Name: 病原性、病態、および薬の有効性を調査するため、代替の非哺乳類動物モデルとしてゴキブリをヒス マダガスカル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 21 s
Description: 学ぶマダガスカルゴキブリを用いた細菌感染モデルで、病原性因子の同定と薬剤スクリーニングを行う方法。宿主病原体相互作用と創薬研究に有用な非哺乳類動物モデルの応用を解説します。

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J ・ チュア、n. a. フィッシャー、d. DeShazer、午前フリードランダー原稿で説明する手順を設計されています。J ・ チュア、n. a. フィッシャー、標準偏差 Falcinelli + DeShazer は、実験を実行しました。J ・ チュアは、原稿を書いていた。
著者は、ジョシュア ・ J ・ w ・粕毛、ノラ + ドイル、ニコラス ・ r ・ カーターとスティーブン A. Tobery の優秀なテクニカル サポートとデビッド p. Fetterer、スティーブン j. カーン統計分析のためにありがとうございます。
仕事によって、防衛脅威の減少代理店の提案 #CBCALL12-THRB1-1-0270 A.M.F と #CBS を受けました。D.D. に MEDBIO.02.10.RD.034
意見、解釈、結論及び提言、これらの者を必ずしも米国軍隊によって支持されません。
この文書の内容が必ずしも反映しないビューまたは国防省の政策も言及されている商号、商品、または組織は、米国政府によって裏書を意味します。

