Name: ラットモデルにおける部分的な術後後の漏れを減らすために脂肪組織由来幹細胞シートの移植 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: 学ぶ脂肪組織由来幹細胞シートのラット結腸吻合部への移植法。術後吻合部漏れを有意に減少させる効果があり、大腸外科における新たな治療戦略として期待されます。

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著者は、皮下脂肪組織のコレクションの外科の部門のすべての外科医、博士 M.A.M。 Mureau 教授博士 S.E.R. 活発に感謝しています。P. Sukho は、試験の実施中にオランダのフェローシップ プログラム (非営利団体-12/435) からの助成金によってサポートされます。Y. m. Bastiaansen-Jenniskens は、オランダの関節炎財団 (LP11) からの助成金によってサポートされます。

腹部皮下脂肪は医療倫理委員会 (#MEC-2014-092)、エラスムス MC 大学医療センター、ロッテルダム、オランダの承認を得て人間のドナーから得られました。すべての動物実験は、動物実験倫理委員会、エラスムス MC 大学医療センター、ロッテルダム、オランダ (133-14-01) によって承認されました。
1. 人間の Asc の分離と培養
<ol><li>脂肪の 1 グラムの分離培地 3 mL を準備します。ミックス低血糖ダルベッコの変更イーグル培地 (LG DMEM) 10 G/L のウシ血清アルブミン (BSA) と 1 グラム/L のコラゲナーゼ タイプ 1。</li>
	<li>人間の皮下の腹部の脂肪組織を解剖 (n = 8、すべての女性、平均年齢 40 ± 9 歳) 一個 (0.5 cm) の滅菌生物学的 SafetyCabinet の生殖不能外科ブレード サイズ 10、アドソン ブラウン組織鉗子および Metzenbaum はさみを使用してにします。</li>
	<li>切り裂かれたティッシュを滅菌瓶メディア ストレージに格納します。切り裂かれたティッシュの総量の重量を量る、準備された分離培地 (150 ml のボトルあたりの分離媒体の脂肪組織の 50 g) で消化を始めます。プロトコルは、一晩ローラー ミキサーに切り裂かれた脂肪と 4 ° C で分離培地ボトルを格納することによってここで一時停止できます。次の手順を続行する前に 15 分間室温 25 ° C に次の日にボトル、prewarm します。 注: 承認エラスムス MC 医療倫理委員会 (# メック-200) の倫理規定によるとで乳房再建手術を受けるドナーから残り物の材料としてその腹部皮下脂肪の得られた:「適切な二次利用人間の組織」の (< http://www.federa.org>)。残った脂肪はないオプトアウトを二次利用ドナーから使われました。</li>
	<li>シェーカー ・ インキュベータで 150 rpm と 1 h の 37 ° C で滅菌ガラス メディア ストレージ ボトルに切り裂かれた脂肪を消化します。</li>
	<li>50 mL チューブに消化ソリューションを分割し、390 x g で 10 分間のチューブを遠心分離機します。</li>
	<li>培地の準備: 10% 牛胎児血清 (FBS)、50 μ g/mL ゲンタマイシン 1.5 μ G/ml ampothericin B. と LG DMEM</li>
	<li>以下の遠心分離、上澄みを除去し、培養液 (10% 牛胎児血清 (FBS)、50 μ g/mL ゲンタマイシン 1.5 μ G/ml ampothericin B と補われる LG DMEM) 20 mL で細胞ペレットを再懸濁します。390 x g で 5 分間のために再度細胞を遠心し、上清を除去します。</li>
	<li>10 ml の培地 (lg 電子-DMEM 10 %fbs、50 μ g/mL ゲンタマイシン 1.5 μ G/ml ampothericin B) の細胞ペレットを再懸濁し、100 μ m のフィルターを通して細胞懸濁液をフィルターします。</li>
	<li>細胞懸濁液を 50 μ l 添加する (赤血球溶解) の 3% 酢酸/メチレン ブルー溶液 50 μ L を追加、ソリューションをミックス、セルをカウントする 10 μ L を使用します。細胞診断とカウントを実行します。プレート細胞培養培地 (lg 電子-DMEM 30 %fbs、50 μ g/mL ゲンタマイシン 1.5 μ G/ml ampothericin B と) で 40,000 セル/cm2の密度で。</li>
