Name: 全身麻酔を使用してプロシージャのマウスにおける体系的な評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: 学ぶ 全身麻酔後のマウスの健康状態を評価する方法。行動パラメータとグルココルチコイド代謝物を測定し、EU指令2010/63に基づく重症度分類のための科学的データを提供します。

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ザビーネ ・ ジェイコブス サンプル コレクション、エディス ・ Klobetz-・ ラッサムの FCM 解析を支援するためのおかげで PD 博士医獣医します。habil。統計分析を支援するため Roswitha メルルと原稿の校正のための Wiebke ・ ゲントナー。研究ベルリン-ブランデンブルク研究プラットフォーム BB3R の一部 (www.bb3r.de) は、ドイツ連邦教育省、研究によって資金が供給された (許可番号: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html)。

研究ドイツ動物福祉法が定めたガイドラインに従って行われ、ベルリン州当局によって承認された ("Landesamt こだわり健康を祝して und Soziales"、許可証番号: G0053/15)。
注: このプロトコルの主な目的は、グルココルチコイド代謝産物の繰り返しなされる麻酔の効果を調べるためだった。使用される動物の数を決定するためのサンプル サイズの計算を行った: n ≥ 2 (s/μ1- μ2) ×2 (zα +βz) ×2。μ1- μ2が作られていますサイズ計算力およびサンプルの作成手段の間の違い (α = 5%、β = 80%); zα = 1.96 と zβ = 0.84 が標準正規分布の分位数。図 1は、このプロトコルのタイム ラインを示します。プロトコルのパラメーターは、コントロールのレベルとの違いを示しています、動物を密接に監視する必要があり、パラメーターは適当な期間の後に再度測定する必要があります。たとえば、特性不安関連行動が増加する場合この動作テスト必要がありますもう一度一週間後、完全復旧までの期間を確認するため。タイム ポイント、このプロトコルでは定義されている期間は、他のプロシージャで使用するために合わせることができます。時間ポイントを変更すると、馴化期間はプロトコルで説明されているように保つ必要があります。マウスの動作に影響を与えるかもしれない要因を減らすためには、マウスの通常の動作を妨げてはテストの後より多くの操作が必要なテストを実施しなければなりません。図 2は、スコアリングのサマリー シートを用いたプロトコルのすべてのテストをまとめたものです。図 3は、テスト結果を解釈する方法の概要を与える幸福のグレードの簡略化されたスケールを提供します。
1. マウスを実験者による処理に娯楽 habituating
<ol><li>別の施設または仕入先から取得されて、少なくとも 2 週間の動物施設に慣らすためにネズミを許可します。</li>
	<li>グループのマウスの家および 12:12 h の光: 暗いサイクル (室温 22 ± 2 ° C; 相対湿度 55 ± 10%) の標準的な条件の下でそれらを維持します。</li>
	<li>標準濃縮としてトンネルと綿の nestlets をすべてのグループに提供食品や水の自由。</li>
	<li>トンネルやカップ、少なくとも12のテスト前一週間を処理するすべてのマウスを慣らします。 ストレスや不安、幸福に影響を与えるとも、このプロトコルの12の結果に大きな影響は、注: を引き起こすことができる尾によってマウスを拾います。</li>
</ol>2. 行動の実験室と装置の準備
注: は、テストでは、理想的には動物が飼われている部屋の近くの別の部屋を提供します。手順を実施する前に、テストの部屋、少なくとも 60 分ホーム檻の中でマウスを転送します。可能であれば、このプロトコル手順の実施、同じ実験室でのすべてのテストを実施します。
<ol><li>穴を掘る動作8をテストし、MGS13 (図 4) で使用するため写真を撮影する観測ケージを準備します。<ol>
<li>約 220 mm × 290 mm の面積と高さ 390 mm のガラスの箱を使用します。</li>
		<li>このボックスの寝具材料の約 0.5 cm の床をカバーします。</li>
