Name: タッチ捺印細胞診を用いた臨床病理標本から質の高い腫瘍 DNA を取得する簡易法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 20 s
Description: 学ぶタッチ捺印細胞診を用いた臨床病理標本からの高品質腫瘍DNA取得法。次世代シーケンスによる遺伝子解析を簡便かつ迅速に実現し、がん研究や診断・治療判断に貢献する革新的プロトコルです。

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参加に同意すること、病院と患者のすべての医療および補助的なスタッフに感謝しますガブリエル白狼、エダンズ ・ グループ (www.edanzediting.com/ac) このレポートの下書きを編集してから、博士に感謝いたします。本研究は、ゲノム研究プロジェクト (容湖とミズーリ州) は、山梨県からの助成金から、安田医療財団 (容湖) 補助金によって支えられました。

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<li>Hirotsu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+and+exome+sequencing+identified+somatic+mutations+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatol+Res%22%5BJournal%5D)">Targeted and exome sequencing identified somatic mutations in hepatocellular carcinoma.</a> Hepatol Res. 46 (11), 1145-1151 (2016).</li>
<li>Hirotsu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+between+two+amplicon-based+sequencing+panels+of+different+scales+in+the+detection+of+somatic+mutations+associated+with+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Comparison between two amplicon-based sequencing panels of different scales in the detection of somatic mutations associated with gastric cancer.</a> BMC Genomics. 17 (1), 833(2016).</li>
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<li>Hirotsu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multigene+panel+analysis+identified+germline+mutations+of+DNA+repair+genes+in+breast+and+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Genet+Genomic+Med%22%5BJournal%5D)">Multigene panel analysis identified germline mutations of DNA repair genes in breast and ovarian cancer.</a> Mol Genet Genomic Med. 3 (5), 459-466 (2015).</li>
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<li>Mok, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osimertinib+or+Platinum-Pemetrexed+in+EGFR+T790M-Positive+Lung+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Osimertinib or Platinum-Pemetrexed in EGFR T790M-Positive Lung Cancer.</a> N Engl J Med. 376 (7), 629-640 (2017).</li>
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<li>Wong, S. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequence+artefacts+in+a+prospective+series+of+formalin-fixed+tumours+tested+for+mutations+in+hotspot+regions+by+massively+parallel+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Med+Genomics%22%5BJournal%5D)">Sequence artefacts in a prospective series of formalin-fixed tumours tested for mutations in hotspot regions by massively parallel sequencing.</a> BMC Med Genomics. 13 (7), 23(2014).</li>
</ol>

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本研究ではチックを使用して臨床病理標本から腫瘍 DNA を取得するための代替方法を提案します。TIC 準備非常にシンプルかつ FFPE のメソッドは、特別な楽器10の要件なしと比較してより少ない時間を必要があります。(図 1) 2 日以内は、DNA の抽出に TIC 準備からすべての手順を完了できます。このメソッド従って遺伝学的検査を行うため所要時間が短くなります。特に、これは分子の解析に必要な日数の短縮に重要な利点を提供します。この短い所要時間では、すぐに分子標的薬を必要とする進行がん患者に適切な治療を提供することが出来ます。このメソッドは、したがって腫瘍における遺伝子変化の解析およびがん治療の分子標的薬の管理のための利点を提供します。
TIC DNA を用いた遺伝学的解析の成功のいくつかの重要なポイントがあります。腫瘍組織は化学療法などの治療や他の治療のため壊死かもしれません。したがって、注意は、可能な限りの腫瘍内の壊死のセクションからのサンプリングを避けるために TIC...

