Name: マクロファージの融合を研究するための光学的品質ガラス表面を加工 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-14T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: 学ぶマクロファージ融合研究のための光学品質ガラス表面加工法。塩酸超音波洗浄とパラフィン被覆により融合能表面を作製し、ライブイメージングや超解像顕微鏡で免疫細胞挙動を詳細に観察できます。

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私たちはこの仕事の役に立つ議論のための代謝と血管生物学 Ugarova 研究所、センターの研究者のメンバーに感謝したいと思います。ジェームズ ・ ファウストは、2015 年に欧州分子生物学研究所超解像顕微鏡法コースでインストラクターに感謝の意を表現する願っています。Janelia で LLSM のサンプル準備のヘルプについてサティヤ Khuon に感謝したいです。レビューとこの作品の撮影の部分の間にジェームズ ・ ファウストは T32 フェローシップ (5T32DK007569-28) によって支えられました。この作品の格子光シート コンポーネントは HHMI およびベティとゴードン ・ ムーア財団によって支えられました。顧問は、NIH によって資金を供給 HL63199 を付与します。

動物を利用する手順は、動物愛護とメイヨー クリニックと Janelia リサーチ キャンパス、アリゾナ州立大学で使用委員会によって承認されました。
1. カバーのガラスを酸洗浄の準備
注: 多くのメーカーから購入したカバーガラスは、どおりきれいできない場合があります。顕微鏡が関与している任意のプロシージャの前にカバー ガラスのバッチを日常的に清掃をご検討ください。
<ol><li>高い金詰りカバーガラスを購入します。正しい厚さ (0.15 または 0.17 mm) を選択する特別な注意を取る。 注: カバー ガラス厚の選択は対物レンズに依存して、客観的バレルに直接表示されます。</li>
	<li>超音波 (42 kHz、70 W) で 1 時間の換気の化学発煙のフード 12 M 塩酸でカバーガラスを孵化させなさい。新鮮な 12 M HCl と追加で 2 回のこの手順を繰り返します。</li>
	<li>純水を別のビーカーを記入し、カバーガラスを追加します。換気化学フードで 5-10 分間カバー ガラスを超音波照射します。この手順を 10 回繰り返します。</li>
	<li>超音波処理で 30 分間換気化学フードで純粋なアセトンでカバーガラスを孵化させなさい。追加で 2 回のこの手順を繰り返します。</li>
	<li>滅菌超純水と別のビーカーを記入し、カバーガラスを追加します。換気化学フードで 5-10 分間カバー ガラスを超音波照射します。この手順を 10 回繰り返します。</li>
	<li>超音波処理と 30 分のための化学フード 100% エチルアルコールでカバーガラスを孵化させなさい。追加で 2 回この手順を繰り返します。 メモ: ethyl アルコールの純度が重要です。溶存固形物の形で汚染物質はガラスの上は乾燥され、マクロファージの融合を促進することができます。</li>
	<li>長期保存のため純粋なアルコールを入れた容器に酸洗浄カバー ガラスを配置します。また、窒素ガスと真空デシケータ内ストア カバーガラスを乾燥させます。</li>
</ol>2. 融合性光学的品質面の準備
<ol><li>無料の DMSO 溶解超純水トルエン高融点点パラフィン ワックス。 注: ストック濃度 10 mg/mL でなされ、希薄化後の 1:9 は超純水トルエン 1 mg/mL に作業ソリューションを作成します。 注意: トルエンは催奇形物質として注意して処理する必要があります。機関の化学衛生学の計画によるとトルエンの処分します。</li>
	<li>ガラス表面を均等にカバーするボリュームで乾燥酸洗浄カバー ガラスへの解決策を働いてパラフィンを適用します。余分なソリューションを捨て、窒素ガスまたは空気でカバーガラスを乾燥します。一括準備 Coplin jar カバーガラスを収容するように設計を使用します。</li>
	<li>X 軸の 3 本のストローク、糸くずのワイプで y 軸の 3 本のストローク次カバー ガラスを磨く (材料の表を参照してください)。</li>
	<li>直前に実験を行い, 無菌純水とカバーガラスを洗浄し、その後紫外光生物学的安全フードで 15-30 分間殺菌します。また、エチレン酸化物またはガンマ照射によるカバー ガラスを滅菌します。</li>
