Name: 虚血性脳卒中のモデルラットの血液脳関門の破壊のIn Vivo評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 19 s
Description: 学ぶ虚血性脳卒中ラットモデルにおける血液脳関門破壊のin vivo評価法。エバンスブルー染色を用いて脳血管透過性を定量的に測定し、神経保護治療の開発に貢献する再現性の高い手法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

著者らは、財政支援のアルダビール大学医療科学 (アイルランド) の研究のための副首相に感謝している (許可 No: 9607)。

動物実験を行い、アルダビール大学医療科学研究評議会のガイドラインに従ってすべてのプロシージャを行った (倫理的な ID 番号: 赤外線ARUMS。REC.1394.08). この可視化の研究で牧草研究所 (イラン ・ テヘラン) から得られる男性の大人の Sprague-dawley ラット (300-350 g) を使用しています。
1. 麻酔および血流計
<ol><li>4% イソフルランを使用して麻酔し、手術の間に亜酸化窒素 (70 %v/v) と酸素 (30 %v/v) の混合物にイソフルラン (1 1.5%) とそれを維持します。</li>
	<li>フィードバック制御暖房毛布にうつ伏せで麻酔動物を置き、この加熱装置に接続された直腸プローブによる 37±0.5 ° C の体温を維持します。</li>
	<li>乾燥を防ぐために両方の目に眼軟膏の少量を適用します。</li>
	<li>頭蓋骨の左側にある外科の領域を電気バリカンで剃る。ガーゼのパッドと肌の消毒に betadine ソリューションを使用します。この地域の 70% のエタノールを含む滅菌パッドを洗い流し、3 サイクル17の両方の手順を繰り返します。</li>
	<li>鎮痛の外科領域17に 0.5% ブピバカイン 0.2 mL を皮下注入します。</li>
	<li>(左耳のベースに左目の眼から延びる) 頭蓋骨 1 cm 長い皮膚切開を行い、頭蓋骨を公開する左の側頭筋を解剖します。作成小さなバリ穴 5 mm 外側 1 mm 後方前18レーザードップラー血流計ペンシル プローブの先端の配置を容易にします。</li>
	<li>仰臥位になりやすいからラットを切り、局所脳血流量 (rCBF) を監視するこれまでにドリル頭蓋骨ブラインド穴にレーザー ペンシル プローブを配置します。</li>
	<li>それぞれの動物のベースライン rCBF を記録し、これを 100% として考慮します。特に、80% 以上の脳血流量の低下が検出された19、20中大脳動脈閉塞 (MCAO) が開始されます。</li>
</ol>2. 焦点煎じつめて虚血の誘導
<ol><li>頸部領域を剃る、betadine ソリューションと 70% エタノールで皮膚を消毒してください。鎮痛17外科サイトで皮下 0.5% ブピバカイン 0.2 mL を注入します。</li>
	<li>左の総頸動脈 (LCCA) にアクセスする首の腹側表面で 2 cm 長い切開を行います。(ECA) 外頚動脈と内頸動脈 (ICA) の分岐にアクセスする近隣の筋膜や迷走神経から LCCA を分離します。</li>
	<li>LCCA または 5-0 絹糸を用いた ECA のいずれか完全に結紮そして翼口蓋動脈のレベルは無料 ICA を解剖します。</li>
	<li>緩く LCCA、周り 5-0 絹糸のネクタイを配置、その後一時的に ICA を血管のマイクロ クリップをクランプします。</li>
	<li>小切開は、以前に配置した緩いネクタイ前 LCCA と ICA の内腔の空間に 4-0 シリコン コーティング ナイロン縫合糸を挿入し、ナイロン縫合糸を保護し、血液の漏れを防ぎます LCCA 周り縫合糸を締めます。</li>