1. 歯擦音のゴキブリのコロニーを維持するための準備
<ol><li>住んでいるゴキブリをしっと叱るのケージを準備します。ケージから出して登山とエスケープからゴキブリをしっと叱るようにケージの上部にある内側の壁のまわりに石油ゼリー、幅で約 20 ~ 30 mm の薄い層を適用されます。 注: ゴキブリをしっと叱るは、様々 な大きな設置スペース、十分な高さのと蓋のある容器に保管できます。マウスのケージを使用して (~ 43 cm × 23 cm × 20 cm)。37 ° C に向けられたケージ、ワセリンは適用されません。</li>
	<li>自然内気な昆虫のための隠れ場所を提供するためにケージ内上下逆さまに配置段ボールの卵のカートンを含めます。発泡スチロールをプラスチックの摂取を防ぐために作ったものと段ボールの卵のカートンを代用しないでください。</li>
	<li>簡単にクリーンアップと孵化幼虫の可視性を高めるには、寝具を提供しません。</li>
	<li>〜 20% の粗蛋白質の組成を含む乾燥したドッグフードを取得します。粗く挽くフードプロセッサーやミキサーでドッグフードと 4 ° C で保存</li>
	<li>いくつかの浅い料理と水族館石や食料や水をスポンジを取得します。 注: ペトリ皿、recommeded。</li>
</ol>2. 歯擦音のゴキブリ繁殖と飼育
<ol><li>商業ブリーダーから (〜 5 cm) ゴキブリをしっと叱るザイモグラムのマダガスカルを取得します。このプロトコルで使用される種はGromphadorhina ホウライカガミです。受け取り後すぐに歯擦音のゴキブリを含む配送ボックスを展開します。</li>
	<li>動物の処理に個人用保護具の使用のための適切な制度的ガイドラインに従います。 注: は、歯擦音のゴキブリの瞼板の爪が鋭いようにゴキブリを処理するため厚い使い捨て手袋を使用します。</li>
	<li>最大 75 大きなゴキブリをしっと叱るを転送 (> 3 cm) 大きいケージごと。新しく孵化し、小さい幼虫を転送 (< 3 cm) 別々 のケージに。 注: は、大幅に上回る 75 を大きいのままに保つマウス ケージごとゴキブリ植民地の健康悪化につながることができるし、死につながる場合も音が聞こえます。</li>
	<li>軽く色、オフホワイトである新しく molted ゴキブリを処理し、それを圧迫を避けます。また、暗くして処理する前に強化外骨格を許可します。 注: ダニ、ブリーダーから受領ゴキブリをしっと叱ることが多いGromphadorholaelaps schaeferiを削除する必要はありません。有益なダニは歯擦音のゴキブリを清潔に保つ、人間には無害です。</li>
	<li>週に一度か二度地面浅い皿に乾燥したドッグフードとゴキブリをしっと叱るをフィードします。ゴキブリをしっと叱るが、次の授乳まで十分な食糧をあることを確認十分なドッグフードを提供します。ウェットとカビとなっている食品を破棄します。</li>
	<li>ドッグフードだけでなくカットされた果物や野菜、リンゴ、ジャガイモ、または浅い皿にレタスなどを提供します。カビや腐った食品を破棄します。</li>
	<li>浅い皿に水を飲んで一週間に一度か二度を提供するが、檻の中の流出を防ぐために皿を入れすぎないではないか。小型のニンフの着陸パッドを提供する料理に小さな水族館石やスポンジを配置します。利用可能な場合は、逆浸透膜水を使用します。</li>
	<li>21 ° C から 30 ° c. まで温度で暗闇の中でゴキブリをしっと叱るを維持大型のゴキブリをしっと叱る宛てで繁殖や妊娠を減らすため 〜 2 ヶ月間低温 (~ 21 ° C) で実験をしてください。対照的に、成長を早めるために高温 (28 ° C ~ 30 ° C) で幼虫を保ちます。 注: キャビネット部屋の温度 (21 ° C)、暗闇の中でケージを維持します。</li>
	<li>ゴキブリはインキュベーターになって音が聞こえる場合、水の別の鍋を含むによって湿度を提供します。</li>
	<li>ケージをきれいには、定期的に、または転送することによってヒスノイズきれいなケージにゴキブリすべて 2 〜 3 週間乾燥糞便をすくいします。ケージの下部を乾燥させておきます。余分な水分が蓄積し、ケージの下に排泄物とミックスする許可されている場合は、すぐにケージをきれい。</li>
</ol>3. ゴキブリ実験に備えて
<ol><li>37 ° C 加湿インキュベーター順化実験前に 1 〜 3 週間ケージでゴキブリをしっと叱るの適切な番号に転送します。インジェクションの制御グループが含まれます。この馴化期間は、実験中に温度ショックを避けるために重要です。</li>
	<li>宛てで 37 ° C 高い温度溶けるゼリーのでケージに石油ゼリーを適用されません。</li>
	<li>食料と水を交換し、ケージをきれいにゴキブリをしっと叱るすべての 1 〜 2 日間を確認します。</li>
	<li>実験中にゴキブリをしっと叱るをグループ化するための蓋付き透明な使い捨てのプラスチック食糧容器を取得します。換気、蓋や釘を使ってコンテナーの側面の穴をパンチ、ハンマーします。 注: スナップをスクリュー キャップの容器を使用キャップ バイオ セーフティ レベル 3 の設定内のコンテナーです。スナップ キャップ容器は、必要に応じてテープで補強することができます。</li>
	<li>注射の日、男女均等を確保するコンテナーごとにグループに 6 に 12 順応歯擦音のゴキブリを配布し、体重します。</li>
