適切なポジショニングと骨のマイクロ アーキテクチャを使用して体内のマイクロ-コンピューター断層撮影の焦点の高分解能イメージングのためのラットの後肢の拘束

本稿は、マイクロで計算された断層レントゲン写真撮影 (µCT) スキャナー体内のユーザー麻酔、正しく位置および脛骨の高分解能イメージング中に最小限の動きでラットの後肢を抑制する方法を指示します。結果は骨のマイクロ アーキテクチャを正確に定量化する処理することができます高品質の画像です。

この手順の全体的な目標は、In Vivo マイクロ コンピューター断層撮影を使用して、近位脛骨と遠位大腿骨の骨マイクロ アーキテクチャの焦点を合わせた高解像度画像を取得するために、ラットの後肢を適切に配置して拘束することです。この方法は、マイクロCTによるIn Vivo画像の取得に関する重要な質問に答えるのに役立ち、後肢の適切な位置決めと拘束のためのガイダンスを提供します。この手順の主な利点は、一貫性の高い画像を取得し、縦断的研究中に発生する骨のマイクロアーキテクチャの変化を定量化するために使用できることです。

ラットをカーボンファイバースキャナーベッドの仰臥位に置きます。つま先をつまむことに反応しないことで適切な鎮静レベルを確認した後、動物の目に眼科用潤滑剤を塗布します。つま先が一方の端から伸びている可鍛性フォームチューブで足を拘束し、フォームが関心のある領域に伸びないように注意しながら、デンタルワックスを塗布して足をフォーム内にしっかりと保持します。

チューブをテープでしっかりと密封し、フォームをチューブに挿入します。フォームとチューブがしっかりとはまっていることを確認し、チューブをX線スキャナーベッドにスライドさせます。脚がぴんと張るまで後肢を伸ばします。

膝関節の位置を触診し、反対側の後肢と尾を胴体に向かって引っ張ることにより、過度の伸展の欠如を確認します。後肢を胴体から離して脚がぴんと張るまで伸ばすことで、X線が骨のすべての領域をできるだけ同様のパターンで通過することを確認します。次に、マスキングテープのいくつかの接着面を拭き取り、修正したテープを使用して、伸びていない後肢と尾を固定し、スキャン視野から外れないようにします。

次に、腰、肩、頭、鼻のコーンをスキャンベッドに固定します。動物を獣医用ラップで包んで熱損失を制限し、標準プロトコルに従って適切な実験パラメータを使用してマイクロコンピューター断層撮影で動物を画像化します。すべての画像を取得したら、動物が部分的に加熱された個々のケージで回復し、完全に横臥するまで監視します。

ラットの後肢の適切な位置決めには、脚を完全に伸ばし、足全体と足首を発泡スチロールで拘束することが含まれ、その結果、小柱および皮質のマイクロアーキテクチャの分析に十分な品質の画像が得られます。後肢の配置が不十分で拘束すると、動きのアーチファクトを伴う画像が作成される可能性がありますが、スキャン視野から完全に除去されていない尾部は、スキャンサンプルによるX線減衰を妨げ、骨髄と組織のミネラル密度の測定値を変化させます。習得すると、この手順は5〜10分で適切に実行できます。

この手順を実行するときは、ラットの呼吸数、鎮静レベル、および放射線被曝量を常に認識することが重要です。この手順は、大腿骨遠位端や腰椎などの他の骨格部位を評価するために変更して使用できます。さらに、この手順は、マウスなどの他のげっ歯類の種に修正して使用することができます。

このビデオを見た後、近位脛骨の骨マイクロアーキテクチャの焦点を合わせ、一貫した高解像度イメージングのために、ラットの後肢を適切に配置および拘束する方法を十分に理解しているはずです。