High-sensitivity Detection of Micrometastases Generated by GFP Lentivirus-transduced Organoids Cultured from a Patient-derived Colon Tumor

Yu Okazawa; Kosuke Mizukoshi; Yu Koyama; Shoki Okubo; Hiromitsu Komiyama; Yutaka Kojima; Michitoshi Goto; Sonoko Habu; Okio Hino; Kazuhiro Sakamoto; Akira Orimo

doi:10.3791/57374

GFP レンチウイルス導入オルガノイド培養患者由来大腸腫瘍によって生成される微小の高感度検出

JoVE Journal
Cancer Research

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High-sensitivity Detection of Micrometastases Generated by GFP Lentivirus-transduced Organoids Cultured from a Patient-derived Colon Tumor

GFP レンチウイルス導入オルガノイド培養患者由来大腸腫瘍によって生成される微小の高感度検出

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09:16 min

June 14, 2018

DOI: 10.3791/57374-v

Yu Okazawa^1,2, Kosuke Mizukoshi^1,2, Yu Koyama^2,4, Shoki Okubo⁵, Hiromitsu Komiyama¹, Yutaka Kojima¹, Michitoshi Goto¹, Sonoko Habu³, Okio Hino², Kazuhiro Sakamoto¹, Akira Orimo²

¹Department of Coloproctological Surgery,Juntendo University Faculty of Medicine, ²Department of Molecular Pathogenesis,Juntendo University Faculty of Medicine, ³Atopy Research Center,Juntendo University Faculty of Medicine, ⁴Department of Oral Pathobiological Science and Surgery,Tokyo Dental College, ⁵Department of Gastroenterology,Juntendo University Faculty of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

CRC の PDX 由来器官毛細細胞に緑色蛍光タンパク質 (GFP) レンチウイルス粒子の効率的な伝達のためのプロトコルを示す本普及のひと大腸癌の高感度検出 (CRC) 細胞組織を植民地化をできるように、ステレオ蛍光顕微鏡による観察で、受信者のマウスに注入する前に。

この方法は、結腸がん患者に見られる微小転移に関する腫瘍生物学の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、マウスのGFP標識患者由来結腸がんオルガノイドによって誘導された微小転移を高感度に検出できることです。一般に、この方法に不慣れな人は、マウスの遠隔臓器で結腸腫瘍オルガノイド由来の微小転移を検出するのが難しいため、苦労するでしょう。

岡澤悠氏と一緒に手順を実演するのは、私のグループの博士課程の学生であり外科医である水越浩輔氏と小山悠氏です。ヒト大腸がん細胞オルガノイドを作製するには、まず、氷上の12ウェルプレートにウェルあたり150マイクロリットルの人工細胞外マトリックスを加えます。すべてのウェルをコーティングしたら、プレートを摂氏37度および5%CO2インキュベーターで30〜60分間インキュベートして、ゲルを固化します。

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