マウスで横方向の大動脈狭窄を誘導するために閉じて胸モデル

この手順の全体的な目標は、マウスの閉鎖胸部モデルで横方向大動脈収縮を行い、左心室心筋肥大を誘発することです。この低侵襲技術は、呼吸器系の問題を軽減し、炎症反応を最小限に抑えるのに役立ちます。この方法は、免疫学の分野における重要な問題、例えば、左心室肥大の発症における心臓マクロファジーの応答に答えるのに役立ちます。

この技術の主な利点は、胸郭が無傷のままであるため、外傷が最小限に抑えられることです。スペースと潮汐量は体重に適応しているため、このプロトコルはさまざまなサイズのマウスで使用できます。また、外科的外傷を軽減し、測定値の偏差を減らします。

マウスを麻酔した後、テキストプロトコルに従って、マウスを温度制御された手術台に移動し、麻酔導入ボックスに接続されているノーズコーンを取り外してナルコーシスを維持します。ナイロン縫合糸で、マウスの上顎切歯を固定します。尻尾をつまんで、反射がないことを確認します。

粘着テープを使用して四肢を固定します。直腸プローブを挿入した後、製造元の指示に従って喉と胸の上部に脱毛クリームを塗布し、1分間放置します。その後、クリームを拭き取り、必要に応じて繰り返します。

人工呼吸器の設定を生理学的パラメータに調整し、動物を手術用顕微鏡下に置いた状態で、下顎骨の約3mm下から第2肋骨までの正中線で皮膚を切開します。顎下腺の正中線と結合組織を特定します。次に、2つの角度のある鉗子を使用して、正中線で腺を穏やかにそして鈍く分割し、気管筋を探索します。

気管傍筋を鈍く引き離すことにより、気管を優しく準備します。鉗子を使って舌を引っ張って喉をまっすぐにして挿管しやすくし、挿管カニューレを気管の内側にそっと挿入します。気管内のチューブを直接視覚化し、適切な胸の動きを確認することにより、挿管を確認します。

気管の補助部分にある両方の頸動脈を、鉗子を使用して結合組織を穏やかに引き離すことにより準備します。20ヘルツのドップラープローブの先端に超音波ゲルを塗布し、プローブの先端を左右の頸動脈に45度未満の角度で配置します。プローブをゆっくりと回転させて横方向と内側に動かし、ドップラー信号を見つけ、プローブを傾けて信号を最適化します。

滅菌手袋とハサミの新しいセットを使用して、皮膚の切開部を2番目の肋間腔まで拡大します。次に、鉗子の先端で2番目の肋間腔を開き、リトラクターを挿入します。200%の倍率で、正中線と結合組織を特定します。

次に、角度のついた鉗子を使用して胸腺を静かに分割します。大動脈弓がはっきりと見えるようになるまで脂肪組織を切除します。角度のついた親指鉗子を使用して、横大動脈の下、腕頭動脈と左総頸動脈の間にトンネルを準備します。

次に、細い鉗子を使用して、6-0縫合糸を保持し、糸を大動脈弓の下に通します。2番目の鉗子で、アーチの反対側から糸を取ります。スペーサーを横大動脈と平行に慎重に配置します。

スペーサーに緩いダブルノットを準備し、大動脈と平行にスペーサーを最適に配置するようにします。次に、最初の結び目を結び、すぐにスペーサーを取り外す前に、すぐに2番目の反対の結び目を作ります。手順全体の中で最も重要なステップは、両方の結び目をすばやくしっかりと結び、すぐにスペーサーを取り外すことです。

6-0ポリプロピレン縫合糸で2番目の肋間腔を閉じ、結紮するときは鎖骨下血管に特に注意を払います。次に、6-0ポリプロピレン縫合糸を使用して、連続縫合パターンで皮膚を縫合します。結紮を確認し、テキストプロトコルに従って術後ケアを実施します。

これらのドップラー流速測定は、左心室と大動脈の圧力上昇により右頸動脈の血流速度が増加する一方で、左頸動脈の狭窄後の血流速度の減衰を引き起こすTACの成功を検証します。このグラフが示すように、手術の6日後には、TACマウスでは非バンドマウスと比較して、心臓重量と体重の比率が有意に増加しました。この比率は、21日後にほぼ一定でした。

心拍数は、左心室の収縮性と心拍出量に大きな影響を与えます。このグラフは、21日後に大動脈縞模様マウスと非大動脈縞模様マウスの心拍数に差がなかったことを示しています。ここで示したように、大動脈の一定のバンディングは、21日後に左心室カテーテルを介して測定された収縮期血圧の上昇によって証明されました。

C57ブラックシックスマウスは、TAC後に収縮機能障害を伴う偏心肥大を発症することが一般的に知られています。左心室径の増加が見られ、これは圧力体積測定でも有意に見えます。その結果、収縮期末期および拡張期の容積が大幅に増加しました。

このテクニックを習得すると、適切に行えば、10分以内に実行できます。最後に、この手順は、最小限の外科的外傷が免疫系の非特異的誘導を制限するため、左心室肥大における免疫応答の最適化された分析を提供します。このビデオを見た後、標準化された低侵襲性横行大動脈狭窄術を行う方法を十分に理解しているはずです。