A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

Daniel Villarreal; Geetali Pradhan; Chia-Shan Wu; Clinton D Allred; Shaodong Guo; Yuxiang Sun

doi:10.3791/57048

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Biology

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A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

マウスからの膵島分離のための簡単な高効率プロトコル

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06:56 min

August 30, 2019

DOI: 10.3791/57048-v

Daniel Villarreal¹, Geetali Pradhan², Chia-Shan Wu^1,2, Clinton D Allred¹, Shaodong Guo¹, Yuxiang Sun^1,2

¹Department of Nutrition and Food Science,Texas A&M University, ²Children's Nutrition Research Center,Baylor College of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

この島分離プロトコルは、外分泌組織を消化するコラゲナーゼ注射の新しい経路と、マウスから島を精製するための簡略化された勾配手順を説明した。これは、酵素消化、勾配分離/精製、およびアイレット手摘みを含みます。分離に成功すると、マウスあたり250~350の高品質で完全に機能する島が生じます。

このプロトコルでは、単一の密度勾配を使用する必要があり、より複雑な従来の小地分離方法に比べて、労働集約性が大幅に低く、コスト効率が高くなります。このプロトコルの主な利点は、酵素が膵臓に直接送達され、組織消化が強化され、膵島の収量が増加することです。まず、マウスの手足をサギン位置にテーピングし、70%エタノールで体をスプレーします。

カバーグラス鉗子と湾曲した外科用ハサミを使用して、約3センチメートルの水平腹部皮膚切開を行い、皮膚を引き開いて腹壁を露出させます。腹部腹膜を3~4センチ垂直に切開し、膵臓を完全に露出させ、マウスを解剖顕微鏡の下に置きます。肝臓葉を優越に押して、淡いピンクのチューブとして現れる胆管を露出させ、右の腰部と腸骨領域から腹腔の右側に腸を静かに移動させ、胆管および肝動脈を露出させる。

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