Name: カルシウム硫酸塩および改良されたウサギ骨感染症モデルにおける自家骨にバンコマイシンによる治療が読み込まれます (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-14T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: 学ぶバンコマイシン負荷カルシウム硫酸塩と自家骨を用いたウサギ骨感染症モデルの構築法。一貫した細菌量を維持し、骨感染症の病態理解と治療戦略の改善に貢献する革新的な動物実験モデルです。

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この作品は、国家自然科学基金、中国の (81803808、81873062)、浙江地方医療と健康科学技術基金 (2017KY271) と科学と浙江省の技術のプロジェクト (2017 37181) によって支えられました。

本研究で使用されるウサギは、ケアと実験動物の使用のためのガイドに従って扱われました。すべての実験手順は、ルールの生命倫理委員会の浙江省アカデミーの伝統中国医学が続いていた。
1. 細菌懸濁液の調製
<ol><li>黄色ブドウ球菌ルリア ベルターニカミラ培養液 0.3 mL と粉末 (ATCC 6538) を凍結乾燥の 0.5 mg を溶解します。完全に懸濁液を混ぜます。</li>
	<li>トリプシン大豆寒天に菌懸濁液を連勝、16 h の 37 ° C で細菌のコロニーを孵化させなさい。</li>
	<li>ユニット (CFU) とトリプシン大豆スープ用 24 時間実行 37 ° C で約 24 時間のサブカルチャー文化を形成単一細菌のコロニーを選択し、取得半ば対数増殖相細菌 16 に 18 h、光学濃度 (OD) 値が 600 で 0.6 nm14。</li>
	<li>遠心管に細菌懸濁液の 1 mL を移します。825 x gと 4 ° C で 5 分間遠心分離し、上澄みを廃棄します。再懸濁します、リン酸緩衝生理食塩水 (PBS); 100 μ L で細菌を洗浄この手順を 3 回繰り返します。最後に、3 ml の PBS の細菌を再懸濁します。</li>
	<li>
15のマクファーランド比濁法を用いた細菌濃度を推定します。
	<ol>
<li>濁度が 0.5 マクファーランド標準と同等になるまで、菌懸濁液の 100 を 500 μ L を比色管に転送します。</li>
		<li>細菌のコンテンツ約 10 に達したとき 0.5 マクファーランドを視覚的に比較して濁度を評価8 CFU/mL。 注:菌懸濁液の量は次のプロトコルのために十分であることを確認します。すべてのウサギの細菌懸濁液の体積は 1 mL 未満です。</li>
	</ol>
</li>
	<li>寒天版の細菌懸濁液 0.2 mL に転送し、均等にそれを適用します。CFU の菌懸濁液を確認する細菌コロニーの 16 h. 数 37 ° C でプレートを孵化させなさい。</li>
</ol>2. 骨感染症モデルの作成
<ol><li>男性ニュージーランド白ウサギ、空気制御条件 (20 ± 1 ° C) および 12/12 h 光暗い照明サイクルの下、個々 のケージで、3 ヶ月熟成をしてください。日常食を提供し、毎日水をタップします。</li>
	<li>ウサギ 3 kg 以上の重量を量ることを手術の時に確認します。</li>
	<li>ペントバルビ タール ナトリウム (体重 100 g あたり 3 mg) と腹腔内投与によるウサギを anaesthetize します。ウサギは麻酔を完全に前足ピンチに応答に失敗したかどうかを確認します。操作の処理中に、オペレーティング テーブルの上ウサギを修正します。 注:確認、モデリング手順期間は 1 h 未満。</li>
	<li>髪の成長の方向に対して電気シェーバーを用いた脛骨近位端領域を剃る。ポビドン ヨード溶液を適用することによって、皮膚を消毒します。</li>
	<li>脛骨とペンと定規で黄色ブドウ球菌(脛骨の上端までの距離が 1.5 cm) 注射用掘削穴の位置の上部端をマークします。掘削穴の位置が脛骨の高原の真ん中に水平を確認してください (図 1A)。</li>
	<li>第 11 メスによる脛骨皮膚を切り取って、骨膜 (図 1B, C) に 1 cm の切開を行います。電気骨ドリル ユニット (図 1D) を使用して脛骨の 2 mm 径の穴をパンチします。</li>
	<li>直径 2 mm と 2 mm の高さ (図 1E) の骨ワックス シリンダーで脛骨高原の直径 2 mm の穴を押してください。脛骨プラトー (図 1F) の水平面に沿って予備骨ワックスを削除します。2 mm の穴が骨ワックス (図 1G) の完全であることを確認します。 注:穴が穴血オーバーフローの有無をチェックすることによって骨ワックスの完全であることを確認します。</li>
	<li>骨膜を縫うし、皮膚縫合糸 (図 1H) を噛むから動物を防ぐために垂直マットレス縫合で縫合手術。</li>
	<li>(図 1の私) 1 mL 無菌インジェクター付き 1 × 108 黄色ブドウ球菌ソリューション (体重 100 g あたり 30 μ L) の CFU/mL を注入します。針骨ワックスを浸透し、ゆっくりと骨髄に黄色ブドウ球菌の溶液を注入していることを確認します。</li>
	<li>モデリング後熱損失を避けるために暖かく、きれいな状態で動物を飼います。呼吸数や心拍数を監視します。起きて家の食料や水への無料アクセスを個々 のケージでウサギを実行します。</li>
</ol>3. 骨感染症モデルの評価
<ol><li>7、14、21、感染後 28 日で頭とフィクサーの外耳ウサギ フィクサーにウサギを配置します。</li>
	<li>