	<li>ゴキブリをしっと叱る個々 の性別を決定します。男性と女性の不足は、角の隆起によって性別を決定します。</li>
	<li>個々 の歯擦音のゴキブリの重量を量る。バランスの歯擦音のゴキブリの計量を容易にするには、tared された 2 つの重量を量るボートで囲みます。 注: 実験間の一貫性を保つのためには、4 に 8 g の重量を持つゴキブリをしっと叱るを使用します。しかし、感染後の生存率の差はありません小 (1.5 に 2 g) と大 (6 に 8 g) ゴキブリをしっと叱る。創薬研究、ゴキブリをしっと叱る ~ 5 g の重量とを取得する体当たりより一貫性のある薬物濃度質量。</li>
	<li>水皿の代わりに高水内容フルーツまたは野菜、リンゴやジャガイモのスライスなどがあります。腐った食べ物を破棄します。コンテナーを乾いた状態に保つ付加的な水を提供しません。</li>
	<li>注射までゴキブリをしっと叱るを 37 ° C に戻る。</li>
</ol>4. 細菌培養と準備
注: このプロトコルで使用される細菌種は、 B. thailandensis、B. pseudomallei B. 疽。クラス ii B. 疽とB. pseudomalleiのすべての操作を行う必要があります。 または 3 実験室バイオ セーフティ レベル (BSL) に位置するクラス III 生物学的安全キャビネット。操作b. thailandensisと同様の生物学的安全キャビネットある BSL2 または BSL3 研究室のいずれか。BSL3 仕事のため制度の標準運用手順に従います。細菌を処理するとき個人用保護具の使用のための制度のガイドラインに従ってください。
<ol><li>感染する前に、少なくとも 3 日細菌病菌のマスター プレートを準備します。ルリア-ベルターニカミラ (レノックス) (LB) を使用して、 B. pseudomalleiまたはB. thailandensisの寒天とB. 疽の 4% のグリセロールを添加使用 LB 寒天培。-80 ° C で保存されている 25% グリセロール ストックから連勝細菌 注: は常に冷凍のグリセロール ストック; から直接マスター プレートを連勝します。細菌の継を避けるためプレートにプレートからこれは減らされた毒性を引き起こす可能性があります。</li>
	<li>マスター プレートからB. pseudomalleiまたはB. thailandensisの何人かのコロニーを 10 〜 20 mL LB スープを接種します。B. 疽の 4% のグリセロールを添加した流体培養基 LB を同様に接種します。</li>
	<li>37 ° C 〜 18 時間で 175 に 250 rpm でスープ文化を振る。</li>
	<li>10 分間 5,000 × g で文化の 3 に 2 mL を遠心します。</li>
	<li>上澄みを廃棄し、滅菌リン酸緩衝生理食塩水 (PBS、137 mM NaCl、2.7 mM KCl、10 mM Na2PO4、1.8 mM KH2PO4、pH 7.4) の細菌のペレットを再懸濁します。</li>
	<li>0.5, 600 で吸光度で測定の光学濃度 (OD) を達成するために PBS で細菌を希釈 nm の分光光度計です。</li>
	<li>直列細菌開始外径 0.5 から 10 倍の PBS で希釈します。感染症のこれらの懸濁液を使用します。</li>
	<li>シリアル希釈による接種の単位 (CFU) を形成し、寒天培地上に 100 μ L の因数のめっきの植民地を決定します。24 〜 48 時間の 37 ° C でプレートを孵化させなさい。</li>
</ol>5. 医薬品製剤
<ol><li>体ごとに与えられる薬の適切な量を決定するマス。歯擦音のゴキブリに CLQ 投与は 50 mg/kg である哺乳類、標準投与量に基づいていた日。</li>
	<li>再懸濁します。 または車両に関心の薬を薄めます。たとえば、12 mg/mL の濃度で PBS における CLQ を希釈します。この濃度は 25 μ L でゴキブリがボリュームを注入音が聞こえる 〜 6 g に薬物の 300 μ g を提供します。</li>
	<li>必要に応じて、薬液滅菌 0.22 μ m シリンジ フィルターを通過します。</li>
	<li>使用するまで 4 ° C で薬液を格納します。少なくとも 21 ° C (常温) 注射前に薬液を温めます。</li>
</ol>6. インジェクターのアセンブリ
<ol><li>反復的なピペットの調整ネジを回して音量 (25 μ L) へのポインターを設定します。</li>
	<li>反復的なピペットのリリース棒を内側にプッシュし、プッシャーを引き出します。繰り返しのピペットは、ロードされた注射器を収容する準備が整いました。 注: は、バランスで放出された水の量を測定することによって反復的なピペットによって放出されるボリュームを調整します。</li>
	<li>細菌や薬物を含む懸濁液 1 mL 注射器を入力します。</li>
	<li>注射器を付ける滅菌 26 または 27 G x 1/2 インチ (または短い) 針。</li>
	<li>トップに気泡をフロートし、10% の漂白剤を入れた容器に泡といくつかの懸濁液を排出する注射器をタップします。</li>
	<li>上向き針ベベルと反復的なピペットのシリンジ クリップにシリンジをスナップします。</li>
