Name: ステージング蛹期間およびショウジョウバエ guttiferaの翼色素沈着測定のためのメソッド (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: 学ぶDrosophila guttiferaの蛹期間ステージングと翼色素沈着測定法。形態発生と色素沈着プロセスの詳細情報を取得し、進化発生生物学における種間比較研究に応用可能です。

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直行用ヒューズ、秉ソクジン撮影、メンタリングの阿形とエリザベス中島英語を編集するための彼の援助のためのはえの在庫を提供する、ショーン b. キャロルとヴェルナー ・ トーマスに感謝します。この仕事は、費によって支えられた 17 K 19427 と武田科学振興財団。

<ol><li>Carson, H. L., Hardy, D. E., Spieth, H. T., Stone, W. S. The evolutionary biology of the Hawaiian Drosophilidae. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCarson%2C+HL+%22Essays+in+evolution+and+genetics+in+honor+of+Theodosius+Dobzhansky%22">Essays in evolution and genetics in honor of Theodosius Dobzhansky</a>. Hecht, M. K., Steere, W. C. , Springer (Meredith Corporation). New York. 437-543 (1970).</li>
<li>Markow, T. A., O'Grady, P. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarkow%2C+TA+%22Drosophila%3A+a+guide+to+species+identification+and+use%22">Drosophila: a guide to species identification and use</a>. , Academic Press. New York. (2006).</li>
<li>Patterson, J. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPatterson%2C+JT+%22The+Drosophilidae+of+the+southwest%22">The Drosophilidae of the southwest</a>. 4313, University of Texas Publication. 7-216 (1943).</li>
<li>Setoguchi, S., Takamori, H., Aotsuka, T., Sese, J., Ishikawa, Y., Matsuo, T. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s10164-014-0399-z">Sexual dimorphism and courtship behavior in Drosophila prolongata.</a> J Ethol. 32 (2), 91-102 (2014).</li>
<li>Werner, T., Jaenike, J. <a target="_blank" href="http://humanities.lib.rochester.edu/drosophilaguide/">Drosophilids of the Midwest and Northeast</a>. , River Campus Libraries, University of Rochester. Rochester. (2017).</li>
<li>Arnoult, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+and+diversification+of+fly+pigmentation+through+evolution+of+a+gene+regulatory+module%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Emergence and diversification of fly pigmentation through evolution of a gene regulatory module.</a> Science. 339 (6126), 1423-1426 (2013).</li>
<li>Camino, E. M., Butts, J. C., Ordway, A., Vellky, J. E., Rebeiz, M., Williams, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolutionary+origination+and+diversification+of+a+dimorphic+gene+regulatory+network+through+parallel+innovations+in+cis+and+trans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">The evolutionary origination and diversification of a dimorphic gene regulatory network through parallel innovations in cis and trans.</a> PLoS Genet. 11 (4), e1005136(2015).</li>
<li>Gompel, N., Prud'homme, B., Wittkopp, P. J., Kassner, V. A., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chance+caught+on+the+wing%3A+cis-regulatory+evolution+and+the+origin+of+pigment+patterns+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chance caught on the wing: cis-regulatory evolution and the origin of pigment patterns in Drosophila.</a> Nature. 433 (7025), 481-487 (2005).</li>
<li>Glassford, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-option+of+an+ancestral+Hox-regulated+network+underlies+a+recently+evolved+morphological+novelty%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Co-option of an ancestral Hox-regulated network underlies a recently evolved morphological novelty.</a> Dev. Cell. 34 (5), 520-531 (2015).</li>
<li>Koshikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancer+modularity+and+the+evolution+of+new+traits%5BTitle%5D)+AND+%22Fly%22%5BJournal%5D)">Enhancer modularity and the evolution of new traits.</a> Fly. 9 (4), 155-159 (2015).</li>
<li>Koshikawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gain+of+cis-regulatory+activities+underlies+novel+domains+of+wingless+gene+expression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Gain of cis-regulatory activities underlies novel domains of wingless gene expression in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (24), 7524-7529 (2015).</li>
<li>McGregor, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+evolution+through+multiple+cis-regulatory+mutations+at+a+single+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Morphological evolution through multiple cis-regulatory mutations at a single gene.</a> Nature. 448 (7153), 587-590 (2007).</li>
<li>Tanaka, K., Barmina, O., Kopp, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+developmental+mechanisms+underlie+the+evolutionary+diversification+of+Drosophila+sex+combs%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Distinct developmental mechanisms underlie the evolutionary diversification of Drosophila sex combs.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (12), 4764-4769 (2009).</li>
<li>Werner, T., Koshikawa, S., Williams, T. M., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+novel+wing+colour+pattern+by+the+Wingless+morphogen%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of a novel wing colour pattern by the Wingless morphogen.</a> Nature. 464 (7292), 1143-1148 (2010).</li>