グリチルリチン エチレンジアミン四酸 (EDTA K2) 抗凝固血容器に耳介静脈から血液 2 mL を描画します。血管から血液の容器に 1 ミリリットルの血液を描画します。室温で 651 x gの速度で 10 分間血清を遠心します。
	<ol>
<li>血液の生化学的分析を使用して全血で白血球数 (WBC) を決定し、C-反応性蛋白 (CRP) 酵素免疫測定 (ELISA) 法16。</li>
	</ol>
</li>
	<li>7、14、21、感染後 28 日で体重 100 g あたり 3 mg の用量でペントバルビ タール ナトリウムと 1 つのモデル ウサギを anaesthetize します。第 11 メスによる脛骨皮膚を切り取って、骨膜 (図 2A) に 2 cm の切開を行います。</li>
	<li>ボーン ワックスをきれいに。電気骨ドリル ユニット (図 2B) を使用して 2 つの隣接する 4.8 mm 径の穴を打つことによって壊死した骨を苔します。骨髄壊死および骨スプーン (図 2C) を使用して肉芽組織を苔します。 注:骨、骨髄内の残りを避けるためにデブリドマン中骨をきれいに。</li>
	<li>2 つの穴 (図 2D) 間の骨組織をこすり清潔。</li>
	<li>羊血液寒天培地プレートに骨髄の 1 mL を広めます。37 ° C で一晩版を孵化させなさい30-300 のコロニーのプレートを選択し、コロニーの数を計算します。</li>
	<li>感染後 28 日目の終わりには、膝と足首の関節の端に沿って脛骨標本を抽出します。24 時間 Decalcify の 4% パラホルムアルデヒドで脛骨標本脛骨標本の修正 10% EDTA 8 週間。</li>
	<li>エタノールの希釈の一連の階級における脛骨標本を脱水し、埋め込むパラフィン ワックス。コロナの平面から 4 連続 5 μ m 部分をカットします。ヘマトキシリンとエオシン (H & E) 染色キットのセクションを染色します。</li>
	<li>ステンド グラスのセクションを表示するのには顕微鏡を使用して、レコードが標準ソフトウェアとともに光の画像を送信しました。</li>
</ol>4. VCS ビーズの作製
<ol><li>医療グレード カルシウム硫酸塩、9.5 g にバンコマイシン塩酸塩粉末 1 g を追加し、混合の電源に通常生理食塩水 3 mL を追加します。ミックスに徹底的にへらで 30 に 45 s。</li>
	<li>柔軟なシリカゲル型 (直径 4.8 mm、高さ 4.8 mm のシリンダー) に混合製品を置き、15 分は、金型を曲げる VCS ビーズを削除するために室温で乾燥します。</li>
</ol>5. 抗生物質治療と自家骨移植
<ol><li>感染後 28 日目体重 100 g あたり 3 mg の用量でペントバルビ タール ナトリウム モデル家兎を anaesthetize します。電気シェーバーを用いた脛骨近位端領域を剃る。ポビドン ヨード溶液を適用することによって、皮膚を消毒します。 注:モデリング手順が 1 h 未満であることを確認します。</li>
	<li>電気シェーバーを使って尻尾領域を剃るし、ポビドン ヨード溶液を適用することによって尾を消毒します。</li>
	<li>手術用のはさみを使って尻尾を削減します。第 11 メスによる尾の皮膚を切り取って、尾の骨を明らかにします。吸収性縫合縫合糸を噛むから動物を防ぐために垂直マットレス縫合と尾地域で皮膚を縫います。</li>
	<li>すべての筋肉、軟部組織、骨膜を削除します。各関節に尾の骨を切断し、骨片を滅菌生理食塩水を含む 100 mm プラスチックの皿に転送します。</li>
	<li>ピンセット (図 2E) を用いた骨髄腔にインプラントの VCS ビーズ (直径 4.8 mm と 4.8 mm の高さ、ビードの部分あたり 1.25 mg バンコマイシンのシリンダー) の 4 個セット。</li>
	<li>骨欠損部を埋める自家骨を 8 個とピンセット (図 2E) を曲線 (直径 2 mm、高さ 4 mm の各部分ごとのシリンダー) を使用しています。</li>
	<li>骨膜を縫うし、マットレス縫合方法 (図 2F) で吸収性縫合と皮膚します。 注:手術中に 25 ° c の温度を保ちます。</li>
	<li>手術後熱損失を避けるために暖かく、きれいな状態で動物を飼います。呼吸数や心拍数を監視します。起きて家の食料や水への無料アクセスを個々 のケージでウサギを実行します。</li>
</ol>6. 抗菌活性の評価
<ol><li>ウサギ フィクサーにウサギを入れて、治療後 2、4、6、8 週間で頭と耳、フィクサーの外に配置。</li>
	<li>EDTA K2 抗凝固血管の耳介静脈から血液を描画します。血管から血液の容器に 1 ミリリットルの血液を描画します。室温で 651 x gの速度で 10 分間血清を遠心します。</li>
	<li>ELISA 法16血液生化学分析装置、および C 反応性蛋白 (CRP) を用いた全血で白血球数 (WBC) を決定します。</li>
</ol>7. 骨再生の評価
<ol><li>注入することによってウサギを安楽死させる治療後 8 〜 12 週間の終わりにネンブタールの投与量。</li>
	<li>膝と足首の関節の端に沿って、脛骨の標本を抽出します。筋肉や筋膜層を苔します。</li>
	<li>マイクロ コンピューター断層撮影 (マイクロ CT) を使用して脛骨の構造を分析します。オーバル形のエリア 4.8 φ と 9.6 をミリメートル長い利益 (率 ROI) の領域として選択します。ビットマップ データを用いた 3 D モデル画像を再構築します。</li>
	<li>骨量/組織ボリューム (BV/TV)、骨梁の厚さ (Tb.Th) の比率のスコアを選択による骨梁数 (Tb.N) と骨梁間隔 (Tb.Sp)from the3D モデル骨再生を評価します。</li>
</ol>

