Name: 細胞分裂時の染色体分配の生きているセルイメージ投射 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: 学ぶHistone2B-GFP BacMam 2.0と回転円板共焦点顕微鏡を用いた有糸分裂細胞の染色体可視化法。マウス胚線維芽細胞を用いて染色体分配を観察し、遺伝子改変や薬剤処理の影響を評価できます。

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博士郭 Chiuan hung さんと博士 Bharatkumar 女子の原稿を改善した貴重なコメントをありがとうしたいと思います。

食品医薬品局 (FDA) の研究施設で機関動物ケアおよび使用委員会によって承認されたプロトコルに従い、これらの研究実験を行った。
1. 分離と培養マウス胚性線維芽細胞 (MEFs)
<ol><li>標準プロトコル7,8,9PP2A B56γ マウス系統と野生型の同腹仔からマウス萌芽期繊維芽細胞 (MEFs) を分離します。</li>
	<li>3 通路の ExpandMEFs は凍結し、実験8必要になるまでを格納します。</li>
</ol>2. 培養 Mefs 2 ウェル カバーグラスチェンバー用のライブ イメージング
<ol><li>500 ml ダルベッコ変更イーグル培地 (DMEM/f12 キー) を 10% 含む MEF 成長媒体の胎仔ウシ血清 (FBS)、1 X ペニシリン/ストレプトマイシン抗生物質、L-グルタミン (200 mM)、非本質的なアミノ酸 (NEAA) メディア 500 mL ボトル × 1。</li>
	<li>37 ° C で予め温めておいた水風呂通路 3 野生型から冷凍 MEFs、PP2A-B56γ-マウスのバイアルを解凍します。</li>
	<li>15 mL チューブに解凍 MEFs を転送し、ゆっくりと 10 mL のピペットを使用して 15 mL チューブに DMEM/F12 メディアの 20 mL の滴を追加します。</li>
	<li>T75 フラスコに DMEM/F12 成長媒体の 20 mL と共に MEFs を転送し、細胞が 70% 合流までそれらを展開します。密度は 4 倍または 10 倍の倍率で逆の顕微鏡を使用して推定されます。</li>
	<li>吸引ガラスの牧草地を使用して培ピペットのボンネットの真空システムに接続された 0.25% トリプシン/EDTA の 3 mL を加える、DMEM/F12 成長媒体の反作用を停止する 5 分追加 3 mL 37 ° C で孵化させなさい。</li>
	<li>室温で 5 分間 (300 x g) を低速度で細胞を遠心します。慎重に上澄みを除去し、再 37 の ° C の水浴中で加温 DMEM/F12 成長培地 1 mL の細胞ペレットを中断します。</li>
	<li>トリパン ブルー排除法またはその他の適切なセルを数える方法8を使用して細胞を列挙します。</li>
	<li>MEFs/ウェル 2 ウェル カバーグラスチェンバーの種子約 20,000。200 μ L/ウェル/F12 DMEM 培を追加し、37 ° C、5% CO2でそれらを一晩インキュベートして接続するセルを許可します。</li>
</ol>3. 同期
<ol><li>G0/G1 期で 0.1 %dmem/F12 成長培地で細胞を培養して MEFs を同期 G0/G1 期のセルの最大数を取得する、24 時間 FBS。 注: 血清飢餓は、好みの方法として使用された、さまざまな方法を逮捕10に必要な細胞の分裂の段階に応じて使用できます。</li>
</ol>4. ラベリング
<ol><li>1.5 mg/mL の DMSO でノコダゾールの原液を準備します。ノコダゾールは G2/m 期で10微小管形成を阻害することによって細胞を逮捕します。</li>
	<li><li> <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57389/57389eq1.jpg"> <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57389/57389eq2.jpg"> </li><li> </li></ol><ol><li><ol><li><li></ol></li><li><li><li><li><li></li><li><li><li><li><ol><li><li></ol></li><li> </li><li></ol><ol><li><li><li><ol><li><li><li></ol></li><li><ol><li><li></li><li></ol></li><li><li><li></ol>