<li>Wittkopp, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraspecific+polymorphism+to+interspecific+divergence%3A+genetics+of+pigmentation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Intraspecific polymorphism to interspecific divergence: genetics of pigmentation in Drosophila.</a> Science. 326 (5952), 540-544 (2009).</li>
<li>Lawrence, P. A., Morata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartments+in+the+wing+of+Drosophila%3A+a+study+of+the+engrailed+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Compartments in the wing of Drosophila: a study of the engrailed gene.</a> Dev Biol. 50 (2), 321-337 (1976).</li>
<li>Bainbridge, S. P., Bownes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+the+metamorphosis+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Embryol.+Exp.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 66, 57-80 (1981).</li>
<li>Ashburner, M., Golic, K. G., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila%3A+A+Laboratory+Handbook%22">Drosophila: A Laboratory Handbook</a>. , 2nd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press. New York. (2005).</li>
<li>Fukutomi, Y., Matsumoto, K., Agata, K., Funayama, N., Koshikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pupal+development+and+pigmentation+process+of+a+polka-dotted+fruit+fly%2C+Drosophila+guttifera+%28Insecta%2C+Diptera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Pupal development and pigmentation process of a polka-dotted fruit fly, Drosophila guttifera (Insecta, Diptera).</a> Dev Genes Evol. 227 (3), 171-180 (2017).</li>
<li>Koshikawa, S., Fukutomi, Y., Matsumoto, K. Drosophila guttifera as a model system for unraveling color pattern formation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKoshikawa%2C+S+%22Diversity+and+evolution+of+butterfly+wing+patterns%3A+an+integrative+approach%22">Diversity and evolution of butterfly wing patterns: an integrative approach</a>. Sekimura, T., Nijhout, H. F. , Springer. New York. in press (2017).</li>
<li>True, J. R., Edwards, K. A., Yamamoto, D., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+wing+melanin+patterns+form+by+vein-dependent+elaboration+of+enzymatic+prepatterns%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila wing melanin patterns form by vein-dependent elaboration of enzymatic prepatterns.</a> Curr Biol. 9 (23), 1382-1391 (1999).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li>
<li>Izumitani, H. F., Kusaka, Y., Koshikawa, S., Toda, M. J., Katoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogeography+of+the+Subgenus+Drosophila+%28Diptera%3A+Drosophilidae%29%3A+evolutionary+history+of+faunal+divergence+between+the+Old+and+the+New+Worlds%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Phylogeography of the Subgenus Drosophila (Diptera: Drosophilidae): evolutionary history of faunal divergence between the Old and the New Worlds.</a> PLoS ONE. 11 (7), e0160051(2016).</li>
<li>Resh, V. H., Cardé, R. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aResh%2C+VH+%22Encyclopedia+of+Insects%22">Encyclopedia of Insects</a>. , 2nd ed, Academic Press. Burlington. (2009).</li>
<li>DeLean, A., Munson, P. J., Rodbard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+analysis+of+families+of+sigmoidal+curves%3A+application+to+bioassay%2C+radioligand+assay%2C+and+physiological+dose-response+curves%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Simultaneous analysis of families of sigmoidal curves: application to bioassay, radioligand assay, and physiological dose-response curves.</a> Am J Physiol. 235 (2), E97-E102 (1978).</li>
<li>Robertson, C. W. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jmor.1050590207/abstract">The metamorphosis of Drosophila melanogaster, including an accurately timed account of the principal morphological changes.</a> J Morphol. 59 (2), 351-399 (1936).</li>
<li>McKinney, M. L., McNamara, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcKinney%2C+ML+%22Heterochrony%3A+the+evolution+of+ontogeny%22">Heterochrony: the evolution of ontogeny</a>. , Plenum Press. New York. (1991).</li>
<li>Hardie, D. C., Gregory, T. R., Hebert, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+pixels+to+picograms%3A+a+beginners%27+guide+to+genome+quantification+by+Feulgen+image+analysis+densitometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">From pixels to picograms: a beginners' guide to genome quantification by Feulgen image analysis densitometry.</a> J Histochem Cytochem. 50 (6), 735-749 (2002).</li>
<li>Koshikawa, S., Miyazaki, S., Cornette, R., Matsumoto, T., Miura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+size+of+termites+%28Insecta%2C+Dictyoptera%2C+Isoptera%29+and+wood+roaches+%28Insecta%2C+Dictyoptera%2C+Cryptocercidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">Genome size of termites (Insecta, Dictyoptera, Isoptera) and wood roaches (Insecta, Dictyoptera, Cryptocercidae).</a> Naturwissenschaften. 95 (9), 859-867 (2008).</li>
</ol>

