Name: さまざまな地域と発展途上と大人の脳のラミナを明らかにするシナプス亜鉛化学の使用 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: 学ぶシナプス亜鉛染色法によるフェレット脳の組織化学的解析。発達期と成体の脳における層構造と領域の識別に応用でき、神経解剖学研究でシナプス亜鉛分布の可視化に有用です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

この作業は、研究資源 (2G12RR03060 26A1); 国立センターからの補助金によって支えられました。少数の健康および健康格差 (8G12MD007603-27) 国立衛生研究所から国立研究所プロフェッショナル スタッフ議会市立大学ニューヨーク (PSC ニューヨーク市立大学);教員の研究グラント (ドイツ連邦共和国 II) アメリカ大学シャルジャ.Vidyasagar Sriramoju は、これらのメソッドにご紹介を感謝いたします。

<ol><li>Nakashima, A., Dyck, R. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19026685">Zinc and cortical plasticity.</a> Brain Res. Rev. 59, 347-373 (2009).</li>
<li>Frederickson, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurobiology+of+zinc+and+zinc-containing+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Neurobiology of zinc and zinc-containing neurons.</a> Int Rev Neurobiol. 31, 145-238 (1989).</li>
<li>Beaulieu, C., Dyck, R., Cynader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+of+glutamate+in+zinc-containing+terminals+of+the+cat+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroReport%22%5BJournal%5D)">Enrichment of glutamate in zinc-containing terminals of the cat visual cortex.</a> NeuroReport. 3 (10), 861-864 (1992).</li>
<li>Martinez-Guijarro, F. J., Soriano, E., Del Rio, J. A., Lopez-Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc-positive+boutons+in+the+cerebral+cortex+of+lizards+show+glutamate+immunoreactivity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Zinc-positive boutons in the cerebral cortex of lizards show glutamate immunoreactivity.</a> J Neurocytol. 20 (10), 834-843 (1991).</li>
<li>Dyck, R., Beaulieu, C., Cynader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histochemical+localization+of+synaptic+zinc+in+the+developing+cat+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Histochemical localization of synaptic zinc in the developing cat visual cortex.</a> J Comp Neurol. 329 (1), 53-67 (1993).</li>
<li>Garrett, B., Geneser, F. A., Slomianka, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+acetylcholinesterase+and+zinc+in+the+visual+cortex+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Embryol.+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Distribution of acetylcholinesterase and zinc in the visual cortex of the mouse.</a> Anat Embryol. (Berl). 184 (5), 461-468 (1991).</li>
<li>Garrett, B., Osterballe, R., Slomianka, L., Geneser, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoarchitecture+and+staining+for+acetylcholinesterase+and+zinc+in+the+visual+cortex+of+the+Parma+wallaby+%28Macropus+parma%29%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Evol%22%5BJournal%5D)">Cytoarchitecture and staining for acetylcholinesterase and zinc in the visual cortex of the Parma wallaby (Macropus parma).</a> Brain Behav Evol. 43 (3), 162-172 (1994).</li>
<li>Dyck, R., Cynader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+interdigitated+columnar+mosaic+of+cytochrome+oxidase%2C+zinc%2C+and+neurotransmitter-related+molecules+in+cat+and+monkey+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">An interdigitated columnar mosaic of cytochrome oxidase, zinc, and neurotransmitter-related molecules in cat and monkey visual cortex.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. (90), 9066-9069 (1993).</li>
<li>Land, P. W., Akhtar, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience-dependent+alteration+of+synaptic+zinc+in+rat+somatosensory+barrel+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosens+Mot+Res%22%5BJournal%5D)">Experience-dependent alteration of synaptic zinc in rat somatosensory barrel cortex.</a> Somatosens Mot Res. 16 (2), 139-150 (1999).</li>
<li>Danscher, G. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF00543951">Exogenous selenium in the brain: a histochemical technique for light and electron microscopic localization of catalytic selenium bonds.</a> Histochemistry. 76, 281-293 (1982).</li>