	<li>ICA から血管のマイクロ クリップを削除します。その後、MCA 起源の閉塞を示す rCBF の顕著な減少を観察までシリコン被覆管腔内のフィラメントを進めます。虚血期間 (90 分) の終わりに、腔内縫合21を撤回することによって再灌流を開始します。</li>
</ol>3. 頚静脈穿刺とエバンス ブルー (EB) 注射
<ol><li>正中線の左側に首で 1 cm の縦切開を行うそして、にべもなく左頸静脈 (LGV) の外の枝にアクセスする距離浅筋膜を解剖します。その後、5-0 絹糸と LGV の頭蓋の終わり完全に縛る。緩く、静脈周囲の関係を 2 つを配置し、心臓血管のマイクロ クランプと LGV 末一時的に。</li>
	<li>小切開は、2 つの縫合線の間の LGV と LGV の内腔の容量に満ちてヘパリン血清カテーテルを挿入し事前にそれ約 10 mm。 その後、カテーテルをセキュリティで保護し、出血を防ぐために静脈周囲の合字を締めます。少量の静脈の崩壊を避けるために血清を注入します。</li>
	<li>再灌流期間の初めに、ゆっくりと 5 分にわたって EB 色素 (生理食塩水で 2 %eb 液の 1 mL/kg) を挿入します。その後、0.5 mL 通常生理食塩水の注入カニューレを洗浄し、静脈12,22から注入カニューレを撤回します。</li>
	<li>最後に、首と頭の切開を縫合し、ブプレノルフィン 0.05 mg/kg を腹腔内注入 (IP) 鎮痛手術17再灌流期間中にすべての 6-8 h 注射を繰り返します。</li>
	<li>回復ケージ17水和を提供するために予め温めておいた saline(IP) の 5 mL を注入します。</li>
	<li>温度と空調制御場所特別な回復ケージ内の動物、動物の麻酔からの回復を監視します。</li>
</ol>4. 血液脳関門の透過性の評価
<ol><li>再灌流の 24 h 後深くチオペン タール ナトリウムと動物を麻酔します。胸骨の下に小さな穴を開けることで、胸腔内を開きます。</li>
	<li>右房内の小さな開口部を作るし、生理食塩水 0.9% に予め温めておいた (37 ° C) 左心室心房から普通の生理食塩水の出口になる無色23まで循環から EB を洗って 15 分間を通じて 110 mmHg の圧の 250 mL を注入します。</li>
	<li>すぐに頭蓋骨から脳を取り除くし、脳行列に配置。嗅球や小脳の解剖し、きれいなかみそりの刃を使用して別の脳の右半球正中線に沿って左 (Lesioned) から。</li>
	<li>各半球の重量を量るとリン酸緩衝生理食塩水 2.5 mL で個別にそれらを均質化し、渦のマシンを使用して 2 分の 2.5 ml のトリクロロ酸 (60%) のこれをミックスします。</li>
	<li>1,322 × g で 30 分間脳サンプルを遠心し、10 分の 4 ° C 冷蔵庫でクールダウンしてサンプルを許可します。</li>
	<li>培養上清を使用して、610 nm23で、分光光度計による EB 吸光度を推定します。</li>
	<li>脳組織の μ g/g として標準曲線と結果を表現に対する EB 濃度を計算します。</li>
</ol>5. 理事会の標準曲線の生産
<ol><li>リン酸緩衝生理食塩水 5 mL に EB の 1-10 μ g の濃度と理事会の 10 のサンプル ソリューションを準備します。</li>
	<li>610 の各サンプルの吸光度を測定分光光度計を用いた nm。</li>
	<li>Y 軸 (図 1) のスプレッドシートと X 軸上の現在の EB 濃度と吸光度の値を使用して散布図を作成します。</li>
	<li>その方程式と曲線の線形トレンド ラインを定義します。それを使用し、EB サンプル濃度を取得します。</li>
	<li>脳組織重量の μ g/g として EB 血管外漏出の最終結果を報告します。</li>
</ol>6. 偽操作
<ol><li>Sham のグループ (含む作り切開頸部に EB 注入) のラットと同じ手術のプロセスを実行しますが、MCAO を除外します。</li>
</ol>