	<li>リリース棒を外側に引っ張って、ディスペンサー ボタンでしっかりとシリンジのプランジャーがプッシャーに対してまで 10% の漂白剤を入れた容器に空の注射を実行するを押します。</li>
	<li>1 または 2 追加空白の注射液は注射器から排出されることを確認するを実行します。反復的なピペットは注射の準備ができて。</li>
</ol>7. ゴキブリ注射
<ol><li>クラス II、クラス III 生物学的安全キャビネット、BSL2 のすべてのゴキブリの注射を行ったり、BSL3 設定使用制度個人用保護具をお勧め。</li>
	<li>ゴキブリをしっと叱ると接触するキャビネットの安全でクリーンな作業面。70% エタノールに続いて 10% の漂白剤を使用すると、残留漂白剤を削除できます。ように、表面の空気が乾燥。</li>
	<li>片方の手でその側で歯擦音のゴキブリをグリップします。注入中に反跳することがその歯擦音のゴキブリを固定します。腹部の terga 間皮膚膜を露出するよう歯擦音のゴキブリを若干曲げます。</li>
	<li>もう片方の手には、針が 0 ° 30 ° の角度に歯擦音のゴキブリの背腹側正中線から繰り返しのピペットなどを保持します。後端から 3rd、4thや 5th tergum に隣接する皮膚膜を穿刺します。 注: 示された角度で歯擦音のゴキブリに針のエントリにより針はなく通過し、歯擦音のゴキブリを終了します。注射部位は、放出された物質が体液でいっぱい腹部キャビティの内で含まれていることを確認します。歯擦音のゴキブリを押しながら事業生きたバクテリア、あるいは薬物を注射する前に水を注入することを練習します。</li>
	<li>しっかりとボリュームを注入する調剤ボタンを押します。優しくエントリの使用と同じ角度で針を撤回します。</li>
	<li>まだ注入されていない歯擦音のゴキブリから区別するために別の容器に注入された歯擦音のゴキブリを配置します。注射部位から滲んでいるが可能性がありますすべての体液をふき取りなさい。</li>
	<li>同じ注射器と針を使用してグループ内で他のゴキブリをしっと叱るを注入することを続行します。注射シリンジのプランジャーは最後の注射では不完全な投与を防ぐためにバレルの底に到達する前に停止します。</li>
	<li>単一歯擦音のゴキブリ、これらの細菌と薬などで複数の注射の歯擦音のゴキブリの背側に tergum の別の側面に挿入します。また、異なる terga (3rd 5th) に注入することで複数の注射を行います。</li>
	<li>容器の蓋をしっかりと閉じを確認します。必要に応じて、テープで蓋を強化します。</li>
	<li>加湿の 37 ° C の定温器でゴキブリをしっと叱る孵化させなさい。</li>
</ol>8. ヒスノイズ ゴキブリの罹患率や死亡率の記録
<ol><li>個人用保護具を推奨クラス II、クラス III 生物学的安全キャビネット制度ですべての歯擦音ゴキブリ検査を実行します。70% エタノールに続いて 10% 漂白剤できれいな安全キャビネットの表面。乾燥空気を作業領域として使用できます。</li>
	<li>罹患率の表 (表 1) の得点を使用して 1-2 週間の期間にわたって毎日歯擦音のゴキブリを一度か二度のスコアします。</li>
	<li>死んでいる歯擦音のゴキブリをコンテナーから削除し、生存者の数を記録します。</li>
	<li>残りのライブ コンテナーの下部に余分な水分が蓄積してきた場合は、清潔な容器にゴキブリをしっと叱るを転送します。また、使い捨てのペーパー タオルを使用して余分な水分をふき取る。</li>
	<li>腐った食べ物は毎日、加湿の 37 ° C の定温器にゴキブリをしっと叱る戻り値を交換してください。</li>
	<li>研究の終わりに、バイオハザード バッグの残りの生存者を置き、安楽死-80 ° C で凍結します。</li>
	<li>データ14 LD50を決定するための統計的な分析、生存のためのカプラン ・ マイヤーとログ ランク分析。同様にすべての昆虫実験対照群のいくつかの死亡があります。これらの死の昆虫15の自然死亡率に起因しています。対照群の死亡口座についての詳細について、参照15を参照してください。</li>
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最適な実験条件は最小限の一貫性のある時間のコミットメントが必要です健康の歯擦音のゴキブリ コロニーで始まります。比較的長い間行くことができるゴキブリをしっと叱る (~ 週間) 食料と水、なし毎週または隔週のケージのメンテナンスを提供する必要があります。これは、食料と水の供給をチェックし、ケージの乾燥を確実に含まれます。順化と; 高温孵化の間に特に重要です乾燥の生きている条件を維持します。我々 はより歯擦音のゴキブリが死ぬことを見つけるとコンテナーが毎日掃除しないとき高温に速い速度で。
一貫性のある投薬や歯擦音のゴキブリの接種にキーしっかりと反復的なピペットのディスペンサー ボタンを押すことです。このテクニックの練習、反復的なピペットにシリンジの読み込みおよび空白注射を実行することをお勧めします。技術に新しい演算子プロシージャの最も時間のかかるステップが保持または射出時歯擦音のゴキブリを固定します。したがって、保持とより野心的なプロジェクトに取り組む前に複数の歯擦音のゴキブリを注入のテクニックを練習しても強くお勧めします。これは、注射に専ら使用される歯擦音のゴキブリの小さいグループを...