次世代シーケンシング技術提供している研究者の遺伝の変化、メンデルの病気、遺伝的素因、がん1,2,3 のゲノム情報を解析の飛躍的な発展.がんゲノム アトラス (TCGA) と国際がんゲノム コンソーシアム (ICGC) は、一般的な癌4のいくつかの種類の遺伝子変異の同定を追求してきた。何百もの重要なドライバー遺伝子は正常に識別されているといくつかこれらの分子の薬物開発1,5,6のターゲットにされています。
臨床場面における FFPE 標本は病理診断とがんを含むさまざまな病気の分子テストのため通常使用されます。ただし、ホルマリンで固定過程では、DNA 蛋白質または DNA のクロスリンクが発生した、DNA 断片化を誘導しました。したがって、FFPE DNA サンプルは常に遺伝学的解析に適した DNA7,8,9の低質と量のため。また、FFPE 標本を準備するまでに数日かかるし、技術的なスキルのセクションを正確に準備する必要があります。したがって、高品質そのままな DNA を求める簡便かつ迅速な手法を開発することをお勧めします。
細胞診、病理組織学的診断のための代替方法です。細胞サンプル準備は簡単、以下の FFPE 準備10と比較して高価で、かつ高速なアプローチです。TIC 手法は、センチネル リンパ節と周辺組織のいくつかの年11,12術中迅速診断乳がん患者に行われています。ただし、チックの標本から高品質の DNA を得ることができるかどうかを検討して、その後の遺伝学的解析のため使用するほとんどの報告がありません。細胞診標本が一般的パパニコロー (Pap) またはギムザ染色、染色し、我々 は以前報告量と TIC 標本 (特にギムザ染色サンプル) から抽出した DNA の品質は FFPE から採取した試料よりも優れて組織13。Pap 染色に比べると、少ない汚損プロシージャを必要とする利点を有するギムザ染色.Pap 染色の後、サンプルを固定されているし、ステンド グラス、彼らマウントしますする必要がある媒体 (例えばMalinol)、腫瘍細胞、正常細胞、炎症細胞を顕微鏡など、サンプルの内容を区別するためのマウント。Pap の標本は、取付手順なし準備だない試料を乾燥するために顕微鏡下で細胞を観察することはほとんど不可能。比較では、乾燥した状態で観察することができますギムザ染色、したがって、取り付け手順は迅速に携帯電話評価する必要ありません。レーザーマイクロダイ セクション、ギムザ染色より適切な乾燥標本が必要なため。
本報告では TIC ギムザ染色標本を準備するための簡易迅速法を導入し、チックが dna の FFPE 標本と比較してより良いソースであることを示す.