	<li>37 ° c 5% CO2 24 h の湿気のある大気でセルを孵化させなさい。</li>
	<li>アスコルビン酸-2-リン酸 (25 μ g/mL) とひと遺伝子組換え繊維芽細胞成長新鮮なインキュベーション、洗浄暖かい (37 ° C) リン酸の細胞緩衝生理食塩水 (PBS) 細胞の残骸を削除し 10 %fbs 文化メディアとメディアを置き換えると、次追加2 (FGF2、1 ng/mL) を考慮します。</li>
	<li>標準 0.25% トリプシン EDTA 溶液 (T175 フラスコ 3 mL) を使用して 90% 合流でサブカルチャー Asc。3-5 分後、10 ml の培地 (lg 電子-DMEM 10 %fbs、50 μ g/mL ゲンタマイシン 1.5 μ G/ml ampothericin B) の 0.25% トリプシン EDTA 溶液を中和します。 注: の流れ cytometry による一般的な ASC 表面マーカーとトライ系統分化アッセイを以前行ったし、Asc がこの表示プロトコル ASC 特徴21,22を使用してを分離したことを明らかにしました。</li>
	<li>10 ml T175 フラスコ (LG DMEM 添加 10 %fbs、50 μ g/mL ゲンタマイシン 1.5 μ G/ml ampothericin B) 培養液中の細胞を洗うし、遠心分離機 250 x g. 削除で 8 分間細胞の上清 1 ml 培養液中の細胞を再懸濁します。診断とセルをカウントします。</li>
	<li>8,000 セル/cm2の密度で T175 培養フラスコで細胞をプレートします。</li>
	<li>さらに使用する前に培地の 10% ジメチルスルホキシド (DMSO) と液体窒素で残りの Asc を凍結します。</li>
</ol>2. ASC シート準備
<ol><li>FBS、1 mL でプレコート熱応答性培養皿 (直径 3.5 cm)、細胞を播種する前に少なくとも 30 分の 37 ° C でインキュベーター内料理を配置します。</li>
	<li>Asc 標準 0.25% トリプシン EDTA 溶液を用いた 3-5 分 (T175 培養用フラスコの 3 mL) を trypsinize します。Trypsinization 後いずれかの細胞の塊がある場合は、カウントする前に 100 μ m のフィルターを通してセルをフィルターします。</li>
	<li>トリプシン溶液を中和する 10% LG DMEM で FBS (T175 フラスコ 10 mL) と 250 x g に 8 分間遠心する細胞懸濁液上澄みを除去し、10% LG DMEM の 1 mL の細胞を再懸濁します FBS。</li>
	<li>FBS と温度応答性培養皿をコーティングしたインキュベーターから 37 ° c の温暖化のプレートに皿を移動し、お皿から FBS を削除します。</li>
	<li>シード Asc 400,000 セル/cm2 (合計で、3.52 × 106細胞培地皿あたり 2 mL で希釈した)。</li>
	<li>慎重に優しく料理を振ることによって細胞をできるだけ均等に配布します。</li>
	<li>5% CO2と湿気のある大気で 37 ° C で 48 時間培養 ASC シート。 注: は、ASC シート形成を妨げる可能性がありますまたは形成された ASC シートの早期剥離を引き起こす温度低下を防ぐために Asc を播種後インキュベーターのドアを開いて最小化しようと。</li>
</ol>3. 部分的な結腸切除術と大腸吻合
<ol><li>誘導し、雄 Wistar ラット (250-350 g の間の重量を量る) イソフルランの 1 L/分を維持 (1.5-5%)/oxygen 吸入とブプレノルフィン 0.05 mg/kg を筋肉内注入します。</li>
	<li>動物が全身麻酔下で、反射テストを用いた麻酔の深さを評価します。乾燥を防ぐため目にビタミン A 含有の眼軟膏を適用します。麻酔は手術のために十分に考えられている無菌で毛を剃ると、70% エタノールで 2 回外科領域をスプレーで腹部を準備します。滅菌紙カーテン腹部をおいましょう。無菌技術を使用し、全体の手術中に滅菌野を維持します。</li>
	<li>滅菌手術ブレード サイズ 10 で 5 cm の正中線腹部切開を行い Metzenbaum ハサミで切開部を拡張します。識別およびコロンを外在生理食塩水湿らせたガーゼで腹腔内の残りの部分から、コロンをパックします。右、真ん中を特定し、左結腸動脈、腸間膜、ぶっきらぼうホルステッド蚊を使用して各容器の周りを解剖し非吸収性の編みシルク 4/0 各個別容器を縛る。</li>