<li>Danscher, G., Howell, G., Perez-Clausell, J., Hertel, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dithizone%2C+Timm%27s+sulphide+silver+and+the+selenium+methods+demonstrate+a+chelatable+pool+of+zinc+in+CNS%3A+a+proton+activation+%28PIXE%29+analysis+of+carbon+tetrachloride+extracts+from+rat+brains+and+spinal+cords+intravitall+treated+with+dithizone%5BTitle%5D)+AND+%22Histochemistry%22%5BJournal%5D)">The dithizone, Timm's sulphide silver and the selenium methods demonstrate a chelatable pool of zinc in CNS: a proton activation (PIXE) analysis of carbon tetrachloride extracts from rat brains and spinal cords intravitall treated with dithizone.</a> Histochemistry. 83, 419-422 (1985).</li>
<li>Gallyas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+staining+of+myelin+by+means+of+physical+development%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Res%22%5BJournal%5D)">Silver staining of myelin by means of physical development.</a> Neurol Res. 1 (2), 203-209 (1979).</li>
<li>Wong-Riley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+visual+system+of+monocularly+sutured+or+enucleated+cats+demonstrable+with+cytochrome+oxidase+histochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Changes in the visual system of monocularly sutured or enucleated cats demonstrable with cytochrome oxidase histochemistry.</a> Brain Res. 171 (1), 11-28 (1979).</li>
<li>Miró-Bernié, N., Ichinohe, N., Perez-Clausell, J., Rockland, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc-rich+transient+vertical+modules+in+the+rat+retrosplenial+cortex+during+postnatal+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Zinc-rich transient vertical modules in the rat retrosplenial cortex during postnatal development.</a> J Neurosci. 138 (2), 523-535 (2006).</li>
<li>Ichinohe, N., Rockland, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+synaptic+zinc+in+the+macaque+monkey+amygdala%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Distribution of synaptic zinc in the macaque monkey amygdala.</a> J Comp Neurol. 489 (2), 135-147 (2005).</li>
<li>Innocenti, G. M., Manger, P. R., Masiello, I., Colin, I., Tettoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Architecture+and+callosal+connections+of+visual+areas+17%2C+18%2C+19+and+21+in+the+ferret+%28Mustela+putorius%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Architecture and callosal connections of visual areas 17, 18, 19 and 21 in the ferret (Mustela putorius).</a> Cereb Cortex. 12 (4), 411-422 (2002).</li>
<li>Khalil, R., Levitt, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+histochemistry+reveals+circuit+refinement+and+distinguishes+visual+areas+in+the+developing+ferret+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Zinc histochemistry reveals circuit refinement and distinguishes visual areas in the developing ferret cerebral cortex.</a> Brain Struct Funct. 218, 1293-1306 (2013).</li>
<li>Manger, P. R., Masiello, I., Innocenti, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Areal+organization+of+the+posterior+parietal+cortex+of+the+ferret+%28Mustela+putorius%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Areal organization of the posterior parietal cortex of the ferret (Mustela putorius).</a> Cereb Cortex. 12, 1280-1297 (2002).</li>
<li>Wong, P., Kaas, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Architectonic+subdivisions+of+neocortex+in+the+gray+squirrel+%28Sciurus+carolinensis.%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+anatomical+record%22%5BJournal%5D)">Architectonic subdivisions of neocortex in the gray squirrel (Sciurus carolinensis.).</a> The anatomical record. 291, 1301-1333 (2008).</li>
<li>Land, P. W., Shamalla-Hannah, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience-dependent+plasticity+of+zinc-containing+cortical+circuits+during+a+critical+period+of+postnatal+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Experience-dependent plasticity of zinc-containing cortical circuits during a critical period of postnatal development.</a> J Comp Neurol. 447 (1), 43-56 (2002).</li>
<li>Czupryn, A., Skangiel-Kramska, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+synaptic+zinc+in+the+developing+mouse+somatosensory+barrel+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Distribution of synaptic zinc in the developing mouse somatosensory barrel cortex.</a> J Comp Neurol. 386, 652-660 (1997).</li>
<li>Timm, F. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF00665092">Zur Histochemie der Schwermetalle. Das Sulfid-Silber-Verfahren.</a> Dtsch Z ges gerichtl Med. 46, 706-711 (1958).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