著者は利害の対立があります。

ここで述べたい蛹の段階の定義のプロトコル削除の詳細な観察は、囲蛹、蛹の期間とd. guttiferaの翼に黒い斑点の強度の測定を測定します。これらのプロトコルは、多くのショウジョウバエのため適用することができ、フライ種、特に翼色素沈着との関連。
詳細な観察と発達するより詳細なイベントの説明により、さらに段階の細分化。多くの場合、郭清を必要とするまたは蛹のセクショニング発達イベントはステージ定義に適していない、その個人は難しい、ステージングの蛹を殺すために、それ以上の使用があるため。新しいショウジョウバエ種の使用は、最初のステップとして発達するイベント、蛹の殻の外から区別を採用すべき一つ。研究の目的に応じて、特定の器官または他の発達のイベントに基づいて段階をさらに細かく分割することができますは。
潜在的な難しさは、複数段階の種間比較種 (立て27) 発達のイベントの順序の反転です。たとえば、キイロショウジョウバエ</em...

ショウジョウバエの形態学的特性のいくつかは種1,2,3,4、5の中で多様化します。質問をアプローチすることができますどの形態の多様性のこれらの形態の発生のメカニズムを比較することによって発生します。このような形態の例として、幼虫の毛、大人のセックスの櫛、外部生殖器装置、腹部色素沈着翼色素沈着6,7,8,9,10,11,12,13,14,15. 大人の間で形態学的差異を研究する蛹の段階の観察と解析、ので、重要後期幼虫段階で大人の特性の運命を決定し、その後形態蛹の期間中。
ショウジョウバエ、発達生物学で「時間 APF」(蛹形成後の時間) 蛹のステージ16を示す一般的な方法です。このシステムは蛹形成後の絶対時間を採用、日常的実験のため非常に便利です。しかし、発達速度、蛹の間で異なる場合があり、エピジェネティックな遺伝子またはアイソレータケージのわずかな違いによって影響を受ける可能性があります、したがって、同じ蛹形成後の絶対時間は保証しません蛹は、同時に発達段階。多くの場合、形態学的特徴によって定義される段階は複数の個人を比較することをお勧めです。特に、正確なステージングと対応する (相同) 段階間の比較、種の比較が必要です。
ベイン ブリッジと Bownes17認識 20 蛹化 (P15(ii)) に P1 はショウジョウバエ蛹の形態学的特徴に基づきます。このステージングは、形態学的発達ステージング18の最も広く使われているシステムです。以前の研究では、翼の色素沈着研究19のための基礎を確立するショウジョウバエ guttiferaの蛹ステージングを行った。D. guttiferaは黒の水玉柄は、その翼、翼色素形成20のモデル種の 1 つです。記載されている形態学的基準に紹介がベイン ブリッジと Bownes の研究17、我々 は、シリアル観察19、ベイン ブリッジと Bownes の段階の期間の推定を使用する代わりに、ステージの期間を直接測定周波数を観察しました。ここで蛹のステージングのメソッドと福富ら19で使用されるショウジョウバエの蛹の段階の期間の測定について述べる。
翼の色素沈着の発生機序を研究、蛹または大人の段階で色素沈着が発生するときに知っている必要があります。福富ら。19は、翼画像の画像解析による蛹および大人の段階で色素の光学密度 (ODs) を定量化します。ショウジョウバエ翼の色素沈着は、黒いメラニン21の蓄積に起因すると考えられます。ODs の定量化, グレイ スケール画像や ImageJ のソフトウェア (https://imagej.nih.gov/ij/) の22が使用されました。認識してスポット特有の色素沈着 (ΔOD) を定量化、我々 はスポット内 OD からスポット外 OD を減算します。この方法をするためには、再現性と客観的ランドマークとして翼静脈を用いる OD 測定場所を決定してください。この資料でこのショウジョウバエ guttiferaの翼色素形成の定量化の方法くわしく述べる。