		<li>新しい環境によって引き起こされる苦痛を減らすために新しい寝具材料の上にホームのケージから使用される寝具材料の一握りを散布図します。</li>
		<li>食品、食事と水供給は通常同じ種類を提供します。 注意: もし可能であれば、マウスは寝具の材料と水鉢を埋めることができるので水のボトルを使用します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>ケージを準備 (タイプ III: 420 mm × 260 mm × 150 mm) をマウスを個別に収容されて 24 時間観察期間 (図 5)。 注: 個々 の住宅の期間を最小限にするため、この期間中に動作、ホーム ケージ活動、食物摂取量と糞便コルチコステロン代謝産物 (FCM) の造巣のデータを収集します。<ol>
<li>苦痛を減らすためにケージ (約 0.5 cm 深) と散布使用寝具素材新素材の上にホームのケージから糞便がなく一握りの材料を新しい寝具の場所。</li>
		<li>環境エンリッチメント (材料の表を参照) だけ14として定義された重量の標準化された正方形の綿の nestlet を提供します。 注: 商業 nestlets は重量で異なる場合があります。したがって、我々 は執事によって記述されている nestlet の重量を変更し、代わりに 2.7 g142.0 g を使用します。</li>
		<li>赤外線センサーを使用してホーム ケージ活性を測定するとき、ケージの上部に赤外線センサーをマウント (材料の表を参照)。</li>
		<li>食べ物、食事、通常付属している同じ種類を提供して広告自由の水します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. マウスのしかめっつらスケール
注: 写真の 3 つの時点で観察ケージで、MGS の撮影です: (i) 2 日前処置後 (iii) 150 分、手順の後 (ii) 30 分 MGS のレコードのベースライン レベル プロシージャ。幸福は損なわれる、MGS のスコアが増加します。増加の MGS のスコアは 150 分後まだ観察される、後の段階で追加の写真を取る。
<ol><li>写真の高解像度カメラを使用します。</li>
	<li>そっと観察ケージにマウスを転送し、少なくとも 30 分間、新しい環境に慣らすために、マウスを許可します。</li>
	<li>約を継続的に取るたびに、30-40 写真ポイント 1-2 分以内。</li>
	<li>すべての写真を並べ替えるには、正面または側面写真の鮮明さを選択してぼやけた写真や正面または側面ビューよりも他の視点からマウスの顔を見る写真を破棄します。</li>
	<li>各時間のポイント、(つまり2 日前の手順、手順の後の 30 分と手順の後 150 分) 各マウスから一枚の写真がランダムに選択します。</li>
	<li>体の位置は、表示されている13ではないマウスの頭だけを表示する写真をトリミングします。</li>
	<li>それぞれの写真に 1 枚のスプレッドシート ファイルを作成し、各シートに MGS の 5 顔アクション ユニットを含むテーブルを追加します。 注: ファイルには、写真投稿手順と同様に、ベースラインの写真が含まれています。</li>
	<li>シートの順序をランダム化します。</li>
	<li>ラングフォードらによって開発された MGS を使用し、3 ポイント スケールを使用して顔のアクション ユニットをスコアそれらを以前受けた 3 つの独立した人にコンピューター画面上のファイルを提示 (0 = 存在しない、1 = 中程度の提示、2 明らかに =現在)。 注: 得点パラメーター13次に基づいて: 軌道引き締め (「しっかりと閉瞼や目スクイズの眼窩領域の狭小化」);鼻のふくらみ (「丸みを帯びた鼻の橋の上に見える皮膚の延長」);頬の膨らみ ("凸"の外観頬筋);耳の位置 (「耳か、垂直方向の尾根に戻って描画されている耳のヒントのおかげでそのフォームを特徴と離れて引っ張られ、彼らのベースラインの位置から戻って」);ウィスカ変更 ("のベースラインからのひげの動き位置いずれかの後方、顔またはフォワードに対して最後に立っているかのようひげがまた一緒に群生」)。</li>
	<li>通り (ラングフォードらから適応のスコアを分析します。13)。<ol>
<li>MGS スコアを生成するそれぞれの写真にすべての表情のユニットを平均します。 注: 顔アクション ユニットの一つも、得点がない場合は平均残りの顔アクション ユニットです。</li>
