Name: 組織と血液サンプリング手順の標準化による閉胸ブタ心筋梗塞モデルの改善 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 1 s
Description: 学ぶ閉胸ブタ心筋梗塞モデルの標準化された組織・血液サンプリング手順。心筋虚血再灌流障害の病態生理を正確に評価し、新規治療薬の開発に貢献する再現性の高い心血管研究手法です。

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著者は、FXIIa 阻害剤と、対応するコントロールを提供する教授クリスチャン Heinis を認識したいです。また感謝するラミナー Beslac、博士ダニエル メトラー、実験的手術ユニット、生物医学研究、テクニカル サポートのためのベルンの大学のための部門からケイ Nettelbeck。セリーヌ Guillod と診断、Interventional ベルン大学病院小児放射線科からマティアス ラウシュ Inselspital は x 線装置と技術サポートを提供しました。このプロジェクトは、スイスの全米科学財団のプロジェクト号 320030_156193 によって賄われていた。我々 はまたコミュニケーションとマーケティング、ベルン大学病院映像記録実験用 Inselspital から氏 Reto Haenni に感謝したいと思います。

1. 動物:
すべての動物は、スイスの国内法のガイドラインに従って扱われました。研究は、ベルンのカントンのローカル動物実験委員会によって承認された (アクセス許可なし。25/16 である)。
男女の大きな白豚を使う (~ 30 ± 5 kg)。2 つのグループに動物を盲目的に分割受信 FXIIa の環 (80 kDa プロテアーゼ) 阻害剤または治療の選択やその他のアクティブなコントロールの 1 つのグループ。
2. 手術 (図 1)
<ol><li>麻酔や動物の準備:
	<ol>
<li>高速で 12 h のための動物実験を開始する前に。</li>
		<li>事前にケタミンを 20 mg/kg と 10 mL のシリンジを使用して首に筋肉内注射を介してキシラジンを 2 mg/kg の動物を薬します。動物の体重を記録して、セックス。</li>
		<li>耳介の静脈に 0.5 mg/kg ミダゾラムと 0.05 mg/kg アトロピンを注射することによって麻酔を誘導します。動物気管内チューブを挿管します。</li>
		<li>人工呼吸器人工呼吸器を使用して麻酔を維持 (O2/空気 1:3、コメッツ 1.5%)、7-8 mm 気道チューブとフィルター。35%、6-10 mL/kg を一回換気量に触発された酸素 (FiO2) の割合を調整します。</li>
		<li>麻酔深度は、鼻をつまんでモーターまたは自律神経の応答の不在で十分な評価されます。眼瞼反射および顎の調子は、継続的にもリラックスした顎の調子や眼瞼反射の不在を対象とした監視されました。コア温度を常時監視し、常温療法 (38-38.5 ° C) のメンテナンスは、パッシブ (分離毛布と暖かいボトル) 地球温暖化で確保しました。</li>
		<li>無料、フリー、Koudstaal および彼の同僚の手順 3 1 3 318、両側内頚動脈で、前述の解剖し、7F シースとそれらを cannulate します。静脈血サンプリング 7F シースと左頸静脈を cannulate します。</li>
		<li>続いて 250 μ g/h 輸液ポンプを使用して連続点滴静注として中心静脈ラインを 250 μ g のフェンタニル鎮痛剤のボーラス投与量を管理します。体温、心拍数、3 誘導心電図 (ECG)、全体の実験中に動脈、中心静脈圧とリズムを監視します。</li>
		<li>静脈ラインから次のベースライン血液サンプルを撤回する標準的な採血管を使用して、: 5 mL クエン酸血漿およびそれぞれのチューブに 2.9 mL EDTA 血漿。すぐに 4 ° C で 15 分間 2,000 × g で遠心します。血清チューブに 2.9 mL の血液を取り出して、室温で 30 分間上記のように遠心分離前に凝固することができます。</li>
		<li>血しょうか血清 500 μ L に 200 μ L 分注チューブし、さらなる分析-80 ° C ですべてのサンプルを格納します。</li>
		<li>製造元の指示に従って BGA マシンを用いた BGA を測定する特殊な血液ガス分析 (BGA) が注射器を使用して動脈ラインから血の 0.5 mL を撤回します。</li>
		<li>標準 2 mL 注射器を使用して静脈ラインから血の 0.5 mL を撤回し、すぐに 30 G の針を使用して行為カートリッジに転送。製造元の指示に従って血液凝固時間測定法マシンに塗りつぶされたカートリッジを挿入します。タイム ポイントは図 2を参照してください。</li>
		<li>2 mL 注射器を使用して静脈ラインに 5000 IU 未分画ヘパリンを管理および MI の実験を開始する前に 20 分を安定させるために動物を許可します。</li>
		<li>2.1.11 で述べたように、モニターはすべての 30-45 分を機能します。法律が < 180 s の場合 2500 IU 未分画ヘパリンを静脈内注入します。</li>
	</ol></li>
	<li>心筋梗塞の実験
	<ol>
<li>標準的な C アーム透視装置を使用 (冠動脈造影プログラム、角度 0 °、12 フレーム/秒 〜 70 kV) または専用の血管造影システムまた、冠動脈インターベンションを実行します。</li>
		<li>透視を使用して、左頚動脈で以前に配置したシースを介して圧力カテーテル (5 階、120 cm) を挿入します。左心室にそれを進めます。圧力のカテーテルを左心室圧を記録する集録システムに接続します。集録システムを継続的に計算して開発した心拍数を記録する必要がある圧力、dP/dt 最大 (左心室の収縮性) 及び dp/dt 最小 (左心室の弛緩) 全体の実験中。10 分の基準値を記録します。</li>
