Question 1

DNA断片化とは何で、アポトーシスの間にどのように発生するのでしょうか？

Accepted Answer

DNA断片化は、染色体DNAが切断端を持つ断片に切断されるアポトーシスの特徴です。細胞質内の酵素であるカスパーゼは、その阻害剤を除去することで、カスパーゼ活性化DNase（CAD）を活性化します。活性化されたCADは核に移動し、染色体DNAを切断し、蓄積してシグナルを送る断片を作り出します細胞死。

Question 2

TUNELアッセイはどのようにアポトーシス細胞を検出しますか？

Accepted Answer

TUNELアッセイは、アポトーシス細胞の切断されたDNA末端を蛍光でマークします。末端デオキシヌクレオチジル転移酵素（TdT）は、切断されたDNAの3'ヒドロキシル基に蛍光標識されたデオキシウリジン三リン酸（dUTP）ヌクレオチドを結合させます。これにより、蛍光顕微鏡下で視認可能なTUNEL陽性細胞が生成されます。

Question 3

組織切片でTUNELアッセイを実行する主な手順は何ですか？

Accepted Answer

TUNELアッセイプロトコルには、4%パラホルムアルデヒドを使用した組織固定、10µmのスライスへのクリオセクショニング、プロテイナーゼKによる透過性化、TdT酵素と標識されたdUTPの追加、37°Cで1-3時間のインキュベーション、ストップバッファーによる反応停止、蛍光顕微鏡による可視化が含まれます。

Question 4

TUNEL試薬を加えること前に組織の透過性化はなぜ必要ですか？

Accepted Answer

浸透は、TUNEL試薬、特にTdT酵素が細胞核に浸透し、断片化したDNAにアクセスすることを可能にします。37°Cで5-15分間のプロテイナーゼK処理は、細胞膜に孔を作り、酵素が核内部にあるその基質に到達できるようにします。

Question 5

研究者はどのようにTUNEL染色を使用して病気におけるアポトーシスを研究できますか？

Accepted Answer

研究者は様々な病気の文脈でアポトーシスを調べるためにTUNEL染色を適用します。例えば、科学者は実験的化合物でヒトの腫瘍サンプルを処理し、増加したアポトースを測定することで、薬物に対する腫瘍の反応性を評価するためにそれを使用します。TUNEL染色は組織切片中のTUNEL陽性細胞の割合を数えることで細胞死を定量化します。

Question 6

カスパーゼはDNA断片化の開始においてどのような役割を果たすか？

Accepted Answer

カスパーゼは細胞質に存在するタンパク質分解酵素で、細胞タンパク質を切断することでアポトーシスを実行します。カスパーゼはカスパーゼ活性化DNase（CAD）をその阻害剤ICADから分離して活性化します。活性化されると、CADは細胞核に入り、染色体DNAを切断し、TUNELアッセイで検出される断片化したDNAを生成します。

Question 7

TUNEL陽性染色は組織サンプルの細胞について何を示すのでしょうか？

Accepted Answer

TUNEL陽性細胞はアポトーシスを起こしており、蛍光dUTPでラベルされた切断された末端を持つ断片化されたDNAを含んでいます。これらの細胞は顕微鏡下で蛍光性を示し、プログラムされた細胞死を示します。TUNEL陽性細胞の数を数えることで、組織切片で起こっているアポトーシスの定量的測定が可能になります。

TUNEL 法 - 評価クイズ