		<li>ベースライン写真各マウスの MGS 違いスコアを取得する写真ポスト プロシージャの平均からの平均値を減算します。</li>
		<li>人 (関連ある標本のノンパラ メトリック検定) の MGS 違いスコアの違いをテストします。 注: 場合有意差 (p < 0.05)、スコアすべての写真やいくつかの写真のスコアだけが、人の間違いかどうかを決定します。後者が true の場合は、これらの写真の得点を繰り返します。それ以外の場合、人は MGS トレーニングを繰り返して、写真を再びスコアします。</li>
		<li>平均、MGS 差異スコア各マウスの別の得点から得られる場合は、すべての人の結果が大幅に違いはありません。</li>
		<li>ノンパラ メトリック検定を使用すると、研究グループ間の平均 MGS 違いスコアを比較します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 穴を掘る行動8,,1516
<ol><li>巣穴を準備するには、通常標準的な不透明なプラスチック水ボトル (250 mL、150 mm の長さ、直径 55 mm、ボトルの首の直径 45 mm)8食として供給される 140 ± 2 g の餌ペレットを配置します。 注: マウスを好むワイド チューブ、68 の mm の直径の穴使用できます執事16のとおり。</li>
	<li>巣の場所は順化の手続きの前に 5 日間ホーム ケージに餌ペレットでいっぱい。 注: 檻の中正規食品調剤ユニットは削除されませんする必要があります、マウスが使用されている食品ペレットでいっぱいにする必要がありますもこれに。</li>
	<li>2 回手続き (ベースライン) の前に 2 日間のテストを行う最後の 30 分の投稿手順を実行します。<ol>
<li>少なくとも 30 分、MGS の写真が撮影された観測ケージに慣らすマウスをしましょう。</li>
		<li>プラスチック製の水のボトルの場所は食品ペレット観測ケージの後ろの壁に平行に満ちています。</li>
		<li>2 h 後に穴に残って食品ペレット (g) の重量を量る。</li>
	</ol>
</li>
	<li>初期重量 (%) を基準にしてマウスで穴から削除食品ペレットの重量を計算します。</li>
</ol>5. 24 時間観察期間
注: マウス、2.2 で説明されているように、個別に収容されます。(図 5)、24 h にわたり、食品を測定するために摂取量、ホーム ケージ活動巣作り行動と FCM レベル。24 時間観測が行われる二度: (ii) プロシージャの日に基準レベルは前の手順 (i) 2 日。
<ol><li>
食品の摂取量
	<ol>
<li>体重 (スコア シートの部分) の任意の変化を評価するために定期的 (例えば麻酔、麻酔、麻酔後 2 日と毎週麻酔後の直前に前に、2 日) でマウスの重量を量る。 注: 体重は、体重の 1 グラムあたりの食品摂取量の計算に必要です。水の摂取量は、24 時間観測期間中も測定できます。食品の摂取量が減少し、幸福感が損なわれます。</li>
		<li>ケージ (約 100 g) の食品単位で提供する標準的な食品食事療法 (グラム) の初期の重量を決定します。</li>
		<li>24 時間観察期間の終わりに標準的な食品ダイエットの重量を決定します。</li>
		<li>食品流出の慎重に食品の単位の下にケージ側をスキャンし、任意の余分な食品ペレット食品ユニットの残りの餌ペレットの重量が判明を追加します。</li>
		<li>単位体重当たりの食品の摂取量を計算します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ホーム ケージ活動 注: 次の手順は、赤外線センサーの使用を参照してください (資料の表を参照)、ホーム ケージ活動が別のプログラムも行われるが。ホーム ケージ活動制御レベル (例えば自発運動の抑制、多動性) からの偏差障害者幸福の印であるかもしれない。<ol>
<li>プログラムを起動します。</li>
		<li>1 分のサンプル間隔と衝動が 24 時間 1 分ごとを記録されることを意味、24 h の捕捉時間を選択します。 注: 実験者が何度か部屋に入る記録を開始した後場合、のみ使用、マウスが邪魔なかったときの期間からのデータ (すなわち暗期)。</li>
		<li>インパルスの 10 分間隔をまとめます。</li>