<ol><li>Funk, L. C., Zasadil, L. M., Weaver, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Living+in+CIN%3A+Mitotic+Infidelity+and+Its+Consequences+for+Tumor+Promotion+and+Suppression%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Living in CIN: Mitotic Infidelity and Its Consequences for Tumor Promotion and Suppression.</a> Dev Cell. 39, 638-652 (2016).</li>
<li>Etemad, B., Kops, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attachment+issues%3A+kinetochore+transformations+and+spindle+checkpoint+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Attachment issues: kinetochore transformations and spindle checkpoint silencing.</a> Curr Opin Cell Biol. 39, 101-108 (2016).</li>
<li>Lara-Gonzalez, P., Westhorpe, F. G., Taylor, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spindle+assembly+checkpoint%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">The spindle assembly checkpoint.</a> Curr Biol. 22, 966-980 (2012).</li>
<li>Jallepalli, P. V., Lengauer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome+segregation+and+cancer%3A+cutting+through+the+mystery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Chromosome segregation and cancer: cutting through the mystery.</a> Nat Rev Cancer. (2), 109-117 (2001).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitotic+protein+CSPP1+interacts+with+CENP-H+protein+to+coordinate+accurate+chromosome+oscillation+in+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Mitotic protein CSPP1 interacts with CENP-H protein to coordinate accurate chromosome oscillation in mitosis.</a> J Biol Chem. 290 (45), 27053-27066 (2015).</li>
<li>Pikor, L., Thu, K., Vucic, E., Lam, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+detection+and+implication+of+genome+instability+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">The detection and implication of genome instability in cancer.</a> Cancer Metastasis Rev. 32 (3-4), 341-352 (2013).</li>
<li>Varadkar, P., Despres, D., Kraman, M., Lozier, J., Phadke, A., Nagaraju, K., McCright, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+protein+phosphatase+2A+B56%CE%B3+regulatory+subunit+is+required+for+heart+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">The protein phosphatase 2A B56γ regulatory subunit is required for heart development.</a> Dev Dyn. 243 (6), 778-790 (2014).</li>
<li>Jozefczuk, J., Drews, K., Adjaye, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Mouse+Embryonic+Fibroblast+Cells+Suitable+for+Culturing+Human+Embryonic+and+Induced+Pluripotent+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells.</a> J. Vis. Exp. (64), e3854(2012).</li>
<li>Varadkar, P., Abbasi, F., Takeda, K., Dyson, J. J., McCright, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PP2A-B56%CE%B3+is+required+for+an+efficient+spindle+assembly+checkpoint%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">PP2A-B56γ is required for an efficient spindle assembly checkpoint.</a> Cell Cycle. 18 (12), 1210-1219 (2017).</li>
<li>Rosner, M., Schipany, K., Hengstschläger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Merging+high-quality+biochemical+fractionation+with+a+refined+flow+cytometry+approach+to+monitor+nucleocytoplasmic+protein+expression+throughout+the+unperturbed+mammalian+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Merging high-quality biochemical fractionation with a refined flow cytometry approach to monitor nucleocytoplasmic protein expression throughout the unperturbed mammalian cell cycle.</a> Nat Protoc. 8 (3), 602-626 (2013).</li>
<li>Jonkman, J., Brown, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Any+Way+You+Slice+It-A+Comparison+of+Confocal+Microscopy+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Tech%22%5BJournal%5D)">Any Way You Slice It-A Comparison of Confocal Microscopy Techniques.</a> J Biomol Tech. 26 (2), 54-65 (2015).</li>
<li>Versaevel, M., Braquenier, J. B., Riaz, M., Grevesse, T., Lantoine, J., Gabriele, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+microscopy+reveals+LINC+complex+recruitment+at+nuclear+indentation+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Super-resolution microscopy reveals LINC complex recruitment at nuclear indentation sites.</a> Sci Rep. 8 (4), 7362(2014).</li>
<li>Wild, T., Larsen, M. S., Narita, T., Schou, J., Nilsson, J., Choudhary, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26904940">The Spindle Assembly Checkpoint Is Not Essential for Viability of Human Cells with Genetically Lowered APC/C Activity.</a> Cell Rep. 1 (8), 1829-1840 (2016).</li>
<li>Iuso, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exogenous+Expression+of+Human+Protamine+1+%28hPrm1%29+Remodels+Fibroblast+Nuclei+into+Spermatid-like+Structures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Exogenous Expression of Human Protamine 1 (hPrm1) Remodels Fibroblast Nuclei into Spermatid-like Structures.</a> Cell Rep. 1 (9), 1765-1771 (2015).</li>
<li>Ratcliffe, E., Glen, K. E., Naing, M. W., Williams, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+and+perspectives+on+stem+cell-based+therapies+undergoing+clinical+trials+for+regenerative+medicine%3A+case+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Br+Med+Bull%22%5BJournal%5D)">Current status and perspectives on stem cell-based therapies undergoing clinical trials for regenerative medicine: case studies.</a> Br Med Bull. 108, 73-94 (2013).</li>
</ol>