現在の研究では、Danscher (1982) 法10、シナプス亜鉛の局在が検出され、脳で可視化するという修正版に基づく組織化学的手法を採用しています。このメソッドは本質的に亜鉛キレート剤ナトリウム亜セレン酸 (Na2SeO3) 動物 (15 mg/kg) を注入することによって動作します。注入後、亜セレン酸は脳に移動し、亜鉛亜鉛含有ニューロンのシナプス小胞にローカライズされたバインドします。亜鉛イオンはシナプス小胞の沈殿物内の分子にバインドされ、その後物理的な開発2,11的に視覚化できます。元のティムの硫化銀染色法は、検出し、生体組織22Au、Ag、Pt、Fe、Cd、Cu、Ni、Zn など重金属の数を視覚化する意図されていた。このメソッドに使用されるキレート剤は、硫化ナトリウムです。したがって、ティムの硫化物法を用いた主要な問題は、金属硫化物に変換することができます任意の金属に銀の...

組織学的汚れは伝統的建築の機能の違いを明らかにして様々 な種の皮質領野の同定の支援するために使用されています。ニッスル物質、チトクロム酸化酵素 (CO) 反応性ミエリンを組織化学的手法の併用は、成人の脳と同様の面積境界を明らかにする証明実り。しかし、これらの組織化学的汚れは皮質と未熟な脳の層の間の明確な境界を常に十分に明らかに行います。
中枢神経系における亜鉛の多数規制機能に参加してシナプス小胞の存在を通して神経調節物質として作用する酵素の補足因子としての DNA 構造の安定化を含むいくつかの重要な機能1。 それが視覚化できること組織学的手法を用いた蛋白結合亜鉛は可視化2をすることはできません一方、シナプス亜鉛はユニークな。この機能は、異なる皮質のシナプス亜鉛パターンを明らかにするために悪用されているし、組織化学シナプスの亜鉛は、多くの研究で使用されています。大脳皮質のグルタミン酸作動性ニューロンのサブセットには、その軸索ターミナル3,4内シナプス小胞中の亜鉛が含まれています。組織化学的研究は、大脳皮質の5,6,7でのシナプスの亜鉛の不均質分布を明らかにしました。異なる皮質領域 (例えば、体性感覚野と視覚的)、または層中の亜鉛の組織化学的反応性の異なる面積と層流分布をするようです (例えば亜鉛量は、顆粒と一次視覚野のではレイヤーが視床入力層 IV シナプス亜鉛の比較的低レベルでより大幅に高い)5,8,9。シナプスの亜鉛は、大脳皮質にみられる染色の不均一性は、面積と層流の識別を容易に特に有利であります。
Danscher の 1982年法10の修正版は、シナプスの亜鉛の化学プロシージャの詳細な説明をご紹介します。このメソッドは、キレート剤として、動物に亜セレン酸注入腹腔内 (IP) を利用しています。亜セレン酸は、脳内でグルタミン酸作動性シナプスのサブセットの小胞は、亜鉛のプールと反応する脳へ移動します。この反応は銀の開発2,,1011後高めることができる沈殿物を生成します。
この手順は、シナプス亜鉛の汚損; の層流および面積のパターンを明らかにします。デンシトメトリー分析は、感覚や環境、薬理学的、遺伝的操作など、他の介入の効果を研究する大人と未熟な脳で定性的・定量的にこれらのパターンを評価するために使用可能性があります。また、1 つはまた他のモデル系シナプス亜鉛その他の皮質や皮質下構造の分布の潜在的な発達的変化を評価しすることも。デンシトメトリーの分析を提供するこの方法で定量的な情報を時間をかけて次の脳の発達のために有利にすることができます。このプロトコルは、層流と地域の境界を明らかにする他の免疫・組織化学的マーカーにコンパニオンを提供します。