</ol>3. 微細炭化水素を含む化合物に融合を限定する所定の地域
<ol><li>酸洗浄カバーガラスを乾燥し、平らな面にガラスを固定します。</li>
	<li>炭化水素化合の実用的なソリューションで金伝達電子顕微鏡のファインダー グリッドを浸す鉗子を使用して、慎重に。実験の目的に合った炭化水素化合物を選択 (表 1参照)。ろ紙上のグリッドをやさしくタッピングによって離れて余分なソリューションを芯し、カバー ・ ガラスの中心にグリッドをすぐに置き。次のステップに進む前に 2 分間乾燥するトルエンを許可します。</li>
	<li>グリッドはガラスを軽く反転によってガラスに接着されていることを確認します。グリッドは、3.2 の新しいカバーのガラスを使用して、手順を繰り返しますをデタッチします。 場合、 注: プラズマ クリーナーを使用できない場合は、ステップ 3.4 を省略します。</li>
	<li>プラズマ真空プラズマ処理によるカバー ガラスのクリーニングします。 注: ファインダーのグリッドは、プラズマから長鎖炭化水素を吸着した基になる表面を保護するためのマスクとして機能します。グリッドによって保護されていない領域は、プラズマへの露出によって非融合性がレンダリングされます。カバーガラスは、プラズマに公開時間の量は、経験的に決定する必要があります。</li>
	<li>ファイン ・ チップ鉗子を使用して、慎重に、微細パターンを公開するガラス面からグリッドを取り外します。</li>
</ol>4. 加工ガラス底培養皿
<ol><li>35 mm プラスチック シャーレ ステップ ドリルを使用しての下で 6-10 mm の孔をドリルします。 注: ステップ ドリル ビットを使用して、滑らかなエッジを作成する重要です。エッジは、あまりにもラフ、カバーガラスが平らな皿の底に接合しないでしょう。不完全平らな表面は顕微鏡を困難にさせます。</li>
	<li>慎重に混合し、ドガの (すなわちポリジメチルシロキサンの製造元の指示に従ってシリコーン ・ エラストマーPDMS)。</li>
	<li>エラストマーの端にだけ近接の薄いコーティングを適用 (すなわち、外接) 穴。 注: エラストマーは、ホールの周り連続とはいえ薄いバンドとして表示されます。</li>
	<li>エラストマーに囲まれた穴をカバーするために料理に融合ペプチド カバーガラス (2 のセクションで説明します)、または (セクション 1 で説明した) 乾燥酸洗浄カバー ガラスを適用優しく。カバー ガラス皿の底と同じ高さに表示されます、ガラスのかなりの部分がプラスチックに接触して穴の直径を超えたことを確認します。2-3 h の 50 ° C で焼成してエラストマーを硬化します。</li>
	<li>融合性ガラスを優先する場合、殺菌は標準のプロトコルによると料理と文化の細胞。微細パターンをお勧め、しかし、微細パターン準備のため 3.2 手順に進みます (マイクロパターニング中に使用されるガス プラズマ殺菌皿と強くガラスに PDMS をカップル)。</li>
</ol>5. 収集 Thioglycollate 誘発マクロファージ
<ol><li>前述3,4,64% ビール thioglycollate の滅菌溶液 0.5 mL を 8 週齢の c57bl/6 マウスを注入します。</li>
	<li>七十から二時間後、承認された動物のケアによると動物を安楽死させると、ガイドラインに従うし、冷えたリン酸緩衝生理食塩水を 5 mM エチレンジアミン四酢酸を添加した腹膜灌流によるマクロファージを収集します。</li>
	<li>3 分間 300 x g でマクロファージを遠心し、15 ミリメートル、HEPES を添加した DMEM:F12 の 1 mL で再懸濁します 10 %fbs、および 1% の抗生物質 (培養液)。 注: セルをその後ノイバウアー検定と数えます。マクロファージは適切な濃度に希釈して、サーフェスに適用されます。所定の表面に適用するセルの数は、実験の質問の目的のための調査官によって注意深く検討されるべき。主要な文学で知られている規格を参照してください。</li>
	<li>30 分後に非付着性細胞を除去し、新鮮な培養液を交換する 0.1 %bsa を添加した HBSS で表面を洗います。文化をインキュベーター (37 ° C で空気 5% CO2 ) に戻ります。</li>
	<li>2 h 後、培地を吸引し、IL-4 の 10 ng/mL 添加培養液中に置き換えます。4他の所で説明したように細胞をイメージします。</li>
</ol>