<ol><li>Jin, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protecting+against+cerebrovascular+injury%3A+contributions+of+12%2F15-lipoxygenase+to+edema+formation+after+transient+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Protecting against cerebrovascular injury: contributions of 12/15-lipoxygenase to edema formation after transient focal ischemia.</a> Stroke. 39 (9), 2538-2543 (2008).</li>
<li>Lo, E. H., Dalkara, T., Moskowitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms%2C+challenges+and+opportunities+in+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms, challenges and opportunities in stroke.</a> Nat Rev Neurosci. 4 (5), 399-415 (2003).</li>
<li>Tam, S. J., Watts, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connecting+vascular+and+nervous+system+development%3A+angiogenesis+and+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Connecting vascular and nervous system development: angiogenesis and the blood-brain barrier.</a> Annu Rev Neurosci. 33, 379-408 (2010).</li>
<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+use+of+H102+peptide-loaded+dual-functional+nanoparticles+in+the+treatment+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">The potential use of H102 peptide-loaded dual-functional nanoparticles in the treatment of Alzheimer's disease.</a> J Control Release. , (2014).</li>
<li>Obermeier, B., Daneman, R., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+maintenance+and+disruption+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Development, maintenance and disruption of the blood-brain barrier.</a> Nat Med. 19 (12), 1584-1596 (2013).</li>
<li>Fang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+Blood-Brain+Barrier+Dysfunction+by+XQ-1H+Following+Ischemic+Stroke+in+Hyperlipidemic+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Attenuated Blood-Brain Barrier Dysfunction by XQ-1H Following Ischemic Stroke in Hyperlipidemic Rats.</a> Mol Neurobiol. 52 (1), 162-175 (2015).</li>
<li>Huang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCR4+antagonist+AMD3100+protects+blood-brain+barrier+integrity+and+reduces+inflammatory+response+after+focal+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">CXCR4 antagonist AMD3100 protects blood-brain barrier integrity and reduces inflammatory response after focal ischemia in mice.</a> Stroke. 44 (1), 190-197 (2013).</li>
<li>Omidi, Y., Barar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impacts+of+blood-brain+barrier+in+drug+delivery+and+targeting+of+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Bioimpacts%22%5BJournal%5D)">Impacts of blood-brain barrier in drug delivery and targeting of brain tumors.</a> Bioimpacts. 2 (1), 5-22 (2012).</li>
<li>Cho, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+blood-brain+barrier+model+for+in+vitro+studies+of+neurovascular+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional blood-brain barrier model for in vitro studies of neurovascular pathology.</a> Sci Rep. 5, (2015).</li>
<li>Barar, J., Rafi, M. A., Pourseif, M. M., Omidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+transport+machineries+and+targeted+therapy+of+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Bioimpacts%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier transport machineries and targeted therapy of brain diseases.</a> Bioimpacts. 6 (4), 225-248 (2016).</li>
<li>Kaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnesium+sulfate+attenuates+increased+blood-brain+barrier+permeability+during+insulin-induced+hypoglycemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Magnesium sulfate attenuates increased blood-brain barrier permeability during insulin-induced hypoglycemia in rats.</a> Can J Physiol Pharmacol. 79 (9), 793-798 (2001).</li>
<li>Pasban, E., Panahpour, H., Vahdati, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+oxygen+therapy+does+not+protect+the+brain+from+vasogenic+edema+following+acute+ischemic+stroke+in+adult+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Early oxygen therapy does not protect the brain from vasogenic edema following acute ischemic stroke in adult male rats.</a> Sci Rep. 7 (1), 3221(2017).</li>
<li>Haghnejad Azar, A., Oryan, S., Bohlooli, S., Panahpour, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-Tocopherol+Reduces+Brain+Edema+and+Protects+Blood-Brain+Barrier+Integrity+following+Focal+Cerebral+Ischemia+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Princ+Pract%22%5BJournal%5D)">Alpha-Tocopherol Reduces Brain Edema and Protects Blood-Brain Barrier Integrity following Focal Cerebral Ischemia in Rats.</a> Med Princ Pract. 26 (1), 17-22 (2017).</li>
<li>Belayev, L., Busto, R., Zhao, W., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+blood-brain+barrier+permeability+following+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of blood-brain barrier permeability following middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Brain Res. 739 (1-2), 88-96 (1996).</li>
<li>Bodsch, W., Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((125I-antibody+autoradiography+and+peptide+fragments+of+albumin+in+cerebral+edema%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">125I-antibody autoradiography and peptide fragments of albumin in cerebral edema.</a> J Neurochem. 41 (1), 239-243 (1983).</li>
<li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+BBB+permeability+after+embolic+stroke+in+rat+using+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+FlowMetab%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of BBB permeability after embolic stroke in rat using MRI.</a> J Cereb Blood FlowMetab. 25 (5), 583-592 (2005).</li>
<li>Uluç, K., Miranpuri, A., Kujoth, G. C., Aktüre, E., Başkaya, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+cerebral+ischemia+model+by+endovascular+suture+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Focal cerebral ischemia model by endovascular suture occlusion of the middle cerebral artery in the rat.</a> J Vis Exp. (48), (2011).</li>
<li>Hungerhuber, E., Zausinger, S., Westermaier, T., Plesnila, N., Schmid-Elsaesser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+bilateral+laser+Doppler+fluxmetry+and+electrophysiological+recording+during+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Simultaneous bilateral laser Doppler fluxmetry and electrophysiological recording during middle cerebral artery occlusion in rats.</a> J Neurosci Methods. 154 (1-2), 109-115 (2006).</li>