	<li>結腸盲腸 aborally 1.0 cm と 0.5 cm 尾側腸間膜動脈の間を分離します。Metzenbaum はさみを使用して健康なコロンを縦断面します。結腸切除後 2 つの長い綿棒遠位結腸を通じてトランス肛門し、近位結腸の最後に導入することにより、結腸の近位および遠位端を一緒にもたらします。</li>
	<li>手術顕微鏡を使用して、1 つレイヤー反転 5 縫合 (非吸収性のモノフィラメント ポリアミド 8/0) を使用して縫合で縫合が不十分なエンド ツー エンドの吻合を作成します。コロンの壁のすべての層の縫合を置き、ノット イレウスを配置します。</li>
	<li>ラットを制御または ASC シート グループにランダムに分割します。</li>
</ol>4. ASC シート移植
<ol><li>ASC シートの剥離を容易にする、各種の生体内移植前に 40 分室温に冷却する培養皿を許可します。 注: 剥離後、ASC シートは直径約 2 cm に縮小します。ASC シート生存率は剥離20後少なくとも 3-6 h の高いまま。</li>
	<li>血清 1 ml 無料 LG DMEM 培地を取り外し。</li>
	<li>ゆっくり非外科的鉗子で ASC のシートの縁をつかむと、皿側吻合部のラインの上に ASC シートの。</li>
	<li>慎重に ASC を伸ばしシート約 0.25 cm 非外科的鉗子とコロンのまわりにシートのラップを使用して縫合線の上下です。ラップで、背側 ASC シートまでコロンを持ち上げます。 注: ASC シート付着自発的に吻合部のラインに、組織接着剤を使用する必要があるまたは他の生体材料はありません。コントロール グループは、任意の追加治療を受信しません。</li>
	<li>手袋と楽器を変更したり、綿棒を削除します。腹部にコロンを交換してください。吸収性の縫合糸を使用してを実行している 1 つの層に近い腹部リネア アルバは、ポリグ リコール酸 5/0 を編組。皮下を縫合し、皮膚吸収性の縫合糸を使用してを実行している 1 つの層で一緒に編みポリグ リコール酸 5/0。</li>
</ol>5. 術後評価とフォロー アップ
<ol><li>すぐに 5 mL の温かい生理食塩水の皮下注入と動物を術後水分補給します。体温を維持し、動物が胸骨の横臥を維持するために十分な意識を取り戻すまでバイタル サインを監視するための熱ランプの下で動物を配置します。 注: 手術を受けた動物が他の動物を完全に回復するまでの会社には返されません。回復後、水への無料アクセスと通常ラットの食事を許可します。手術後の痛みを軽減するため 3 日間のすべての 6-8 h 皮下 0.05 mg/kg ブプレノルフィンを管理します。本研究では任意の時に抗生剤を投与しません。</li>
	<li>健康と体重の毎日の臨床評価を取得します。非常に低い健康スコアや重度の体重減少の場合動物は麻酔下にいながら心臓穿刺による急激で安楽死する必要があります。</li>
	<li>術後 3 または日の 7 日目、イソフルランの 1 L/分で再びラットの麻酔 (ブプレノルフィン、なし 1.5-5%)/oxygen 吸入 U 字切開で再手術を行い。腹膜炎、狭窄、線維性の癒着、膿瘍の存在の兆候の腹部をチェックしてください。癒着の重症度をスコアし、腹部、吻合部の地域両方の膿瘍します。</li>
	<li>吻合部を含む、コロンの閉じたセグメント内の空気の吸入による吻合部破裂圧力を決定します。時破裂圧力として最初の空気が漏れる空気の圧力と破裂の場所を記録します。</li>
	<li>各犠牲動物からコロンを削除し、パラフィン埋め込むと 4 μ m 厚いセクションにコロンを切断して次のバッファー 4% ホルムアルデヒド - 大腸吻合を含む - コロンのカットのセグメントを修正します。</li>
	<li>心臓穿刺による急激で吻合セグメントのコレクションの後に直接麻酔中の動物を安楽死させます。呼吸運動、心臓の鼓動の不在と動物の死を確認します。</li>
	<li>ヘマトキシリン ・ エオシンと赤、Picro シリウスなど組織化学的染色を行い、人間のミトコンドリア、ラットの血管内皮細胞 (抗 cd34 陽性) と (CD3 +、CD163 +) 免疫系の細胞に対する抗体で免疫組織化学的染色。</li>
	<li>コンピューター分析のためのスライドをデジタル化し、動物のグループを比較します。</li>
</ol>