昆虫病原細菌と自然免疫生体防御研究するため代替の非哺乳類動物モデルとしての使用は、近年勢いを得ています。ロジスティック、これは、比較的安価なコストと取得、処理、および哺乳類に比べて昆虫の世話のしやすさのためです。規制政策研究に昆虫の使用を支配するがもないです。範囲対象ではありませんまたは任意の動物によって定められた制限使用委員会や政府機関。サロゲートの動物モデルとして昆虫、特に病原因子、ホスト病原体の相互作用、および抗微生物薬の効果の評価のための包括的なスクリーニングの調査に。その使用はそれにより動物実験1,2の行為に内在する倫理的なジレンマのいくつかを克服する研究に使用される哺乳類の数を減らすことができます。
昆虫は、昆虫と哺乳類の1、3の生来の免疫システム間の共通性の高度があるため代理ホストとして役立つかもしれない。Plasmatocytes 昆虫と哺乳類のマクロファージは貪食微生物4です。好中球に昆虫相手は血球5,6です。昆虫および哺乳類細胞における細胞内オキシダティブ バースト経路が似ています。両方の活性酸素種は、オーソログ p47phoxと p67phox蛋白質5によって生成されます。フリー ダイヤル昆虫や Toll 様受容体受容体と哺乳類におけるインターロイキン-1 の下流シグナル伝達カスケードも非常に似ています。7ディフェンシンなどの抗菌ペプチドの生産の両方の結果します。このように、昆虫は後生動物によって共有される一般の生得的な免疫機構を研究対象に利用できます。
属Gromphadorhinaからゴキブリをヒス マダガスカルと呼ばれる昆虫は、存在する場合、通常満期 5 ~ 8 cm に達する最大のゴキブリの種のひとつです。マダガスカル島にのみネイティブ、歯擦音のゴキブリは8気門と呼ばれる呼吸器系の開口部から空気を追放するとき生じる音それが作る - シューという音によって特徴付けられます。独特のヒスノイズは求愛と侵略の9のゴキブリをしっと叱る間社会的なコミュニケーションの形として機能し、男性はその生息地で妨げられたときに聞くことができます。マダガスカルの音を立てるゴキブリは、アメリカのゴキブリと他都市害虫種に比べてゆっくり動くが。及び繁殖; 簡単です。妊娠中の歯擦音のゴキブリは、一度に 20 に 30 子孫を生成できます。5 ヶ月で性的に成熟に達する、ニンフと呼ばれるゴキブリ ヒス赤ちゃん後に 6 回の脱皮を受けているし、5 歳生きることができます野生と飼育下8の両方。
マダガスカル活用して病菌疽、B. pseudomallei、細胞内の病原体に感染し、 B. thailandensis 10、11.の代理ホストとしてゴキブリをヒスゴキブリをしっと叱るでこれらの病原体の病原性細菌病菌、シリアのハムスターのベンチマーク モデル動物に病原性を示したに比べていた。B. pseudomalleiとB. 疽の 50% 致死量 (LD50) 両方モデル11に類似していたことがわかった。興味深いことに、 B. thailandensis齧歯動物モデルにおける非病原性は歯擦音のゴキブリ11致命的です。B. thailandensis感染に関してこの違い歯擦音のゴキブリ モデルの有用性を強調します。B. thailandensis変異体の減衰は、齧歯動物モデルでより歯擦音のゴキブリでより容易に解決できます。さらに、 B. thailandensisとして使用され多くの場合B. pseudomallei B. 疽 10,12,13, それの減衰の突然変異を識別するためのモデル生物でした。その劇毒性の親戚に同じような目標に します。
B. 疽に減衰するB. thailandensisシリアのハムスターと歯擦音のゴキブリでの病原性の違い、6 型分泌システム-1 (T6SS-1) などの重要な病原因子の変異にもかかわらず、B. pseudomalleiが B. thailandensis 11同様に減衰します。さらに、歯擦音のゴキブリ モデルを検証すると、個別 T6SS 突然変異体 (T6SS-2 T6SS 6) B. pseudomallei、シリアンハム スターにおける病原性のベアリングを持たない、残る歯擦音のゴキブリ11病原性という点で。したがって、歯擦音のゴキブリは 3細菌病菌の種の実行可能な代理の動物モデルであります。我々 は最近、病菌感染10とその毒性に対する抗マラリア薬クロロキン (CLQ) の有効性を検証するサロゲートの動物モデルとして歯擦音のゴキブリを利用しました。
ここでは、マダガスカルのケアと育児について述べるゴキブリをヒスと病菌の 3 種でこの昆虫に感染する方法について詳細に説明します。さらに、我々 は歯擦音のゴキブリは病原性細菌病菌の感染症で薬の有効性と、それ可能性が高いとしても同様の研究で他の細菌の病原体の代理ホストを勉強するサロゲート実行可能なモデルを示しています。