著者は、彼らは競合する金銭的な利益があることを宣言します。

正確な染色体分離を確保する細胞周期制御チェックポイントは、異数性とセル変換1,2,3を防ぐため。本研究でわかったその不活性化 PP2A B56γ 弱体化した紡錘アセンブリ チェックポイントで起因しました。ライブセル イメージング ノコダゾール9奏効した PP2A B56γ MEFs における有糸分裂時誤偏析染色体を観察することができました。
このプロトコルは、生きているセルイメージ投射のためのラベル染色体 BacMam 2.0 技術で生成された Histone2B GFP ラベルを利用しています。ラベルに重要な手順の 1 つは十分な表示を達成するために (PPC) のセルごとの粒子の右の量を計算します。10-50 PPC が最適な滴定を通して分かった。この試薬は、細胞に有毒であるかもしれないそれ故にラベルとラベル付きセルに毒性の間のバランスを達成する...

次のプロトコルでは染色体の分離とヒストン 2B GFP、BacMam 2.0 のラベリングおよび生きているセルイメージ投射使用してマウス萌芽期繊維芽細胞の細胞周期の間に細胞分裂の進行を可視化する便利な方法をについて説明します。
細胞周期制御チェックポイントは、染色体分配を監視し、セル1,2,3の遺伝的整合性の維持に重要な役割を果たします。誤隔離された染色体の蓄積異数性、ほとんどの固体腫瘍4の認刻極印である可能性があります。したがって、染色体不安定性を勉強する方法として染色体の遅れの検出を使用できます。
蛍光標識タンパク質ライブ染色体分配を視覚化するために使用される、mCherry タグの生成が遅れている染色体または H2B GFP タグ付きタンパク質遺伝子配達および分子生物学5相当な知識が必要です。ここで簡潔にするため、CL HB リージェントを呼びます CellLight Histone2B GFP BacMam 2.0 試薬の使用について述べる。この試薬は、すぐに使用することができます、従ってベクトル品質と完全性の心配がありません。さらに、この試薬では、潜在的に有害な治療または脂質や色素負荷化学物質の使用は必要ありません。従来の蛍光ラベルとは異なり CL HB リージェント汚れとは無関係 (すなわち。、膜電位)。CL HB 摂政を単にセルに追加し、タンパク質発現の夜通し孵化することができます。CL HB リージェントは、哺乳動物細胞ではレプリケートされません、バイオ セーフティ レベル (BSL) 研究所 1 の設定で使用できます。また、最もダイナミックな細胞分析を遂行する 5 日前まで、十分な時間のため一晩インキュベートした後このトランスフェクションを検出できます。
また、染色体の異常は、フローサイトメトリー、免疫組織化学または蛍光性の現場の交配 (魚) の6のなど様々 な技術によって調査できます。フローサイトメトリーは、異数性、測定することができる DNA 含量と細胞周期の細胞の位相に基づく研究に使用できます。フローサイトメトリーは、異数性を測定する使用できますが、染色体の誤った分離に関する情報は記載していません。魚および免疫組織化学の手法は、DNA や染色体に結合する蛍光プローブを使用します。これらの技術は細胞の人口の状態のスナップショットを提供する、彼らは生細胞イメージングにより行方不明の期間続く特定の細胞分裂の時空間的可視化を通じて取得する情報を許可しません。
このプロトコルは、遅れて染色体やノコダゾール扱われるマウス萌芽期繊維芽細胞 (MEFs) で PP2A-B56γ-マウスから分離した誤偏析染色体研究に使用されました。上記のアプリケーションのほかは、このプロトコルは、ラベルおよび細胞周期制御を研究するために使用できる様々 な細胞タイプにおける染色体分離または腫瘍細胞の染色体不安定性を視覚化するシンプルなツールを提供します。さらに、それも使用できますさまざまな薬物治療によって引き起こされる染色体不安定性の研究、遺伝子が染色体の誤った分離の結果ノックアウトの効果を研究します。

