Name: 乾燥 - 加齢黄斑変性症の視細胞の細胞移植による再生療法:体内の予備的なレポート (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 24 s
Description: 学ぶ、乾性加齢黄斑変性症の視細胞再生療法。脂肪由来幹細胞と血小板を用いた脈絡膜上移植により、視力と網膜感度を改善する革新的な外科手術技術を探索する。

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著者の謝辞があります。

低ビジョン アカデミーの倫理委員会で承認された研究のプロトコルとすべての科目はヘルシンキ宣言に従って書面による同意署名します。この研究は、ラフバラからシェフィールド大学倫理的な承認を受けた。
注: 脈絡自家移植 Limoli 網膜修復法 (LRRT) による乾燥 - 加齢黄斑変性症患者の包含と除外基準は、表 1に示すです。
1. 乾燥 - 加齢黄斑変性症患者の診断
<ol><li>共焦点走査型レーザー検眼鏡、SD-10 月、私と診断を確認します。</li>
	<li>遠くと近くの各グループの BCVA を評価します。メジャー メーカー ポイント単位 (Pts) で近いビジョン (クローズ アップ) のために。BCVA 時間 0 (T0) 90 (T90) を測定し、180 日間初期の治療糖尿病網膜症の研究と比較して (T180) ログマー 4 メートルで (EDTRS) グラフ。</li>
	<li>レコード電気幼魚、薄明視と明所視細胞の活動、または国際臨床視覚電気生理学 (ISCEV)11会によって 2009 年に設定された基準によると、フラッシュの ERG。</li>
</ol>2. anesthetization
注: LRRT の中に麻酔のゴールド スタンダードは局所麻酔、麻酔と鎮静のサブほぞの含浸による補強です。特定のケースで全身麻酔をお勧めします。
<ol><li>角膜を取得し、外用局所麻酔薬を適用することで結膜の麻酔注入 4% リドカイン 1% ロピバカインと手術前に、の滴の 15 〜 20 分。</li>
	<li>サブ結膜に直接浸潤麻酔を注入とテノン嚢下のスペース。</li>
	<li>局所浸潤の腹部の脂肪組織を抽出すると、前とサブ結膜と角膜輪部から 12 mm サブほぞのスペースの両方を使用します。Carbocaine または 1,200 IU エピネフリン混合 marcain の局所麻酔薬を採用してください。</li>
	<li>繰り返される小さなボリを通じて麻薬性鎮痛薬としてフェンタニルを使用して正しく行うことができる麻酔薬を用いた術中の鎮静を提供します。投与量は、一般的にボーラスあたりミダゾラムの 1 mg とフェンタニルの 0.025 mg です。</li>
</ol>3. Limoli 網膜修復技術準備
注: この手法は、subscleral スペース1,6,7,12軌道自家脂肪を移植する Pelaez の介入のバリアントを表します。外科的移植細胞が周囲の組織、脈絡膜と網膜18,19,20,21,22 で神経栄養因子や原因プロパティの多くの GFs を作り出すことができます。 ,23,24,25。LRRT、深い sclerectomy による移植自家細胞と脈絡膜の間の距離を削減し、脈絡膜流れ9、パラクリン自家細胞分泌を促進するために茎と脈絡膜の接触面積を拡大 10,14。
<ol><li>脈絡膜と強膜、Limoli 網膜修復手法 (LRRT)15,16,17と呼ばれるプロシージャの間の細胞移植手術の前にそれぞれの目の適切な消毒を行います。</li>
	<li>コールマンらと sovrachoroidal スペース15,16,17の SVF で、腹部の脂肪からのローレンスの法 (図 1) を用いて、ADSCs を移植します。</li>
	<li>血小板と潜入脂肪椎弓根は、次の手順により得られた PRP ゲルから派生します。</li>
	<li>遠心分離機の血6,12と多血小板血漿 (PRP) を収集します。血小板顆粒への刺激は、脂肪椎弓根6,12GF リリースします。</li>
</ol>4. 技術仕様および戦略
注: 脂肪質のティッシュの収集し、ローレンスとコールマン技術17(材料表) によると、患者の腹部の皮下層から精製します。
