Name: サンプル準備および透過電子顕微鏡によるエクソソームのイメージ投射 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 15 s
Description: 学ぶ透過電子顕微鏡法によるエクソソームの形態観察とタンパク質局在解析。免疫ゴールド標識と負染色を用いて細胞外小胞の構造と機能を詳細に解明し、がんなどの疾病診断への応用可能性を示します。

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この研究は生物によって支えられた &#38; 医療技術開発プログラム国立研究財団 (NRF) の &#38; 韓国の政府によって資金を供給 (MSIP &#38; MOHW) (第 2016M3A9B6904244)。私たちもエキソソームの浄化の薬用 Bioconvergence 研究センターのメンバーに感謝します。

1 ブロックの準備、断面、染色や、エキソソームのイメージング
<ol>
	<li>1.5 h23100,000 × g で遠心分離によって HCT116 細胞の培養上清からエクソソームをペレットします。培養上清を削除し、1 ml の 0.1 M ナトリウム cacodylate 溶液 (pH 7.0) 4 ° C で 1 時間で 2.5% グルタルアルデヒドの精製エキソソーム ペレットを慎重に修正0.1 M ナトリウム cacodylate 4.28 g ジメチルアルシン酸 160 mL の蒸留水 (DW) を解散します。0.1 M HCl を蒸留水 200 mL までと 7.4 に pH を調整します。</li>
	<li>定着剤を削除し、室温で 1 ml の 0.1 M ナトリウム cacodylate バッファーのペレットをすすいでください。10 分を持続させる各変更で 3 回を繰り返します。</li>
	<li>4 ° C で 1 時間 2% オスミウム四酸化の 1 ml サンプルを修正後</li>
	<li>固定を外し、すすぎ 3 回 0.1 M ナトリウム cacodylate バッファー 10 分毎。</li>
	<li>傾斜アセトン シリーズで 10 分間インキュベート (50%、60%、70%、80%、90%、95%、100%、それぞれ)、シェーカーで。</li>
	<li>アセトンを取り外して 30 分間 3:1 アセトン: 低粘度埋め込み混合溶液を孵化させなさい。エキソソーム ペレットは、チューブです。</li>
	<li>メディアを取り出して 1:1 アセトン: 低粘度埋め込み混合媒体を追加し、30 分間インキュベートします。</li>
	<li>メディアを取り出して 1:3 アセトン: 低粘度埋め込み混合媒体を追加し、30 分間インキュベートします。</li>
	<li>メディアを取り出して、100% 低粘度混合物を埋め込み、室温で一晩インキュベートを追加します。</li>
	<li>純粋な低粘度 65 ° C で 24 h の埋め込み型と焼くを使用して混合物を埋め込むサンプルを埋め込む</li>
	<li>超ミクロトームで 60 nm の厚さでセクションを準備します。</li>
	<li>20 分間の 2% 酢酸ウラニウム二重染色と 10 分のクエン酸をリードします。 レイノルズ鉛ソリューション 1.33 g 鉛硝酸とクエン酸ナトリウムの 1.76 g を 50 ml の蒸留水の合計に追加します。</li>
	<li>80 で透過型電子顕微鏡下でグリッドを観察 kV。</li>
	<li>「取得」をクリックし、、クリックして「ファイル」と"Save as"80 で電子顕微鏡 CCD カメラ システムの kV。露光時間の自動設定に従います。</li>
</ol>
2. セクションおよびイメージング (図 1) の免疫染色
<ol>
	<li>超ミクロトームを使用して 60 nm の超薄切片を切り、ニッケル グリッドを収集します。</li>
	<li>50 μ L の滴無料アルデヒド グループをクエンチする 10 分の 0.02 M のグリシンのグリッドを孵化させなさい。</li>
	<li>リンス DW の 100 μ L で 3 回それぞれ 1 %bsa を含む PBS で 1 時間室温で 10 分間加温。</li>
	<li>50-100 μ L 滴 KRS 抗体24 (0.1 %bsa を含む PBS で 1: 100) アンチのグリッド間インキュベート 1 時間に応じて、このステップべきである 4 ° C で一晩。</li>
	<li>10 分の 0.1 %bsa を含む PBS の 5 別滴 (50 μ L) でグリッドを洗います。</li>
	<li>2nd抗体 (抗うさぎ IgG が 0.1 %bsa を含む PBS で 10 nm の金粒子 (1: 100) に共役) 1 h の滴にグリッドを転送します。</li>
	<li>5 洗浄グリッドは各 10 分 0.1 %bsa を含む PBS の滴 (50 μ L) を区切ります。</li>