<table><tbody><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>11320082</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミン</td><td>Gibco</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>MEM 非必須アミノ酸溶液 (100X)</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン (10,000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'リン酸緩衝生理食塩水</td><td>Gibco</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>EMD Millipore</td><td>MX 1458-6</td><td></td></tr><tr><td>極低温バイアル収納ボックス</td><td>Fisherbrand</td><td>10-500-28</td><td></td></tr><tr><td>極低温バイアル</td><td>Corning/costar</td><td>431416</td><td></td></tr><tr><td>T75フラスコ</td><td>Cellstar</td><td>658175</td><td></td></tr><tr><td>2ウェルチャンバーカバーガラス</td><td>Nunc</td><td>155380PK</td><td></td></tr><tr><td>セロメーター ビジョン セルプロファイラー</td><td>Nexcelom Bioscience LLC</td><td>セロメーター ビジョントリオ</td><td></td></tr><tr><td>ノコダゾール</td><td>シグマ</td><td>M1404</td><td></td></tr><tr><td>セルライト ヒストン 2B-GFP、BacMam 2.0</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック インク</td><td>C10594</td><td></td></tr><tr><td>ツァイス細胞観察器 スピニングディスク共焦点顕微鏡システム</td><td>カールツァイス顕微鏡</td><td>ツァイス細胞観察 SD</td><td></td></tr><tr><td>ウォーターバス</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>280シリーズ</td><td></td></tr><tr><td>インキュベーター</td><td>三洋商業ソリューション</td><td>MCO-18AIC(UV)</td><td></td></tr><tr><td>クラスII 生物学的安全キャビネット</td><td>ベーカーカンパニー</td><td>SterilGard</td><td></td></tr><tr><td>Axiovisionソフトウェア</td><td>Zeiss</td><td>Ver.4.8.2</td><td></td></tr><tr><td>ImageJソフトウェア</td><td>国立衛生研究所</td><td>Ver.1.51r</td><td></td></tr></tbody></table>

細胞分裂時の染色体分配の生きているセルイメージ投射

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

染色体分離されねばならない確実かつ均一に娘細胞に細胞分裂の間に。染色体分離の再現性は、紡錘アセンブリ チェックポイント (SAC) を含む複数のメカニズムによって制御されます。SAC は、有糸分裂を通して細胞の進行の防止のため、すべての染色体がスピンドル微小管に接続している場合を除き、複雑なフィード バック システムの一部です。染色体のラギングおよび異常な染色体分離機能不全の細胞周期制御チェックポイントの指標し、細胞分裂のゲノムの安定性を測定する使用ことができます。SAC の規制緩和は、染色体の分離中にエラーの蓄積により悪性細胞に正常な細胞の変形で起因できます。SAC の実装と複雑な動原体の形成は、キナーゼとホスファターゼ プロテインホスファターゼ 2 a などの相互作用で厳しく規制 (PP2A)。このプロトコルでは、遅れていた PP2A B56γ 調節サブユニットのノックアウト マウスから分離されたマウス萌芽期繊維芽細胞における染色体の生きているセルイメージ投射について説明します。このメソッドは、その他細胞周期制御イメージング技術フローサイトメトリーなど免疫細胞化学染色体の動的な時空間の可視化ではなく、細胞分裂の状態のスナップショットを提供するだけの欠点を克服します。有糸分裂の間。