<li>Panahpour, H., Nouri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-Ischemic+Treatment+with+candesartan+protect+from+cerebral+ischemic%2Freperfusioninjury+in+normotensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm+Pharm+Sci%22%5BJournal%5D)">Post-Ischemic Treatment with candesartan protect from cerebral ischemic/reperfusioninjury in normotensive rats.</a> Int J Pharm Pharm Sci. 4 (4), 286-289 (2012).</li>
<li>Panahpour, H., Dehghani, G. A., Bohlooli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enalapril+attenuates+ischaemic+brain+oedema+and+protects+the+blood-brain+barrier+in+rats+via+an+anti-oxidant+action%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Pharmacol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Enalapril attenuates ischaemic brain oedema and protects the blood-brain barrier in rats via an anti-oxidant action.</a> Clin Exp Pharmacol Physiol. 41 (3), 220-226 (2014).</li>
<li>Panahpour, H., Nekooeian, A. A., Dehghani, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+Central+Angiotensin+II+AT1+Receptor+Protects+the+Brain+from+Ischemia%2FReperfusion+Injury+in+Normotensive+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Iran+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Blockade of Central Angiotensin II AT1 Receptor Protects the Brain from Ischemia/Reperfusion Injury in Normotensive Rats.</a> Iran J Med Sci. 39 (6), 536-542 (2014).</li>
<li>Panahpour, H., Nekooeian, A. A., Dehghani, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+attenuates+ischemic+brain+edema+and+protects+the+blood-brain+barrier+integrity+from+ischemia%2Freperfusion+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Iran+Biomed+J%22%5BJournal%5D)">Candesartan attenuates ischemic brain edema and protects the blood-brain barrier integrity from ischemia/reperfusion injury in rats.</a> Iran Biomed J. 18 (4), 232-238 (2014).</li>
<li>Kaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+magnesium+sulfate+on+blood-brain+barrier+disruption+caused+by+intracarotid+injection+of+hyperosmolar+mannitol+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+sci%22%5BJournal%5D)">The effects of magnesium sulfate on blood-brain barrier disruption caused by intracarotid injection of hyperosmolar mannitol in rats.</a> Life sci. 76 (2), 201-212 (2004).</li>
<li>Schöller, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+microvascular+basal+lamina+damage+and+blood-brain+barrier+dysfunction+following+subarachnoid+hemorrhage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of microvascular basal lamina damage and blood-brain barrier dysfunction following subarachnoid hemorrhage in rats.</a> Brain Res. 1142, 237-246 (2007).</li>
<li>Bodsch, W., Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((125I-Antibody+Autoradiography+and+Peptide+Fragments+of+Albumin+in+Cerebral+Edema%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">125I-Antibody Autoradiography and Peptide Fragments of Albumin in Cerebral Edema.</a> J Neurochem. 41 (1), 239-243 (1983).</li>
<li>Sandoval, K. E., Witt, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+tight+junction+permeability+and+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier tight junction permeability and ischemic stroke.</a> Neurobiol Dis. 32 (2), 200-219 (2008).</li>
<li>Zhu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Baicalin+reduces+the+permeability+of+the+blood-brain+barrier+during+hypoxia+in+vitro+by+increasing+the+expression+of+tight+junction+proteins+in+brain+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Ethnopharmacol%22%5BJournal%5D)">Baicalin reduces the permeability of the blood-brain barrier during hypoxia in vitro by increasing the expression of tight junction proteins in brain microvascular endothelial cells.</a> J Ethnopharmacol. 141 (2), 714-720 (2012).</li>
<li>Kucuk, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+losartan+on+the+blood-brain+barrier+permeability+in+long-term+nitric+oxide+blockade-induced+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of losartan on the blood-brain barrier permeability in long-term nitric oxide blockade-induced hypertensive rats.</a> Life Sci. 71 (8), 937-946 (2002).</li>
<li>Uyama, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+vascular+permeability+in+the+gerbil+brain+after+transient+ischemia+using+Evans+blue+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of vascular permeability in the gerbil brain after transient ischemia using Evans blue fluorescence.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 8 (2), 282-284 (1988).</li>
<li>Kleinig, T. J., Vink, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+inflammation+in+ischemic+and+hemorrhagic+stroke%3A+therapeutic+options%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Suppression of inflammation in ischemic and hemorrhagic stroke: therapeutic options.</a> Curr Opin Neurol. 22 (3), 294-301 (2009).</li>
<li>Del Zoppo, G. J., Mabuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microvessel+responses+to+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Cerebral microvessel responses to focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 23 (8), 879-894 (2003).</li>
<li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Des+Devel+Ther%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Shin, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+induced+hypertension+improves+blood+flow+and+oxygen+metabolism+in+transient+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).</li>
<li>Bottiger, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cerebral+ischemia+due+to+cardiocirculatory+arrest+in+mice+causes+neuronal+degeneration+and+early+induction+of+transcription+factor+genes+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Mol+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Global cerebral ischemia due to cardiocirculatory arrest in mice causes neuronal degeneration and early induction of transcription factor genes in the hippocampus.</a> Brain Res Mol Brain Res. 65 (2), 135-142 (1999).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