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<li>Miyahara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monolayered+mesenchymal+stem+cells+repair+scarred+myocardium+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction.</a> Nat Med. 12 (4), 459-465 (2006).</li>
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</ol>

著者らは、調査した潜在的な利益相反として解釈される可能性が任意の商業や金融関係の不在を宣言します。

縫合は、プライマリ吻合による結腸切除術後最も重篤な有害事象です。吻合部の中断や漏れを防ぐために最適な技術はまだ欠けています。生体材料の配列のローカル アプリケーションはさまざまな結果25,26,27と、実施されています。細胞療法の目的は、組織置換による組織修復やパラクリン分泌を介してローカル癒しの刺激を容易にすることです。
このラットモデルにおける ASC シート移植は技術的に成功しました。臨床的および組織学的評価は、一次吻合による結腸切除後漏れを減らすことで ASC シートの有効性を実証しました。
大腸吻合する ASC シートの移植、大腸手術における新しいアプローチです。今回、初めて、高密度 ASC シートが移植されました。Asc 細胞シートとして配信のための選択は、従来の細胞移植技術細胞シート技術28<...

主な吻合を持つ部分的な結腸切除術は、大腸癌、クローン病、憩室炎1,2など大腸に影響を与える多くの病気のため行うことができます一般的に行わ手術です。大腸吻合は縫合3後、最も恐ろしい合併症です。吻合部リークに関連付けられているいくつかの危険因子が同定されている、不明4、5のまま漏洩防止ソリューションです。
脂肪組織由来の間質細胞 (Asc) は、抗炎症および栄養特性6、7、再生治療8候補者を約束これらの細胞を作るに関連付けられます。心臓の筋肉、皮膚、食道9,10、11,12,13など様々 な組織に組織の治癒を促進するため Asc の有効性を示した。ただし、腸治癒を促進する Asc の使用に関するほとんどのレポートがありません。ASC コーティング biosutures を介して実験的大腸吻合に Asc のローカル移植または Asc の漿膜注射癒しの14のいずれかなしの改善を示した吻合部をより好ましいにもかかわらず縫合を予防しなかった15をの癒し。
懸濁液の Asc のローカル移植併用または生体が不十分なセルの保持または移植細胞11の不十分な分布に関連付けられた可能性があります。細胞シート技術16,17 ASC 配信18,19の革新的な方法を提供しています。したがって、以前の研究では、新しいアプローチは実験的大腸吻合20で適用できるシートのセルで構成されている Asc を提案しました。この研究は、ASC シート移植がラットモデルにおける部分的な術後後大腸吻合の漏れを減らすに成功したことを示した。この記事は、ASC シート準備と外科的移植法を報告します。