野生型と PP2A-B56γ-マウスから MEFs 2 よくチャンバー カバー ガラスのシードし、の接続を許可しました。2 日目、MEFs は 0.1% を使用して同期された FBS の 24 h。200 ng/mL メディアで MEFs 第 3 日ノコダゾールと 30 PPC CL HB regentwere は 37 で 18 時間培養° C、5 %co2。4 日目、回転するディスク共焦点顕微鏡システム (図 1) を使用してセルをイメージしました。生きている細胞イメージングが有糸分裂 (図 2) を NEBD からきて、個々 の細胞の運命を視覚化に使用されました。ノコダゾールは、G2M 段階で微小管形成阻害による野生型細胞を逮捕する知られています。そのポスト、ノコダゾール治療の野生型細胞が中期アッパー パネル (図 2) で逮捕されたことがわかっ...

このプロトコルでは、ラベルおよび Histone2B GFP BacMam 2.0 ラベルおよび回転のディスク共焦点顕微鏡システム使用して分裂期の細胞で生きている染色体の視覚化に簡単で便利な方法について説明します。

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

この方法の全体的な目標は、Histone 2B-GFP BacMam 2.0標識とスピニングディスク共焦点顕微鏡システムを使用して、有糸分裂細胞の生きた染色体を標識し、可視化することです。この方法は、培養細胞内の有糸分裂染色体を視覚化し、染色体分配に対する遺伝子改変または薬物治療の影響を研究するために使用できます。この技術の主な利点は、有糸分裂細胞の生きた染色体を標識および視覚化するための簡単で便利な方法を提供することです。ライブイメージング手順のデモンストレーションを行うのは、FDA生物製剤評価研究センターのウイルス製品部門の顕微鏡およびイメージングコア施設を管理している武田和代博士です。この実験で使用したマウス胚性線維芽細胞(MEF)は、テキストプロトコルに記載されているように、摂氏37度、CO2濃度5%の2ウェルチャンバーカバーガラスで一晩成長します。翌日、0.1%FBSを含むDMEM/F12増殖培地でインキュベートすることにより、G0/G1期のMEFを同期させます。ラベリングの日に、DMSO中のノコダゾールの1ミリリットルあたり1.5ミリグラムの原液を準備します。重要なステップは、細胞に毒性を与えることなく染色体可視化に十分な標識を達成するために、細胞あたりのCL-HB粒子の適切な量を計算することです。私たちは以前に、滴定実験によって、30 PPCが最適に機能することを決定しました。MEFsに、10%FCSを含む200マイクロリットルの成長培地、ノコダゾール1ミリリットルあたり200ナノグラム、および細胞あたり30粒子のCL-HB試薬を追加します。MEFを摂氏37度、CO25%で18時間インキュベートします。MEFの可視化は、環境チャンバーと油浸63倍対物レンズを備えたスピニングディスク共焦点顕微鏡システムを使用して行われます。イメージングの1日前に、環境チャンバーの電源をオンにし、チャンバー全体を摂氏37度で一晩温めます。翌日、顕微鏡スタンド、カメラ、回転ディスクユニット、イルミネーター、アルゴンレーザー、コンピューター、電動ステージの電源をONにします。システムを3分間ウォームアップした後、イグニッションキーをオンにしてアルゴンレーザーを始動します。アルゴンレーザーのトグルスイッチをスタンバイからレーザーランに切り替えます。データ集録および処理ソフトウェアを起動します。ステージトップインキュベーターのCO2コントローラーを起動し、CO2の濃度を5%に設定しますチャンバーカバーガラスをインキュベーターから取り外し、顕微鏡ステージに置き、油浸63X対物レンズを選択します。接眼レンズを通して観察し、画像の焦点を合わせ、核膜破壊(NEBD)の段階にある細胞を特定します。488ナノメートルのアルゴンレーザーを開始し、Histone 2B-GFPを可視化しま

live-cell-imaging-of-chromosome-segregation-during-mitosis

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

発生生物学

ここでは、画像への基本的なプロトコルを記述し、siRNAのトランスフェクション後のライブ哺乳類の組織培養細胞の有糸分裂のタイミングを定量化する。...

siRNAトランスフェクション後の有糸分裂のタイムラプスイメージング

出典: Schumacher, D.、Sogaard-Andersen, L. 成長遅い社会細菌 ミクソコッカス・ザンサスの 完全な栄養細胞周期の蛍光生細胞イメージング。ジャーナル・ヴィジョンズ Exp.