<table><tbody><tr><td>Euthazol (安楽死溶液)</td><td>ヘンリー・シャイン</td><td>710101</td><td></td></tr><tr><td>亜セレン酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>214485</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン (Ketaved)</td><td>ヘンリー・シャイン</td><td>48858</td><td>100 mg/ml 注射剤</td></tr><tr><td>キシラジン (アナセド)</td><td>ヘンリー・シャイン</td><td>33198</td><td>100 mg/ml 注射剤</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>F8775</td><td>希釈剤4%</td></tr><tr><td>アラビアガム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9752-500G</td><td></td></tr><tr><td>クエン酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1909</td><td></td></tr><tr><td>クエン酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W302600</td><td></td></tr><tr><td>ハイドロキノン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9003</td><td></td></tr><tr><td>乳酸銀</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>85210</td><td></td></tr><tr><td>魚ゼラチン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7765</td><td></td></tr><tr><td>シトクロームc</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2506</td><td>(III型、馬の心臓由来)</td></tr><tr><td>Catalse</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C10</td><td></td></tr><tr><td>ショ糖</td><td>ドミノ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>キシレン</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>X5P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>パーマウント</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>SP15-500</td><td></td></tr><tr><td>100% エタ</td><td>ノール フィッシャーサイエンティフィック</td><td>A406-20</td><td>スライド取り付け前の脱水に使用</td></tr><tr><td>カバースリップ</td><td>Brain Research Laboratories</td><td>#3660-1</td><td></td></tr><tr><td>つや消しのサブベッドなしスライド</td><td>Brain Research Laboratories</td><td>#3875-FR</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>American Optical Company</td><td>860</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>Olympus</td><td>BX-60</td><td></td></tr><tr><td>Adope Photoshop</td><td>Adobe Systems, San Jose, CA</td><td></td><td>画像を組み立てるには</td></tr>、<tr><td>ImageJ</td><td>フリーソフトウェアは http://rsb.info.nih.gov/ij/</td><td></td> <td>デンソメトリック測定用</td></tr><tr><td>プラスチックトレイ</td>でダウンロードできます 任意の<td>標準プラスチックトレイを使用して</td><td></td><td>、スライドを現像液に浸すことができます</td></tr><tr><td>ホットプレート</td> 任意の<td>標準ホットプレートを使用することができます</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

さまざまな地域と発展途上と大人の脳のラミナを明らかにするシナプス亜鉛化学の使用

Use of Synaptic Zinc Histochemistry to Reveal Different Regions and Laminae in the Developing and Adult Brain

解剖学的および機能的な脳組織および開発の評価には、異なる神経回路と未熟な大人の脳の領域の正確な同定が必要です。ここで別のレイヤーと脳の間で染色パターンの違いを明らかにする亜鉛の組織化学的染色手順をについて説明します。他の人は亜鉛含有ニューロンと脳の回路の分布を明らかにするだけでなく、正常にいくつかの種の開発と大人の脳の面積と層流境界の線引きにもこのプロシージャを利用しています。ここで我々 は説明これ開発から画像とプロシージャを汚すと大人のフェレット脳。我々 はエリアのレイヤー、解剖学的マーカーとして機能する亜鉛染色パターンを明らかにして開発および成人の視覚野における視覚皮質を区別するために安心して使用できます。このプロトコルの主な目的は、レイヤーと他の方法がように失敗する発展途上と大人の脳の領域の正確な同定を可能にする組織化学的方法を提示することです。第二に、デンシトメトリーの画像解析と併せて、この方法により開発中の潜在的な変化を明らかにするためのシナプスの亜鉛の分布を評価するために 1 つです。このプロトコルは、試薬、ツール、および順次冷凍脳のセクションを染色に必要な手順の詳細について説明します。フェレット脳組織を使用してこのプロトコルを解説していますが、それは簡単に、齧歯動物、猫、または他の頭脳領域のように同様にサルでの使用に適応できます。