<table><tbody><tr><td>FINE FROST white20 マイクロスライドガラス</td><td>松波硝子工業株式会社</td><td>SFF-011</td><td></td></tr><tr><td>Arcturus PEN メンブレンガラススライド</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>LCM0522</td><td></td></tr><tr><td>Cyto Quick A solution</td><td>武藤純薬品</td><td>20571</td><td></td></tr><tr><td>Cyto Quick B solution</td><td>武藤純薬品</td><td>20581</td><td></td></tr><tr><td>May-Grunwald Solution</td><td>武藤純薬品</td><td>15053</td><td></td></tr><tr><td>Giemsa solution</td><td>Muto Pure Chemicals</td><td>15002</td><td></td></tr><tr><td>QIAamp DNA FFPE tissue kit</td><td>Qiagen</td><td>56404</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Fast Advanced Master Mix</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4444557</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan RNase P Detection Reagents Kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4316831</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Assay from FFPE DNA QC Assay v2</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4324034</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Fast Optical 96ウェル反応プレート&nbsp;</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp 光学接着フィルム</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4311971</td><td></td></tr><tr><td>MicroMixer E36</td><td>TITEC</td><td>0027765-000</td><td></td></tr><tr><td>ViiA 7 リアルタイムPCRシステム</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>VIIA7-03</td><td></td></tr><tr><td>Himac CF16RXII</td><td>日立工機</td><td>CF16RII</td><td></td></tr><tr><td>イオンライブラリー TaqMan 定量キット</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4468802</td><td></td></tr><tr><td>Ion AmpliSeq がんホットスポットパネル v2</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4475346</td><td></td></tr><tr><td>イオン AmpliSeq ライブラリーキット 2.0</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4480442</td><td></td></tr><tr><td>Ion Xpress バーコードアダプター 1-16 キット</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4471250</td><td></td></tr><tr><td>イオン PGM Hi-Q ビューシーケンシングキット (200 塩基)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>A30044</td><td></td></tr><tr><td>イオンシェフシステム</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4484177</td><td></td></tr><tr><td>Veriti 96ウェルサーマルサイクラー</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>Veriti200</td><td></td></tr><tr><td>Ion 318 チップキット v2 BC</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4488150</td><td></td></tr><tr><td>イオン PGM システム</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>PGM11-001</td><td></td></tr><tr><td>イオン PGM ウォッシュ 2 ボトルキット</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>A25591</td><td></td></tr><tr><td>Agencourt&trade;アンプリュー&トレード;XP Kit</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63881</td><td></td></tr><tr><td>16ポジションマグネットスタンド</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4457858</td><td></td></tr><tr><td>Nonstick, RNase-free Microfuge Tubes, 1.5 mL (Low binding tube)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AM12450</td><td></td></tr><tr><td>Nuclease-free water</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AM9938</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp&trade;光学式96ウェル反応プレート</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4306737</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp&trade;透明粘着フィルム</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>4306311</td><td></td></tr><tr><td>Agencourt>アンプリュー&トレード;XP キット</td><td>ベックマン・コールター</td><td>A63881</td><td></td></tr><tr><td>エタノール(99.5)</td><td>ナカライ テスク</td><td>08948-25</td><td></td></tr><tr><td>水酸化ナトリウム (10M)</td><td>シグマ</td><td>72068</td><td></td></tr><tr><td>DTU-Neo</td><td>TAITEC</td><td>0063286-000</td><td></td></tr><tr><td>E-36</td><td>TAITEC</td><td>0027765-000</td><td></td></tr><tr><td>ECLIPSE CI-L</td><td>ニコン</td><td>704354</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Lite LTS ピペットL-2XLS+</td><td>メトラー・トレド</td><td>17014393</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Lite LTS ピペット L-10XLS+</td><td>メトラー・トレド</td><td>17014388</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Lite LTS ピペット L-20XLS+</td><td>メトラー・トレド</td><td>17014392</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Lite LTS ピペット L-100XLS+</td><td>メトラー・トレド</td><td>17014384</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Lite LTS ピペット L-200XLS+</td><td>メトラー・トレド</td><td>17014391</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Lite LTS ピペット L-1000XLS+</td><td>メトラー・トレド</td><td>17014382</td><td></td></tr><tr><td>プチチェンジ</td><td>ワケン</td><td>MODEL8864</td><td>ミニ遠心分離機</td></tr><tr><td>プチインキュベーター</td><td>ワケン</td><td>WKN-2290</td><td>エアインキュベーター</td></tr><tr><td>センシケア パウダーフリーニトリル検査用手袋</td><td>メドライン</td><td>SEM486802</td><td></td></tr><tr><td>滅菌ガーゼ</td><td>大崎</td><td>11138</td><td></td></tr><tr><td>冷蔵庫メディクール</td><td>山陽</td><td>MPR-312DCN-PJ</td><td></td></tr><tr><td>フェザートリミング ブラッド</td><td>フェザー</td><td>No.130</td><td></td></tr><tr><td>フェザートリミング ブラッド</td><td>フェザー</td><td>No.260</td><td></td></tr><tr><td>フェザー S</td><td>フェザー</td><td>FA-10</td><td></td></tr><tr><td>ボルテックス ジーニアス3</td><td>IKA</td><td>41-0458</td><td>ボルテックスミキサー</td></tr><tr><td>ピンセット</td><td>ナツメ</td><td>A-5</td><td></td></tr><tr><td>1.5mL マイクロチューブ</td><td>バイオビック</td><td>RC-0150</td><td></td></tr></tbody></table>

タッチ捺印細胞診を用いた臨床病理標本から質の高い腫瘍 dna を取得する簡易法

Simple and Rapid Method to Obtain High-quality Tumor DNA from Clinical-pathological Specimens Using Touch Imprint Cytology

管理およびがん患者のための特定の分子標的薬の治療前にがんの突然変異の状態を確認する重要です。臨床設定では、ホルマリン固定パラフィン包埋 (FFPE) 組織は、遺伝学的検査のため活躍しています。ただし、FFPE の DNA は、ホルマリン固定過程における断片化や破損は、一般的に。したがって、FFPE DNA は時々 低品質と量の DNA のための遺伝学的検査の適切ではないです。顕微鏡下で観察することができますタッチ捺印細胞診がん細胞からゲノム DNA を取得する (TIC) の方法をご紹介します。細胞形態と癌細胞数は、チックの標本を使用して評価できます。さらに、2 日以内 TIC サンプルからゲノム DNA の抽出を完了ことができます。合計金額、このメソッドを使用して得られた TIC DNA の品質 FFPE DNA のそれよりも高かった。この迅速かつ簡単な方法では、研究者 (例えば、次世代シーケンス解析、デジタル PCR および量的なリアルタイム PCR) 遺伝学的検査の高品質 DNA を取得し、結果をレポートのターンアラウンド時間を短縮することができます。