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</ol>

著者は、彼らは競合する金銭的な利益があることを宣言します。

識別し、その後、マクロファージの融合を促進するため、光学的品質のガラス表面を開発する必要が最近ない出版された調査直接まで生活のコンテキストでマクロファージの融合を可視化という事実から生じた試験片3、 4。これは、一般的に使用される融合性プラスチック表面 LWD 目標を必要し、する大部分の段階の対照の光学に制限されますが原因です。これらの障壁は、マクロファージの融合の特別なレートを推進だけでなく、意外な MGCs の形成空間制御を付与する光学的品質ガラス表面をエンジニア リングによって克服されました。
この技術は、マクロファージの融合を監視する高度なイメージング技術の使用を可能に制限なし付属していません。長鎖炭化水素(例えばオレアミド、パラフィン ワックス等)を吸着した研磨面は、マクロファージの融合融合性プラスチック表面と比較しての特別料金を生成する核融合残る空間確率プロセス (図 2</s...

MGCs の形成に伴う慢性炎症1識別人体病理学的状態の数。Mononucleated マクロファージ ヒューズ フォーム MGCs2に合意、にもかかわらず意外にも少数の研究は、生活の文脈の中融合を示している標本3,4。ほとんどイメージングに必要なきれいなガラス表面はマクロファージの融合による炎症性サイトカイン5時を促進しないためにです。確かに、きれいなガラスとして使用する場合、基板、マクロファージの融合中間倍率の目的 (すなわち10-20 X) 及び連続 15 時間以上低画像多くの場合単一の融合イベントを観察するに必要があります。
その他の手、融合性プラスチック表面 (例えばpermanox) または細菌学的グレードのプラスチックにフュージョン2を促進します。しかし、プラスチックを通してイメージングは、基板が厚いと光が飛び散るので問題です。これはイメージング長い作動距離 (LWD) 対物レンズが必要なので複雑になります。ただし、LWD 目標通常収集能力と比べて、coverslip 修正、低光があります。さらに、以来、プラスチックの複屈折、微分干渉コントラストなど試料を通過する光の極性の変化を利用する技術が可能。プラスチックの使用に伴う障壁をそれはマクロファージの融合/MGC 形成が表面に発生する個所を予測することが可能ではないという事実によってさらに強調しました。一緒に、これらの制限は、段階の対照の光学、合計イメージング期間を拡張するマクロファージの融合の可視化を制限する (> 15 連続時間)、および低解像度。
最近マクロファージ/MGCs4分子超解像顕微鏡観察を行いながら高い融合性のガラス表面がわかりました。この観測された意外なのできれいにガラス表面の非常に低いレートで融合を促進する 〜 インターロイキン 4 (IL-4) 融合によって決定される存在下で 24 時間後 5% インデックス4。融合を促進するために容量がオレアミドの汚染が原因だったことがわかった。オレアミドまたは同様に長鎖炭化水素に含まれているその他の化合物の吸着したガラス膜融合。ほとんど融合ペプチド化合物 (パラフィン ワックス) マイクロパターニングゲル、それはマクロファージの融合と permanox と比較して同じ時間内で観測された融合イベントの数の 2 倍増加を時空間制御の高度を与えられます。これらの光学的品質の表面は形態学的特徴と生きている標本の MGCs 形成カイネティクスに最初の一見を提供しました。
このプロトコルの様々 な MGCs の生きている標本からの形成を監視するために使用できるガラス表面の作製について述べる。さらに、これらのサーフェスが遠方の超解像技術に従う義務があることを示します。表面加工は、実験の目的に依存して、各サーフェスは、進むテキストの関連の例で説明。