これまで、放射線と放射性トレーサー24,25, 蛍光顕微鏡26,27, EB 血管外漏出テクニック20,の検出などのさまざまな方法23血液脳関門の損傷を評価するために使用されています。EB 色素が強く血清アルブミンと結合することができると血管漏出を検出し、BBB 内訳11,28,29の定量化のトレーサーとして使用されます。承認済みで信頼性の高い方法としては、EB 血管外漏出手法は、虚血性脳卒中を含む脳の別の傷害によって影響を受ける BBB の整合性に直接推定を提供します。
<p class="jo...

血液脳関門 (BBB) 破壊による分子病態脳浮腫には、虚血性脳卒中の重要な合併症と脳卒中患者1,2の生存率の主要な決定要因が残っています。脳毛細血管内皮細胞 (BCECs) によって形成される、異なる神経血管コンポーネント (BCECs、ペリサイト、グリア、および神経細胞3間タイトジャンクショなど) で構成される、血液-脳関門 (BBB) を提供します、中枢神経系 (CNS)、末梢血循環4,5間の専門的かつ動的なインタ フェース。虚血再灌流傷害など侮辱でした BBB の機能の整合性を混乱させるし、最終的に原発性脳腫瘍の怪我や脳の炎症を引き起こす脳実質に白血球の循環のそれに続く侵入につながる6,7. 脳卒中の発生に続く BBB の機能不全の正確な検出には動物モデルが必要です。このようなモデルは、非常に重要な病態生理学的メカニズムの基礎となる、新しい神経保護戦略を導入することを勉強するためです。BBB の細胞培養技術を用いたモデル体外は高い開発し、BBB 生理病理学8,9,10の分子生物学研究に使用されます。それにもかかわらず、生体内で動物モデル、人間の臨床条件に類似の BBB の虚血性損傷を作り出す、この点で非常に価値があるも。エバンス ブルー (EB) の血管外漏出の定量的検出は BBB の整合性と神経変性疾患、虚血性脳卒中11,を含む機能の評価のために使用されているよく受け入れられ、敏感な技術12,13,14します。 この方法は、実験室でコスト効果の高い、可能、再現性のある、完全に該当します。その実装では、放射性トレーサー15や磁気共鳴画像 (MRI)16、他の方法のための前提条件となるなど、高度な機器は必要ありません。この記事で包括的に虚血性脳卒中のモデルラットによる EB 血管外漏出 bbb ランク評価の基本的な技術的なプロセスを示しています。