図 1は、DNA の抽出に TIC 標本作製から全体のプロセスを示しています。特に、TIC サンプルからゲノム DNA を取得するのみ 2 日間を要します。スライド処理の前に腫瘍ストレージの効果を評価しました。組織検体はすぐにスライドに触れられたとき、および組織は、生理食塩水湿らせた滅菌・ ガーゼ 1 h (図 2) のために保たれた腫瘍細胞がスライド ガラス上に接続されていたことがわかった。しかし、組織は、室温で保たれた、時腫瘍細胞添付されませんでしたよくスライドに。準備されたスライドは、3 カ月、4 ° C で格納できます。したがって、乾燥のための標本を許可しないことが重要です。
我々 は本手法の有用性を検討したし、FFPE を用いて標本と比較します。14 の腫瘍の標本、TIC と FFPE サンプルの調製し、腫瘍内容と純度が T...

腫瘍組織から高品質 DNA を取得は、次世代シーケンシングによる遺伝子の変異を分析するための重要な第一歩です。この記事では腫瘍細胞を豊かにし、押印細胞診標本のタッチから無傷の DNA を取得する簡単かつ迅速な方法を提案する.

タッチ捺印細胞診を用いた臨床病理標本から質の高い腫瘍 DNA を取得する簡易法

It is critical to determine the mutational status in cancer before administration and treatment of specific molecular targeted drugs for cancer patients. ...