	<li>ダブル-染色暗い条件の下で 20 分間酢酸 2% ウランとレイノルドの鉛クエン酸 10 分間それぞれ。</li>
	<li>「取得」をクリックし、、"ファイル"と"Save as"CCD カメラ システム 80 で電子顕微鏡の下でをクリック kV。露出時間は続いた自動設定です。</li>
</ol>
<img alt="チューブおよびツールでのシーケンシャルクロマトグラフィープロセス。タンパク質精製実験" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56482/56482fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 
図 1: サンプル調製と染色のプロセス。(A)二重固定エキソソームが脱水および混合樹脂を埋め込み低粘度で浸透します。(B)の樹脂を埋め込みます。(C)ダイヤモンド ナイフで超薄いセクション。(D)免疫金ラベルを設定します。超薄切片のグリッドは、湿らせたペーパー タオルに配置されますのパラフィルムで液滴に置かれます。各セクションは 50-100 μ L 抗体の液滴と孵化し、バッファーで洗浄します。(E)酢酸ウラニウム染色を二重になりクエン酸。蓋は、重金属染色用アルミ箔で覆われています。(F)は染色液はろ紙によって削除されます。<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56482/56482fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
3. 負の染色
<ol>
	<li>グロー放電グロー放電によって 1 分ホルムバール/炭素薄膜塗膜 200 メッシュ銅 EM グリッド。</li>
	<li>2 %1 ml 精製エクソソームを修正パラホルムアルデヒド (PFA) 5 分。 注意: パラホルムアルデヒド煙、有毒です。すべての作業は、換気の発煙のフードで行われるべき。</li>
	<li>グリッド上の 5-7 μ L エキソソーム懸濁液ソリューションを読み込むし、1 分間インキュベートします。エキソソームの濃度が高すぎる場合は、1/2 - 1/5 の濃度を薄めます。</li>
	<li>すぐに注射器による EM グリッド面フィルター 1% ウラニル酢酸 (UA) ソリューション 〜 20 滴で染色します。</li>
	<li>ろ紙をグリッド エッジに連絡してグリッドに過剰な UA ソリューションを削除します。</li>
	<li>すぐに水を一滴を持つグリッドをすすいでください。このステップは、余分な染色液が削除されます。</li>
	<li>ピンセットでグリッドをテーブルに置くし、室温下で 10 分間乾燥する培養皿で部分的にグリッドをカバーします。</li>
	<li>80 で TEM による未来の観察のための EM グリッド ボックスのグリッドを保存 kV。</li>
</ol>
4 是非、全体のマウント
<ol>
	<li>グロー放電ホルムバール/炭素薄膜フィルム コーティング 200 メッシュ銅 EM グリッド 30 s。</li>
	<li>2 %1 ml 精製エクソソームを修正パラホルムアルデヒド (PFA) 5 分。 注意: パラホルムアルデヒド煙、有毒です。すべての作業は、換気の発煙のフードで行われるべき。</li>
	<li>エキソソーム ソリューションを固定グリッド上 5-7 μ L を読み込むし、インキュベート pbs 100 μ L に 5 分すすぎ 3 回各 10 分。</li>
	<li>無料アルデヒド グループをクエンチする 10 分の 0.05 M のグリシンの 50 μ L でグリッドを扱います。</li>
	<li>30 分のブロック バッファー (1 %bsa を含む PBS) のドロップにグリッドを転送します。</li>
	<li>50-100 μ L 抗 PD L1 抗体 (0.1 %bsa を含む PBS で 1: 100) でグリッドを 1 時間に応じて、このステップべきである 4 ° C で一晩インキュベートします。</li>
	<li>10 分の 0.1 %bsa を含む PBS の 5 別滴 (50 μ L) でグリッドを洗います。</li>
	<li>グリッドを 1 h の 2nd抗体のドロップに転送します。</li></ol>0.1 %bsa を含む PBS で 1: 100 希釈 9-11 nm の金粒子標識抗マウス IgG。
	<li>10 分の 0.1 %bsa を含む PBS の 5 別滴 (50 μ L) でグリッドを洗います。DW の 2 独立した滴 (50 μ L) とグリッドを洗います。2% 酢酸ウラニウム 3.8 3.4 から前述の否定的な汚損を実行します。</li>
	<li>80 で TEM による未来の観察のための EM グリッド ボックスのグリッドを保存 kV。</li>