<table><tbody><tr><td>プラズマ</td><td>クリーナーHarrickプラズマ</td><td>PCD-32G</td><td></td></tr><tr><td>ファインダーグリッド</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>G400F1-Au</td><td>任意の金TEMグリッドは動作します</td></tr><tr><td>カバーガラス(22x22ミリメートル)</td><td>トールラボ</td><td>CG15CH</td><td>は、高ストリンジェンシーカバーガラス</td></tr>パラ<tr><td>フィンワックス</td>シ<td>グマAldrich</td><td>17310</td><td></td></tr>ワ<tr><td>セロレータシ</td><td>グマAldrich</td><td>16415</td><td>のみを使用します置換された</td></tr><tr><td>オレアミド</td><td>シグマAldrich</td><td>O2136</td>は<td>、新鮮な</td></tr><tr><td>イソプロパノール</td><td>シグマAldrich</td><td>278475</td><td></td></tr><tr><td>トルエン</td><td>シグマAldrich</td><td>244511</td><td></td></tr><tr><td>アセトン</td><td>VWR国際</td><td>BDH1101</td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>15050</td><td>を使用して低溶解を使用し、置換された場合、&α;-トコフェロールフリーでなければなりません固形物エタノール</td></tr>塩<tr><td>酸</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ッシュ<td>A144C-212</td><td>を使用して、カバーガラス</td></tr><tr><td>Slyguard 184</td><td>VWRインターナショナル</td><td>102092-312</td>を<td>1:10の比率で混合し、50°Cで硬化させます。C 4 h</td></tr><tr><td>35 mm シャーレ</td><td>サンタ クルス バイオテクノロジー</td><td>sc-351864</td><td></td></tr><tr><td>デュモン no. 5 鉗子</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>72705</td><td>セクション 3.5</td></tr><tr><td>FBS</td><td>アトランタ バイオロジカル</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>DMEM: F12</td><td>コーニング</td><td>10-092</td><td>には 15 mM HEPES</td></tr><tr><td>ペン/ストレプト</td><td>コーニング</td><td>30-002-CL</td><td></td> が含まれています</tr><tr><td>HBSS</td><td>Corning</td><td>21-023</td><td></td></tr><tr><td>BSA溶液</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9576</td>を<td>HBSSで0.1%で使用して、非接着性マクロファージ</td></tr><tr><td>IL-4</td><td>Genscript</td><td>Z02996</td><td>アリコートを10 &muで洗浄します。g/mL で保存し、-20 °Cで保存します。C</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>ジャクソン研究所</td><td>000664</td><td>造影剤を必要としない固定サンプルまたは技術に使用</td></tr><tr><td>eGFP-LifeActマウス</td><td>n</td><td>/a n/a</td><td>ライブ蛍光イメージングに使用</td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Kimberly Clark&nbsp;</td><td>34155</td>炭<td>化水素吸着表面を研磨するために使用</td></tr></tbody></table>

マクロファージの融合を研究するための光学的品質ガラス表面を加工

Fabricating Optical-quality Glass Surfaces to Study Macrophage Fusion

生きている標本から巨細胞 (MGCs) の形成の可視化という最もライブ イメージング技術は、ガラスを光の伝搬を必要とするが、ガラスにマクロファージの融合は、まれなイベントのためにチャレンジしております。このプロトコルは、長鎖炭化水素を含む化合物の吸着が融合性表面にガラスを変換いくつかの光学的品質のガラス表面の作製を提示します。まず、きれいなガラス表面処理表面改質の出発原料として、説明します。第二に、融合性基板非融合性ガラスに変換する長鎖炭化水素を含む化合物の吸着のメソッドが提供されます。第三に、このプロトコルでは、MGC 形成の時空間制御の高度を促進するため表面のマイクロ パターンの作製について説明します。最後に、ガラス底培養皿を製造すると説明します。マクロファージの融合や MGC 形成を研究するモデルとしてこの体外電池システムの使用の例を示します。