<ol><li>Malizos, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Forum%3A+The+Burden+of+Bone+and+Joint+Infection%3A+A+Growing+Demand+for+More+Resources%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Joint+Surgery-American+Volume%22%5BJournal%5D)">Global Forum: The Burden of Bone and Joint Infection: A Growing Demand for More Resources.</a> Journal of Bone and Joint Surgery-American Volume. 99, 20(2017).</li>
<li>Peeters, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Teicoplanin+-+based+antimicrobial+therapy+in+Staphylococcus+aureus+bone+and+joint+infection%3A+tolerance%2C+efficacy+and+experience+with+subcutaneous+administration%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Teicoplanin - based antimicrobial therapy in Staphylococcus aureus bone and joint infection: tolerance, efficacy and experience with subcutaneous administration.</a> BMC Infectious Diseases. 16, 622(2016).</li>
<li>Sugaya, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Percutaneous+autologous+concentrated+bone+marrow+grafting+in+the+treatment+for+nonunion%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Orthopeadic+Surgery+and+Traumatology%22%5BJournal%5D)">Percutaneous autologous concentrated bone marrow grafting in the treatment for nonunion.</a> European Journal of Orthopeadic Surgery and Traumatology. 24, 671-678 (2014).</li>
<li>Birt, M. C., Anderson, D. W., Bruce, T. E., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteomyelitis%3A+Recent+advances+in+pathophysiology+and+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopeadics%22%5BJournal%5D)">Osteomyelitis: Recent advances in pathophysiology and therapeutic strategies.</a> Journal of Orthopeadics. 14, 45-52 (2017).</li>
<li>Walter, G., Kemmerer, M., Kappler, C., Hoffmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+algorithms+for+chronic+osteomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Deutsches+Arzteblatt+International%22%5BJournal%5D)">Treatment algorithms for chronic osteomyelitis.</a> Deutsches Arzteblatt International. 109, 257-264 (2012).</li>
<li>Henriksen, K., Neutzsky-Wulff, A. V., Bonewald, L. F., Karsdal, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+communication+on+and+within+bone+controls+bone+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Local communication on and within bone controls bone remodeling.</a> Bone. 44, 1026-1033 (2009).</li>
<li>Mendoza, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+vancomycin+powder+on+bone+healing+in+a+rat+spinal+rhBMP-2+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery+Spine%22%5BJournal%5D)">The effect of vancomycin powder on bone healing in a rat spinal rhBMP-2 model.</a> Journal of Neurosurgery Spine. 25, 147-153 (2016).</li>
<li>Cohn Yakubovich, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computed+Tomography+and+Optical+Imaging+of+Osteogenesis-angiogenesis+Coupling+to+Assess+Integration+of+Cranial+Bone+Autografts+and+Allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Computed Tomography and Optical Imaging of Osteogenesis-angiogenesis Coupling to Assess Integration of Cranial Bone Autografts and Allografts.</a> Journal of Visualized Experiments. (106), e53459(2015).</li>
<li>Brecevich, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+Comparison+of+Accell+Evo3+and+Grafton+Demineralized+Bone+Matrix+Putties+against+Autologous+Bone+in+a+Rat+Posterolateral+Spine+Fusion+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Spine+Journal%22%5BJournal%5D)">Efficacy Comparison of Accell Evo3 and Grafton Demineralized Bone Matrix Putties against Autologous Bone in a Rat Posterolateral Spine Fusion Model.</a> Spine Journal. 17, 855-862 (2017).</li>
<li>Jensen, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+porcine+model+of+implant-associated+osteomyelitis%3A+A+comprehensive+analysis+of+local%2C+regional%2C+and+systemic+response%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopeadic+Research%22%5BJournal%5D)">Novel porcine model of implant-associated osteomyelitis: A comprehensive analysis of local, regional, and systemic response.</a> Journal of Orthopeadic Research. 35, 2211-2221 (2016).</li>
<li>de Mesy Bentley, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+Staphylococcus+Aureus+Deformation%2C+Proliferation%2C+and+Migration+in+Canaliculi+of+Live+Cortical+Bone+in+Murine+Models+of+Osteomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Evidence of Staphylococcus Aureus Deformation, Proliferation, and Migration in Canaliculi of Live Cortical Bone in Murine Models of Osteomyelitis.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 32, 985-990 (2017).</li>
<li>Norden, C. W., Kennedy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+osteomyelitis.+I%3A+A+description+of+the+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Experimental osteomyelitis. I: A description of the model.</a> Journal of Infectious Diseases. 122, 410-418 (1970).</li>
<li>Mistry, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel%2C+multi-barrier%2C+drug+eluting+calcium+sulfate%2Fbiphasic+calcium+phosphate+biodegradable+composite+bone+cement+for+treatment+of+experimental+MRSA+osteomyelitis+in+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">A novel, multi-barrier, drug eluting calcium sulfate/biphasic calcium phosphate biodegradable composite bone cement for treatment of experimental MRSA osteomyelitis in rabbit model.</a> Journal of Controlled Release. 239, 169-181 (2016).</li>