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</ol>

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この記事では、詳細なエキソソームの構造を観察し、その特定の蛋白質の分類のためのプロトコルを示します。否定的な汚損はエキソソーム17をイメージングに最適な方法として考えられています。この手法は、エクソソームのカップ状の構造を示しています。しかし、このカップの形状は乾燥プロセスによって発生するアーチファクトのフォームです。低温電子顕微鏡 TEM 結果エクソソームが水溶液25,26で完全に球状構造を持っていることを示しています。クライオ電子顕微鏡法は、自然の構造を検査するための非常に強力な法免疫金法を適用することは困難です。デルラソと同僚 (全体マウント-ネガティブ染色法) の従来の方法で乾燥を指摘したカップ状の形態をもたらした。本研究では, セル準備 (ルーチン EM; 固定、脱水、埋め込み、および断面) の標準的な方法でエキソソームの乾燥の影響を減らすために適用されました。プラスチックを埋め込むを使用して EM を回避または変性による工芸品 (容積や形状の変更) を削減できる...

細胞小胞 (Ev) は、細胞から分泌される脂質二分子膜ベシクル、30、300 nm 間のサイズの範囲します。EVs は、ホジキン病1患者の小胞からの証拠と、1978 年に最初に報告されました。これらの小胞はサイズ 40 に 120 ナノメートルと報告されました。1980 年に、EVs が凝固系と血栓症、癌患者2の血管内血栓の形成に関与していることが報告されました。30 年後、EVs は、浸潤、免疫回避、および血管新生3を促進するために重要な要因であること報告されています。さらに、EVs 機能は、炎症、免疫障害、神経疾患、がん4の領域における細胞間相互作用のレギュレータとして研究されています。EVs は、マイクロ Rna5mRNA、タンパク質など特定の生体分子を含む、診断および治療の潜在的な応用解析6,7されています。EVs は、エクソソーム、prostasomes、oncosomes、dexosomes、微粒子、promininosomes、argosomes、およびエキソソームのような小胞細胞の起源および生物学的機能3によってを含むサブグループから成るカテゴリです。さらに、彼らの器官を基に、これらの EVs に分かれます (小屋機構の解明、100-1000 nm) 機構の解明およびエクソソーム (30-300 nm)8,9。これらのうち、免疫応答10、癌11,12、および伝染病13セル コミュニケーターとして、エキソソームを報告されています。
早期診断マーカーとしてエクソソームの関心が急速に高まっていると精製とエクソソームの性質は、分子イメージング技術と同伴が必要があります。その起源と機能を14、に応じて、エクソソームの形態とさまざまなサイズは、電子顕微鏡などの高解像度の顕微鏡検査の技術によって区別できます。ほとんどエクソソームいた否定的なステンド グラス透過電子顕微鏡 (TEM)15,16,17、可視化し、これらの結果は、全台紙の小胞の特定の蛋白質の反応によって確認されました。18. いくつかの研究グループは、走査電子顕微鏡、原子間力顕微鏡19、20、および低温電子顕微鏡 TEM21,22によって構造を報告しています。ただし、これらのテクニックはエキソソーム構造を調べる場合に役立ちますが、彼ら、エキソソームの内側にある特定の蛋白質の位置観測のために十分ではありません。したがって、特定の蛋白質のラベリングとエクソソームをイメージングするためのプロトコルを導入しました。我々 は、ブロック準備、極薄切片および免疫染色、エキソソームのタンパク質の詳細な場所を判別するに適用されます。否定的な汚損と全体マウント免疫染色は、昔から、エキソソームの特性と比較しました。