材料の物理化学的パラメーターは、マクロファージの融合7,8,9,10の程度に劇的な効果を持っています。また、表面汚染物質は、マクロファージの融合11を促進するために知られています。したがって、マクロファージの融合のネガティブ コントロールとして重要なを始めるきれいなカバー ガラスです。きれいプロトコル 1 で説明したように、表面研磨による長鎖炭化水素の吸着度ナノトポグラフィ (図 1) を作成します。 一方ないの明白な表面の特徴をフラットにカバー ガラスが非常にです。
きれいなカバー ガラス表...

このプロトコルを記述する生きている標本のマクロファージの融合の監視に使用することができ、固定標本の超解像顕微鏡の長鎖炭化水素を含む化合物を吸着した光学的品質のガラス表面の作製.

Visualizing the formation of multinucleated giant cells (MGCs) from living specimens has been challenging due to the fact that most live imaging ...

このプロトコルの全体的な目標は、非フソジェニックカバーガラスを、あらゆる形態の光学顕微鏡を使用してマクロファージ融合を研究するために使用できるフソジェニック表面に変換することです。この方法は、マクロファージ融合の分子メカニズムに関連する基本的な質問に答えるのに役立ちます。この手順の主な利点は、マクロファージ融合の研究に、あらゆる顕微鏡技術、特にライブイメージングを使用できることです。この手順を実演するのは、3人目のフェローであるJames Faustと、私の研究室の大学院生であるArnat Balabiyevです。まず、換気の良い化学ヒュームフードで、高ストリンジェンシーカバーガラスを12モル塩酸で1時間超音波処理してインキュベートします。新しい12モルHCLでステップをさらに2回繰り返します。別のビーカーに超純水を入れ、カバーガラスを追加します。次に、カバーガラスを5〜10分間超音波処理します。次に、カバーガラスを純粋なアセトンで30分間超音波処理しながらインキュベートします。この手順をさらに 2 回繰り返します。次に、別のビーカーに滅菌済みの超純水を入れ、カバーガラスを追加します。カバーガラスを5〜10分間超音波処理します。カバーガラスを100%エチルアルコール中で超音波処理により30分間インキュベートする。この手順をさらに 2 回繰り返します。長期保存の場合は、酸で洗浄したカバーガラスを純粋なエチルアルコールで意志した容器に入れます。または、カバーガラスを窒素ガスで乾燥させ、真空デシケーターで保管します。DMSOフリーの高融点パラフィンワックスを超高純度トルエンに溶解します。ガラスピペットを使用して、乾燥した酸洗浄されたカバーガラスに十分なパラフィン作業溶液を塗布し、ガラス表面を均一にコーティングします。余分な溶液をデカントし、窒素ガスまたは空気でカバーガラスを乾燥させます。糸くずの出ないワイプで、X軸に沿って3ストローク、次にY軸に沿って3ストロークを使用してカバーガラスを磨きます。実験を行う直前に、滅菌済みの超純水を使用してカバーガラスを洗浄し、その後、生物学的安全フード内で紫外線で15〜30分間滅菌します。酸で洗浄したカバーガラスを乾燥させ、平らな面に固定します。鉗子を使用して、金透過型電子顕微鏡ファインダーグリッドを炭化水素化合物の作業溶液に慎重に浸します。フィルターペーパーのグリッドを軽くたたいて余分な溶液を吸い取り、すぐにグリッドをカバーガラスの中央に置きます。トルエンを2分間乾かします。ガラスをそっと反転させて、グリッドがガラスに接着されていることを確認します。グリッドが外れた場合は、新しい酸洗浄されたカバーガラスを使用して接着を繰り返します。TEMグリッドを取り外した後、低倍率でマイクロパターンの連続性を調べます。マイクロパターンは連続しているように見えますが、材料はパターンのマージンを超えて伸びてはなりません。次に、真空ガスプラズマを備えたプラズマクリーナーを使用して、テキストプロトコルに従ってカバーガラスを清掃します。次に、細い先端の鉗子を使用して、ガラス表面からグリッドを慎重に取り外して、マイクロパターンを露出させます。ステップドリルビットを使用して、35mmのプラスチックシャーレの底に滑らかなエッジを持つ6〜10mmの円形の穴を開けます。シリコンエラストマーは、製造元の指示に従って慎重に混合し、脱気します。ペトリ皿の穴の端のすぐ近くにエラストマーの薄いコーティングを塗布します。エラストマーは、穴を囲む連続した細いバンドとして現れる必要があります。