Clonal Analysis of Embryonic Hematopoietic Stem Cell Precursors Using Single Cell Index Sorting Combined with Endothelial Cell Niche Co-culture

Brandon K. Hadland; Barbara Varnum-Finney; Cynthia Nourigat-Mckay; David Flowers; Irwin D. Bernstein

doi:10.3791/56973

並べ替え内皮細胞ニッチ共培養と組み合わせて 1 つのセルインデックスを使用して胚性造血幹細胞前駆体...

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Developmental Biology

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Clonal Analysis of Embryonic Hematopoietic Stem Cell Precursors Using Single Cell Index Sorting Combined with Endothelial Cell Niche Co-culture

並べ替え内皮細胞ニッチ共培養と組み合わせて 1 つのセルインデックスを使用して胚性造血幹細胞前駆体のクローン解析

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09:32 min

May 8, 2018

DOI: 10.3791/56973-v

Brandon K. Hadland^1,2, Barbara Varnum-Finney¹, Cynthia Nourigat-Mckay¹, David Flowers¹, Irwin D. Bernstein^1,2

¹Clinical Research Division,Fred Hutchinson Cancer Research Center, ²Department of Pediatrics, Division of Pediatric Hematology/Oncology,University of Washington School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ここでマウスの萌芽期の開発中に造血幹細胞前駆体のクローンの解析手法を提案する.内皮細胞共培養と表現型特性と単一造血前駆細胞の生着を潜在的な特徴への移植胚大動脈性腺発生地域から単一セルの並べ替えインデックスを組み合わせています。

この方法の全体的な目標は、マウスの胚発生中のクローン造血幹細胞またはHSC前駆細胞の表現型特性と生着の可能性を特定することです。この方法は、胚発生におけるクローン性HSC前駆体のユニークな系統寄与に関する発生造血の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、造血性前駆体が単一細胞レベルで分析されることです。

これにより、希少なHSC前駆体を区別するユニークな表現型特性を同定することができます。まず、性交後9.5〜11.5日の間に胚から解剖した組織である大動脈-生殖腺-メソネフロス(AGM)を、10ミリリットルのPBSを含む15ミリリットルの円錐管に氷上に10%FBSを添加します。組織がチューブの底に落ち着いたら、上清を吸引し、すぐに0.25%コラゲナーゼ1ミリリットルをサンプルに加えます。

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