で蚊を維持するために必要です。我々 は両方のボルバキアに適している所にAe。 ネッタイシマカ蚊を維持するための単純なプロトコルを記述する-感染し、野生型の蚊。メソッド研究所適応を最小限にし、実験フィールド蚊との関連性を高めるためアウトブ リードを実装します。さらに、植民地は、オープン フィールドのリリースのための自分の体力を最大化する最適な条件の下で維持されます。

図 4は、 Ae。 ネッタイシマカ幼虫の発育に最適な栄養の影響を示しています。ときコンテナー幼虫 1 日あたりの食品の 0.25 mg または以下の両方の男性と女性、開発時間が増加は容器のより少ない同期提供 0.5 mg 食品の。幼虫の発育期間を通して十分な食糧を指定しない場合このメンテナンス スケジュールに悪影響があります。遅い開発個人に対して選択されているの危険性が、吸血を遅らせることが、複製が発生する前に大人の死亡のリスクが高いがあります。
図 5は、さまざまな栄養政権下でAe。 ネッタイシマカ成虫の翅長 (体の大きさの見積もり) を示しています。男性と女性の両方の翼の長さは大幅に減少し、栄養が最適ではない場合より変数になります。制服ボディ サイズ、本体サイズは多産に積極的に関連付けられて大き...

ボルバキアに感染しているネッタイシマカ蚊はアルボ ウイルスの伝達を抑制する自然集団にリリースされています。我々 は研究所適応と選択範囲を最小限に抑えるための対策を講じて実験およびフィールド ・ リリース、ボルバキア感染症研究室と後部Ae。 ネッタイシマカに方法を説明します。

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

本プロトコルの目的は、Wolbachiaに感染したネッタイシマカ（Aedes aegypti）の維持管理方法について記述することです。これらの蚊は、デング熱やその他のウイルスの伝播を抑制するために世界中で放出されています。本プロトコルのネッタイシマカの飼育方法は、実験や疾病管理プログラムに蚊を利用することに関心を持つあらゆる研究者に活用いただけます。この手法は、不妊昆虫放出法を含む蚊の個体数制御プログラムに向けた、遺伝子組み換え蚊の飼育にも利用可能です。このアプローチに含まれる原理は、他の病原体媒介種の飼育にも適用できます。本プロトコールでは、蚊を約26 °C、相対湿度50～70%の環境下で、赤道地域の光周期に従って飼育してください。高温で飼育するとWolbachia感染が消失する可能性があるため、コロニーを過熱させないでください。近交弱勢を最小限に抑えるため、1集団あたり約500匹の蚊を維持してください。適切な栄養管理のもとで本プロトコルを用いることにより、28日サイクルで世代を更新できます。基質上の卵から開始します。孵化を誘導するため、水 3 L に魚類飼料 約 300 mg と少量の活性乾燥酵母を加えたトレイに卵を浸します。孵化の 1 日後、ガラスピペットを用いて約 500 匹の幼魚を、水 4 L と新鮮な魚類飼料を入れたトレイに移します。幼虫に十分な餌があるか、毎日トレイを確認してください。最適な餌の供給量を維持するため、1日おきに約600 milligramsの魚用餌を添加します。餌を与えすぎると水が濁り、死滅につながる可能性があるため、必要に応じて水を交換してください。栄養状態と温度が適切に維持されていれば、幼虫は孵化から5〜7日で蛹になります。そして、その約2日後に成虫が羽化します。孵化から7日後に、トレイの内容物すべてを細かいメッシュで濾します。ろ過した水の一部を5リットルの容器に保持し、同一コロニー内の卵の配置に使用します。次に、メッシュを反転させ、200 millilitersの水を入れたプラスチック容器に浸して蛹を移します。残っている幼虫に餌を与えるため、適量の餌を添加します。次に、成虫の羽化ケージを準備し、10% sucrose溶液を入れたカップを2個と、乾燥を防ぐための湿らせた脱脂綿を入れたカップを2個設置します。蛹を性別ごとに分ける必要がない場合は、蛹の容器をケージの中に入れ、成虫が脱出してケージ内に入れるよう、蓋をわずかに開けておきます。すべての成虫が羽化した後、容器をケージから取り出します。容器を早く取り出すことで、発育の遅い個体を選別して排除しないようにしてください。未交尾の蚊を採集するため、24時間ごとに、幼虫飼育トレイから蛹を200 millilitersの水を入れたプラスチック容器に移します。その後、サイズによって雌雄