<table><tbody><tr><td>マダガスカルのヒスゴキブリ &nbsp;&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Carolina Biological Supply Co, Burlington, NC&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>143668 Kibbles n Bits、任意のフレーバー</td>ビッグ<td>ハートペットブランド、サンフランシスコ、カリフォルニア州</td><td>UPC #079100519378</td><td></td></tr>使い捨て<tr><td>プラスチック容器または同等の</td><td>ラバーメイド、ハンターズビル、ノースカロライナ</td><td>州UPCのスナップ #FG7F71RETCHIL</td><td></td></tr><tr><td>使い捨てプラスチック容器または同等の</td><td>ラバーメイド、ハンターズビル、ノースカロライナ</td><td>州UPCのネジ</td> #FG7J0000TCHIL <td></td></tr><tr><td>トライダックステッパーシリーズの繰り返しピペット</td><td>Dymax Corporation www.dymax.com</td><td>T15469</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ (1 mL)&nbsp;</td><td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>針 (26 or 27G x 1/2)</td><td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ</td><td>305109, 305111</td><td></td></tr><tr><td>Chloroquine diphosphate</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td><td>C6628</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline</td><td>Gibco/ Thermo Fisher Scientific, Gaithersburg, MD</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Difco Luria- Bertani (Lennox)</td><td>Bectonディキンソン、スパークス、メリーランド</td><td>州240230</td><td></td></tr>寒<tr><td>天&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich、St. Louis、MO</td><td>A1296</td><td></td></tr>グリ<tr><td>セロール</td><td>Sigma-Aldrich、St. Louis、MO</td><td>G6279</td><td></td></tr></tbody></table>