<ol><li>手動で収穫 3 mm 鈍カニューレを使用して、各患者の腹部の皮下層からの脂肪組織の 10 mL は、ローレンスとコールマン技術17 (図 2 a ・ 2 b) によるとロック注射器に接続します。</li>
	<li>20 ° C (図 2C) で 1,500 × g で 5 分間遠心分離して血や脂肪、油、液体から脂肪質のティッシュの純粋な SVF を区切ります。SVF は、ADSCs17の非常に豊富です。</li>
	<li>22 G 針と PRP の準備のための別々 のチューブは、ひと末梢血の 8 mL を収集します。</li>
	<li>20 ° c (図 2D) 1,500 × g で 5 分間収集した血液を遠心分離します。LRRT、その後で変更結果 ADSC の増殖は、脈絡膜血流の増加を支持する、自家脂肪移植の生存率と脂肪7、によってだけ分泌されるこれらの要因の作用のより包括的な変調で 11,17。</li>
	<li>眼窩脂肪から得られる移植を収容し、SVF から PRP、ローレンスに従って得られる ADSCs の混合物ではこのポケットの残留量が飽和に脈絡ポケット (詳細については手順 4 で、特定 4.4 と 4.5) を構築し、コールマン技術17。</li>
</ol>5 LRRT (Limoli 網膜修復技術) によって視細胞移植: 外科手術と技術的な詳細
<ol><li>6-0 シルク縫合糸、サルの角膜輪部近くで強膜を固定します。</li>
	<li>5.5「ウェストコット Tenetomy 曲線はさみを使用して、劣った一時的な角膜輪部から 11 ミリメートルで結膜下と subtenonian スペースを開きます。</li>
	<li>Limoli バジーレ結膜リトラクターを強膜手術野をするこの空間に挿入します。</li>
	<li>角膜輪部からの 8 mm の強膜側にフラップをカット済み、5 mm 三日月ナイフの角度面取りを使用しています。フラップのヒンジは、ラジアルと外科医の左側に常にです。</li>
	<li>角膜輪部から 8 mm で、サルの象限には、クレッセント ナイフ、斜め傾斜面を使用して、放射状のヒンジ側に約 5 mm の深い強ドアを開きます。脈絡膜のスレートの色を表示するのには十分な深さで sclerectomy を実行します。</li>
	<li>後続の視細胞移植で血液の循環を促進するために、フラップの遠位部で少し蓋を削除することによってギャップを作成します。</li>
	<li>眼科ピンセットで下斜筋上のギャップから眼窩脂肪を抽出します。抽出された脂肪は十分にその注入後生き残るためにそれを許可する血管であることを確認します。</li>
	<li>脈絡膜のベッドとドアの近位端に脈絡膜 6/0 polyglactin 繊維縫合糸に自家脂肪弁をそっと置きます。</li>
	<li>脂肪の茎またはその栄養血管の圧縮を避けるために強膜フラップを縫合します。</li>
	<li>(血液材料の遠心分離、コンポーネント、および血小板顆粒26の分離によって得られた) PRP ゲル 1 mL で脂肪の椎弓根の間質に潜入 30 G 斜め (30 °) カニューレを使用します。</li>
	<li>縫合糸を結膜の側面を準備します。結膜のリトラクターを削除します。</li>
	<li>6/0 polyglactin ファイバーを用いた結膜を縫合します。</li>
	<li>閉じる前に、フラップ、脈絡膜と脈絡膜の自家移植との間の subscleral スペースに自家脂肪移植を併用した小さな柔軟なプラスチック製のチューブを挿入するスペースを残します。</li>
	<li>飽和自家脂肪移植、脈絡膜、強膜フラップの残留容量 0.5 cc SVF (ADSCs のリッチ)、以前 3.2 で、小さな柔軟なプラスチック製のチューブで強膜のポケットに挿入準備します。</li>
	<li>残余空間を飽和後の縫合を閉じます。</li>
	<li>手術後、抗生物質アジスロマイシン 500 mg との 3 日間を管理します。また、組み合わせて抗生物質やステロイド、クロラムフェニ コールなどベタメタゾン、約 15-20 日目ドロップ療法を提供します。 注: ADSCs、SVF PRP から脂肪細胞から成っている、自家今得られている26。脈絡膜の流れに自己細胞の傍分泌の分泌を刺激するために深い sclerectomy 移植自家細胞と脈絡膜の間の距離を減らします。同じ目的のためには、茎と脈絡膜の間の接触のエリアを展開します。</li>
</ol>