<table><tbody><tr><td>イソフルラン</td><td>ピラマル</td><td>AWN 34041100</td><td>20 - 25 &deg;C</td></tr><tr><td>2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロリド(TTC)</td><td>モレクラ</td><td>31216368</td><td>4年</td></tr><tr><td>スプレイグ&ndash;ドーリーラット&nbsp;</td><td>パスチャーインスティテュート(イラン、テヘラン)</td><td></td><td>300-350g</td></tr><tr><td>エバンスブルー&nbsp;</td><td>シグマ・アルドリッチ&nbsp;</td><td>314-13-6</td><td></td></tr><tr><td>トリクロロ酢酸&nbsp;</td><td>シグマ・アルドリッチ&nbsp;</td><td>76-03-9</td><td>2年間</td></tr><tr><td>Bupivacaine HCl (0.5%)</td> <td>Delpharm Tours</td><td></td><td>below&nbsp; 25 &deg;C</td></tr><tr><td>ブペルノルフィン</td><td>エクシール (イラン)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>炭酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>497-19-8</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム&nbsp;</td><td>シグマ・アルドリッチ&nbsp;</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>リン酸水素ナトリウム</td><td>EMDミリポア&nbsp;</td><td>231-448-7</td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>&nbsp;7447-40-7</td><td></td></tr><tr><td>エタノール&nbsp;</td><td>シグマ・アルドリッチ&nbsp;</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>シリコーン(キサントプレン)</td><td>ヘレウス</td><td>EN ISO 4823</td><td></td></tr><tr><td>アクティベーター ユニバーサル プラス</td><td>ヘレウス</td><td>66037445</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ解剖鉗子</td><td>ストールティング</td><td>52100-41</td><td></td></tr><tr><td>スプリング シザー</td><td>ストールティング</td><td>52130-00</td><td></td></tr><tr><td>操作&nbsp;はさみ</td><td>Roboz</td><td>52140-70</td><td></td></tr><tr><td>脳マトリックス&nbsp;</td><td>Stoelting</td><td>51390</td><td></td></tr><tr><td>小動物用麻酔器 |</td><td>&nbsp;ケントサイエンティフィック</td><td>SS-01</td><td></td></tr><tr><td>パワーラボシステム</td><td>ADインスツルメンツ</td><td>ML880</td><td></td></tr><tr><td>レーザードップラー流量計</td><td>ADインスツルメンツ</td><td>ML191</td><td></td></tr><tr><td>加熱フィードバックシステム</td><td>ハーバード大学 Appratus</td><td>72-7560</td><td></td></tr><tr><td>血管マイクロクランプ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18055-03</td><td></td></tr><tr><td>シルク5-0縫合糸</td><td>エチコン</td><td>682G</td><td></td></tr><tr><td>エチロン4-0縫合糸&nbsp;</td><td>エチコン</td><td>EH6740G</td><td></td></tr></tbody></table>

虚血性脳卒中のモデルラットの血液脳関門の破壊のin vivo評価

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

虚血性脳卒中は、分子病態脳浮腫、血液脳関門 (BBB) の破壊を介するその後原発性脳損傷につながります。誘発虚血性脳卒中ラットは確立され、BBB の機能の整合性を調査するため生体内でモデルとして使用されます。エバンス ブルー (EB) の虚血性損傷脳のサンプルの吸光光度検出は研究と新規治療戦略の開発のための信頼性の高い正当化を提供すること。このメソッドは、再現性のある結果を生成し、特別な装置を必要としない任意の研究室では、適用。ラットにおける虚血性脳卒中の誘導 EB の血管外漏出の検出に関する可視化および技術的なガイドラインを紹介します。