図 1のフローチャートのシナプス亜鉛の脳のセクションを染色するこのプロトコルに関連する主要な手順が掲載されています。プロトコルは 3 つのフェーズに分けることができます: 1) 血流や組織の採取、2) ティッシュの準備と染色と 3) 亜鉛化学。簡潔に、プロトコルの最初のフェーズは、動物は麻酔をかけられ、亜セレン酸ナトリウムの適切な投与量と IP を注入します。十分な時間の経過の (理想的には 60-90 分) 後、は、動物がその後安楽死させた後 4% パラホルムアルデヒド溶液に 0.9 %nacl 水溶液の灌流が。頭は首し、脳が頭蓋骨からすぐに削除されます。脳は、4% パラホルムアルデヒド プラス保護剤の検討として 30% ショ糖液でシンクできます。プロトコルの 2 番目のフェーズで凍結切片をリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) に切断 40 μ m での滑走式ミクロトームで、番号のシリーズに分けます。最適な結果を得るのための一晩乾燥してセクションを残して断面、直後後卵白话スライド セクションをマウントすることが重要...

パターンの異なる脳の領域を染色特性の層流および面積の亜鉛を明らかに組織化学的手順をについて説明します。レイヤーと領域を開発、大人の脳を確実に区別するためにその他の解剖学的マーカーと亜鉛染色パターンは組み合わせて使用可能性があります。

Characterization of anatomical and functional brain organization and development requires accurate identification of distinct neural circuits and regions ...