		<li>6 階 (100 cm、EB3.75) を挿入右総頚動脈に以前に配置したシースを介してカテーテル。左冠動脈、左冠行枝 (LAD) に到達するために x 線の指導の下でそれを進めます。ガイディングカテーテル経由で 20 mL の注射器を使用して、ベースラインの冠動脈造影を実行する造影剤を注入します。 注: 造影剤の注入圧によって行われていたが、専用の電源インジェクター システムを使用することも可能性があります。</li>
		<li>経皮的冠動脈インターベンション (PCI) カテーテルの適切なサイズを選択する x 線モニターに若者のサイズを評価します。15-25 mm、直径 2 と若者のサイズに応じて mm 3.5 間の長さと PCI バルーンを使用します。PCI カテーテル、冠動脈ガイドワイヤー (F 014/J 175 cm) を組み立てます。造影剤が記入されたインフレーション デバイスと PCI カテーテルを接続します。 注: 若者直径は定規を使用してキャリブレーション モニター上で直接測定することができ、PCI バルーンのサイズがそれに応じて選択されます。</li>
		<li>2.2.4 から組立システムをカテーテルの内腔に挿入します。若者の 2 つ目の対角枝を超えてに到達するまでガイドワイヤを若者に進出します。</li>
		<li>若者の約真ん中に達するまで PCI カテーテルを事前に透視を使用します。通常時に左心室 (LV) の AAR の同じようなパーセントを持つために最初の対角枝 (図 3) は後、2 番目の後、冠動脈の解剖学によって若者のブロック サイトを選択します。 注: ブロックのサイトの選択は、対角枝の長さとこのようにそれぞれ支店を経由の血によって供給されるティッシュの領域に依存します。長い、場合これの直後に分岐最初対角枝ブロックのサイトになります。短い最初対角枝の場合ブロックは 2 番目の斜め後行われます。</li>
		<li>ガイドワイヤを削除し、PCI カテーテルのバルーンを膨らませるし、徐々 に 1 のための心筋虚血を誘発する 7-10 バーに膨らまし装置内の圧力の増加を FiO2虚血の 15 と 40 分間の 50-60% に増やします。6-10 mL/kg で一回換気量を維持します。 注: この手順に発生の発生を減らす、心室細動の頻度を減少します。</li>
		<li>虚血; を開始直後後が PCI カテーテルのバルーンの血管造影カテーテルを通して造影剤を注入しながら 5-10 の映像記録10 分間虚血 PCI カテーテルのバルーンに遠位の若者の完全閉塞を確認する後を繰り返します。</li>
		<li>すぐに、検出し、治療 (2.2.10) に密接に動物を監視不整脈。発生は通常発生して周波数の増加 (> 毎分 3) 心筋虚血の誘導後 20 〜 40 分間。このような場合は、頬のすぐ下両側に首を優しくマッサージします。ほとんどの場合これは総頸動脈にある迷走神経体位刺激によっておそらく定期的にハートビートを再確立に十分でしょう。</li>
		<li>不整脈は、心室細動に進行、洞リズムを再確立するのに外部、二相性除細動器を使用します。150 J (30 kg の動物) のショック状態し、酸素を含む血液と、冠動脈を埋めるためにショックを適用する前にすぐに除細動パッドを使用して 5-10 胸部圧迫を適用します。</li>
		<li>必要に応じて繰り返し、175 J 3rd衝撃後にエネルギーの増加。重い動物のより高いエネルギー設定を使用します。</li>
		<li>虚血時間の終わりの前に 5 分では、2.1.8-2.1.13 に記載されている採血を繰り返します。被験物質を注入 (環 FXIIa 阻害または 4 mg/kg を制御、盲目的にこれにこれを行う) 中心静脈ラインとフラッシュ 20 mL の生理食塩水でラインを通して静脈内投与。</li>
		<li>1 クエン酸血漿を撤回する (前述の 2.1.8 で 2.1.9) 2.2.12 で物質を注射した後 4 分。</li>
		<li>若者の閉塞を確認し、PCI カテーテルのバルーンをしぼませる、このカテーテルをカテーテルから削除する血管造影 (2.2.3) を実行します。心筋虚血の徴候は 5 分以上のため、直前に心電図で表示されていたときにデフレと 10 分その後、PCI カテーテルのバルーンの除去の直後に血管造影で, 閉塞部に遠位の若者の血流を確認します。若者の再閉塞は。</li>
		<li>2 h の心筋虚血後再灌流を許可します。再灌流 (2.1.8 と 2.1.9) の 10、30、60、115 分で血漿、血清サンプルを取る。60 と 115 分 (2.1.10) で BGA を監視します。</li>
		<li>虚血のために使用したのと同じ位置にガイドワイヤーと共に PCI カテーテルを挿入し直します。前に、PCI のカテーテルのバルーンを膨らませるし、血管造影 (2.2.3) によって若者の閉塞を確認します。左心室から圧カテーテルを削除し、記録を停止します。</li>
		<li>2 %100 mL を注入中心静脈ラインにエバンス ブルー リン酸緩衝生理食塩水 (PBS、pH 7.4)。約 30 秒後、全体の動物が、青に変わったら注入 40 mL 20% 動物の安楽死に塩化カリウム。死は、心電図、脈波の有無によって確認されました。</li>
	</ol></li>
</ol>3. サンプリング技術
<ol><li>
心 (図 4) をサンプリングを抽出、解剖、
	<ol>
<li>中心部を公開する胸骨を実行します。Koudstaal と同僚、手順 8-2、8-318に記載されたプロトコルに従ってください。カット オープン心膜以前心膜炎由来し、動物がさらに評価されない可能性があります異常の検査中。</li>
		<li>収縮し、カテーテルと同様に、PCI を削除します。詳しく分析するため心臓を切除します。下大静脈を切断し、血液吸引ポンプを使用し、体と心を結ぶすべての大型船をカットを削除します。</li>
		<li>部屋の温度生理食塩水で心臓内と外をすすいでください。心臓全体の重量を量る。</li>
		<li>30-40 分以内には、鋭いナイフを使用して長い軸に垂直な僧帽弁の腱索形態に頂点から約 3-5 mm のスライスに中心部をカットします。</li>