<li>Bernthal, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+In+vivo+Optical+and+%C2%B5CT+Imaging+to+Monitor+Infection%2C+Inflammation%2C+and+Bone+Anatomy+in+an+Orthopaedic+Implant+Infection+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Combined In vivo Optical and µCT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e51612(2014).</li>
<li>Koeth, L. M., DiFranco-Fisher, J. M., McCurdy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Reference+Broth+Microdilution+Method+for+Dalbavancin+In+Vitro+Susceptibility+Testing+of+Bacteria+that+Grow+Aerobically%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically.</a> Journal of Visualized Experiments. (103), e53028(2015).</li>
<li>Uttra, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ephedra+gerardiana+aqueous+ethanolic+extract+and+fractions+attenuate+Freund+Complete+Adjuvant+induced+arthritis+in+Sprague+Dawley+rats+by+downregulating+PGE2%2C+COX2%2C+IL-1%CE%B2%2C+IL-6%2C+TNF-%CE%B1%2C+NF-kB+and+upregulating+IL-4+and+IL-10%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Ephedra gerardiana aqueous ethanolic extract and fractions attenuate Freund Complete Adjuvant induced arthritis in Sprague Dawley rats by downregulating PGE2, COX2, IL-1β, IL-6, TNF-α, NF-kB and upregulating IL-4 and IL-10.</a> Journal of Ethnopharmacology. 224, 482-496 (2018).</li>
<li>Harrasser, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+implant-related+osteomyelitis+in+the+metaphysis+of+rat+tibiae%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Musculoskeletal+Disorders%22%5BJournal%5D)">A new model of implant-related osteomyelitis in the metaphysis of rat tibiae.</a> BMC Musculoskeletal Disorders. 17, 152(2016).</li>
<li>Abedon, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Commentary%3A+Phage+Therapy+of+Staphylococcal+Chronic+Osteomyelitis+in+Experimental+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Commentary: Phage Therapy of Staphylococcal Chronic Osteomyelitis in Experimental Animal Model.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1251(2016).</li>
<li>Tan, H. L., Ao, H. Y., Ma, R., Lin, W. T., Tang, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+effect+of+quaternized+chitosan-loaded+polymethylmethacrylate+bone+cement+on+methicillin-resistant+Staphylococcus+epidermidis+infection+of+the+tibial+metaphysis+in+a+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">In vivo effect of quaternized chitosan-loaded polymethylmethacrylate bone cement on methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis infection of the tibial metaphysis in a rabbit model.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58, 6016-6023 (2014).</li>
<li>Chiara, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Osteomyelitis+in+the+Diabetic+Foot+by+Imaging+Techniques%3A+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis+Comparing+MRI%2C+White+Blood+Cell+Scintigraphy%2C+and+FDG-PET%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Detection of Osteomyelitis in the Diabetic Foot by Imaging Techniques: A Systematic Review and Meta-analysis Comparing MRI, White Blood Cell Scintigraphy, and FDG-PET.</a> Diabetes Care. 40, 1111-1120 (2017).</li>
<li>Khalid, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Raman+Spectroscopy+detects+changes+in+Bone+Mineral+Quality+and+Collagen+Cross-linkage+in+Staphylococcus+Infected+Human+Bone%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Raman Spectroscopy detects changes in Bone Mineral Quality and Collagen Cross-linkage in Staphylococcus Infected Human Bone.</a> Scientific Reports. 8, 9417(2018).</li>
<li>Putters, T. F., Schortinghuis, J., Vissink, A., Raghoebar, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+study+on+the+morbidity+resulting+from+calvarial+bone+harvesting+for+intraoral+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oral+and+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">A prospective study on the morbidity resulting from calvarial bone harvesting for intraoral reconstruction.</a> International Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 44, 513-517 (2015).</li>
<li>Yin, J., Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Completely+resorption+of+autologous+skull+flap+after+orthotopic+transplantation%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Clinical+and+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">Completely resorption of autologous skull flap after orthotopic transplantation: a case report.</a> International Journal of Clinical and Experimental Medicine. 7, 1169-1171 (2014).</li>
<li>Takehiko, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+results+of+managing+large+medial+tibial+defects+in+primary+total+arthroplasty%3A+autogenous+morcellised+bone+graft%5BTitle%5D)+AND+%22International+Orthopaedics%22%5BJournal%5D)">Preliminary results of managing large medial tibial defects in primary total arthroplasty: autogenous morcellised bone graft.</a> International Orthopaedics. 41, 931-937 (2017).</li>
</ol>