<table><tbody><tr><td>LG DMEM</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>22320022</td><td>ASC isolation and culture</td></tr><tr><td>Collagenase type I</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>17100-01</td><td>ASC Isolation</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9418</td><td>ASC Isolation</td></tr><tr><td>Fetal wevine serum</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>10270-106</td><td>FBS, ASC isolation and culture</td></tr><tr><td>3% aceticメチレンブルーの酸</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7060</td><td>ASC Isolation</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>15750-037</td><td>ASC isolation and culture</td></tr><tr><td>Ampothericin B</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>15290-018</td><td>ASC isolation and culture</td></tr><tr><td>Shaker (Gallenkamp Environmental Shaker Model 10X 400)</td> <td>Akribis Scientific</td><td>F240</td><td>ASC Isolation</td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>Hettichlab</td><td>Rotina380</td><td>ASC 分離および培養</td></tr><tr><td>リン酸緩衝液 生理食塩水</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>14190-094</td><td>PBS, ASC 分離および培養</td></tr><tr><td>アスコルビン酸-2-リン酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8960</td><td>ASC 分離および培養</td></tr><tr><td>ヒト組換え線維芽細胞成長因子 2</td><td>AbD セロテック</td><td>AF-100-15</td><td>FGF2, ASC 分離および培養</td></tr><tr><td>トリプシン EDTA</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>25200-056</td><td>ASC 培養</td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650-5x</td><td>DMSO, ASC 凍結</td></tr><tr><td>熱応答性培養皿</td><td>Nunc サーモ科学</td><td>174904</td><td>ASC シートの準備</td></tr><tr><td>非吸収性編組シルク 4/0</td><td>B ブラウン</td><td>21151042</td><td>手術</td></tr><tr><td>非吸収性モノフィラメントポリアミド 8/0</td><td>B ブラウン</td><td>G1118170</td><td>手術</td></tr><tr><td>吸収性編組ポリグリコール酸 5/0</td><td>B ブラウン</td><td>C1048207</td><td>手術</td></tr></tbody></table>

ラットモデルにおける部分的な術後後の漏れを減らすために脂肪組織由来幹細胞シートの移植

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

縫合は、大腸手術後悲惨な合併症です。漏洩防止のための現在の方法は、臨床的有効性の異なるレベルを持って、彼らは今不完全なソリューションまでです。ASC のシートを使用して幹細胞療法は、この問題への解決策を提供できます。Asc は、組織のための栄養と免疫調節特性治癒を促進するために有望な候補者と見なされます。ここでは、漏れを減らすためラットのモデル大腸吻合移植された高密度の ASC シートを生産するためのメソッドを提供します。Asc は、容易に切り離すことができる温度応答性培養皿の細胞シートを形成しました。移植の日、5 縫合大腸吻合による部分的な結腸切除術を行った.動物はラット ASC 1 枚入ですぐに定植。ASC シートは、任意の接着剤、縫合、または任意の生体材料なし吻合に自発的に付着しました。動物のグループが 3 と 7 日を犠牲になった術後。移植した動物に比べると、対照動物の吻合部膿瘍と漏れの発生率は高かった。私たちのモデル大腸吻合後 ASC シートの移植は成功し漏れ率が低いに関連付けられています。

ASC シート文化と結腸切除および吻合術の手順を描いたこの研究の流れは、図 1に示すです。図 2は、ASC シート顕微鏡的形態と中および剥離後 ASC シートの巨視的な外観を示しています。図 3は、ASC シート剥離・移植の別の手順を示します。図 4示します吻合と漏洩防止の ASC シートの存在術後 3 日間。
大腸吻合評価のフォロー アップの期間。異なる評価の数字と表のとおりです。対照群と比較して、移植動物群は、頻繁に吻合部裂開や術後 3 日目に漏れ少なくなり術後 7 日目に頻繁に膿瘍形成を示した。対照群と比較して、移植した動物開発しなかった重要な癒着や狭窄形成。表 1は、移植、移...

準備・ ラットのモデル大腸吻合の縫合が不十分な上に脂肪組織由来幹細胞 (ASC) シートの移植が表示されます。この新しいアプリケーションは、ASC シートが大腸吻合の漏れを減らすことができますを示しています。