		<li>常に同じ向きでカット サンプル (図 5) の方向を維持するために上を向いて腹側と中心部を配置する注意してください。</li>
		<li>デジタル単一レンズの反射カメラを用いた心のスライスを撮影します。</li>
		<li>右心室 (不要として破棄) を切り取る。写真左心室スライスと左心室の総重量のすべてのスライスの重量を量る。</li>
		<li>エバンス ブルー肯定的なすべてのセクションでエバンス ブルーの否定的な組織と区別します。メスを使用して非虚血性の組織 (エバンス ブルー正) から、虚血性 (エバンス ブルー負) を分離するスライスを解剖します。</li>
		<li>まずエバンス ブルーの否定的なセクション (AAR リスクで虚血領域) を分析します。それらすべての重量を量るし、プラスチック製の容器にすべて入れてください。</li>
		<li>(心臓のサイズ) によると 100-150 mL トリフェニル テトラゾリウム塩化物溶液 (2 g、TTC 16 g デキストラン、分子量 48000-90000、200 mL の PBS、作りたてに) 完全にスライスをカバー、ソリューション内中心部分が自由に移動できるようにします。コンテナーをカバーし、軽く振りながら 37 ° C で 20 分間インキュベートします。</li>
		<li>インキュベーションこの 20 分の時間では重さ・ エバンス ブルーの中に肯定的な部分 (ANR 危険でない領域) は組織 Tek を埋め込むためのサンプルを取る (損傷から最も遠位部を選択) し、さらに分析-80 ° C で保存します。4% ホルムアルデヒド液に残りの部分を転送し、組織学のセクションの常温で保存します。</li>
		<li>TTC ソリューションから AAR の部分を削除します。赤の染色組織は実行可能な虚血組織 (VIT)、非染色組織が虚血性壊死 (NIT)。小 2 個 (2 ~ 3 mm のブロック) をカット両方 NIT と VIT、組織 Tek にそれらを埋め込むし、さらに詳しい分析-80 ° C で保存します。これらのサンプルは、同じ重さで必要があります。</li>
		<li>発泡スチロールの容器にそれらをピンで止めるとヒューム フードに室温で 24 時間 4% ホルムアルデヒド溶液を完全にカバー (AAR から派生したすべてのスライス) の作品の残りの部分を修正します。作品写真ドキュメントについては、次の手順でフラット滞在してください。</li>
		<li>次の日同じズーム設定と組織 (同じ倍率) からの距離と高解像度カメラを使って作品の両側を写真します。自動スケール バーをすべての画像に追加します。すべてのバーは、同じ長さである必要があります。 注: 高解像度カメラは自動的にそれぞれの写真に縮尺記号を追加するソフトウェアに接続する必要があります。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
AAR および梗塞サイズの計算
	<ol>
<li>左心室の AAR % = (AAR の重量 g/重量 g で左心室の) * 100。</li>
		<li>AAR と写真に基づいて NIT (各部分の両側) の総面積を計算するのに ImageJ ソフトウェアを使用します。</li>
		<li>角度ツールからの直線を使用してスケールのバーの長さを選択することによって、スケール バーを調整します。分析メニューから選択 > 縮尺の設定、既知の距離と縮尺記号の単位を挿入します。すべての写真に同じスケールが適用されますので「グローバル」を選択します。</li>
		<li>AAR を計算するフリーハンド選択ツールを使用して組織の全体の表面積をマークします。組織や脂肪組織 (図 6 C) の側 (高さ) を含めないように注意してください。</li>
		<li>「領域」と分析から「ラベルを表示」を選択することで、測定を設定 > 設定測定メニュー。分析から表面積を測定 > メジャー。</li>
		<li>3.2.5 NIT を測定する (マーク非染色組織のみ) の手順を繰り返します。注: は、寄生虫の卵の計算に脂肪組織 (図 6 D) を含めないでください。組織の他の側の手順を繰り返します。</li>
		<li>AAR および組織の各部分の NIT の平均を計算します。</li>
		<li>3.2.7 から取得した値を使用して、AAR:% AAR NIT の割合として、NIT を計算する = (Σ 平均体表面積 NIT の cm2/Σ 平均 AAR の cm2の表面積) * 100。</li>
		<li>2 つの別の捜査官は、上記の方法を繰り返す必要があります。差異の許容は、< 10% です。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
虚血マーカー
	<ol>
<li>-80 ° c (2.1.9) 心筋トロポニンのレベルを測定する以前に保存されている EDTA 血漿検体を使用- 19を説明私は、以前シングル プレックス Luminex タイプの試金を使用して。</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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<li>Ellenbroek, G. H. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Outcome+Assessment+in+a+Pig+Model+of+Acute+Myocardial+Infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primary Outcome Assessment in a Pig Model of Acute Myocardial Infarction.</a> J Vis Exp. , e54021(2016).</li>
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著者は利益相反を宣言しません。