		<li>(インパルス × 分) 時間曲線下の領域を計算します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
巣作り行動 注: 複雑・高の巣は幸福を示すインジケーターとして使用できます。<ol>
<li>正方形の綿 nestlet を配置 (材料の表を参照してください) 檻の真ん中に定義された重量 (例えば2.0 g)。</li>
		<li>次の朝、約 2 時間点灯後執事14によると 5 点満点 (下記参照) に巣をスコアします。初期 nestlet 重量の少なくとも 5% を任意の untorn の nestlet の部分の重量を量る。スコア通り14巣<ol>
<li>90% そのままの nestlet の場合は「1」スコアを割り当てます。</li>
			<li>50-90% そのままの場合は、「2」スコアを割り当てます。</li>
			<li>割り当てるスコア「3」の場合は、nestlet の 50-90% は千切り。</li>
			<li>割り当てる 90% 以上は千切り、巣はフラット、その円周の 50% 未満が丸くマウス本体高さより高い場合に「4」を獲得します。</li>
			<li>割り当てるより 90 %nestlet は千切り、巣が高いとその円周の 50% 以上が背を丸めてマウスの平均身長よりも高い場合、「5」をスコアします。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
糞便中コルチコステロン代謝物 注: コントロール レベル以上 FCM の増加 24 時間麻酔後に急性ストレスのレベルに合わせてください。<ol>
<li>24 時間観察期間の終わりに鉗子を使用してケージからすべて乾燥糞便ペレットを収集し、尿で汚染されたぬれたペレットを排除します。</li>
		<li>パルメらによると FCM を抽出します。17、次のようにします。<ol>
<li>60-70 ° C の温度で乾燥糞便</li>
			<li>モルタルを使用して糞便をホモジナイズしてください。</li>
			<li>複数の渦に 30 分間遠心管中の 80% メタノール 1 mL に 0.05 g の因数を振る。</li>
			<li>15 分間 2500 x g でサンプルを遠心します。</li>
			<li>別の遠心チューブに上清の 0.5 mL のピペットします。</li>
			<li>-18 ° C 最低糞便 (物) を保存します。</li>
			<li>5α-pregnane-3b,11b,21-triol-20-one 酵素免疫測定法 (EIA)18,19または別の完全に検証された EIA を使用して FCM を分析します。</li>
		</ol>
</li>
		<li>FCM ベースライン FCM 濃度に対する濃度値の変化率を計算します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. 無料探索的パラダイム
<ol><li>ラックからホームのケージを取る、24 時間観測期間の終わりにテーブルの表面に置きます。</li>
	<li>ケージの長い側に 45 ° の角度でケージに (食糧または水のボトル) なしグリッド ケージ上部を配置します。 注: マウスの隠れ場所として、巣を破壊しないが、巣の上ケージ上部を斜めに配置。</li>
	<li>モニターまたはビデオ記録約 1.5 m の距離から 10 分間マウス。<ol>
<li>タイマーを開始します。</li>
		<li>すべて時マウス (ケージの上のすべての 4 つの足) のケージの上に登って (ケージの床に足を 1 つまたは複数) とケージ上部の葉に注意してください。 注: いくつかのマウスがケージの上に登って、ケージの端に沿って歩くためにそれを残します。いくつかのマウスをケージの上にリアできます。マウスがまだ上のケージなら、これらの場合を扱います。</li>
	</ol>
</li>
	<li>バートらの後にパラメーターを評価します。20。<ol>
<li>待機時間 (単位は秒) の最初の調査を分析します。</li>
		<li>探検の数を分析します。</li>
		<li>探査の合計時間 (秒) を分析します。 注: 最初の調査、探査、数が少ないと探査の低総期間に待ち時間特性不安の高いレベルを示すことができます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