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

それらは組織治癒にプラスの効果を仮定しているため、ASCシートは、心筋梗塞などの多くの疾患モデルでテストされています。この実験は、ASCシートが腹腔内で使用でき、腸に適用できることを示しています。ASCシートの主な利点は、合成材料が不要なことです。また、ASCシート移植は比較的簡単に行え、少しの練習で済みます。このASCシート移植の新たな応用は、腸切除後の漏出を防ぐために開発されたものであり、新たな治療戦略の第一歩となるものです。腸管吻合にASCシートを塗布すると、漏出防止に有望であることが示されている。ASCシートは、尿路などの他の腹腔内臓器にも適用できます。まず、サイズ 10 の滅菌外科用ブレード、Adson-Brown 組織鉗子、Metzenbaum はさみを使用して、ヒトの皮下腹部脂肪組織を 0.5 cm の小片に解剖します。滅菌ガラス瓶内の解剖された組織の総量を秤量します。ボトルあたり30mlのアイソレーションメディウムを追加します。そして、解剖した脂肪組織をシェーカーインキュベーターで150rpm、摂氏37度で1時間消化します。1時間後、消化した組織溶液を50mlのチューブに分け、チューブを390Gで10分間遠心分離します。培地を添加して細胞ペレットを再懸濁し、さらに培地を最大45 mLまで加え、結合した細胞を390 Gで5分間遠心分離し、上清を除去します。細胞ペレットを10 mLの培地で再懸濁します。そして、100ミクロンのフィルターで細胞懸濁液をろ過します。50リットルの3%酸性メチレンブルー溶液を50リットルの細胞懸濁液に加え、シラミの赤血球に添加します。溶液を混合した後、10リットルを血球計算盤にピペットで移し、細胞をカウントします。細胞を1平方cmあたり40000細胞の密度で、培地入りのT175フラスコに播種します。そして、細胞を摂氏37度で5%CO2の湿度の高い雰囲気で24時間インキュベートします。翌日、温かいリン酸緩衝生理食塩水で細胞を洗浄し、細胞の破片を取り除きます。次に、培地を10%FBS培地に加えて、新たに添加したアスコルビン酸-2-リン酸とヒト組換え線維芽細胞成長因子2と交換します。細胞が90%のコンフルエントに達するまでインキュベートします。脂肪幹細胞を90%コンフルエンスで、標準的な0.25%トリプシン-EDTA溶液を使用して継代培養します。3〜5分後、0.25%トリプシン-EDTA溶液を10mlの培地で中和します。遠心チューブに移し、細胞を250 Gで8分間遠心分離し、上清を取り除き、細胞を1 mLの培地に再懸濁します。血球計算盤で細胞をカウントした後、T175培養フラスコに細胞を8000細胞/平方cmの密度でプレートします。残りのASCを液体窒素で凍結し、10%ジメチルスルホキシドを培地で使用してからさらに使用します。直径3.5cmの熱応答性培養皿に、1mlのウシ胎児血清をプレコートします。次に、播種する前に、少なくとも30分間、皿を摂氏37度のインキュベーターに入れます。熱応答性皿へのASC接着を補助し、培養中のASCシートの早期剥離のリスクを減らすために、細胞播種前に熱応答性皿をウシ胎児血清でプレコートする必要があります。以前と同様にASCをトリプシンしますが、トリプシン処理後に細胞の塊がある場合は、カウントする前に100ミクロンのフィルターで細胞をろ過します。インキュベーターから皿を取り出し、摂氏37度の温め皿に移します。皿からFBSを取り外します。LG DMEMに細胞ペレットを10%FBSで再懸濁し、細胞をカウントした後、皿ごとに2mlの培養培地で10の6番目のASCsの3.52倍を希釈し、各3.5cm皿に1平方cmあたり400000個の細胞を播種します。皿を静かに振ることにより、細胞をできるだけ均等に慎重に分配します。その後、ASCシートを5%CO2の湿度の高い雰囲気下で37°Cで48時間培養します。移植当日は、in vivo移植の40分前に培養皿を室温まで冷まし、ASCシートの剥離を容易にします。冷却したら、培地を取り出し、1 mLの無血清LG DMEMと交換します。細胞シートを移植するには、非外傷性鉗子でASCシートの端をそっとつかみ、ASCシートの皿側を吻合線の上に置きます。シートの適切な取り扱いと正しいシート配置は、無傷のシート移植を成功させるために不可欠です。ASCシートを吻合線の上下約0.25cmまで慎重に伸ばします。結腸を持ち上げてシートを結腸に巻き付け、ASCシートを背側に巻き付けます。ASCシートを移植しなかった対照動物は、術後3日目に白い矢印で示されているように、吻合線付近で糞便漏出を示します。黒矢印で示されているASCシートを移植した動物は、術後3日目に糞便漏出と膿瘍形成の減少を示しました。手術の7日後にも同様の結果が認められました。この画像は、HおよびEで染色された移植動物の結腸直腸吻合部位の代表的な断面を示しています.シート構造は、術後7日までの吻合部位で識別できます。一度習得すると、このテクニックは適切に実行されれば数分で実行できます。ASCシートは、結腸のゼロセル表面に自発的に接着するため、ASCシートにフィットするために接着剤や縫合糸を使用する必要はありません。このビデオを見た後、結腸部分切除後の漏出を防ぐために、ASCシートをラットの結腸直腸吻合部に移植する方法を十分に理解しているはずです。