<table><tbody><tr><td>グルタルアルデヒド</td><td>EMS</td><td>16200</td><td></td></tr><tr><td>カコジル酸ナトリウム&nbsp;</td><td>EMS</td><td>12300</td><td></td></tr><tr><td>四酸化オスミウム 1g 結晶</td><td>EMS</td><td>19100</td><td>ヒュームフードのみ使用</td></tr><tr><td>アセトン</td><td>純生</td><td>1B2031</td><td></td></tr><tr><td>スパー媒体</td><td>TED PELLA</td><td>18108</td><td></td></tr><tr><td>ウルトラミクロトーム</td><td>ライカ</td><td>UCT</td><td></td></tr><tr><td>酢酸ウラニル</td><td>EMS</td><td>22400</td><td>有害化学物質</td></tr><tr><td>クエン酸鉛</td><td>EMS</td><td>17900</td><td></td></tr><tr><td>透過型電子顕微鏡</td><td>日立</td><td>H7600</td><td></td></tr><tr><td>ニッケルグリッド</td><td>EMS</td><td>G200-Ni</td><td></td></tr><tr><td>銅グリッド</td><td>EMS</td><td>G200-Cu</td><td></td></tr><tr><td>グリシン</td><td>SIGMA</td><td>022K5404</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水</td><td>SIGMA</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>オーリオン</td><td>25557</td><td></td></tr><tr><td>1st抗体</td><td></td><td></td><td>精製を手動で&nbsp;</td></tr><tr><td>精製された抗ヒトCD274 (B7-H1、PD-L1) 抗体</td><td>BioLegend</td><td>329710</td><td>ホールマウントImmumogold</td></tr><tr><td>精製マウスIgG2b、&κ;アイソタイプ Ctrl</td><td>BioLegend</td><td>401202</td><td>ホールマウント Immumogold (Control)</td></tr><tr><td>2nd Anti-mouse igG conjugated 9-11 nm gold particle</td><td>sigma</td><td>G7652</td><td></td></tr><tr><td>Transmission Electron Microscopy</td><td>JEOL</td><td>JEM2200FS</td><td></td></tr><tr><td>Glow discharger</td><td>JEOL</td><td>JFC1100E</td><td></td></tr><tr><td>Carbon grid</td><td>EMS</td><td>121119</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>EMS</td><td>19210</td><td></td></tr><tr><td>Formvar カーボンコーティング銅グリッド (200 meh)</td><td>EMS</td><td>FCF200-CU</td><td></td></tr><tr><td>Formvar カーボンコーティング&nbsp;ニッケルグリッド(200メッシュ)</td><td>EMS</td><td>FCF200-NI</td><td></td></tr></tbody></table>

サンプル準備および透過電子顕微鏡によるエクソソームのイメージ投射

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

エクソソームは体液によって分泌されるナノ細胞小胞であり、それらを分泌する細胞の特性を表すために知られています。分泌小胞の形態と内容は、セルの動作または生理学的状態、たとえば細胞増殖、移行、胸の谷間と死を反映します。エクソソームの役割のサイズに非常に依存し、エクソソームのサイズ、30 ~ 300 nm。エキソソーム イメージングのため最も広く使用されている方法が否定的な汚損、その他の結果は、クライオ電子顕微鏡、走査電子顕微鏡、原子間力顕微鏡に基づいていますが。典型的なエキソソームの形態の否定的な汚損によって評価はカップの形状が、さらに詳細はまだ分からない。エキソソームの構造研究を特徴は医学・薬学分野の特定の必要です。したがって、関数に依存した形態はエキソソームの詳細構造の特定の蛋白質のラベル付けなどの電子顕微鏡検査の技術によって検証すべき。詳細な構造を観察するには、エクソソームの負の染色像と極薄, 切片画像を比較しました。このプロトコルでは、私達は否定的な汚損、全体マウント免疫染色、ブロック作製、薄セクション、および免疫金ラベルを含むエクソソームのイメージングのための透過型電子顕微鏡を提案します。

現在、エクソソームは透過電子顕微鏡によるサイズと形状のカテゴリに分類されます。図 2に示します負エキソソームと全体のマウント ・ ステータスに免疫標識エキソソームを染色します。図 3は、薄切片法後断面エキソソームと免疫標識エクソソームを示します。免疫金は特定の蛋白質の抗体を用いて染色は、積極的に、エキソソームを識別し、エキソソームのタンパク質の種類を分類する使用されます。本プロトコルは、プラスチックの断面エキソソームを全体のマウント免疫染色、免疫染色を使用します。
<img alt="ウイルス粒子の透過型電子顕微鏡;ウイルスの形態と超微細構造の詳細な研究。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56482/56482fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859...