このプロトコルの全体的な目標は、臨床サンプルから高品質の腫瘍DNAを取得することです。この方法は、がんの研究、診断、治療の決定など、基礎科学および臨床科学における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、以前の方法よりも簡単かつ迅速に腫瘍DNAを取得できることです。プロトコールを開始するには、手袋をはめた手で、事前に調製および切除した組織の腫瘍表面を正常なスライドガラスに数回触れます。触れた部分がスライドガラスの80%以上を覆っていることを目視で確認します。通常のスライドガラスをポリエチレンナフタレートまたはPENメンブレンスライドに軽く押し付け、手袋をはめた手で2〜3回優しくこすります。細胞が通常のスライドガラスからPENメンブレンスライドに移されたことを視覚的に確認します。ガラススライドとPENメンブレンスライドの両方を室温で5分間風乾します。乾燥後、通常のスライドガラスを染色して直接細胞学的検査を行います。スライドガラスを固定液に5秒間浸し、ギムザ染色液で15秒間染色します。通常のスライドガラス上の腫瘍内容物と細胞性を顕微鏡で完全に評価し、スクリーニングして迅速に評価します。いくつかの基準に基づいて腫瘍細胞を評価します。サンプルが前のセクションの迅速な顕微鏡評価によって60%を超える腫瘍細胞性を示している場合は、ナイフと手袋をはめた手でDNA抽出用のPEN膜スライドの腫瘍接触フィルムを切断します。カットしたフィルムを、ピンセットと手袋をはめた手で滅菌した微量遠心チューブに移します。フィルム入り微量遠心チューブは、DNA抽出まで摂氏4度で保管してください。ソフトウェアを開き、実行条件を計画し、ソフトウェア内で実行パラメータを設定します。「プラン」タブをクリックして「テンプレート」を選択し、適切な実行方法を選択します。アプリケーションと手法のタイプを選択し、[次へ] をクリックします。装置、サンプル調製キット、ライブラリキットタイプ、テンプレートキット、シーケンシングキット、ベースキャリブレーションモード、チップタイプ、制御シーケンス、バーコードセットを選択し、[次へ]をクリックします。プラグインを選択し、[次へ]をクリックします。プロジェクトを選択し、[次へ] をクリックします。次に、対象地域のデフォルトの参照ファイルと BED ファイルを選択します。サンプル名を入力し、バーコードを選択して、[実行計画] をクリックします。次に、メーカーの指示に従って、自動装置でテンプレートの調製とチップのローディングを行います。試薬カートリッジを室温で45分間解凍してから使用してください。ステップ6.8で計算したライブラリー濃度に従って、希釈していないライブラリーをヌクレアーゼフリー水で希釈し、20個のピコモルライブラリーを作成します。シーケンシング用のプールライブラリを準備し、氷上に保存します。サンプルチューブの底に100マイクロリットルのピペットでプールされたライブラリの25マイクロリットルを追加します。電源を入れ、自動測定器のカバーを開けます。シーケンシングチップ、チップアダプター、濃縮カートリッジ、チップカートリッジ、PCRプレート、PCRフレームシール、リカバリーチューブ、溶液カートリッジ、試薬カートリッジを自動装置の適切な位置に置きます。画面上でセットアップ、実行、ステップバイステップをタッチします。カバーを閉じて、画面上のスタートチェックをタッチします。デッキスキャンプロセスの後、[次へ]をタッチします。表示内容、キット種類、チップID、サンプルID、チップ種類、プランをご確認ください。時間を設定してOKをタッチします。チップの装填が終わったら、NEXTをタッチしてカバーを開けます。手袋をはめた手で、シーケンシングチップをチップアダプターから降ろします。チップをチップ容器に入れ、パラフィルムで包み、シーケンシング反応までチップを摂氏4度で保管します。次に、濃縮カートリッジ、PCRプレート、PCRフレームシール、リカバリーチューブ、溶液カートリッジ、試薬カートリッジを手袋をはめた手で、自動装置の適切な位置から取り外します。手袋をはめた手で、空のチップカートリッジを自動機器の廃棄物チップ位置に移します。「次へ」をタッチしてカバーを閉じます。次に、タッチスタートし、紫外線で自動化された機器を4分間清掃します。亜塩素酸ナトリウム錠剤を1, 000ミリリットルの超純水に溶解し、0.22ミクロンのフィルターで溶液を濾過する。シーケンシング機器がウォームアップしたら、シーケンシング機器の画面で[クリーン]をタッチし、[次へ]をタッチします。250ミリリットルのフィルター滅菌亜塩素酸ナトリウム溶液でシーケンシング装置を洗浄し、次に250ミリリットルの超純水で洗浄します。次に、[初期化]をタッチして、画面上の適切なシーケンシングキットを選択します。手袋をはめた手で灰色の荷送人を取り付けます。洗浄液、pH調整液、pH標準液でシーケンシング装置を初期化します。次に、20マイクロリットルのピペットで50ミリリットルのチューブに100マイクロリットルのDATP、DGTP、DCTP、およびDTTPヌクレオチドを追加します。手袋をはめた手で灰色の荷送人を適切な場所に設置します。50ミリリットルのチューブをロードし、シーケンシング機器にねじ込みます。画面で [次へ] を選択して、初期化手順を開始します。初期化手順が完了したら、画面上の[実行]をタッチし、適切なライブラリ調製装置を選択します。チップの2次元バーコードをスキャンします。シーケンシングチップを適切な位置に挿入します。チップクランプとインストゥルメントドアを閉じて「チップチェック」をタッチし、「次へ」と「OK」の画面上でシーケンシングランを開始します。シーケンシング反応後、データを転送し、シーケンシングサーバー上でデータ解析パイプラインを実行します。DNAの絶対量とゲノムDNAの分解レベルの指標であるRQ値は、TIC試料の方がFFPE試料よりも高いDNA収量を達成していることを示しています。さらに、TIC DNAのRQ値は、異なる腫瘍タイプにわたってFFPE DNAのRQ値と比較して有意に高かった。APC Q1367*は、サイト1から抽出されたFFPEおよびTIC DNAの両方で同定され、APC S1356*KRAS G12DおよびTP53 M237iは、サイト2、3、および4から抽出されたFFPEおよびTIC DNAの両方で検出され、同じ腫瘍部位から調製されたFFPEとTICのDNAサンプルで同一の体細胞変異が同定されたことを示唆しています。特に、原発性結腸直腸癌と2つの転移性肝癌サンプルとの間で同じ体細胞変異が検出され、サイト2からの腫瘍クローンが肝臓に転移したことを示唆しています。その開発後、この技術は、分子研究および医学研究の分野の研究者が遺伝性がんを特定するための道を開きました。

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Research

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Cancer Research

がん研究

循環腫瘍細胞は細胞のダメージを与えることなく癌患者の血液から分離されています。腫瘍細胞の単離は上皮マーカーに対する抗体に加えて、E-セレクチンの二分子表面を使用して行われます。ナノチューブのコーティングは、特に高い捕捉純度で得られた癌細胞の接着を促進する。...