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プロトコルは、単一の麻酔または繰り返しのイソフルラン麻酔を受けた C57BL/6JRj マウスの福利を評価するために元々 開発されました。結果は幸福を評価するため機密性の高いメソッドが他の手段 (例えば無料探索的パラダイム MGS、穴居性の食品の摂取量) と同様に、高級な動作テストをするを確認します。繰り返しイソフルラン麻酔には、特性不安関連行動、MGS、潜砂行動の短期的な影響が原因発生します。さらに、食品摂取量10に影響を与える繰り返しイソフルラン麻酔が登場。
無料探索的パラダイムに減らされた探索行動が示されているし、何度も麻酔したマウスで高い特性不安のレベルが一度だけ麻酔したマウスとコントロールと比較してその結果。ただし、すべてのグループのマウスは、グリッド ケージ トップ10,20を検討しました。不安関連行動を調査するとき、特性および状態不安21<...

EU ディレクティブ 2010年/631は、ラッセルとバーチ2によって開発された 3 r 原則 (交換、削減、改良) は動物実験が必要な場合に適用することを定めています。EU 指令の究極の目標はすべての動物テストを段階的に、ディレクティブ、当分の間、いくつかの動物実験がまだ必要な人間と動物の健康を守る研究を行うことを認めています。したがって、動物実験は、任意の別の方法で置き換えることはできません、実験動物の最小数のみは、信頼性の高い結果を得られます。さらに、痛み、苦しみ、そして実験プロシージャを伴う苦痛の量は適切な洗練の手段を使用して最小化する必要があります。EU ディレクティブ 2010年/63 は、手順の重大度は、非回復、軽度、中程度、または重度の1として前向き分類される必要が定めています。重症度分類は、ケースバイ ケースに基づいて決定は、特定の手順の重大度を推定するための科学的ツールを持つことが重要です。
モートンとグリフィス3提案としてスコア シートは、幸福4に対するマイナスの効果を含む正常な状態からの任意の偏差を検出するに必要不可欠なツールです。スコアシートが遡及的痛み、苦しみを決定する使用され、実験によって引き起こされると (例えば体重、毛皮、歩行)、個々 の動物の物理的な状態で目に見える変化に焦点を当てる。附属書 VIII の EU 指令 2010年/63 は、それぞれに重要度カテゴリの例を示します、データに基づく科学的を使用して指定されたプロシージャの厳しさの度合いを推定する研究者まだ欠如ツール。
否定的な幸福を示す指標の不在は、動物の状態を判断する唯一の方法ではないです。肯定的な幸福を指す指標の存在はまた重要な5,6,7,8です。たとえば、動物は穴を掘るのような豪華な行動を表示や入れ子建物動作に不可欠なニーズが満たされたときのみ。幸福を縮小した場合高級動作5,7を拒否する最初のです。幸福の評価で使用されるプロトコルは、詳細かつ包括的な9の彼らの幸福感を評価するために物理的な生理学的/生化学的、および動物の心理状態を指すインジケーターを含める必要があります。
洗練されたコンテキスト内でプロトコルはこれらの要件を満たすために、マウス10の福利に全身麻酔を含む手順の効果を評価するために開発されました。同時に目標は、与えられた実験にプロトコルの簡単な統合を有効にする追加のストレスを最小限に抑えることでした。プロトコルは、行動、活動、食物摂取、入れ子などホーム ケージ動作と特性不安関連行動を掘り進むと見なします。さらに、糞マウス顔をしかめるスケール (MGS) とコルチコステロン代謝物質の非侵襲的な分析を含みます。プロトコルは、科学的かつ動物中心に幸福の評価を容易にして厳しさの度合いの分類をサポートする福利に関する情報を提供するために設計されています。スコア シートの他のプロシージャの重症度分類に有用な情報を提供できます。プロトコルを実行する簡単です広範な装置を必要としない、研究の結果に影響を与えることがなく継続的な実験に統合できます。注意すべきこと動物の研究: レポートので生体実験 (到着) ガイドライン11は、動物実験、改善設計、分析、およびレポートの目的を含むすべての調査で観察されます。