Sham ラットの左半球と右半球の EB レベルに差はありませんでした (1.06 ± 0.1 μ g/g と 1.1 ± 0.09 μ g/g、それぞれ)。図 2A 2B、一過性虚血の誘導に示すように (90 分虚血/24 h 再灌流) 理事会レベルの差の原因 (10.41 ± 0.84 μ g/g, p &lt; 0.001) と比較して、それぞれの虚血ラットの左半球のsham ラットの半球。総称して、これらの調査結果を示し通常の条件下で EB が脳実質内に BBB を容易に越えることはできません、脳虚血性の侮辱 (2A および 2B の数字) BBB の高められた透磁率による EB の血管外漏出を誘発します。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57156/57156fig1.jp...

この手順の全体的な目標は、虚血性脳卒中のモデルラットの血液脳関門の破壊の生体内評価の再現性の高い技術を提供することです。

虚血性脳卒中のモデルラットの血液脳関門の破壊のIn Vivo評価

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

この手順の全体的な目標は、虚血性脳卒中の反応モデルにおける血液脳関門の破壊をin vivoで評価する再現性の高い方法を提示することです。これは、脳の左側にある中大脳動脈閉塞のための管腔内フィラメントを使用した虚血性脳卒中の誘発によって達成されます。手順の次のステップは、頸静脈外枝のカニューレ挿入と、中大脳動脈閉塞の終わりと再灌流期間の開始時にエバンス ブルー色素を注入することです。24時間後、深い麻酔下で、動物の循環系がエバンスブルーから洗い流され、脳が摘出されます。次に、2つの大脳半球を分離し、均質化して遠心分離し、最終的に組織の上清を使用して、分光光度計でエバンスブルー濃度を測定します。麻酔と流量測定。4%イソフルランを使用して麻酔を誘発し、手術期間中は70%の亜酸化窒素と13%の酸素の混合物でイソフルラン1〜1.5%で維持します。麻酔をかけた動物をフィードバック制御加熱ブランケットの上で腹臥位に置き、この加熱ユニットに接続された直腸プローブを使用して体温を正常な生理学的範囲に維持します。頭蓋骨左側の手術部位を剃り、ガーゼパッドを使用してベタジン溶液を塗布して皮膚を消毒します。70%エタノールを含む滅菌パッドと交換し、両方の手順を3サイクルで繰り返します。左目の外側眼角から左耳の付け根まで伸びる頭蓋骨に1センチメートルの長さの皮膚切開を行い、左側頭筋を解剖して頭蓋骨を露出させます。次に、ドップラー流量計ペンシルプローブの先端を簡単に配置できるように、ブレグマの横方向5ミリメートルと後方1ミリメートルに小さな穴を開けます。ラットを腹臥位から仰臥位に回し、レーザーペンシルプローブを以前に開けた頭蓋骨の穴に入れて、局所的な脳血流を監視します。各動物のベースライン領域脳血流を記録し、それを限局性脳虚血の 100% 誘発と見なします。首の部分を剃り、ベタジン溶液と70%エタノールで皮膚を消毒します。0.2ミリリットルの0.5%ブピバカインを手術部位に注射し、鎮痛剤を投与します。首の腹面に2センチメートルの長さの外科的切開を行い、左総頸動脈にアクセスします。総頸動脈を隣接する筋膜と迷走神経から分離して、外部頸動脈と内部頸動脈の分岐にアクセスします。左総頸動脈または5-0嚢縫合糸を使用して外部頸動脈のいずれかを永久に結紮し、内頸動脈を翼状口蓋動脈のレベルまで解剖します。総頸動脈の周りに5-0嚢縫合糸を緩く配置し、血管マイクロクリップで内部頸動脈を一時的に固定します。前に緩いネクタイをする前に総頸動脈に小さな切開を行い、次に4-0シリコーンコーティングされたナイロン縫合糸を内部頸動脈の管腔に挿入し、総頸動脈の周りの縫合糸を締めてナイロン縫合糸を固定し、血液漏れを防ぎます。血管マイクロクリップを内頸動脈から取り外します。次に、中大脳動脈起始の閉塞を示す局所脳血流の著しい減

an-vivo-assessment-blood-brain-barrier-disruption-rat-model-ischemic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

このビデオは、EAEマウスモデルにおける血液脳関門の破壊を評価する手順を示しています。さまざまなサイズの蛍光色素が眼窩後方向に注入され、脳の血管を循環します。小さい色素は隙間から脳組織に漏れますが、大きい色素は混乱が深刻な場合にのみ入り、バリア損傷の程度と相関します。...