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオは、ハ​​マダラカの細胞株とし、無細胞培地で培養endosymbiontをからボルバキアpipientisを精製する方法を説明します。細菌の生存のためのアッセイは、示されている。...

無細胞培地でボルバキアの維持

RIDL®(優勢致死性を持つ昆虫の放出)システムを用いてAedes...

ブラジルにおけるフィールドリリースのための遺伝子組み換え Aedes aegypti の大量生産

提示されたプロトコルは、封じ込めの設定で、ジカのような特定のウイルスに対する Aedes aegypti...

ジカウイルスを用いた Aedes aegypti蚊の ベクターコンピテンス分析

記載されているのは、卵を数え、24個の井戸組織培養プレートを使用して個々の蚊の孵化率を決定する時間と省スペースの方法であり、これは胎児性および生殖能力アッセイの規模と速度を大幅に増加させることができる。...

24ウェル組織培養プレート(EAgaLプレート)を用いた Aedes aegypti のフェクアンディティと不妊治療アッセイの改善

このプロトコルは、CRISPR/Cas9遺伝子編集ツールで動作するように最適化された Culex quinquefasciatus...

キュレックス・キンケファシアトゥスにおける効率的な部位特異的変異誘発のための胚微小注入技術

ミクロスポリド寄生虫 エダリアシア・アダイスを培養するプロトコル.寄生虫は、幼虫段階で水平移動を介して Aedes aegypti...

アエデスアエジプティ蚊における微小胞体寄生虫・エダリア・アダイスの伝播

無菌昆虫技術(SIT)は、化学的防除に耐性がある可能性のある特定の医学的に重要な蚊の個体数を制御するために使用されます。ここでは、 ネッタイシマカ...

照射され、マークされたオスの ネッタイシマカ を、操作可能な滅菌昆虫技術プログラムで放出するための準備

ここでは、蛍光色素をマーカーとして用いた雄 のAedes aegypti の交配性を研究するためのプロトコルを提示する。雌の蚊は、交尾のためにマークされた男性と無印の両方の雄にさらされます。交配後、それらの精子は、交配パートナーを決定するために蛍光顕微鏡下で検査される。...

蛍光色素、ローダミンBを用いて、オス のアエデスアエジプティ 蚊の交配競争力を研究する

細胞内ボルバキアの検出には4つの方法を用い、抗生物質を用いた天然型ボルバキア感染症を治したヒトスジシマカ由来Aa23とAa23-Tのボルバキア感染の検出精度を向上させ、互いに補完し合いました。...

ヒトスジシマカ細胞株における ボルバキア 株 wAlbBの 検出

本プロトコルでは、 ネッタイシマカ...

トランスジェニック ネッタイシマカ の適応コストの定量化

細胞株は、宿主細胞の外部で培養できない細胞内生物の研究に有用です。 ボルバキアに感染した系統は多くの発見を可能にしてきましたが、これらの系統内の不均一性は、実験結果にばらつきをもたらす可能性があります。...

ボルバキア感染ショウジョウバエmelanogasterJW18細胞株からのモノクローナル培養物の生成

学ぶ Wolbachia感染Aedes aegyptiの飼育管理プロトコル。デング熱などのウイルス伝播抑制に向けた研究と病媒制御プログラムに活用可能。適切な温度・湿度管理と栄養条件で安定した集団維持を実現する方法を解説。

ネッタイシマカ蚊ボルバキアに感染維持

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