病原性、病態、および薬の有効性を調査するため、代替の非哺乳類動物モデルとしてゴキブリをヒス マダガスカル

The Madagascar Hissing Cockroach as an Alternative Non-mammalian Animal Model to Investigate Virulence, Pathogenesis, and Drug Efficacy

自然免疫の多くの側面は、哺乳類と昆虫の間保存されます。昆虫、 Gromphadorhina、属からゴキブリをヒス マダガスカルは、病原性、宿主-病原体相互作用、生得の免疫反応および薬の有効性の研究のための代替動物モデルとして利用できます。子育てに関する詳細は、歯擦音のゴキブリの繁殖と飼育が提供されます。またどのようにそれは細胞内病原体B. thailandensis、B. pseudomallei 病菌疽などの細菌に感染することを示す.歯擦音のゴキブリの使用は高価ではない、研究における哺乳類の使用規制問題を克服します。さらに、歯擦音のゴキブリ モデルを使用して検索結果、再現性と哺乳類モデルを用いて得られたもののようです。したがって、マダガスカルの歯擦音のゴキブリは、動物実験を行う際に検討する必要があります魅力的なサロゲート ホストを表します。

このセクションは、マダガスカル ゴキブリをしっと叱るB. 疽、B. pseudomallei B. thailandensis; に感染していた場合に得られた結果を示しています。結果は細菌感染に対する薬物の効果、薬物の毒性病原性の勉強にこの昆虫が病菌の種の扱いやすい動物モデルであります。ゴキブリをしっと叱るよりは野生型B. pseudomallei K96243 親B. 疽に感染していたグループより弱毒変異株 (Δhcp1) に感染していたグループで生き残った SR1 またはB. thailandensis DW503 (図 1)。逆に、感染病原性変異体 (Δhcp2または Δhcp3) またはB. pseudomallei (図 1) と同様に、歯擦音のゴキブリが死亡しました...

細菌の病原性、病態、薬物毒性、薬効、生得の免疫反応の研究を実施する、代替の非哺乳類動物モデルとしてゴキブリをヒス マダガスカルを利用するプロトコルを提案します。

Many aspects of innate immunity are conserved between mammals and insects. An insect, the Madagascar hissing cockroach from the genus Gromphadorhina, can ...

この研究の全体的な目標は、Gromphadorhina属の新規代理動物モデルである昆虫、Madagascar Hissing Cockroachにおける細菌感染の影響を評価することです。マダガスカルヒッシングゴキブリを代替動物モデルとして使用することは、微生物学の質問に答えるのに非常に役立ちます。これらには、宿主と病原体の相互作用と微生物の病因に関する研究が含まれます。具体的には、さまざまな動物に共通する病原性因子の同定に非常に役立ちます。さらに、そのようなモデルであるマダガスカルヒッシングゴキブリは、感染症の治療に効果的な薬物を特定するのに役立ちます。さまざまな病原体の弱毒化変異を探すための大規模なスクリーニング研究は、この動物モデルを使用して簡単に行うことができます。シューという音を立てるゴキブリは、入手、取り扱い、手入れも簡単で、使用に関連するコストも低く抑えられます。この方法は、バークホルデリアの病因に関する洞察を提供しましたが、他の細菌性病原体の研究にも適用できる可能性があります。シューという音を立てるゴキブリの使用は、哺乳類の気温でGalleriaワックスワームモデルを使用して技術的および物流上の問題に直面したときに初めて思いつきました。元インターンで、ゴキブリがたくさん鳴くネイチャーセンターでボランティアをしていた人が、ゴキブリを試してみることを提案しました。私たちはそうしました、そして彼らは見事に働きました。ゴキブリは片方の手で固定しにくく、もう片方の手で接種剤を注入するため、この方法を視覚的に示せることが重要です。手順を実演するのは、研究室の学生インターンであるJoshua Roanです。技術者のJared Crumplerは、シューという音を立てるゴキブリを固定して注射する別の方法も実演します。テキストプロトコルに従ってヒスゴキブリを繁殖させた後、温度ショックを避けるために、馴化実験の1〜3週間前に、ケージ内の適切な数のヒスゴキブリを摂氏37度の加湿インキュベーターに移します。1〜2日ごとにヒスゴキブリをチェックして、水分含有量の高い食品を交換し、ケージを清掃します。注射当日は、6〜12匹の順応したヒスゴキブリを容器ごとにグループに分配し、性別と体重が均等に分配されるようにします。注射を含むすべてのBurkholderia作業は、クラスIIまたはクラスIIIの生物学的安全キャビネットで、BSL2またはBSL3の設定で、施設が推奨する個人用保護具を使用して実行します。感染の3日前に、Burkholderia pseudomalleiまたはBurkholderia thailandensisのLB寒天に細菌をストリーキングするか、Burkholderia malleiの4%グリセロールを添加したLB寒天に細菌をストリーキングして、Burkho

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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病原性、病態、および薬の有効性を調査するため、代替の非哺乳類動物モデルとしてゴキブリをヒスマダガスカル

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