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</ol>

ARVO 2015 年に 5 月 3-7-デンバー、コロラド州 - 米国を提示しました。

本研究の主な目的は、脂肪細胞、ADSCs、SVF で PRP の視細胞移植 VA と AMD の影響を受けた目の乾燥で網膜の感度を時間をかけて改善するかどうかを評価するためだった。別の主な目的は、GF を用いた治療法がいくつかの病気の患者にとって役に立つかもしれないいくつかの臨床研究が示唆しているので、最近の文献に基づいて、これらの細胞の可能な治療効果を実証することでした。
実際には、いくつかの研究は自家ひと誘導多能性幹細胞 (iPSC) が AMD18,組織補充療法における網膜色素上皮 (RPE) の再生を目的とした、移植細胞源を表すことができる示されている19. 典型的な RPE マーカーを表現、展示できる単層偏 GF 分泌を示す貪食能力と同様、遺伝子発現パターン ネイティブ RPE18,19 のそれらに類似するようにこれらの細胞シートが生成されます</su...

複数の慢性疾患を治療する患部に幹/前駆細胞の全身またはローカル注入から成る細胞療法は最後の十年の1で細心の注意を描画されます。1990 年代、網膜萎縮2における潜在的治療役割で成長因子 (GFs) を調べた。実際には、多くのヒトの細胞はアポトーシス、すなわち、プログラムされた死細胞3のブロックを遅らせたりすることができます特定の蛋白質である GFs を生成できます。
それは漸進的かつ不可逆的な細胞死が視細胞層と、その結果、中央視覚機能4の損失への損傷を含む萎縮性網膜疾患を乾燥 - 加齢黄斑変性症 (AMD) には知られています。AMD は、先進国および日付に有効な治療法がないすべての黄斑変性の 80% を占める 55 歳以上の人の失明の主要な原因です。
いくつかの研究では、自家の GFs を取得できる様々 なソースがあることを示しています。これらは異なる種類の細胞、脂肪由来幹細胞 (ADSCs) の脂肪5 間質血管の分数 (SVF) に含まれる、血小板血小板血漿 (PRP) から派生した眼窩脂肪由来間質細胞の脂肪を含む、構成します。 ,6,7。現在の GF セットにより網膜 neuroenhancement フィラトフ、Meduri、Pelaez、調査と Limoli は自家脂肪移植 (AFT) が効果的な8,9,10であることを示しています。
また、事前調査は網膜電図 (ERG) データの重要な改善を示したと、AMD の影響を受けた目の乾燥11にポスト脈絡自家移植が記録されます。脈絡で外科的移植組織は変調のアポトーシス6,7,12を遅らせること、網膜細胞のパラクリン分泌です。核の外側の層の厚さを考慮したモルモットの網膜の病理組織学的検討は GFs が網膜に栄養効果を持っていることを示しています。したがって、GFs の直接または間接的な使用は、分子の誘導剤と阻害剤6,7,12のバランスのとれた関係を治療上の利点をもたらすことができる可能性があります。
このメソッドの目的は、脂肪細胞、SVF で PRP ADSCs の視細胞移植が最も向上するかどうかを評価するために修正視力 (BCVA) と microperimetry (MY) 反応 AMD の影響を受けた目の乾燥です。本研究は文献6,7,12,13によると、GF 生産に基づいて再建の治療効果を発揮することを目的と。