この方法の全体的な目標は、フェレット凍結脳切片で組織化学的染色を行い、発達中の脳と成体の脳のさまざまな領域と層を区別するシナプス亜鉛染色パターンの利用を示すことです。この方法は、異なる脳領域や層間のシナプス亜鉛染色パターンの質的および量的違いなどの重要な質問に答えるのに役立ちます。主な利点は、この手法がシンプルで信頼性が高く、独自の染色パターンに基づいて、発達中の脳と成人の脳のさまざまな領域と層を識別できることです。この方法は、野生の視覚野の領域と層を区切る際の洞察を提供するために利用されてきましたが、げっ歯類、猫、または霊長類の異なる脳領域の層を区別するためにも使用できます。200ミリリットルの現像液を調製するには、40グラムのアラビアガムを120ミリリットルのお湯にゆっくりと加え、ガラス棒で攪拌し続けて完全に溶解させます。その後、数分間冷ましてから、漏斗で6〜8層のガーゼ布でろ過します。次に、5.04ミリリットルの蒸留水に5.04グラムのクエン酸と4.7グラムのクエン酸ナトリウムを加え、溶解してクエン酸緩衝液を作ります。次に、1.7グラムのハイドロキノンを30ミリリットルの加熱蒸留水に加えます。0.22グラムの乳酸銀を30ミリリットルの水に加えて、乳酸銀溶液を作ります。次の順序で、アラビアガム、クエン酸緩衝液、ハイドロキノン、最後に乳酸銀溶液を混合して、現像液を調製し、暗所に保ちます。この手順を開始するには、体重1キログラムあたり15ミリグラムの亜セレン酸ナトリウム溶液(亜鉛キレート剤)を麻酔したフェレットに腹腔内に注入します。.次に、亜セレン酸ナトリウム溶液が脳に到達するまで60〜90分待ちます。次に、フェノバルビタール1キログラムあたり100ミリグラムの過剰摂取を腹腔内に注射して動物を安楽死させ、ユータゾールが効くまで数分待ちます。安楽死させたフェレットに、最初に生理食塩水で 1 分間、次に 4% パラホルムアルデヒドで 20 分間、心血管灌流を行います。次に、スクロースを含む固定剤を使用して、1時間で全固定手順を完了します。メスを使用して、鼻から首まで正中線を切開し、頭蓋骨を露出させます。脳を繊細に取り除き、メスの刃を使って半球を分離します。次に、後部を脳の残りの部分から切断して分離し、2〜4時間後置します。組織を0.1モルリン酸緩衝液の30%スクロース溶液に保持することにより、脳を沈めます。.脳が沈んだ後、凍結スライド式ミクロトームを使用して、視覚野を介して厚さ40マイクロメートルの半接線の切片を作成します。絵筆を使用してすべての脳切片を収集し、リン酸緩衝生理食塩水で満たされたタックルボックスに入れます。次に、卵白コーティングされたスライドに1つまたは2つの一連の脳切片をすばやく取り付けます。スライドを室温で一晩保管して乾かします。スライドが乾いたら、無水アルコールに15分間浸します。その後、スライドを室温で完全に乾かすまで1時間待ちます。切片を1%ゼラチン溶液に10秒間すばやく沈めてから、慎重に水気を切ります。切片を室温に保ち、一晩乾燥させます。プラスチック製のトレイを使用して、スライドを並べて配置します。次に、現像液を注ぎ、スライドが完全に沈んでいることを確認します。反応の進行について、30分ごとにセクションを確認することを忘れないでください。スライドが適切に汚れている場合は、スライドに取り付けられた部分をトレイから取り外し、スライドをスライドラックに保管します。大きなガラスステンディングディッシュを使用して、スライドラック内のスライドを温かい流水で10分間洗い、ゼラチンコートと外側の銀の堆積物を洗います。スライドを室温で乾燥させた後、100%エタノールで5分間脱水し、キシレンで5分間透明にします。最後に、封入剤を入れたカバースリップをスライド上に置きます。明視野顕微鏡を使用して切片を検査し、関心のある領域の写真を撮ります。関心領域の顕微鏡写真から亜鉛染色切片を選択し、幅約450マイクロメートルの皮質カラムをランダムに選択します。関心のある各領域で、いくつかの異なる脳切片から適切な数のサンプル列を選択します。次に、列の画像を画像処理ソフトウェアに転送します。ソフトウェアでは、長方形のセクションツールを使用して、皮質列全体を囲みます。次に、反転ツールを使用して、画像をコントラスト反転します。次に、プロットプロファイルツールを使用して、線に沿ったピクセル強度の2次元グラフを作成し、画像から光学密度プロファイルを生成します。最後に、プロット プロファイル オプションを使用して、プロット プロファイル グラフを垂直プロファイルに変換します。次に、プロットプロファイルをもう一度クリックします。幼若フェレット脳の半接線亜鉛染色切片の顕微鏡写真は、過剰に染色された組織と過小に染色された組織の特徴を示しています。過度に染色された組織は、層状変化が不十分で、白質が密に染色された非常に暗褐色になります。対照的に、染色が不十分な組織は淡褐色を発し、白質の染色は最小限に抑えられます。半接線切片の顕微鏡写真は、成体のフェレットの視覚皮質領域におけるシトクロムオキシダーゼ染色中のシナプス亜鉛を示しています。シナプス亜鉛染色強度は、領域17および18の顆粒上層および顆粒下層で高く、第4層は軽く染色されます。逆に、面積が17と18の第4層は、シトクロムオキシダーゼ反応性を染色すると、重く染色されます。柱状顕微鏡写真は、すべての皮質層におけるシナプス亜鉛の層状分布と、それらの相補的な正規化された光学密度値を示しています。皮質の深さによるシナプス亜鉛染色の変化を反映するために、各視覚皮質領域で光学密度値の正規化プロットを生成しました。プロットプロファイルに存在するトラフは、領域17および18の層4におけるシナプス亜鉛染色が低いことを示しています。この手順は、時間の経過とともに特定の脳領域に発達上の変化と染色強度があるかどうかを説明するのに役立ちます。この技術は、神経解剖学の研究者が、感覚的、環境的、薬理学的、または遺伝的操作が、さまざまな種の成体および未熟な脳のシナプス亜鉛染色の分布にどのように影響するかを調査するのに役立つことが証明されました。ご覧いただきありがとうございます。あなたの実験に頑張ってください。

use-synaptic-zinc-histochemistry-to-reveal-different-regions-laminae

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

記録カルシウム活性のためのカルシウムインジケーター色素と脳室下帯（SVZ）細胞をロードする方法について説明する。生後SVZは、神経前駆細胞および神経芽細胞を含む、密に詰まった細胞が含まれています。むしろ風呂ローディングを使用するよりも、我々はより良​​い染料拡散を可能にする組織内部の圧力によって色素を注入した。...