蛍光標識細菌における染色体分離のタイムラプスイメージング

神経前駆有糸分裂は、神経新生の重要なパラメータである。神経前駆糸分裂の我々の理解の多くは、固定された組織の分析に基づいている。胚性脳スライス内のライブイメージングは​​、制御された環境で、高い時間·空間分解能で有糸分裂を評価するための汎用的な手法である。...

発生中のマウス胚性皮質における有糸分裂のライブイメージング

高分解能共焦点顕微鏡を用いた解析に続いて HeLa 細胞の二重チミジン同期するためのプロトコルを提案します。このメソッドは、多数の有糸分裂、また界面機能を有する多機能性蛋白質の細胞分裂の役割の解明を可能にする S...

有糸分裂の多機能の細胞周期蛋白質の役割を研究する有糸分裂細胞同期と高分解能共焦点顕微鏡を組み合わせた

住セルイメージ投射は、固定細胞イメージングだけで達成可能ではない単一セルまたは全体人口の豊富な情報を提供します。ここでは、下記の抗有糸分裂薬パクリタ キセルで治療細胞運命決定を評価する生細胞イメージング...

長期的な住セルイメージ投射細胞の運命をパクリタ キセルに応答を評価するために

ここでは、有分裂・マイオシス時の生きた核分裂酵母細胞におけるタンパク質挙動や核ダイナミクスを研究者が研究できる非毒性顕微鏡法である生細胞イメージングを紹介する。...

蛍光生細胞顕微鏡によるミトティック・マイオシス酵母核ダイナミクスの検討

細胞分裂は、蛍光タグ付きタンパク質とタイムラプス顕微鏡を使用してリアルタイムで可視化することができます。ここで提示されるプロトコルを使用して、ユーザーは細胞分裂タイミングダイナミクス、ミトチックスピンドルアセンブリ、および染色体の議会と分離を分析することができます。RNA干渉(RNAi)媒介遺伝子ノックダウン後のこれらの事象の欠陥を評価し、定量することができる。...

細胞分裂のライブイメージングのためのショウジョウバエS2細胞の使用

ここでは、スピンドル形成と人工的進行のダイナミクスを評価するプロトコルを提示する。当社のタイムラプスイメージングの応用により、ユーザーは、人芽細胞の様々な段階で細胞を同定し、人芽細胞の欠陥を追跡および同定し、抗マイト薬への曝露時にスピンドルダイナミクスと人工細胞の運命を分析することができます。...

水動紡錘摂動後のメタフェイズタイミングと細胞運命のダイナミクスを評価するライブ細胞イメージング

タイムラプス顕微鏡は、出芽酵母の減数分裂を研究するための貴重なツールです。このプロトコルでは、細胞周期同期、タイムラプス顕微鏡、および標的タンパク質の条件付き枯渇を組み合わせて、減数分裂染色体分配中の特定のタンパク質の機能を研究する方法を実証する方法について説明しています。...

S. cerevisiaeの減数分裂を研究するためのタイムラプス顕微鏡とタンパク質のステージ特異的核枯渇の使用

このプロトコルは、生きたショウジョウバエの蛹の眼神経上皮をイメージングするための効率的な方法を提供します。この方法は、組織の動きと不均一なトポロジーを補正し、複数のGFPタグ付き接合タンパク質を使用して細胞境界の視覚化を強化し、簡単に組み立てられるイメージングリグを使用します。...

のライブイメージングショウジョウバエ蛹アイ

学ぶHistone2B-GFP BacMam 2.0と回転円板共焦点顕微鏡を用いた有糸分裂細胞の染色体可視化法。マウス胚線維芽細胞を用いて染色体分配を観察し、遺伝子改変や薬剤処理の影響を評価できます。

細胞分裂時の染色体分配の生きているセルイメージ投射

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