患者の血液サンプルから生存循環腫瘍細胞の急速な分離

このプロトコルは、ホルマリン固定、パラフィン包埋生検組織におけるサイトメガロウイルスのqPCR検出について説明しています。これは、迅速で、感度が高く、特異的で、曖昧なヘマトキシリンとエオシン、または免疫組織化学染色パターンの解釈に役立ちます。...

定量PCRは、ホルマリン固定、パラフィン包埋された生検組織中のサイトメガロウイルスDNAの検出のための高感度かつ迅速な方法であり、

このプロトコルは、さまざまな正常および悪性のヒト組織に存在するCD45+細胞（リンパ球/白血球）の定性的および定量的評価のための新鮮なヒト組織断片の迅速な非酵素的解離を説明しています。さらに、一次組織ホモジネートから得られた上清を回収し、さらなる分析や実験のために保存することができます。...

簡単かつ迅速なプロトコル非酵素的に浸潤リンパ球の分析のための新鮮なヒト組織を解離

ここでは、の回復を可能にするために、一緒にワンステップ5μlのマイクロボリューム溶解/ STR増幅を含む強化された増幅プロトコルで、サンプル「DNA触れる」を中に存在するバイオ粒子の収集のために最適化され、効率的な除去戦略を説明短いタンデムリピート（STR）バイオ粒子ドナー（単数または複数）のプロファイル。...

法医学インチタッチDNA」の証拠から簡体マイクロマニピュレーションにより回収する単一のヒト生体粒子の強化された遺伝解析

この原稿は、2つの次世代シーケンシングパネルの臨床プロトコルについて説明しています。1つのパネルは血液悪性腫瘍を調査し、もう1つのパネルは固形腫瘍で一般的に変異した遺伝子を対象としています。ヒト悪性腫瘍におけるドライバー変異の分子分類は、貴重な予後および予測情報を提供します。...

固体と液体の腫瘍におけるアクショナブル変異の検出のための次世代シーケンシング

皮膚腫瘍は、しばしば、モース顕微鏡手術後に捨てられる。臨床支援スタッフが、臨床操作を妨害することなく、下流の実験室用途のための皮膚腫瘍（ 例えば、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、および黒色腫）試料を効果的に処理および保存することを可能にするプロトコールがここに記載される。...

クリニックベースのバイオリポジトリの設立

腫瘍細胞の特徴への新しいアプローチを提案します。我々 は DNA 蛍光-原と蛍光を組み合わせる-機能性医療用ワイヤー線の生体内でCtc...

循環腫瘍細胞を取り込むため医療用ワイヤー線を用いた腫瘍細胞の特性解析: 蛍光抗体法や DNA 魚に基づく 3 D アプローチ

ここでは、患者の生体液(生体流体)に存在する循環DNAにおける腫瘍体細胞変異を検出するプロトコルを提示する。当社の液滴デジタルポリメラーゼ連鎖反応(dPCR)ベースの方法は、腫瘍変異アレーリン周波数(MAF)の定量化を可能にし、腫瘍応答の診断および時間的モニタリングに最小限に侵襲的な補体を促進する。...

患者の生体流体における腫瘍関連循環DNAの検出とモニタリング

この記事では、所定の患者から異なる検体間のクローンおよびサブクローンの変化を同定する方法について説明する。ここで説明する実験は特定の腫瘍タイプに焦点を当てていますが、このアプローチは他の固形腫瘍に広く適用可能です。...

目標シーケンシングアプローチによる比較病変分析

循環腫瘍細胞(CTC)の特徴付けは、翻訳研究で一般的な話題です。このプロトコルは、非小細胞肺癌(NSCLC)患者サンプルにおけるCTCのPD-L1特性測定および列挙に関する半自動免疫蛍光(IF)アッセイについて説明する。...

免疫蛍光による非小細胞肺癌患者からの循環腫瘍細胞の半自動PD-L1特性図と列挙

このプロトコールは、ホルマリン固定パラフィン包埋組織試料の腫瘍含量パーセントを増加させる方法を提示する。...

腫瘍マクロ解剖による腫瘍含量の増加

学ぶタッチ捺印細胞診を用いた臨床病理標本からの高品質腫瘍DNA取得法。次世代シーケンスによる遺伝子解析を簡便かつ迅速に実現し、がん研究や診断・治療判断に貢献する革新的プロトコルです。

タッチ捺印細胞診を用いた臨床病理標本から質の高い腫瘍 DNA を取得する簡易法

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