カルシウムイメージングの急性脳室下帯スライスの調製

出典:McLeod, F., et al.海馬のげっ歯類の脳スライスにおけるシナプス密度の評価。J. Vis. Exp.

免疫蛍光法を用いたマウス海馬切片のシナプスの顕微鏡解析

私たちは、ゼブラフィッシュ胚におけるマウスナーニューロンや他の網様体細胞からパッチクランプ記録を経由して電気的活動を記録し、監視するための完全な脳脊髄準備を開発しました。従って、我々は、発生中の胚における主要ニューロンから興奮性と抑制性シナプス電流、電位依存性チャネル活性および活動電位を記録することができる。...

胚ゼブラフィッシュマウスナー細胞からパッチクランプ記録

ここでは、器官型スライス培養技術を用いて海馬の出生後の神経新生を研究するための技術が記載されている。この方法では、成人の神経新生のin vitro操作を可能にし、培養海馬への薬理学的薬剤の直接適用することができます。...

生後神経発生の研究のための器官型スライス培養

このプロトコルは、ビオシチン充填およびその後の免疫組織化学的後処理を使用して電気生理学的記録の中にパッチを適用したニューロンの形態学的回復のための方法を提示しています。我々は、染色し、カバーガラスをした厚いビオシチン充填された部分は、後に第二次抗体日または数ヶ月で再染色することができることを示しています。...

神経化学的マーカーのためのビオシチンで満たされたと加工セクションの免疫染色

正確に特定および蛍光抗体法を用いた海馬スライスにおけるシナプスの分析のためのプロトコルは、この資料に記載されています。...

海馬の齧歯動物の脳スライスにおけるシナプス密度の評価

ここで説明したプロトコルを記述する蛍光分析、biocytin 回復と海馬 ca 2 介在神経細胞内の電気生理学的記録in vitro...

Biocytin 回復と塗りつぶされた海馬 ca 2 介在ニューロンの 3 D 再構成

透過型電子顕微鏡と子宮内で伝達の組み合わせは、開発中に神経系の細かい微細構造の形態学的変化を研究するための強力なアプローチです。これらの併用は、神経可塑性の地形表現に関しての基になる構造の詳細の変更への深い洞察をことができます。...

子宮内開発のマウスの脳および脊髄の伝達の後の微細構造神経可塑性パラメーターの評価

我々は、新生ラット脳組織を処理して、神経終末におけるシナプス小胞分布の morphometric...

Ultrastructural のための新生ラット脳組織の調製 Morphometric 神経末端におけるシナプス小胞分布の解析

極度切除は、深い定量的プロテオーム分析のために、マウス脳内で最大の神経原性ニッチの新鮮な凍結製剤を可能にする。この方法は正確で効率的であり、最小限の組織摂動を引き起こす。そのため、このニッチの分子微小環境や、他の臓器、領域、種の研究に最適です。...

正確で深い定量プロテオーム分析のための成人皮下帯のクライオセクション解剖

提示されたプロトコルは、主にシナプス数と樹状突起棘の形態に焦点を当てて、マウスバレル皮質の概日変化を定量化するための透過型電子顕微鏡(TEM)の使用を説明しています。...

マウスバレル皮質における概日シナプス可塑性の解析のための可視化技術としての透過型電子顕微鏡

学ぶシナプス亜鉛染色法によるフェレット脳の組織化学的解析。発達期と成体の脳における層構造と領域の識別に応用でき、神経解剖学研究でシナプス亜鉛分布の可視化に有用です。

さまざまな地域と発展途上と大人の脳のラミナを明らかにするシナプス亜鉛化学の使用

さらに動画を探す