この仕事で利害の衝突を報告なし。

両方の急性および慢性の骨感染症; を勉強する建設された各種動物モデルの以前の研究でただし、理想的なモデルの検索はまだ17,18が保持されます。さらに、低コストで実施しやすいまま、モデル期間中の臨床場面における骨感染症の病理組織学的特性をシミュレートする理想的な骨感染症モデルは期待されます。これまでのところ、家兎骨感染症モデルは、ウサギが利用可能な安価な炎症性骨疾患研究で最も一般的なモデルです。私たちの以前の研究では、さまざまな体の重みを持つウサギの感染率と死亡率を比較しました。その結果、体重が 3 kg を超えるをする必要があります。そうではなければ、高い死亡率または haematosepsis と高い死亡率の発生率が高い手術後。
以前の研究とは異なりウサギ骨感染症モデルと私たちの研究では抗生物質による治療は、人間の病気や外科的療法の病理組織学的特徴と一貫性が。ナトリウム morrhuate と黄色ブドウ球菌と注入される動物の以前の研究では、60 ...

通常骨感染症細菌または他の微生物侵入外傷、骨折、その他骨疾患1以降後に起因します。骨感染症は、炎症や骨のティッシュの破壊の高レベルを引き起こす可能性があります。クリニックで黄色ブドウ球菌(ブドウ球菌)、骨感染症2,3の優勢な原因となるエージェントです。骨感染症、痛み、衰弱、頻繁に4の治療が非常に困難である慢性の経過を取る。現時点では、壊死組織のデブリドマンとバンコマイシン ロード カルシウム (VCS) ビードの注入は局所感染症5,6を制御するための効率的な戦略として確認されています。ただし、患者の 10% から 15% は、抗感染症治療7後長期にわたる骨修復処理、遅延連合または非組合員を経験しました。骨欠損の大きい区分は、整形外科医にとって最も困難な問題です。自家骨移植は、骨癒合治療8,9の最適な骨交換と見なされます。
日付、骨に関する研究のほとんどに感染症や自家骨移植を動物モデル、ネズミ、ウサギ、犬、豚、羊10,11などの様々 な種類で行われています。ウサギ モデルが一般的な骨感染症研究として最初ノルデンとケネディによって 1970年12,13で実行されます。以前の研究では、ノルデンのメソッドに続く家兎モデルを使用して、細菌ソリューション オーバーフローにつながって骨髄から血液の漏れとして、黄色ブドウ球菌骨髄注入量が正確に定量化していないとわかった。
家兎骨感染症を誘発する手術法の改良を提案する.骨感染症モデルを確認するは、プロシージャの終わりには、血液生化学検査、細菌学的検査、病理組織学的検討を行った。VCS は、感染を抑制する移植されたし、自家骨は、骨の再生を促進するために移植されました。

<table><tbody><tr><td>吸収性外科縫合</td>糸 <td>Jinghuan</td><td>18S0604A</td><td></td></tr><tr><td>無菌注射器</td><td>Jinglong</td><td>20170501</td><td></td></tr><tr><td>骨ワックス</td><td>ETHICON</td><td>JH5CQLM</td><td></td></tr><tr><td>CCD カメラ</td><td>オリンパス</td><td>DP72</td><td></td></tr><tr><td>EDTA-K2 抗凝固剤</td><td>血管 XINGE</td><td>20170802</td><td></td></tr><tr><td>電動骨ドリルユニット</td><td>バオ・カン</td><td>BKZ-1</td><td></td></tr><tr><td>電気シェーバー</td><td>Codos</td><td>3800</td><td></td></tr><tr><td>軟質シリカゲルモールド&nbsp;</td><td>WRIGHT</td><td>1527745</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin and Eosin Staining Kit</td><td>Beyotime</td><td>20170523</td><td></td></tr><tr><td>Luria-Bertani culture medium</td><td>Baisi Biothchnology</td><td>20170306</td><td></td></tr><tr><td>医療グレードの硫酸カルシウム</td><td>WRIGHT</td><td>1527745</td><td></td></tr><tr><td>マイクロコンピュータ断層撮影法(マイクロCT)</td><td>Bruker</td><td>SkyScan 1172&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>CX41</td><td></td></tr><tr><td>ニュージーランド白ウサギ</td><td>浙江実験動物センター&nbsp;</td><td>SCXK 2014-0047</td><td></td></tr><tr><td>No.11メス&nbsp;</td><td>Yuanlikang</td><td>20170604</td><td></td></tr><tr><td>正常生理食塩水</td><td>Mingsheng</td><td>20170903</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>TBD(Jingyi)</td><td>20170703-0592</td><td></td></tr><tr><td>ペントバルビタールナトリウム</td><td>Merk</td><td>2070124</td><td></td></tr><tr><td>povidone-iodinesolution</td><td>Lierkang</td><td>20170114</td><td></td></tr><tr><td>S. aureus 凍結乾燥粉末</td><td>中国一般微生物カルチャーコレクション</td><td>センターATCC 6538</td><td></td></tr>羊<tr><td>血液寒天</td><td>HuanKai</td>微生物<td>3103210</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン大豆寒天プレート</td><td>HuanKai微生物</td><td>3105697</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン大豆スープチューブ</td><td>HuanKai</td>微生物<td>3104260</td><td></td></tr><tr><td>バンコマイシン</td><td>リリー</td><td>C599180</td><td></td></tr></tbody></table>

