機能と神経病理学的評価の c57bl/6 マウスの実験的自己免疫性視神経炎を誘導するための単純なアプローチ

この手順の全体的な目標は、疾患プロセスの機能的および病理学的分析のために、マウスモデルで実験的自己免疫性神経炎またはEANを成功裏に誘導することです。EANモデルは、末梢神経障害に関連する主要な問題に対処するために使用できます。また、新規治療薬の有効性を調査する可能性のある素晴らしいモデルでもあります。

このアプローチの主な利点は、マウスでEANモデルを使用するときに適用できるシンプルで客観的な機能テストパラダイムを提供することです。今日、私と一緒に手順を実演しているのは、メルボルン大学のニューロトロフィンおよびミエリン生物学研究室の学部生であるSang Won Yooです。病気の誘発の3日前に、運動機能評価装置の電源を入れ、ライトボタンのスイッチを入れてください。

マウスを手に取り、赤い食用色素の容器に降ろします。マウスを歩行コンパートメントに置き、トレッドミルの速度を毎秒15センチメートルに設定します。トレッドミルの電源を入れ、[記録]をクリックして、歩行機能イメージングシステムを使用して、マウスの走行動作を36秒間キャプチャします。

36秒後、録画とトレッドミルを停止し、練習走行の練習走行動画 file 指定されたフォルダに保存します。最初の予防接種の1日前に、30-1 / 2ゲージ針を備えた0.5ミリリットルの注射器を使用して、250マイクロリットルのマウス等張性PBS IPに百日咳毒素1.6マイクログラム/1.6マイクログラムを投与し、6〜8週齢の男性C57BL / 6マウスに麻酔をかけます。.次に、表に従ってマウスにEANの臨床徴候を0から4のスケールで採点し、示したように運動機能評価を実行します。

翌日、0.9%生理食塩水に同量のペプチド溶液を、結核菌1ミリリットルあたり20ミリグラムをビーズで混合し、室温で1分間最高速度で溶液を混合します。23ゲージの針を備えたシリンジに接種材料をセットし、シリンジを反転させて振とうしてから、シリンジシャフト内の空気を排出します。接種物を送達する前に、肩甲骨の間の正中線のすぐ外側の髪を取り除き、露出した皮膚を70%エタノールで消毒します。.

次に、Adson鉗子のペアを使用して皮膚をつかみ、皮下注射を介して百日咳毒素を注入したマウスに50マイクロリットルの溶液を送達します。翌朝、ちょうど示したように、250マイクロリットルのPBS IPに百日咳毒素1.2マイクログラム/ミリリットルの百日咳毒素を48時間後に注入します。3回目の百日咳注射の3日後、以前と同じ注射部位にさらに50マイクロリットルの新しく調製した接種物を投与し、実験が終了するまで週に2回、動物の臨床スコアと運動機能を監視します。

C57BL/6マウスにおけるP0 180-199ペプチド誘導EANは、初回免疫後6日目から臨床スコアが発現し、初回免疫後25日目にスコアの重症度が最大となり、初回免疫後40日目に臨床スコアが若干改善する単相性疾患を引き起こします。マウスは、初回免疫後6日という早い時期に単純なランニングタスクで失敗し始め、単純なトレッドミルランニングタスクを免疫後35日までに完了する能力はほとんどなく、初回免疫後55日でランニング能力が向上しません。ペプチド誘発EANマウスの坐骨神経の半薄切片の検査により、年齢が一致した健康な対照群の坐骨神経と比較して、脱髄の領域が明らかになります。

高出力透過型電子顕微鏡画像は、脱髄、ミエリンラメラの損傷、ミトコンドリアの腫脹などの軸索ストレスの兆候など、特定の神経病理学的特徴の同定を可能にします。これらの動物は、年齢が一致した健康な対照組織では観察されない坐骨神経での外傷性上昇ベータアミロイド前駆体タンパク質発現によって証明されるように、急性軸索損傷も示します。ノードの幅が広がり、パラノードが分断されることも観察されます。

一度習得すると、皮下注射はマウスあたり約5〜10分以内に行うことができ、注射エラーの可能性は最小限に抑えられます。この手順を試みるときは、注射部位を観察して、すべての接種物が注射部位内に残り、そのどれもが漏れていないことを確認することが非常に重要です。トレッドミル歩行のビデオキャプチャは、遊脚相や歩幅などの他のパラメータを計算できるため、非常に優れており、これらの測定値は新しい治療法の有効性をテストする際に重要になる可能性があります。

このビデオを見た後、C57BL/6雄マウスでEANを誘導する方法を本当によく理解しているはずです。さらに、注射エラーがないように、安全かつ正確に皮下注射を行う方法について、非常によく理解している必要があります。針や接種物を使用すると、特に鋭利物を使用すると怪我をする可能性があることを忘れないでください。

ですから、怪我をする可能性を避けるために、常に鉗子を使用し、皮膚や組織を手でつかまないようにし、使い捨ての注射器を使用して、その過程で決して再キャップしないことは本当に良い考えです。