エラストマーで囲まれた穴を覆うために、フソジェニックまたは乾燥酸洗浄されたカバーガラスを皿にそっと塗ります。カバーガラスが皿の底と同じ高さに見え、穴の直径を超えて伸びて、ガラスのかなりの部分がプラスチックと接触していることを確認します。エラストマーを50°Cで2〜3時間焼いて硬化させます。テキストプロトコルに概説されているように、8週齢のC57 black-6マウスに4%Brewer's Thioglycolateの滅菌溶液0.5ミリリットルを注入します。72時間後、承認された動物の世話と使用のガイドラインに従って動物を安楽死させた後、5ミリモルEDTAを補給した氷冷PBSを使用して腹腔間洗浄によりマクロファージを採取します。マクロファージをGの300倍で3分間遠心分離し、15ミリモルヒープ10%FBSおよび1%抗生物質を補充したDMEM / F-12の1ミリリットルに細胞ペレットを再懸濁します。細胞を計数して希釈し、表面に30分間適用した後、HBSS 0.1%BSAを使用して表面を洗浄し、培地を交換します。その後、培養物をインキュベーターに戻します。2時間後、培地を吸引し、IL4のミリリットルあたり10ナノグラムを補充した培養培地と交換してから、細胞をイメージングします。このビデオで説明されているようにクリーニングすると、カバーガラスは非常に平らで、明らかな表面の特徴はありません。一方、長鎖炭化水素の吸収とそれに続く表面の研磨により、ここで見られる程度のナノトポグラフィーが生まれます。きれいなカバーガラス表面では、マクロファージは非常に低い速度で融合します。対照的に、IL4の存在下で24時間後、長鎖炭化水素を含む化合物で吸着した表面に適用されたマクロファージは、強固な融合を受けます。また、溶剤を吸収するだけでは、ガラスがフソジェニックな表面になるわけではありません。ここでは、光学顕微鏡の回折限界よりも小さい構造の半値全幅(FWHM)を使用して、分解能の電位差を定量的に評価します。重要なことは、100ナノメートルの蛍光ビーズのFWHMにさまざまな表面間で明らかな差がないことから、蛍光イメージングに必要なガラスの特性が十分に保存されていることが示唆されます。この実験では、マクロファージを長鎖炭化水素を含む表面に適用しました。次に、3D Direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopyと呼ばれる超解像顕微鏡の形式が実施されました。これらのビデオは、マクロファージを表面に適用することで、さまざまなライブイメージング技術が実現可能であることを示しています。マスターすると、ガラスを変更して表面をフソジェニックにすることは、適切に行われれば30分で行うことができます。この手順を試みるときは、慎重に従うことを忘れないでください。この手順に続いて、蛍光顕微鏡などの他の方法を実行して、分子特異的なコントラストとの融合の観察を得ることができます。これにより、融合時に直接関与するタンパク質を特定するように設計された実験が可能になります。開発後、この技術は、研究者がマクロファージ融合の時間分解ビューを取得するための道を開きました。将来的には、マクロファージ融合のメカニズムをより深く理解するのに役立つでしょう。このビデオを見た後、マクロファージ融合を研究するためにカバーガラスを改造できるようになるはずです。酸やトルエンでの作業は非常に危険である可能性があるため、この手順を実行するときは常にPPEと適切な換気を使用する必要があることを忘れないでください。

fabricating-optical-quality-glass-surfaces-to-study-macrophage-fusion

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

Source: Lê-Bury, G., et al. Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates live confocal imaging of HIV-1-infected human macrophages to visualize and quantify phagosome migration using GFP fluorescence and bright field tracking, providing insights into how HIV alters intracellular trafficking during Fc receptor–mediated phagocytosis.