<table><tbody><tr><td>Drosophila guttifera</td><td>The Drosophila Species Stock Center at the U.C. San Diego</td><td>15130-1971.10</td><td>Drosophila guttifera、この記事で使用されているショウジョウバエの種</td></tr><tr><td>プラスチックバイアル</td><td>ハイテク</td><td>MKC-30</td><td>プラスチックバイアル、フライストックのメンテナンス用</td></tr><tr><td>バズプラグバイアルとガラスバイアル用ボトルクロージャー</td> フィ<td>ッシャーサイエンティフィック</td><td>AS-271</td><td>セルロースプラグ フライストックメンテナンス用</td></tr><tr><td>ホワイトソフトシュガー</td><td>三井製糖</td><td>J-500g</td><td>ホワイトソフトシュガー スタンダードコーンミール/砂糖/酵母/寒天食品用</td></tr><tr><td>コーンフラワー</td><td>日本製粉</td><td>F</td><td>コーンフラワー、スタンダードコーンミール/砂糖/酵母/寒天食品用</td></tr><tr><td>コーングリッツ - C</td><td>日本製粉</td><td>GC</td><td>コーングリッツ - C スタンダードコーンミール/砂糖/酵母/寒天食品用</td></tr><tr><td>寒天粉末</td><td>松木寒天産業</td><td>No.602</td><td>寒天粉末 スタンダードコーンミール/砂糖/酵母/寒天食品用</td></tr><tr><td>ドライビール酵母</td><td>アサヒ食品 &ヘルスケア</td><td>Y2A</td><td>乾燥ビール酵母、標準コーンミール/砂糖/酵母/寒天食品用</td></tr><tr><td>ブチル p-ヒドロキシ安息香酸</td><td>ナカライ テスク</td><td>06327-02</td><td>ブチル p-ヒドロキシ安息香酸、標準コーンミール/砂糖/酵母/寒天食品用</td></tr><tr><td>エタノール</td><td>和光</td><td>057-00456</td><td>エタノール、標準コーンミール/砂糖/酵母/寒天食品用</td></tr><tr><td>平底マイクロチューブ</td><td>Ina Optica</td><td>CF-0150</td><td>1.5 mL マイクロチューブ、用蛹の採取</td></tr><tr><td>CAPSULEFUGE</td><td>タカラトミー</td><td>PMC-060</td><td>蛹の採取用ミニ微量遠心機</td></tr><tr><td>滅菌済みシャーレNB</td><td>三精メディカル</td><td>01-013</td><td>プラスチックペトリ皿(直径90mm×高さ15mm)</td></tr><tr><td>血清チューブラック</td><td>いわき</td><td>9796-050</td><td>モイストチャンバーとして、蛹の観察に使用</td></tr><tr><td>コーニング ファルコン イージーグリップ組織培養皿</td><td>コーニング</td><td>353001</td><td>プラスチックペトリ皿(直径35mm×高さ10mm)</td></tr><tr><td>ファルコン標準組織培養皿</td><td>コーニング</td><td>353002</td><td>プラスチックペトリ皿(直径60mm×高さ15mm)</td></tr><tr><td>押しピン</td>コ<td>クヨ</td><td>51233709</td><td>マイクロチューブの蓋にピンホールを作るための押しピン</td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>SZX16</td><td>形態観察用実体顕微鏡</td></tr><tr><td>オ</td><td>リンパス</td><td>DSE-330-A</td><td>デジカメ 画像撮影用</td></tr><tr><td>NICETACK両面テープ</td><td>ニチバン</td><td>NW-15SF</td><td>両面テープ 蛹除去用</td></tr><tr><td>デュモン #5 鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11252-20</td><td>鉗子 蛹除去用</td></tr><tr><td>ゴッホ VISUAL ペイントブラシ</td><td>タレンズジャパン</td><td>GWVR-#5/0</td><td>蛹除去用ブラシ</td></tr><tr><td>グライナー CELLSTAR 12ウェル 細胞培養プレート</td><td>メルク</td><td>665-180</td><td>12ウェル細胞培養プレート、蛹周期の測定用</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>和光</td><td>191-01665</td><td>NaCl、PBS</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Nacalai Tesque</td><td>285-14</td><td>KCl、PBS</td></tr><tr><td>Na2HPO4&middot;12H2O</td><td>和光</td><td>196-02835</td><td>Na2HPO4&middot;12H2O、PBS</td></tr><tr><td>用 KH2PO4</td><td>Nacalai Tesque</td><td>28721-55</td><td>KH2PO4、PBS</td></tr><tr><td>段付きNDフィルター</td><td></td><td></td>用、<td> 色素沈着測定のキャリブレーション用</td></tr><tr><td>ImageJソフトウェア</td><td>NIH</td><td>1.8.0-101</td><td>ImageJソフトウェア、翼の黒い斑点の強度の測定用 (https://imagej.nih.gov)</td></tr><tr><td>FINE FROST ガラススライド</td><td>Matsunami Glass Ind</td><td>FF-001</td><td>ガラススライド、翼の黒い斑点の強度の測定用</td></tr><tr><td>角型顕微鏡カバーガラス 18 x 18</td><td>Matsunami Glass</td><td>Ind C018181</td><td>翼の黒い斑点の強度を測定するためのカバースリップ</td></tr></tbody></table>