心筋私/R 負傷後急性心筋梗塞3患者の予後に直接変換は最終梗塞サイズに大きな影響があります。心筋の病態生理を理解私/R 傷害は減らすか、それを防ぐために最初のステップです。心筋私/R の損傷、閉塞血管の再灌流直後後に発生する急性の状態。私/R 負傷は自然免疫応答の活性化につながるし、再灌流と周囲組織20のサイトで細胞の損傷が発生しました。最近の研究は、脳のラットモデルにおける神経学的予後の改善を示した私/R 負傷8FXIIa 阻害剤で処理します。ただし、現在のパイロット研究では我々 が見つかりません環 FXIIa 阻害剤の効果で心筋私/R 負傷。使用される FXIIa 阻害剤の新規であり、豚の体内動態はまだ知られていません。したがって、効果の観測の欠如は、不適切な投薬またはアプリケーションによって原因可能性があります。これは、フォロー アップ研究で対処する必要があります。
動物モデルの標準化は深さで心筋の病態を調べることが不可欠、私/R 負...

虚血性心疾患、特に急性心筋梗塞 (MI) は、先進国1の死の主な原因です。今日、MI の標準治療は、経皮的冠動脈インターベンション (PCI)、バルーン カテーテル治療です。急性 MI の PCI 治療を受けた患者の予後と生活の質に影響を与える重要な要因の 1 つは、梗塞サイズです。サイズの削減は、患者の生存率と予後2大きな影響を持つことができます。心筋虚血・再灌流 (私/R) 傷害は、心血管の研究の主要な目的の 1 つは、回避または低減心筋梗塞巣の大きさに大きな影響私/R 負傷3。私の正確なメカニズム R 負傷がまだ調査4/。プラズマ カスケードと内皮細胞の活性化は、私の特徴/R 負傷5。凝固系の活性化は明らかに関与する6,7です。最近では、血液凝固カスケードの接触相活性化に伴う初期上流ペプチドとして FXII の役割は、FXII で示されている脳のモデルラットをノックアウト私/R 負傷8。ブタのモデルにこれらの結果の検証は、臨床の翻訳に重要なステップです。したがって、我々 は心筋のコンテキストで、新規環 (80 kDa) FXIIa プロテアーゼインヒビターをテスト私/パイロット研究で R 負傷。
急性 MI と PCI 治療の臨床状況を模倣、動物モデルが私たち理解心筋の病態を改善するために不可欠である/R 負傷、新規治療法の選択肢をテストします。豚の良い動物モデルを表す臨床心筋私/R 負傷。これは、彼らの心は解剖学と冠循環に関する人間の心に非常に似ていますが、それらはまた心筋の虚血と再灌流9,10と同様の病態生理学的応答を示すためだけではありません。ラットやマウスなどの他のモデルいないこれらの基準を満たすし、犬などが多くのより多くの担保の冠血管人間と比較して人間の心11,12と比較されたときかなりの相違を表示13。
ブタ心筋梗塞モデルは調べる心筋虚血性心疾患を含む循環器病研究で広く使用されています私/R 負傷14,15,16,17。後者は胸骨に関連する炎症性反応を最小化するため、炎症性疾患や開開胸手術使用が不可欠であります。C アーム血管造影の臨床を用いた閉胸のモデルは、この問題を克服します。さらに、最も重要なポイントの一つは梗塞サイズ (虚血性壊死、NIT) ができるように、我々 のプロトコルが虚血性 (リスク、AAR の領域) と非虚血性左心室 (ANR 危険でない領域) 部の正確な区別を提供することは正確に決定されます。今回の私たちの目的は心筋、ブタの再現方法を明確に定義する私/R 傷害モデル、特に私の分子メカニズムのより正確な分析を可能にする心筋組織サンプリングに関して/R 傷害と薬剤治療の効果の鮮明な画像。