カルシウム硫酸塩および改良されたウサギ骨感染症モデルにおける自家骨にバンコマイシンによる治療が読み込まれます

Treatment with Vancomycin Loaded Calcium Sulphate and Autogenous Bone in an Improved Rabbit Model of Bone Infection

骨感染症に起因する細菌の侵入、臨床整形外科、外傷外科治療が非常に困難であります。持続的な炎症、骨髄炎、および最終的な骨癒合骨感染可能性があります。可能で、再現可能な動物モデルの確立は、骨の感染症研究と抗生物質による治療が重要です。インビボ モデルとして家兎モデル広く骨感染症研究に使用されます。ただし、ウサギに関する先行研究は細菌の量は変数として、感染状態が一貫性のある、感染症モデルを骨します。本稿では, 骨髄に細菌をブロックすることによって、ウサギの骨感染症を誘発する手術法の改善。それから、多段階評価はモデリング方法を確認する遂行することができます。
一般に、こそぎとって壊死とバンコマイシン ロード カルシウム硫酸塩 (VCS) の注入抗生物質治療で優勢であります。VCS で硫酸カルシウムの利点クロール骨と新しい骨成長、こそぎとって後大規模な骨欠損が発生します。自家骨 (AB) は、壊死骨をこそぎとって後大規模な骨欠損の治療のための骨欠損を克服するために魅力的な戦略です。
本研究では骨欠損部に注入した自家骨と尾の骨を使用しました。骨修復は、動物の犠牲の後マイクロ計算トモグラフィー (マイクロ CT) と組織学的解析を用いて測定しました。その結果、VCS グループ骨癒合は、一貫して得られました。対照的に、VCS AB グループ内の骨欠損区域は有意に減少。現在のモデリング手法は、骨感染症モデルを準備する再現性のある、実行可能な安定した方法を説明します。VCS AB 治療は抗生物質による治療後に骨癒合率が低い結果になった改善された骨感染症モデルとベンチャー ・ キャピタルや自家骨の組み合わせ治療は外傷整形外科用アプリケーションに関連する骨の感染症や骨の再生のメカニズムを勉強に役立つかもしれない。

骨感染症モデルの評価 黄色ブドウ球菌の感染後ウサギの病的な症状の診療所で慢性骨髄炎の代表的な症状と類似していた。私たちの研究では 30 ウサギが感染しており、モデル グループとして受けるし、10 ウサギ制御動物として受けた。すべてのモデルのウサギは、副鼻腔 (図 3A) からフローを白と黄色の膿と、脛骨のローカル サイトの副鼻腔を感染しています。H &amp; E 染色の結果は、モデル グループで死んだ骨の周り細菌の集合体があることを示し正常骨を識別できません。CRP と WBC のレベルは、コントロール群 (図 3B) よりモデル グループで高くなっています。壊死骨髄 lysates は寒天は、感染症 (図 3C) 後のモデル グループ...

本稿では改良されたウサギ骨髄で細菌の同じ量をブロックすることによって黄色ブドウ球菌に感染しているモデル。読み込まれるバンコマイシン カルシウム硫酸塩および自家骨は、抗生物質と骨の修復治療に使用されます。プロトコルは、骨感染症、再生を勉強のために有用かもしれない。

Bone infection results from bacterial invasion, which is extremely difficult to treat in clinical, orthopedic, and traumatic surgery. The bone infection ...