<table><tbody><tr><td>イソフルラン</td><td>CP-Pharma Handelsgesellschaft mbH</td><td>1214</td><td></td></tr><tr><td>InfraMot - センサーユニット</td><td>TSEシステム</td><td>302015-SENS</td><td></td></tr><tr><td>InfraMot - コントロールユニット</td><td>TSEシステム</td><td>ズ 302015-C/16</td><td></td></tr><tr><td>InfraMot - ソフトウェア</td><td>TSEシステム</td><td>302015-S</td><td></td></tr><tr><td>ネスレットN</td><td>アンケア - プレプレックス</td><td>NES3600</td><td></td></tr><tr><td>カメラEOS 350D</td><td>カノン</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

全身麻酔を使用してプロシージャのマウスにおける体系的な評価

Systematic Assessment of Well-Being in Mice for Procedures Using General Anesthesia

ラッセルとトリーバーチの原則 (交換、削減、洗練された) が開発した 3 r、合わせて科学的な研究は、可能な限り動物実験に代わる方法を使用してください。動物実験に代わるものがない、実験動物使用数の合計は貴重なデータを取得するための必要最小限にする必要があります。さらに、痛み、苦しみ、そして実験手順に伴う苦痛を最小限にする適切な洗練の手段が適用されるべき。痛み、苦しみ、そして苦痛の程度を分類に使用されるカテゴリは、非回復、軽度、中程度、または重度 (EU 指令 2010年/63) です。カテゴリは、個々 のケースで適用するには、それは科学的に正しいツールを使用する重要です。
ここで示したよくあ評価プロトコル中に全身麻酔を使用するプロシージャです。プロトコルは穴を掘るなど幸福の指標としての動作の造巣ホーム ケージ活動、マウスのしかめっつらスケールと豪華な行動に焦点を当てください。また、特性不安関連行動の自由探索的パラダイムを使用します。24 時間麻酔後に急性ストレスの指標として糞便中コルチコステロン代謝物を測定します。
プロトコルはマウスの全身麻酔の幸福の科学的に確かな情報を提供します。その簡単のためプロトコル簡単に適応でき計画研究の統合します。それが EU 指令 2010年/63 のカテゴリーにおける苦悩を分類するスケールを提供していない研究者が科学的データを用いた手法の厳しさの度合いを見積もることができます。それは、動物を中心とした科学的方法で幸福の評価を改善する方法を提供します。

このプロトコルはもともと C57BL/6JRj マウスのイソフルラン麻酔の経験を 1 つの幸福を評価するために開発された (45 分麻酔セッションは 1 つ、n = 13 女性) または繰り返しのイソフルラン麻酔 (6 麻酔 45 分のセッション 3-4 日で麻酔セッション、n 間 = 13 女性) マウスの幸福と比較して (n = 女性 6 名)10麻酔を受け取らなかったが、同じ手段によるとテストされました。イソフルラン麻酔と対照マウスと比較して C57BL/6JRj マウスの福利に繰り返しイソフルラン麻酔の 1 つ経験の影響を検討しました。ここでは、女性の C57BL/6JRj マウスの代表的な結果は、以前は Hohlbaumらで公開いくつかのデータを含む以前に未発表の結果と同様に、 10のとおりです。
統計解析</st...

全身麻酔を使用してプロシージャの間にマウスの福利を評価するためのプロトコルを開発しました。グルココルチコイド代謝物を分析しただけでなく幸福のレベルを示す行動パラメーターのシリーズ。プロトコルは、動物を中心とした科学的な厳しさの度合いを推定する一般的な援助として使用できます。

In keeping with the 3R Principle (Replacement, Reduction, Refinement) developed by Russel and Burch, scientific research should use alternatives to animal ...