<table><tbody><tr><td>ABL 90 Flex、血液ガス分析器</td><td>放射計</td><td>-</td><td>血液ガス分析(BGA)</td></tr><tr><td>ACT Plus</td><td>Medtronic</td><td>-</td><td>活性化凝固時間</td></tr><tr><td>Atropin</td><td>Sintetica-Atropinum</td><td></td> <td>Sulfas、0,5mg/ml</td></tr><tr><td>バランス(20-500 Kg)</td><td>NAGATAスケール、Tiwan</td><td>HTB/HTR</td><td>代替品が使用可能</td></tr><tr><td>バランス(21-4200 g)</td><td>メトラー・トレド、スイス</td><td>MS4002SDR</td><td>代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>採血チューブ:EDTA、クエン酸、血清</td><td>S-Monovette, Nuembrecht, Germany</td><td>05.1167.001, 05.1071.001 and 05.1557.001 代替</td><td>製品が使用可能</td></tr><tr><td>BV PulseraモバイルCアーム</td><td>フィリップ</td>ス<td>-</td><td>代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Labcare, UK</td><td>ALC PK120R</td><td>代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>除細動器 Lifepak 12</td><td>メドトロニック</td><td>-</td><td>代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>Leuconostoc mesenteroides</td><td>Sigma-Aldrich, Germany</td><td>D3759</td><td>平均 M.wt 48000-90000</td></tr><tr><td>デジタル一眼レフカメラ</td><td>ソニー, タイ</td><td>DSLR-A500/A550</td><td>代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>解剖鉗子</td><td></td><td></td><td>代替製品は、</td></tr><tr><td>EMPIRA RX PCI拡張カテーテル</td><td>Cordis、Johnson&を使用することができます。ジョンソン、米国</td><td>85R15300S</td><td>直径 3 mm、長さ 15 mm、代替製品を使用できます</td></tr><tr><td>EMPIRA RX PCI 拡張カテーテル</td><td>Cordis、Johnson&ジョンソン、米国</td><td>85R15350S</td><td>直径 3.5 mm、長さ 15 mm、代替製品を使用できます</td></tr><tr><td>エバンス ブルー</td><td>シグマ - アルドリッチ、ドイツ</td><td>E2129</td><td>有毒</td></tr><tr><td>なファビウス GS プレミアム レスピレーター</td><td>Dr&auml;ger、L&uuml;ベック、ドイツ</td><td>-</td><td>麻酔ワークステーション、代替製品を使用できます</td></tr><tr><td>フェンタニル</td><td>インセルスピタール ISPI</td><td>-</td><td>フェンタニル 2500mcg/50ml</td></tr><tr><td>ホルムアルデヒド</td><td>病理学研究所、ベルン大学</td><td>SI148701</td><td>代替製品は、</td></tr><tr><td>FXIIa阻害剤</td>を使用することができます EPFL<td></td>の<td>クリスチャン・ハイニス教授の研究室が提供する</td><td>新規二環式ペプチド</td></tr><tr><td>ガレオ, 冠状動脈ガイドワイヤー</td><td>Biotronik, Germany</td><td>125497</td><td>代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>ガイダンスカテーテル</td><td>ボストンサイエンティフィック, フロリダ州, USA</td><td>34356-06</td><td>6F (100 cm, EB3.75).代替製品は、</td></tr><tr><td>ヘパリンナトリウム</td><td>Drossapharm、バーゼル、スイス</td><td>-</td><td>リクミン、25000 U.I./5 ml</td></tr>ハイエンド<tr><td>電気手術</td><td>BOWA、ドイツ</td>ARC <td>400</td><td>血液吸引のための電源を使用することができます。代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>Hydro-Guardmini 呼吸フィルター</td><td>Intersurgical, リトアニア</td><td>1745000</td><td>フィルター</td></tr><tr><td>Image J</td><td>National Institute of Health, USA</td><td>1.47v</td><td>代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>インフレ装置、Atrion QL2530</td><td>Atrion 医療製品、アラバマ州、米国</td><td>96402</td><td>代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>IntelliVue MP 70</td><td>Philips, Boeblingen、ドイツ</td><td>-</td><td>モニター(ECG、心拍数、血液圧迫、体温)。