<table><tbody><tr><td>鈍いカニューレ、3 mm。</td><td>メンター、カリフォルニア州サンタバーバラ。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luer-LokTMシリンジ&nbsp;</td><td>BDバイオサイエンス、ニュージャージー州フランクリンレイクス。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Regen-BCTチューブ。&nbsp;</td><td>RegenKitの;RegenLab、ルモンシュルローザンヌ、CH。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>&nbsp;RegenPRPセントリ。RegenLab、ルモンシュルローザンヌ、CH。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BDベンフロンプロセーフティ22G x 1.00インチ(0.9 mm x 25 mm)。</td><td>BDバイオサイエンス、ニュージャージー州フランクリンレイクス。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SPSS統計バージョン19.0</td><td>IBM Corp.、アーモンク、ニューヨーク、米国。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>共焦点走査型レーザー検眼鏡&nbsp;</td><td>Nidek Inc、フリーモント、カリフォルニア州</td><td>Nidek F10&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Cirrus 5000 Spectral Domain-Optical Coherence Tomography</td><td>Carl Zeiss Meditec AG, イェーナ, ドイツ</td><td>&nbsp;SD-OCT&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>マイア100809マイクロペリメトリー&nbsp;</td><td>CenterVue S.p.A., Padua, Italy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>眼の電気生理学電気医療システム,</td><td>C.S.O., S.r.l., Scandicci, Italy</td><td></td><td>&nbsp;ERGのRetimax&nbsp;</td></tr></tbody></table>

乾燥 - 加齢黄斑変性症の視細胞の細胞移植による再生療法:体内の予備的なレポート

Regenerative Therapy by Suprachoroidal Cell Autograft in Dry Age-related Macular Degeneration: Preliminary In Vivo Report

自己細胞の視細胞移植は最高矯正視力 (BCVA) を向上させることが、microperimetry (MY) によって影響を受ける目のレスポンスを時間をかけて加齢による黄斑変性症 (AMD) を乾燥かどうかを調べることを本研究の目的は、生産と周囲の組織の成長因子 (GFs) が分泌。患者は各研究グループにランダムに割り当てられました。すべての患者は、乾燥 AMD BCVA (ログマー) の解像度の最小角度の 1 対数以上と診断されました。脈絡自家移植 Limoli 網膜修復法 (LRRT) では 11 患者から 11 目を含んだグループ A で実施されました。テクニックは、脂肪細胞、間質の血管分数と脈絡で多血小板血漿血小板から得られる脂肪幹細胞の注入によって行われました。逆に、14 人の患者の 14 目を含む B 群は対照群として使用されました。それぞれの患者の診断は、共焦点走査型レーザー検眼鏡、スペクトル ドメイン光コヒーレンストモグラフィー (SD 10 月) によって確認されました。グループ A の BCVA によって改善 0.581 に 0.504 0.376 ログマーと 90 日間で 180 日 (+32.20%) 術後。さらに、私のテスト 180 日 12.59 db 11.44 db 増加します。定数 GF 分泌脈絡膜の流れを確保するためは、脈絡膜の背後に接ぎ木した異なった細胞のタイプができました。したがって、結果を示す移植グループの視力 (VA) を増やすことができます 6 ヵ月後コントロール群よりも。