Live Imaging of Phagosome Migration in HIV-1-Infected Human Macrophages

このビデオは、マクロファージを介した独立性赤血球(RBC)食作用イベントを監視するためのアッセイを示しています。マウス免疫グロブリンG(IgG)-オプソニン化ヒト赤血球をマウスマクロファージとインキュベートし、共焦点顕微鏡で観察します。赤血球は、食細胞カップ形成を介してマクロファージに飲み込まれ、リソソーム分解の標的となります。...

IgGオプソニン化赤血球のマクロファージ食作用のリアルタイムイメージング

このビデオは、ガラス底皿の表面に付着したIgGオプソン化赤血球(RBC)のマクロファージ媒介性食作用におけるファゴソームの形成と閉鎖をリアルタイムで可視化するための高解像度の全反射蛍光(TIRF)顕微鏡法を示しています。マクロファージはRBCの周囲に偽足を伸ばし、ファゴソーム内に飲み込み、ガラス表面から分離します。...

TIRF顕微鏡法によるファゴソームの形成と閉鎖の可視化

Phagocytic cells play a major role in the innate immune system by removing and eliminating invading microorganisms in their phagosomes. Phagosome ...

ライブマクロファージにおけるファゴリソソーム生合成の研究

このプロトコルは、特定の目的の細胞タイプを分離するための、デスチオビオチン、ストレプトアビジン、およびAPTESシステムのカスタマイズ可能な表面機能化について説明しています。さらに、この原稿では、このプロセスのアプリケーション、最適化、および検証について説明します。...

ガラスの表面機能を介して、標的細胞の単離方法

全反射蛍光顕微鏡を用いて、生きたマクロファージにおける前例のない高分解能のファゴソーム形成とクロージャを3次元で可視化するための実験設定について説明します。これにより、食細胞カップの基部、伸びる偽足、および食細胞の正確な部位を監視できます。...

「ファゴソーム閉鎖アッセイ」全反射蛍光顕微鏡（TIRFM）を用いて、三次元的にファゴソーム形成を可視化します

ここでイメージの単一食イベントに回転ディスク共焦点顕微鏡を用いたマウス腹腔マクロファージの方法について述べる。他の貪食細胞に、プロトコルを拡張できます。...

マウスのマクロファージによる貪食のコマ撮りの 3 D イメージング

このプロトコルは、生体材料インプラント微小環境をモデル化する様々なポリマー表面および吸着タンパク質層に応答して、マウスマクロファージ細胞株におけるTLR依存性NF-аb/AP-1転写因子活性を測定する迅速かつ間接的な方法を研究者に提供する。...

高分子表面上の吸着タンパク質層におけるトール様受容体媒介NF-kB/AP-1シグナル伝達を調べるマクロファージレポーター細胞アッセイ

このプロトコルは、3Dレーザー印刷を使用した埋め込み型統合イメージングウィンドウの作成について説明しています。このウィンドウは、マイクロレンズとマイクロスキャフォールドを組み合わせたシステムで構成されています。この方法では、生体適合性フォトレジストSZ2080の2光子重合(2PP)を連続的に行い、製造効率と異なるコンポーネント間のアライメントを最適化します。...

高度な In vivo イメージングのための微細構造イメージングウィンドウに統合された埋め込み型光学系の微細加工

グラスウールフィルタは、世界中の研究グループの数によって水系ウイルスを濃縮するために使用されている。ここでは、グラスウールフィルタを構築するための単純なアプローチを示し、フィルタはまた、水性、ウイルス、細菌や原生動物病原体を濃縮するのに有効であるを示しています。...

濃縮水性ウイルスと農業人獣共通病原体のガラスウールフィルター

学ぶマクロファージ融合研究のための光学品質ガラス表面加工法。塩酸超音波洗浄とパラフィン被覆により融合能表面を作製し、ライブイメージングや超解像顕微鏡で免疫細胞挙動を詳細に観察できます。

マクロファージの融合を研究するための光学的品質ガラス表面を加工

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