代替製品を使用できます</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sintetica SA</td><td>-</td><td>塩化カリウム 15%</td></tr><tr><td>ケタミン</td><td>ベトキノール</td><td>-</td><td>ナルケタン、1ml/100mg</td></tr><tr><td>LR-ACT</td><td>メドトロニック</td><td>402-01</td><td>ACT 特殊シリンジ</td></tr><tr><td>ミダゾラム</td><td>ロシュ</td><td>-</td><td>ドーミカム、5mg/ml</td></tr><tr><td>モノポーラメス</td><td></td><td></td><td>代替製品を使用できます</td></tr><tr><td>ニードルホルダー</td><td></td><td></td><td>代替製品</td></tr><tr><td>高解像度カメラ、Grossing Spotimaging用PathStand Macro Imaging Stand</td> Station<td>、USA</td><td></td><td>1080 p HD解像度。代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>PBS</td><td>社内準備</td><td>-</td><td>代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>末梢静脈カニューレ、18G</td><td></td><td></td><td>代替製品が使用可能</td></tr><tr><td>PowerLab 4/35データ収集システム</td><td>Adinstruments, Spechbach,</td><td></td> Germany-Rotamax120T <td></td></tr><tr><td></td><td>Heidolph, Germany</td><td>544-41200-00</td><td>Shaker.代替として</td></tr><tr><td>R&uumlを使用できます。schelit-スーパーセーフティクリアチューブ</td><td>テレフレックス、ダブリン、アイルランド</td><td>112480</td><td>気道チューブ、代替製品を使用できます</td></tr><tr><td>安全なピコアスピレーター シリンジ</td><td>ラジオメーター</td><td>956-622</td><td>BGA特殊シリンジ</td></tr><tr><td>生理食塩水</td><td>Sintetica Bioren-NaCl</td><td></td> <td>0,9%。代替製品を使用できます</td></tr><tr><td>セボラン 1.5%</td><td>アッヴィ AG-</td><td></td><td>セボラン 250ml 100%</td></tr> <tr><td>シース</td><td>コーディス、ジョンソン&ジョンソン、米国</td><td>504-607 A</td><td>AVANTI + / 7 F、代替製品は、</td></tr><tr><td>宇宙輸液ポンプ</td><td>B.Braun Medical AG、ドイツ</td><td>-</td><td>フェンタニルの注入用に使用できます。代替製品は、</td></tr><tr><td>SPR-350(ミラーカテーテル)</td><td>Adinstruments、テキサス州、米国</td><td>840-8166</td><td>MIKRO-TIP、5F、120センチメートル</td></tr><tr><td>胸骨切開鋸</td><td></td><td></td>代替<td>製品を使用することができます</td></tr>縫<tr><td>合糸ETHICON</td><td>、ジョンソン&ジョンソン、米国</td><td>Y3110H</td><td>モノクリル3-0 SH-1プラス。代替製品は、</td></tr>シ<tr><td>リンジ(20、10、5 mL)</td><td>CODAN、Baar、Switzerland</td><td>62.7602、 62.6616、 62.5607 </td>それぞれ使用できます<td>。また、ヘパリンまたはFXIIaまたはそれぞれのコントロールを注入する。代替製品を使用することができます</td></tr><tr><td>ソラックススプレッダー</td><td></td><td></td><td>代替製品を使用することができます</td></tr><tr><td>Tissue-tek</td><td>SAKURA, Netherlands</td><td>4583</td><td>O.C.T. compound</td></tr><tr><td>血管鉗子</td><td></td><td></td><td>代替製品は</td></tr><tr><td>Xenetix 300造影剤</td>を使用することができます <td>Guerbet, Z&uuml;リッチ、スイス</td><td>-</td><td>ロビトリドール、ヨウ化物300 mg/ml</td></tr><tr><td>キシラジン</td><td>ベトキノール</td><td>-</td><td>キシラパン、20mg/1 mL</td></tr><tr><td>2,3,5-トリフェニルテトラゾリウム チョライド</td><td>Sigma-Aldrich, オーストリア</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>500 &mu;L tubes (eppendorf)</td><td>Trefflab, Switzerland</td><td>96.08185.9.03</td><td>代替製品が使用可能</td></tr></tbody></table>

