Lighting Up the Pathways to Caspase Activation Using Bimolecular Fluorescence Complementation

Chlo&#233; I Charendoff; Lisa Bouchier-Hayes

doi:10.3791/57316

JoVE Journal
Biochemistry

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Lighting Up the Pathways to Caspase Activation Using Bimolecular Fluorescence Complementation

カスパーゼ活性化分子蛍光補完への道をライトアップ

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08:47 min

March 5, 2018

DOI: 10.3791/57316-v

Chloé I Charendoff¹, Lisa Bouchier-Hayes²

¹Department of Pediatrics, Division of Hematology-Oncology,Baylor College of Medicine, ²Department of Pediatrics, Division of Hematology-Oncology and Department of Molecular and Cellular Biology,Baylor College of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

このプロトコルを記述するカスパーゼ分子蛍光補完 (BiFC);自分の活性化の最初のステップであるイニシエーターカスパーゼの誘起近接を視覚化に使用することができますイメージングベースのメソッド。

この方法論の全体的な目標は、イニシエーターカスパーゼの活性化の最初のステップの1つを視覚化することです。このステップは誘導近接と呼ばれ、アポトーシス細胞死中にカスパーゼ分子が集まって活性二量体を形成するときに発生します。この方法は、特定のイニシエーターカスパーゼをいつ、どこで、どれだけ効率的に活性化できるかなど、カスパーゼ分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。

この手法の主な利点は、生細胞内のカスパーゼ活性化複合体の集合をリアルタイムで視覚化できることです。この生体分子蛍光相補法は、カスパーゼに注入されたチロキシンタンパク質Venusの断片を使用します。断片はそれ自体では蛍光を発しませんが、カスパーゼが誘導された接近を受けると、2つの金星の半分が一緒になり、光ります。

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