全身麻酔を使用してプロシージャのマウスにおける体系的な評価

このプロトコルの全体的な目標は、全身麻酔を含む処置を受けたマウスの健康状態を評価し、EU指令2010/63に準拠した重症度分類を裏付ける科学的に健全なデータを提供することです。このプロトコルは、全身麻酔を伴う処置によって引き起こされる苦痛の程度など、実験動物科学の分野における動物福祉に関する重要な質問に答えるのに役立ちます。このプロトコルの主な利点は、個々のマウスの健康状態が動物ベースの科学的な方法で評価され、このプロトコルを他の計画された研究に容易に適応して統合できることです。

このプロトコルのアイデアを最初に思いついたのは、反復麻酔が実験用マウスに1回の曝露よりも多くのストレスを引き起こす場合、科学的根拠に基づくデータが欠落すると推測したときでした。このステップでは、床面積が約 220 mm x 290 mm、高さが 390 mm のガラス箱を準備します。床を約0.5センチの寝具材で覆います。

次に、新しい寝具材料の上に、ホームケージから使用済みの寝具材料を一握り散らして、新しい環境によって引き起こされる苦痛を軽減します。食料と水を用意してください。マウスを観察ケージにそっと移し、マウスが新しい環境に少なくとも30分間慣れるのを待ちます。

マウスのしかめっ面スケールには、写真撮影用の高解像度カメラを使用してください。1〜2分以内に各時点の写真を約30〜40枚連続して撮影します。Deacon氏とJirkof氏によると、穴を掘る動作をテストするには、140グラムの食品ペレットを標準的な不透明なプラスチック水筒に入れて巣穴を準備します。

次に、餌のペレットを入れたペットボトルを観察ケージの後壁と平行に置きます。2時間後、巣穴に残っている食品ペレットの重量を量ります。ベースラインとして、手順の2日前に2回テストを実施します。

このステップでは、マウスを個別に飼育する24時間観察期間のために、新しい寝具材料をセットしたケージを調製します。24時間の観察期間は、マウスのしかめっ面と穴を掘る行動の後に始まります。単一のハウジングの期間は最小限に抑えられます。

その間に、ホームケージの活動、食物摂取、巣作り行動、および糞便コルチコステロン代謝産物のレベルが測定されます。次に、ホームケージから糞便のない使用済みの寝具材料を一握り、新しい材料の上に散らばらせて、苦痛を軽減します。定義された重量の標準化された正方形の綿のネスレットを環境エンリッチメントとしてのみ提供します。

その後、ケージの上部に赤外線センサーを取り付けて、ホームケージの活動を測定します。標準的なフードペレットと水を自由自在に供給し、マウスをケージに入れます。翌朝、ライトが点灯してから約2時間後に、ディーコンによる5段階評価に従って巣を採点します。

さらに、最初のネスレットウェイトの少なくとも5%を占める未破れのネストレットピースの重量を量ります。次に、グリッド状のケージトップをケージの長い方に対して45度の角度でケージに置きます。タイマーを開始し、約1.5メートルの距離からマウスを10分間モニターまたはビデオ録画します。

マウスがケージの上部に 4 つの足をすべて置いてケージの上部に登ったり、ケージの床に 1 つ以上の足を置いてケージの上部を離れたり、分析を行ったりする場合はすべて注意してください。麻酔の1回の経験と繰り返しの麻酔は、曝露の30分後にマウスのしかめっ面スケールの差スコアを対照と比較して増加させました。最後の麻酔から150分後、すべてのマウスのしかめっ面スケール差スコアが制御レベルに戻りました。

穴を掘る行動については、マウスが巣穴から取り除いた食物ペレットの重量の割合を対照と比較して、繰り返し麻酔するだけで有意に減少しました。巣作り行動については、麻酔の1回の経験、反復麻酔、および対照の間で巣のスコアに有意差はありませんでした。自由探索的パラダイムでは、反復麻酔は、対照と比較して探索の数を大幅に減らし、最後の麻酔の1日後に1回の麻酔と比較して探索の合計持続時間を減らしました。

最後の麻酔から8日後、研究グループ間に違いはなくなりました。このプロトコルを試す際には、トンネルやカッピング法でマウスを扱うことを忘れないでください。マウスの尻尾を拾うと、ストレスや不安が引き起こされ、それが健康状態に影響を及ぼし、プロトコルの結果にも影響を与える可能性があります。

このプロトコルは、マウスの健康に対する手順の影響を評価するために、計画された研究に簡単に適応して統合できます。手順と研究デザインに応じて、このプロトコルの最適なテストを選択する必要があります。このビデオを見た後、全身麻酔の手順を受けたマウスの健康状態を評価する方法についてよく理解できます。

このプロトコルは、動物ベースの科学的な方法で手順の重症度を分類するのに役立ちます。