組織と血液サンプリング手順の標準化による閉胸ブタ心筋梗塞モデルの改善

Improvement of a Closed Chest Porcine Myocardial Infarction Model by Standardization of Tissue and Blood Sampling Procedures

心筋虚血再灌流 (私/R) 心筋梗塞後, 壊死の面積のほぼ半分に貢献する損傷。心筋を回避または低減する承認薬がない日付に私/R 負傷。心筋の病態生理学的メカニズムの理解と研究/R 傷害は成功した治療法の開発が不可欠です。大規模な動物実験は、並進メソッドで重要なステップです。急性心筋梗塞のブタのモデルを確立されており、自分や他人によって記述されます。今後の実験で使用するためのサンプリング手法に焦点を当てて詳細にモデルの価値をさらに向上を目指しました。さらに、我々 は最終結果の品質に影響を与えることができる小さいが重要なステップを強調します。心筋の臨床状況を模倣する私/R 負傷、経皮的冠動脈インターベンション (PCI) カテーテルは、動脈左前下行枝冠 (LAD) 麻酔下のブタの挿入されました。このモデル模倣急性心筋梗塞、PCI 治療の領域を正確に把握する可能性を持つ人間のリスクだけでなく、壊死 ° ° °- と実行可能な虚血性の組織。ここでモデルは FXIIa の二環性のペプチド阻害剤の効果を調べるために使用されました。モデルは、心筋梗塞後の効果時間が長く再灌流を許可するように変更できます。

1 つの動物は、技術的なエラー (虚血時に、被験物質の添加前に血圧の急激な低下) による FXIIa 阻害剤または制御ペプチドの投与前に途中で死亡しました。1 つの動物は、左前下行枝 (LAD) の解剖学的異常のために虚血/再灌流障害は認められなかったので FXIIa 阻害剤グループから除外されました。尖部を含む左の心室の大部分はこの動物の回旋動脈灌流。最終的な分析に含まれている動物であった n = 環 FXIIa ペプチド阻害剤群 2 (27.5 ± の重量を意味する 2.5 kg) と n = 3 非アクティブな二環式制御ペプチドの受信 (29 ± の重量を意味する 0.8 kg)。
ビデオ画像を x 線/豚の心臓の冠動脈造影は、圧力カテーテルの位置を視覚化し、若者 (図 3 a) をブロックする場所を決定に使用されています。図 3 b</stro...

ここに示すの並進価値が心筋虚血/再灌流障害の病態生理の理解を高めるために急性心筋梗塞の確立されたブタモデルのサンプリング手順を標準化するためのプロトコル新規薬剤の候補者をテストします。

Myocardial ischemia reperfusion (I/R) injury contributes to almost half of the necrotic area after myocardial infarction. To date there is no approved ...

このブタ閉鎖胸部心筋梗塞モデルの全体的な目標は、心筋虚血再灌流障害を調査することです。この方法は、急性心筋梗塞の文脈における虚血再灌流障害の病態生理学を調査するなど、心血管研究における重要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、梗塞のサイズを正確に決定し、さらなる分析のための正確なサンプリング技術を可能にすることです。手術のために豚を準備し、テキストプロトコルに記載されているように麻酔薬を投与します。両側の頸動脈を解放することから解剖を開始します。7フレンチシースでそれらをカニューレします。次に、静脈血サンプリングのために7フレンチシースで左頸静脈をカニューレ挿入します。次に、標準的な採血管を使用して、ベースラインの血液サンプルを静脈ラインから採取します。5ミリリットルと2.9ミリリットルの血液をそれぞれクエン酸血漿収集チューブとEDTA血漿収集チューブに集め、すぐに摂氏4度で2, 000gで15分間遠心分離します。次に、2.9ミリリットルの血液を血清チューブに集め、室温で30分間凝固させ、次に摂氏4度で15分間2, 000gで遠心分離します。次に、透視ガイドを使用して、前に配置したシースを介して圧力カテーテルを左頸動脈に挿入します。それを左心室に進めてから、取得システムに接続して左心室圧を記録します。実験全体を通じて、心拍数、発達圧力、左心室の収縮性、左心室の弛緩を連続的に計算して記録するように、取得システムを設定します。次に、前に配置したシースを介してガイディングカテーテルを右頸動脈に挿入します。X線ガイダンスを使用して、カテーテルを左冠状動脈に進め、次にLADまたは左前下行冠状動脈に進みます。所定の位置に配置されたら、20ミリリットルの注射器からガイディングカテーテルに造影剤を注入して、ベースラインの冠動脈造影を行います。次に、PCIカテーテルと適切なサイズの冠状動脈ガイドワイヤーを組み立て、造影剤をあらかじめ充填した拡張装置にPCIカテーテルを接続します。組み立てたシステムをガイディングカテーテルの内腔に挿入し、ガイドワイヤーをLADの最初の対角線分岐を超えて到達するまでLADに進めます。次に、透視ガイドを使用して、PCIカテーテルがLADの約中央に達するまで進めます。テキストプロトコルで説明されているように、LAD ブロッキングサイトを選択します。次に、ガイドワイヤーを取り外し、膨張装置内の圧力を7〜10バールに上げて、PCIカテーテルのバルーンを膨らませ、心筋虚血を誘発します。バルーンを1時間膨らませたままにします。虚血を開始した直後に、造影剤を注入しながら5〜10秒のビデオを記録し、PCIカテーテルのバルーンの血管造影を行います。これを 10 分後に繰り返して、LAD の閉塞を確認します。虚血の15分から40分後、吸気酸素の割合を5