ステージング蛹期間およびショウジョウバエ guttiferaの翼色素沈着測定のためのメソッド

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

ショウジョウバエ(ミバエ) の多様な種は、開発および進化的変化の責任遺伝子の変化のメカニズムを勉強する機会を提供します。特に、大人の段階は翼色素沈着比較を含む種間の比較形態学的形質の豊富なソースです。種の発達の違いを研究する、詳細な観察と適切なステージングが正確な比較のため必要です。ここで蛹期間のステージングと水玉フルーツ フライ、ショウジョウバエの guttiferaで翼色素沈着の定量化のプロトコルについて述べる。まず、詳細な形態学的観察と形態に基づく蛹のステージの定義の方法について述べる。このメソッドには、蛹の形態の詳細な観察を可能にする、蛹の外側キチン質ケースでは蛹殻を除去するための技術が含まれています。第二に、定義された蛹の期間の測定方法について述べる。最後に、デジタル画像や ImageJ ソフトウェアを用いた画像解析に基づく翼色素の定量法について述べる。これらのメソッドは、蛹大人形質の発達プロセスを比較するための強固な基盤を確立できます。

D. guttiferaの蛹の期間は (P1 - P15(ii); (P1、P5 の - 6、P10) の段階は図 3、およびすべての 17 段階を図 4に示すとおり 3 つ代表の画像) 17 段階に分けられます。ベイン ブリッジと Bownes17は、キイロショウジョウバエの 20 段階を認識、 d. guttiferaにいくつかこれらの段階のない適用でした。2 つの発生イベントの発生順序、黄色のボディ (小屋26腸内細胞の固まり) の外観と緑を回してマルピギー氏管のタイミングがd. guttiferaで厳密に制御しない、したがって我々 は P5 を分離できる (i)、P5(ii) および P6。またとは異なりキイロショウジョウバエ、胸部および腹部の毛の黒染めのタイミン...

ステージングの蛹期間およびショウジョウバエ guttiferaの翼色素沈着の測定のためのプロトコルを説明します。ステージングと色素沈着の定量化アダルト形質の発達のメカニズムを研究するための強固な基盤を提供して形質の開発に関する種間比較を有効にします。

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary ...