このプロトコルでは、否定的な汚損、詳細な構造と免疫金エクソソームの特定の蛋白質の位置を判断するための極薄断面透過型電子顕微鏡に必要な様々 なテクニックについて説明します。

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

この手順の全体的な目標は、精製された細胞外小胞の形態を観察し、電子顕微鏡を使用して細胞外小胞内で特定のタンパク質局在化を行うことです。この方法は、エクソソームとその内部に位置する特定のタンパク質の分類など、細胞外小胞研究期間における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、エキソソームの内側と外側の両方に位置する特定のタンパク質の部分を観察するために使用できることです。この技術の意味するところは、癌や細菌感染症を含むいくつかの病気の診断を確実にすることです。この方法はエクソソームに関する洞察を提供しますが、他の生物学的サンプル、マイクロセルラーインキュベーション、および特定のタンパク質局在にも適用できます。一般に、この方法に不慣れな個人は、免疫金粒子の非特異的結合中に汚染を引き起こすため、苦労します。標準的な技術を使用して、培養中のエクソソームを調製します。次に、HCT116細胞の培養上清を超遠心分離し、培地からエキソソームをペレット化します。ペレット状にしたら、培養上清を慎重に取り除きます。精製したエキソソームペレットを固定するには、PH 7.0の0.1モルのソルジウムカコジル酸溶液に2.5%グルタルアルデヒドの1ミリリットルを追加します。.脂質バイレイヤー小胞を摂氏4度で1時間インキュベートします。次に、固定剤を取り出し、ペレットを0.1モルのカコジル酸ナトリウム緩衝液1ミリリットルで室温で10分間すすぎます。次に、サンプルを1ミリリットルの2%四酸化オスミウムで摂氏4度で1時間後置します。固定液を取り出し、エキソソームペレットを0.1モルのカコジル酸ナトリウム緩衝液で3回すすぎ、10分ごとに緩衝液を交換します。次に、サンプルを10分間、一連の段階的なアセトン濃度で振とうして脱水します。次に、アセトン3部と低粘度包埋混合物1部の溶液を混ぜ合わせます。アセトンをこの混合物と交換し、サンプルを30分間インキュベートします。低粘度の包埋培地の比率を増やし続け、各ステップで30分間インキュベートします。最後に、エキソソームペレットを低粘度包埋混合物の100%に室温で一晩インキュベートします。翌日、埋込み型を用いて純粋な低粘度包埋混合物に試料を埋め込み、65°Cで24時間焼きます。ウルトラミクロトームを使用して、厚さ60ナノメートルの切片を調製します。切片をニッケルグリッドに置き、それらの一部を2%酢酸ウラニルで20分間二重染色し、続いてクエン酸鉛で10分間二重染色します。次に、染色した切片を透過型電子顕微鏡にセットし、80キロボルトで試料を観察し、露光時間を自動的に設定します。エキソソーム画像を表示した状態で、顕微鏡ソフトウェアを使用して画像を取得して保存します。まず、厚さ60ナノメートルの未染色切片を含むグリッドを、0.02モルグリシンの50マイクロリットル滴に10分間インキュベートして、遊離アルデヒド基をクエンチします。次に、切片を100マイクロリットルの蒸留水でそれぞれ10分間3回すすぎます。最後のすすぎ後、切片を1%BSAを含むPBSで室温で1時間インキュベートします。次に、50〜100マイクロリットルの抗KRS抗体にグリッドを1時間インキュベートします。次に、0.1%BSAを含むPBSの滴でグリッドを5回、それぞれ10分間洗浄します。次に、グリッドを適切な二次抗体の滴下に移し、切片を室温で1時間インキュベートします。次に、グリッドを10分間5回洗浄し、それぞれに0.1%BSAを含むPBSを別々に滴下します。暗所で2%酢酸ウラニルで切片を20分間二重染色し、続いてクエン酸レイノルズ鉛を10分間染色します。染色した切片を透過型電子顕微鏡に置き、80キロボルトでサンプルを観察し、前述したように画像化します。ネガティブ染色を行うためには、単離後に精製したエクソソームを2%パラホルムアルデヒド1ミリリットルで5分間固定します。薄い、フォームバー/カーボンフィルムコーティングされた200メッシュの銅EMグリッドを1分間グロー放電で処理し、次に5〜7マイクロリットルのエキソソーム懸濁液をグリッドにロードし、1分間インキュベートします。エクソソームの濃度が高すぎる場合は、濃度を適切なレベルに希釈してください。すぐに、EMグリッドの表面にろ過した1%酢酸ウラニル溶液を約20滴垂らしてエキソソームを染色します。グリッドの端を濾紙で接触させて、余分な酢酸ウラニル溶液をグリッドから取り除き、次にグリッドを水滴ですばやくすすぎます。ピンセットを使用してグリッドをテーブルに置き、グリッドを部分的に培養皿で覆います。グリッドを室温で10分間乾燥させてから、グリッドを画像化するか、将来の観察のために電子顕微鏡グリッドボックスに保管します。まず、薄いフォームバー/カーボンフィルムコーティングされた200メッシュの銅EMグリッドを30秒間グロー放電で処理します。次に、2%パラホルムアルデヒド溶液に固定したエクソソームを5〜7マイクロリットルのグリッドにロードし、そこで5分間インキュベートします。次に、エクソソームを100マイクロリットルのPBSで、それぞれ3回、10分間すすぎます。エキソソーム含有グリッドを50マイクロリットルの0.5モルグリシン溶液で10分間処理し、遊離アルデヒド基をクエンチします。次に、グリッドを1%BSAを含むPBSの滴に移し、30分間ブロックします。次に、50〜100マイクロリットルの抗PD-L1抗体を使用してグリッドを室温で1時間、または摂氏4度で一晩インキュベートします。0.1%BSAを含むPBSを5滴ずつ10分間グリッドを洗浄し、その後、グリッドを二次抗体の滴に移し、1時間待ちます。次に、0.1%BSAを含むPBSを5滴ずつ10分間グリッドを洗浄し、次に2滴の蒸留水でグリッドを洗浄します。終了したら、前に示すように2%酢酸ウラニルでネガティブ染色を行い、サンプルを画像化するか、将来の観察のためにEMグリッドボックスに保存してください。ここで観察されるエキソソームの形態は、ネガティブ染色の産物です。これらのエクソソームは、乾燥プロセス中に発生する可能性のあるアーティファクトである典型的なカップ形状の形態を示します。ホールマウントイムノゴールド染色法を用いて、エキソソーム中の特定のタンパク質の位置などの追加情報を得ることができます。ここで、白い矢印はPD-L1の位置を示しています。切片化された画像では、小胞はエクソソームの構造的特徴として知られる内腔構造を示しました。これらも、エキソソーム全体の特定のタンパク質を識別するために免疫金染色することができます。習得すると、イムノゴールド染色技術は、適切に実施されれば、簡単な調製と切片化の後に線維性細胞で行うことができます。この手順に続いて、二重免疫染色などの他の方法を実行して、2つの異なるタンパク質の位置を同時に特定することができます。各開発の後、この技術は、生検における疾患診断を探求するために、細胞外小胞の分野で使用される場合があります。このビデオを見れば、エクソソーム内の特定のタンパク質局在を特定する方法についてよく理解できるはずです。彼らがクロルハイド、パラホルムアルデヒド、四酸化オスミウムなどの固定液を使用していることは非常に危険である可能性があり、この手順を実行するときは、換気されたヒュームフードやラテックス手袋などの予防措置を常に講じる必要があることを忘れないでください。