このプロトコルの全体的な目標は、全身麻酔を含む処置を受けたマウスの健康状態を評価し、EU指令2010/63に準拠した重症度分類を裏付ける科学的に健全なデータを提供することです。このプロトコルは、全身麻酔を伴う処置によって引き起こされる苦痛の程度など、実験動物科学の分野における動物福祉に関する重要な質問に答えるのに役立ちます。このプロトコルの主な利点は、個々のマウスの健康状態が動物ベースの科学的な方法で評価され、このプロトコルを他の計画された研究に容易に適応して統合できることです。このプロトコルのアイデアを最初に思いついたのは、反復麻酔が実験用マウスに1回の曝露よりも多くのストレスを引き起こす場合、科学的根拠に基づくデータが欠落すると推測したときでした。このステップでは、床面積が約 220 mm x 290 mm、高さが 390 mm のガラス箱を準備します。床を約0.5センチの寝具材で覆います。次に、新しい寝具材料の上に、ホームケージから使用済みの寝具材料を一握り散らして、新しい環境によって引き起こされる苦痛を軽減します。食料と水を用意してください。マウスを観察ケージにそっと移し、マウスが新しい環境に少なくとも30分間慣れるのを待ちます。マウスのしかめっ面スケールには、写真撮影用の高解像度カメラを使用してください。1〜2分以内に各時点の写真を約30〜40枚連続して撮影します。Deacon氏とJirkof氏によると、穴を掘る動作をテストするには、140グラムの食品ペレットを標準的な不透明なプラスチック水筒に入れて巣穴を準備します。次に、餌のペレットを入れたペットボトルを観察ケージの後壁と平行に置きます。2時間後、巣穴に残っている食品ペレットの重量を量ります。ベースラインとして、手順の2日前に2回テストを実施します。このステップでは、マウスを個別に飼育する24時間観察期間のために、新しい寝具材料をセットしたケージを調製します。24時間の観察期間は、マウスのしかめっ面と穴を掘る行動の後に始まります。単一のハウジングの期間は最小限に抑えられます。その間に、ホームケージの活動、食物摂取、巣作り行動、および糞便コルチコステロン代謝産物のレベルが測定されます。次に、ホームケージから糞便のない使用済みの寝具材料を一握り、新しい材料の上に散らばらせて、苦痛を軽減します。定義された重量の標準化された正方形の綿のネスレットを環境エンリッチメントとしてのみ提供します。その後、ケージの上部に赤外線センサーを取り付けて、ホームケージの活動を測定します。標準的なフードペレットと水を自由自在に供給し、マウスをケージに入れます。翌朝、ライトが点灯してから約2時間後に、ディーコンによる5段階評価に従って巣を採点します。さらに、最初のネスレットウェイトの少なくとも5%を占める未破れのネストレットピースの重量を量ります。次に、グリッド状のケージトップをケージの長い方に対して45度の角度でケージに置きます。タイマーを開始し、約1.5メートルの距離からマウスを10分間モニターまたはビデオ録画します。マウスがケージの上部に 4 つの足をすべて置いてケージの上部に登ったり、ケージの床に 1 つ以上の足を置いてケージの上部を離れたり、分析を行ったりする場合はすべて注意してください。麻酔の1回の経験と繰り返しの麻酔は、曝露の30分後にマウスのしかめっ面スケールの差スコアを対照と比較して増加させました。最後の麻酔から150分後、すべてのマウスのしかめっ面スケール差スコアが制御レベルに戻りました。穴を掘る行動については、マウスが巣穴から取り除いた食物ペレットの重量の割合を対照と比較して、繰り返し麻酔するだけで有意に減少しました。巣作り行動については、麻酔の1回の経験、反復麻酔、および対照の間で巣のスコアに有意差はありませんでした。自由探索的パラダイムでは、反復麻酔は、対照と比較して探索の数を大幅に減らし、最後の麻酔の1日後に1回の麻酔と比較して探索の合計持続時間を減らしました。最後の麻酔から8日後、研究グループ間に違いはなくなりました。このプロトコルを試す際には、トンネルやカッピング法でマウスを扱うことを忘れないでください。マウスの尻尾を拾うと、ストレスや不安が引き起こされ、それが健康状態に影響を及ぼし、プロトコルの結果にも影響を与える可能性があります。このプロトコルは、マウスの健康に対する手順の影響を評価するために、計画された研究に簡単に適応して統合できます。手順と研究デザインに応じて、このプロトコルの最適なテストを選択する必要があります。このビデオを見た後、全身麻酔の手順を受けたマウスの健康状態を評価する方法についてよく理解できます。このプロトコルは、動物ベースの科学的な方法で手順の重症度を分類するのに役立ちます。

systematic-assessment-well-being-mice-for-procedures-using-general

Research

JoVE Journal

Behavior

行動

出典:Yan, Z., et al. Evaluating the Anti-depression Effect of Xiaoyaosan on Chronically-stressed mice.J. Vis. Exp.