improvement-closed-chest-porcine-myocardial-infarction-model

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

外科手術による外傷、炎症反応を誘導する。サイトカイン、内因性リガンドは、虚血再灌流後に心筋梗塞サイズを調節することが知られています。我々は、開胸の影響を最小限に抑えるためにぶら下がって重みを使用してマウスの虚血再灌流の変更されたクローズド·胸のモデルを提示します。...

心筋虚血再灌流障害のマウスクローズド胸モデル

このプロトコルは、再灌流に続く左前下行冠動脈（LAD）の90分の非開胸冠動脈バルーン閉塞を使用して、ブタ心筋梗塞（MI）モデルについて説明します。さらに、このような心機能、血行動態、微小血管抵抗、および梗塞サイズなどのいくつかの転帰パラメータのためのプロトコルもまた提示される。...

豚における心筋梗塞および機能的結果の評価

信頼できる正確なアウトカム評価は、臨床治療への臨床前治療の翻訳のための鍵です。現在の用紙は、ブタ急性心筋梗塞モデルにおける心機能および損傷の3つの臨床的に関連する主要な結果パラメータを評価する方法を説明します。...

急性心筋梗塞の豚モデルにおける主要アウトカム評価

このプロトコルは、MRIと全心心筋組織の3次元比較するための新規な方法を説明します。これは、心筋梗塞の慢性ブタモデルの梗塞境界域における心筋内注射の正確な評価のために設計されています。...

3Dホール・ハート心筋組織の分析

左屈折性動脈閉塞と急速なペーシングによって引き起こされる心不全の豚モデルを確立し、細胞ベースの治療法に対する幹細胞の筋膜内投与の効果と安全性をテストすることを目的とした。...

幹細胞治療のための心筋梗塞後心不全の豚モデルの確立

現在の研究の全体的な目標は、閉胸、成人ゲッティンゲンミニピッグにおける心筋梗塞(MI)および心筋梗塞後の心不全(ポスト-MI HF)の誘導の技術と、ゲッチンゲンのミニピッグのポストMI HFモデルの特徴付けを、陸上豚と比較して提示することである。...

ヘッティンゲンミニピッグとランドレーツ豚における閉胸冠動脈閉塞/再灌流モデルにおける心筋梗塞後心不全

ここでは、コラーゲン選択的コントラスト増強を有する健康で病理学的な大型哺乳類心臓全体の高解像度マイクロコンピュータ断層撮影画像を得るためのプロトコルを提示する。...

慢性疾患を有する大型哺乳類心臓モデルのコントラスト増強マイクロコンピュータ断層撮影イメージングのための組織調製技術

ヒトにおける疾患の自然なプロセスをエミュレートする心筋梗塞(MI)動物モデルは、病態生理学的メカニズムを理解し、新しい緊急療法の安全性と有効性をテストするために不可欠です。ここでは、経皮塞栓コイルを展開して作成したMIブタモデルについて説明する。...

豚モデルにおける経皮塞栓コイル展開による心筋梗塞

本研究では、急性心筋虚血再灌流研究のためのラットにおける従来の手順を技術的に改変することにより、左前下行冠動脈結紮術の品質管理に焦点を当てたプロトコルを提示する。...

虚血再灌流研究のための左前下行冠動脈結紮術:技術改変と品質管理によるモデル改良

プロトコルは、循環死後の寄付の大型動物(ブタ)モデルとそれに続く胸腹部正常熱局所灌流を説明し、心臓移植の臨床シナリオを厳密にシミュレートし、治療研究と戦略を促進する可能性があります。...

心臓評価のための循環死後の献血と正常母性局所灌流の大型動物モデル

学ぶ閉胸ブタ心筋梗塞モデルの標準化された組織・血液サンプリング手順。心筋虚血再灌流障害の病態生理を正確に評価し、新規治療薬の開発に貢献する再現性の高い心血管研究手法です。

組織と血液サンプリング手順の標準化による閉胸ブタ心筋梗塞モデルの改善

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