transplantation-adipose-tissue-derived-stem-cell-sheet-to-reduce

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

このビデオは、マウスの大動脈周囲弓脂肪組織から蛍光標識された神経堤由来脂肪由来幹細胞(ADSC)を単離および培養する技術を示しています。単離後、NCADSCsを検出し、蛍光活性化細胞ソーティング法を用いて選別した後、プレート上で培養することで細胞増殖を促進します。...

マウス腹膜脂肪組織からの脂肪由来幹細胞の単離

2001年には、UCLAの研究者は、成体幹細胞の集団の単離を説明した脂肪組織から、脂肪由来幹細胞またはASCをと呼ばれる。この記事では、コラゲナーゼを使用して手動、酵素消化プロトコルを使用して脂肪吸引物からASCの分離の概要を説明します。...

人間の脂肪吸引物からの脂肪由来幹細胞を手動で隔離

脂肪由来幹細胞 (Asc) は簡単に隔離され、正常ラットの脂肪から採取しました。ASC...

作成および糖尿病創傷治癒モデルにおける脂肪由来幹細胞 (ASC) シートの移植

この研究は、ブタモデルに拡張された内視鏡的粘膜下層剥離術（ESD）後の食道狭窄予防のためのβシート移植の内視鏡的脂肪組織由来間質細胞（ADSC）の成功した方法を報告します。...

拡張食道内視鏡的粘膜下層切開後に狭窄を防止するためのADSC-シート移植

ここでは、細胞シート技術を用いた生体内で癌モデルを開発するためのプロトコルを提案する.このようなモデルは、抗癌剤治療の評価のため非常に役に立つかもしれない。...

生体内で肝細胞癌の開発の間葉系幹細胞シートの可能性を探る

本稿では、レシピエント動物の間肩甲膜白色脂肪パッドにドナーラット乳腺上皮細胞を移植する移植方法について説明する。この方法は、乳腺上皮発生に対する宿主および/またはドナーの影響を調べるために使用することができ、事前にクリアする必要がなくなり、この技術の有用性を拡張する。...

間肩甲膜白脂肪パッドへのラット乳腺上皮細胞移植

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精巣上体白色脂肪組織を用いた脂肪被覆膵島移植

このプロトコルは、嚢炎のラットモデルを確立するための方法を説明しています。回腸嚢モデルは、マイクロサージェリー技術を使用して回腸嚢-肛門吻合術(IPAA)手術を行うことによって作成されました。手術後、ラットを4%デキストラン硫酸ナトリウム(DSS)で4日間治療しました。...

デキストラン硫酸ナトリウムを用いた直腸結腸切除術および回腸嚢肛門吻合後の嚢炎のラットモデル

ここでは、糖尿病および肥満のBTBRマウスの腎機能を改善しながら、不妊症、肥満、および高血糖を逆転させる有望な戦略を提供する白と褐色の脂肪組織移植プロトコルを紹介します。...

白と褐色の脂肪移植片:黒と黄褐色の短距離(BTBR)肥満マウスにおける生殖、代謝、および腎臓の欠損を矯正するためのアプローチ

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豚脂肪組織から脂肪由来幹細胞および脂肪細胞の効率的な単離

学ぶ脂肪組織由来幹細胞シートのラット結腸吻合部への移植法。術後吻合部漏れを有意に減少させる効果があり、大腸外科における新たな治療戦略として期待されます。

ラットモデルにおける部分的な術後後の漏れを減らすために脂肪組織由来幹細胞シートの移植

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