骨感染研究には、生産可能な動物モデルが非常に重要です。しかし、現在、感染状態と細菌の数が一貫しているウサギモデルはありません。私たちの骨感染ウサギモデルは、一貫した細菌を使用し、バンコマイシンを搭載した硫酸カルシウムおよび自己原性断片によって治療されます。この技術は、骨感染および骨非組合療法の診断に向けて、および骨感染の病因を理解する上で拡張することができる。この方法は、ラット、マウス、およびブタの他の骨感染モデルに関する洞察を提供する可能性があります。同じ量の細菌懸濁液を骨髄に積み込むのは難しい。視覚的なデモンストレーションは、研究者が重要なステップを簡単かつ正確に実行するのに役立ちます。細菌懸濁液を調製するために、まず0.3ミリリットルのLB培養培地でS.aureus凍結乾燥粉末の0.5ミリグラムを溶解する。懸濁液を十分に混ぜ、細菌をトリプティック大豆寒天プレートにストリークし、摂氏37度で16時間インキュベーションします。翌朝、摂氏37度で24時間トリプティック大豆スープチューブの培養用単一の細菌コロニー形成ユニットを選びます。細菌が中対数増殖期にある場合は、1ミリリットルの細菌を1.5ミリリットルのチューブに移し、遠心分離によって細菌を採取する。次いで、細菌細胞ペレットを1回の洗浄につき100マイクロリットルのPBSで3回洗浄し、最終洗浄後に細菌を3ミリリットルの新鮮なPBSで再懸濁する。骨感染型を設定するには、生後3ヶ月の雄ニュージーランド白ウサギの足ピンチに対する応答の欠如を確認し、電気剃毛器を使用して毛髪の成長方向に対して近位脛骨領域から毛髪を取り除きます。露出した皮膚をポビドーネ溶液で消毒し、ペンと定規を使用して脛球の上端とS.Aureus注入のための掘削穴位置をマークし、掘削穴位置が脛体台の水平真ん中にあるのに注意してください。次に、数11メスを使用して皮膚を切開し、続いて腹骨に1センチメートルの切開を行います。電気骨ドリルユニットを使用して、脛骨に直径2ミリメートルの穴を開け、2ミリメートルの直径2ミリメートルの長い骨ワックスで穴を押します。脛骨高原の水平面に沿って予備の骨ワックスを取り除き、穴が骨ワックスでいっぱいであることを確認します。その後、吸収可能な外科縫合糸を使用して、垂直マットレス縫合糸で骨膜と皮膚を縫い上げ、動物がステッチを噛むのを防ぎます。そして、1ミリリットルの敗血症注入器を使用して、S.Aureus溶液のミリリットル当たり8つのコロニー形成単位をドリルホールにゆっくりと10回注入します。注射後7日目、14日目、21日目、28日目に、感染したウサギを頭と耳を持つウサギの拘束剤に拘束剤を入れ、白血球およびC反応性タンパク質分析のために耳介静脈から血液サンプルを採取する。麻酔後、数11メスを使用してセンチメートル脛骨皮膚および腹膜切開を行い、骨ワックスをきれいにします。次に、電気骨ドリルユニットを使用して、隣接する直径4.8ミリメートルの穴を2つパンチして壊死した骨を脱花させ、骨スプーンを使用して壊死性骨髄および造粒組織を脱花する。その後、2つの穴の間の骨組織を削ってきれいにし、残骸骨髄の1ミリリットルを羊の血液寒天プレートに広げ、摂氏37度で一晩インキュベーションする。翌朝、30〜300コロニーのプレートを選択し、感染した動物1匹あたりのコロニー形成ユニットの数を計算する。感染後28日目に、バンコマイシン塩酸塩粉末1グラムを9.5グラムの医療グレード硫酸カルシウムに加え、ヘラを使用して3ミリリットルの正常生理食塩水で30〜45秒間攪拌する。混合生成物を柔軟なシリカゲル型に加え、室温で15分間乾燥させます。次いで、バンコマイシンを硫酸カルシウム、またはVCSビーズを除去するために金型をフレックスする。抗生物質治療および自生骨の移植のために、まず、尾部を剃る前に、負傷した脛骨を再び露出させ、露出した尾部皮をポビドーネ溶液で消毒する。手術用はさみを使用して尾を切り倒し、吸収可能な外科縫合糸を使用して垂直マットレス縫合糸で皮膚を閉じ、動物がステッチを噛むのを防ぎます。尾の骨を明らかにするために尾の皮をカットするために数11メスを使用してください。筋肉、軟部組織、骨膜を取り除き、各関節で尾骨を取り外します。骨片を滅菌生理食糸を含む100ミリメートルのプラスチック皿に移します。次に、湾曲したはさみを使用して、VCSビーズの4つの部分を脛骨骨髄腔に埋め込み、湾曲した鉗子を使用して骨の欠陥を8個の自己生状尾骨片で満たします。次に、マットレス縫合の方法で吸収可能な外科縫合糸で骨膜および皮膚切開部を閉じる。C反応性タンパク質および白血球レベルは、対照動物よりも骨感染モデル群において高い。VCSまたはVCSの自己異性骨治療の2、4、6、および8週間後に、C反応性タンパク質および白血球レベルが有意に低下する。2次元再構成画像は、VCSまたはVCSおよび自己生骨による治療後12週間の間に骨容積の進行的な増加を示し、骨損失は未治療の骨感染モデル群において有意である。骨再生定量インデックスを解析するために、ビットマップデータを使用して3Dモデル画像を再構築し、各ボーンで目的の楕円領域を9.6ミリメートル長さ楕円の楕円領域で選択することができます。未治療の骨感染モデル群における骨容積と組織容積の比は、VCSおよびVCS自在骨群で測定されたものよりも有意に低い。VCS自己属骨群の骨柱数と厚さのスコアは、未治療の骨感染モデルおよびVCS動物の中のトラベクトラ数および厚さのスコアよりも有意に高い。さらに、VCS自己異性骨群における骨膜分離スコアは、未治療の骨感染モデルおよびVCS群で測定されたものよりも著しく低い。適当な体重のウサギを選びに行くように注意してください。骨ワックスでブドウ球菌溶液をブロックします。壊死性骨を完全にデブライドし、直径4.8ミリメートルの2つの隣接する穴をパンチします。手順に従って、超音波、放射線学およびコンピュータ断層撮影などの他の診断尺度法は、骨感染および修復の病理学的プロセスを監視するために行うことができる。この改善された骨感染モデルとVCSと自己生骨治療の組み合わせは、骨感染と骨再生の下線メカニズムを研究するのに役立つ可能性があります。黄色ブドウ球菌凍結乾燥粉末は危険であるため、細菌懸濁液は常に単離された細菌検査室で調製する必要があります。