この実験の全体的な目標は、蛹の期間をステージングし、ショウジョウバエの翼の色素沈着を測定することです。この方法は、ショウジョウバエの色素沈着パターンがどのように発達するかなど、進化発生生物学分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、形態学的発達と色素沈着プロセスに関する詳細な情報を取得できることです。この方法は、ショウジョウバエguttiferaの形態学的発達と色素沈着プロセスについての洞察を提供することができますが、他のショウジョウバエ種にも適用できます。蛹の除去を開始するには、ペーパータオルに両面テープを貼り付けます。腹側を上にして、両面テープに蛹を置きます。蛹の前面と内部の蛹の間のスペースを見つけます。鉗子を使用して、この隙間の周りの蛹をつかんで取り除きます。そして、蛹の頭の前面を露出させます。鉗子の先端を前後軸と平行に動かして挿入します。鉗子の先端を持ち上げて、蛹を局所的に壊します。破損が蛹の後部に達するまで、このアクションを繰り返します。蛹と蛹の脚の間に隙間が形成されていることを確認してください。そして、内部の蛹への損傷を最小限に抑えながら、蛹の腹側を壊します。蛹をできるだけ壊した後、細い絵筆を使って蛹を取り出します。ddH2Oで湿らせたティッシュペーパーの上に蛹を置き、プラスチック製のペトリ皿に入れます。露出した蛹は脆弱で乾燥しやすいため、すぐに写真を撮ります。画像の準備を進め、鉗子で蛹の前部を切除します。蛹を取り出し、プラスチック製のペトリ皿に入れたリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に入れます。次に、翼の基部を切断します。翼を折りたたんだ状態で、ddH2Oを充填したプラスチック製のシャーレに入れ、浸透圧で翼を伸ばします。新たに閉じた成虫を10分ごとにストックファイルから収集します。CO2麻酔パッドを使用してハエに麻酔をかけます。動かない状態で麻酔を確認し、翼の基底関節を切断します。スライドガラスに10マイクロリットルのPBSを落とします。翼をドロップに置きます。そして、ドロップをカバースリップで覆います。次に、実体顕微鏡のライトをONにして、最大に設定します。対物レンズを11.5倍に設定し、絞りを最も開いた状態に設定します。次に、カメラの電源を入れてカメラをセットします。顕微鏡のフォーカスノブを動かして、サンプルに焦点を合わせます。リモコンのシャッターボタンを押して撮影します。カンパニフォームセンシラムを中心として、翼の遠位部を左側に、翼の内側を上側に配置した翼の画像を撮ります。カンパニフォームセンシラムスポットを中央にした画像を開きます。[イメージ]、[タイプ 1]、[8 ビット] の順にクリックし、イメージを 8 ビット イメージに変換します。エリア選択ツールで長方形をクリックし、長方形を描きます。長方形の右側を、カンパニフォームセンシラムスポットの右側にセットします。[編集]、[選択]、[マネージャに追加] の順にクリックし、[すべて表示] 列をオンにします。次に、線選択ツールの角度ツールをクリックします。3番目の縦静脈の後線に最初の線を引きます。線の左端点を、前に描画した四角形の頂点に設定します。長方形の上側に 2 本目の線を引きます。Mキーを押して、このステップで描かれた2本の線の間の角度を測定します。コンピューターの画面上の画像のウィンドウをクリックします。「編集」(Edit)、「選択」(Selection)、「マネージャに追加」(Add to Manager) の順にクリックします。領域選択ツールで長方形をクリックし、画像ウィンドウの約1/9のサイズの長方形を描きます。Edit(編集)、Selection(選択)、Rotate(回転)をクリックします。以前に測定した角度のマイナス度を[角度]列に書き、[OK]をクリックして、この手順で描画した長方形を回転させます。矢印キーを使用して描画した四角形を移動し、四角形の左側に 2 番目の縦静脈の後線の端点を設定します。そして長方形の下側は、3番目の縦静脈の後線に取り付けます。第2縦静脈の端点から第3縦静脈の後線まで垂線が引かれたことを確認した。垂直線の足を点Aとして定義します。ポイントAにカーソルを置くときに、以下のエリア選択ツールに示されているポイントAのX座標とY座標を記録します。ポイントAを中心にして画像を開きます。[イメージ]、[タイプ]、[8 ビット] の順にクリックして、イメージを 8 ビット イメージに変換します。エリア選択ツールで長方形をクリックし、画像ウィンドウの約1/9のサイズの長方形を描きます。「編集」(Edit)、「選択」(Selection)、「指定」(Specify) の順にクリックします。楕円形と中央揃えの列を確認します。幅と高さの列に 100 ピクセルを書き込みます。X座標列に点AのX座標を書き込み、Y座標列に点AのY座標を書き込み、[OK]をクリックします。次に、「分析と測定」をクリックします。キャリブレーションがすでに終了している場合は、ODが平均列に示されます。複数のステージのデータを比較したところ、ステージP12は色素沈着の発症タイミングであり、脱落後12時間で色素沈着が完了することがわかりました。その開発後、この技術は、進化発生生物学の分野の研究者がショウジョウバエ種間の蛹の発達と色素沈着プロセスの違いを調査する道を開きます。

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生物学

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蛹摘出後の ショウジョウバエ の蛹の脚の発達の長期ライブイメージング

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学ぶDrosophila guttiferaの蛹期間ステージングと翼色素沈着測定法。形態発生と色素沈着プロセスの詳細情報を取得し、進化発生生物学における種間比較研究に応用可能です。

ステージング蛹期間およびショウジョウバエ guttiferaの翼色素沈着測定のためのメソッド

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