sample-preparation-imaging-exosomes-transmission-electron

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

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&gt;jove_content&lt;この記事では、全血からエキソソームを分離する方法と、半自動装置を使用したナノ粒子追跡によるさらなる分析方法を紹介しています。提示された技術は、液体懸濁液中の粒子を視覚化および分析するための非常に高感度な方法を提供します。...

エキソソームの定量化とサイズの測定のための革新的方法

胆汁液は、潜在的に重要なバイオマーカーを含む細胞外小胞/エクソソームの貴重な供給源です。このプロトコルは、miRNAプロファイリングを含むさらなる分析のために、ヒトの胆汁からエキソソームを単離するための堅牢な方法を表しています。...

ヒト胆汁からマイクロRNA含有エキソソームの単離とプロファイリング

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液体試料からのエキソソームおよび細胞外小胞の標識フリー固定化および原子間力顕微鏡(AFM)によるイメージングに関するステップバイステップの手順について説明する。AFM画像は、溶液中の小胞のサイズを推定し、他の生物物理学的特性を特徴付けるために使用されます。...

原子間力顕微鏡による細胞外小胞のイメージング

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エクソソームのローディングとデリバリーのためのマイクロニードルパッチの作製と特性評価

ここでは、コラゲナーゼI型による消化と超遠心分離の組み合わせを使用して、マウス脾臓由来エクソソームを単離するプロトコールを紹介します。...

マウス脾臓組織由来エクソソームの単離と特性評価

学ぶ透過電子顕微鏡法によるエクソソームの形態観察とタンパク質局在解析。免疫ゴールド標識と負染色を用いて細胞外小胞の構造と機能を詳細に解明し、がんなどの疾病診断への応用可能性を示します。

サンプル準備および透過電子顕微鏡によるエクソソームのイメージ投射

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