ここに示す手順を使用して、BCVA (ログマー) の解像度の最小角度の 1 対数以上と、AMD の影響を受けた患者の中でも乾燥の 2 つのグループの研究で在籍していた。グループ A に対し受信脈絡自家移植 Limoli 網膜修復法 (LRRT) による 11 患者の 11 目を含むグループ B、14 患者の 14 目を含む、対照群として使われました。
スチューデントの t 検定とカイ二乗検定は、それぞれ、(表 2) の 2 群間の平均年齢・性別分布を比較する使用されました。LRRT 手術の前後には、統計解析やデータの可視化を行った。
前と治療後の違いが有意かどうかを決定するウィルコクソン ‒ マン ‒ ホイットニーの符号付き順位検定を行った。この例のように、通常配布される人口を想定できない依存の 2...

本研究の目的は、間質血管の一部に含まれている脂肪由来幹細胞と血小板由来血小板豊富な血しょう Limoli 網膜修復技術の視細胞移植が視力を改善できるかどうかを評価するためには、乾燥 - 加齢黄斑変性症の影響を受ける目の網膜感度応答。

This study is aimed at examining whether a suprachoroidal graft of autologous cells can improve best corrected visual acuity (BCVA) and responses to ...

この外科的介入の全体的な目標は、網膜細胞のアポトーシスを遅らせる網膜神経強化を導入して、視力低下患者の視覚能力とリハビリテーションを改善することです。この方法は、乾燥性AMDや神経視神経萎縮症など、網膜萎縮性変性によって引き起こされるロービジョンの分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。それは補助拡大装置によって自然な環境および視力の視力を改善する。これらの網膜修復は、下にあるコロイドによる血管茎脂肪の増加を促進し、茎の血管新生を促進し、椎弓根の健康と生存を改善します。この治療法は、成長因子の関与を通じて、すべての網膜要素に再生スタートアップを与えるためにも機能します。この技術は網膜変性を遅らせるために開発されましたが、治療が必要な成人組織や臓器系にも適用できます。まず、22ゲージの針を使用して8ミリリットルの末梢血を採取し、多血小板血漿を採取します。セパレーターゲル付きのクエン酸ナトリウム真空管を使用すると、細胞成分と血漿の分離が促進されます。血液のチューブを1500g、摂氏20度で5分間遠心分離します。血液は3つの層に分離します。血小板の少ない血漿からなる最上層を吸引して廃棄します。次に、多血小板血漿からなる中間層を収集して保存します。脂肪組織を採取するために、Limoli網膜修復のために黄斑変性症患者に麻酔をかけます。腹部皮下層から脂肪組織を採取します。ロッキングシリンジに接続された3ミリメートルの鈍いカニューレを使用して、約10ミリリットルの組織を採取します。ローレンスとコールマンのテクニックを使用します。次に、サンプルを摂氏1500度と20度で5分間回転させることにより、脂肪組織の間質血管画分を分離します。血液層のすぐ上に位置する間質血管画分は、脂肪由来の幹細胞が非常に豊富です。自家移植に必要なのは1ミリリットル以下です。最後に、0.5〜0.6ミリリットルの間質血管画分、0.2〜0.3ミリリットルの多血小板血漿、および0.1ミリリットルのヒアルロン酸を送達チューブにロードして、自家移植片を組成します。2本の注射器と3方向ストップコックでブレンドします。カニューレのチューブを5ミリメートルに角度をつけて、自家移植片を強膜下腔に注入しやすくします。手術を開始する前に、患者が座った状態で治療を行っている目に印を付けて、作業領域を区切り、目の生理的なサイクロねじれ効果を回避します。まず、下側頭輪の近くに6-0シルク縫合糸で強膜を固定することから修復手術を開始します。強膜の固定は重要なステップです。針は、深すぎず、表面的すぎず、辺縁部に入らなければなりません。目に穴を開けると、しぼんでしまいます。糸がオケタの場合、目は固定されません。なんというストレスでしょう!次に、5.5インチのウェストコット腱切開術湾曲ハサミを使用して、下側頭輪から11ミリメートル

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