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Medicine

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ウサギモデルにおける軟骨欠陥の改造と修理のためのマトリックス支援自家軟骨細胞移植

ウサギの膝関節における骨軟骨欠損の治療のための実験技術が記載されている。骨軟骨欠損に同種間葉系幹細胞の移植は、組織工学の分野で有望な開発を提供しています。フィブリン細胞塊の準備...

フィブリン塊における同種間葉系幹細胞の注入によってウサギの膝関節における骨軟骨欠損の治療

このビデオでは、関心のある骨サンプル置換材料の骨再生能力を評価するためのウサギの頭蓋骨モデルを生成する外科的手順について説明します。...

ウサギの頭蓋骨欠損モデルの生成:骨再生能力の骨代替材料を評価するために、ウサギの頭蓋骨の上部に丸い欠損を作成する外科的処置

このビデオでは、細菌の漏れを防ぐために骨ワックスを使用してウサギの骨髄に細菌感染を外科的に誘発する技術について説明しています。このウサギモデルは、骨感染症の治療や骨の再生の研究に使用することができます。...

骨感染症のウサギモデルの生成:骨髄に直接細菌を注入して慢性感染を誘発する技術

黄色ブドウ球菌の生物発光操作された株を用いて、整形外科用インプラント感染のマウスモデルにおいて、光学およびμCTイメージングを組み合わせて、非侵襲的にかつ長手方向における細菌感染の動態、ならびに対応する炎症反応および解剖学的変化をモニターする能力を提供骨。...

合わせた<em&gt;インビボ</em&gt;光とμCTイメージングマウスにおける整形外科インプラント感染で感染症、炎症、および骨解剖学を監視する

現在血管柄付き複合移植の任意の種類は、長期-的-免疫抑制、生活の重要な徴候のサポートが困難に依存します。モデルを提案、新しい豚脛骨 VCA 骨 VCA...

豚脛骨移植外科的血管新生: 新しい大型動物の骨血管複合移植モデル

ここでは、骨再生能力の観点から骨置換材料を評価することを目的として、ウサギの外科的プロトコルを提示する。ウサギの頭蓋骨に固定されたPEEKシリンダーを使用することにより、骨伝導、骨化誘導、骨形成および材料によって誘発される血管形成は、生きているまたは安楽死した動物のどちらかで評価されてもよい。...

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プロトコルはステンレス鋼kワイヤー インプラントが生物発光黄色 ブドウ球 菌Xen36と感染する脊髄インプラント伝染の新しい生体内のマウス...

脊椎インプラント感染のin vivoマウスモデル

ウサギの開放内側大腿骨顆衝撃モデルは、心的外傷後変形性関節症(PTOA)およびPTOAの進行を緩和するための新しい治療戦略を研究するために信頼できます。このプロトコルは、インパクターヘッドを備えたキャリッジベースのドロップタワーを使用して、ウサギの後部内側大腿骨顆の孤立した軟骨欠損を生成します。...

ウサギの心的外傷後変形性関節症を発生させるための再現性軟骨衝撃モデル

動物モデルは頻繁に骨への癌の転移を研究するために利用されている。このプロトコルでは、骨転移の研究のために腫瘍接種の2つの一般的な方法を説明し、簡単にこれらのモデルを監視し、定量化するために利用される分析のいくつかを説明します。...

骨転移モデル

学ぶバンコマイシン負荷カルシウム硫酸塩と自家骨を用いたウサギ骨感染症モデルの構築法。一貫した細菌量を維持し、骨感染症の病態理解と治療戦略の改善に貢献する革新的な動物実験モデルです。

カルシウム硫酸塩および改良されたウサギ骨感染症モデルにおける自家骨にバンコマイシンによる治療が読み込まれます

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