EAEマウスモデルにおける蛍光色素を用いた血液脳関門破壊の決定

このビデオは、中大脳動脈閉塞を受けたラットの脳切片における梗塞帯と脳浮腫の評価を示しています。梗塞領域は酸化還元染色を使用して特定されますが、画像解析ソフトウェアのブルーフィルターと閾値機能により、影響を受けた半球の梗塞領域と浮腫が定量化されます。...

中大脳動脈閉塞後のラット脳の梗塞帯と脳浮腫の測定

出典:Kuts, R. et al.Laser-induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats. J. Vis. Exp.

レーザー誘発脳損傷ラットモデルにおける血液脳関門完全性の評価

血液脳関門の乱れは、脳にある種の薬物の送達を助ける。動脈配信マンニトールは、物理的障壁を破壊するために、血管周囲の細胞を縮小します。...

血液脳関門の破壊のラットモデルは、対象となる神経血管治療を許可する

このプロトコルは、マウスにおける一過性中大脳動脈閉塞後の梗塞容積と血液脳関門の破壊を減少させる反復的な低酸素プレコンディショニング、または全身性低酸素症への短時間の曝露について説明しています。また、脳卒中後の梗塞容積と血液脳関門の破壊の二重定量化についても詳しく説明し、神経血管保護の有効性を評価します。...

マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングと過渡中大脳動脈閉塞後に神経血管保護の定量

本研究では神経変性条件下で血液-脳関門の破壊を評価するための簡単で効率的な手順を提案する.我々 の目的を達成するために我々 は高分子量かにラベル (FITC)...

神経変性疾患のマウスモデルで FITC 標識アルブミンの点滴静注による血液脳関門透過性の評価

血液脳関門の機能障害の動物モデルに適用可能な灌流が続く蛍光トレーサーの腹腔内注入によるマウス脳血管透過性アッセイをご紹介します。1 逸見脳は、透水性の定量的評価と可視化トレーサー/染色の他に使用されます。10 匹のマウスに 5-6...

生体内で血液脳関門透過性アッセイを用いたマウス蛍光トレーサーに分類

このプロトコルは、げっ歯類の脳サンプルの同じセット上の虚血性脳損傷の3つの最も重要なパラメータを測定する新しい技術を記述する。1つの脳サンプルのみを使用することは、倫理的および経済的コストの面で非常に有利である。...

げっ歯類の脳サンプルの単一のセットで脳卒中後脳浮腫、梗塞ゾーンおよび血液脳関門破壊を測定する

血液脳関門(BBB)の破壊による色素の血管外漏出を可視化する方法として、異なる時点のマウスに2種類の蛍光色素を投与することで可視化する方法を開発しました。グリセロールを凍結保護剤として使用すると、同じサンプルでの免疫組織化学が促進されました。...

軽度外傷性脳損傷のマウスモデルにおける血液脳関門破壊の評価

ラット のin vivo モデルは、虚血性脳卒中の病態メカニズムと治療標的を調査するために不可欠なツールです。この研究では、ラットの中大脳動脈閉塞 (MCAO)...

虚血性脳卒中のラットモデルにおける免疫蛍光法による細胞死シグナル伝達の評価

学ぶ虚血性脳卒中ラットモデルにおける血液脳関門破壊のin vivo評価法。エバンスブルー染色を用いて脳血管透過性を定量的に測定し、神経保護治療の開発に貢献する再現性の高い手法です。

虚血性脳卒中のモデルラットの血液脳関門の破壊のIn Vivo評価

さらに動画を探す