慢性ストレスばく露によるマウスのうつ病の誘発と評価

立ち直り反射の消失は、長い実験動物でも催眠呼ばれる、意識不明のための標準的な行動の代理を務めています。薬理学的介入によって引き起こされる揮発性麻酔薬感受性における変化は、任意の吸入治療剤の送達のために適合させることができる注意深く制御されたハイスループット評価システムを用いて検出することができる。...

局所または全身薬理学的介入後のマウスの揮発性全身麻酔の感度変化を評価する

このフィルムは、マウスにおける全身および肝臓の血行動態を取得する方法を示します。全体の監視は重要なパラメータは、全身血圧、中心静脈圧、総肝動脈流量、および門脈の圧力、ならびにマウスにおけるポータル流量の取得を含む。...

マウスにおける全身および肝血行動態パラメータの監視

運動能力の包括的な行動テスト...

運動能力、気分およびマウスにおける認知の繰り返しの評価のための行動テスト バッテリー

この記事では、新しいマウス判断バイアスプロトコルの詳細な説明を提供します。この嗅覚掘り作業の情動状態に対する感受性の証拠も実証され、多様な研究分野にわたるその有用性が議論される。...

嗅覚掘削作業によるマウス判定バイアスの評価

機械的競合回避アッセイは、マウスの疼痛感受性の非反射的読み出しとして使用され、様々なマウス疼痛モデルにおける情動動機付け応答をよりよく理解するために使用することができる。...

マウスの疼痛行動を測定するための機械的衝突回避アッセイ

黄体形成ホルモン(LH)の拍動は、生殖機能の特徴です。我々は、連続自動採血に関連する特定のニューロン集団の遠隔活性化のためのプロトコルについて述べる。この技術により、時限ホルモンの調節、多重化、および意識的で自由に動く動物のLHレベルに対する操作効果の最小化が可能になります。...

マウスの循環黄体形成ホルモンを誘導および測定するための自動採血と組み合わせた遠隔ニューロン活性化

この記事では、コンテキストのためのプロトコルを提示したマウスで恐怖学習と記憶を評価するために、ビデオ分析システムを使用して、恐怖条件付け試験に頭出し。...

マウスにおけるビデオ解析システムを用いた文脈と手掛り恐怖条件付け試験

私たちは、認知に対する年齢の影響を調査中でタブレットコンピュータベースのアプリケーション（EmoCogMeter）のユーザビリティをテストしました。結果は、それによって、アプリケーションの使いやすさを証明し、加齢に伴う認知機能の低下を示しています。調査結果は、検出および認知機能障害の監視のためのタブレットベースのアプリケーションの大きな臨床的および実用的な可能性を強調している。...

EmoCogMeter、新規タブレットコンピュータベースのアプローチを用いて認知機能の加齢変化の評価

ラットの行動柔軟性などの実行機能を評価する能力は、無傷の動物と疾患モデルの両方で認知の神経生物学を調査するのに役立ちます。ここでは、前頭前野ネットワークの混乱に特に敏感な戦略シフトと逆転学習を評価するための自動化されたタスクについて説明します。...

ラットの行動の柔軟性を評価するためのオペラント手順

学ぶ 全身麻酔後のマウスの健康状態を評価する方法。行動パラメータとグルココルチコイド代謝物を測定し、EU指令2010/63に基づく重症度分類のための科学的データを提供します。

全身麻酔を使用してプロシージャのマウスにおける体系的な評価

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